微生物学实验指导
微生物学实验指导大全
微生物学实验指导黄文芳张松编著华南师范大学生命科学学院第一部分基础实验实验1 培养基的配制一、实验目的和内容目的：学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤。
内容：1．牛肉膏蛋白陈培养基的配制。
2．高氏1号培养基的配制。
3．马丁氏培养基的配制。
二、实验材料和用具牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/L NaOH、lmol/L HCl、KNO3、NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O。
试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布、漏斗、漏斗架、胶管、止水夹等。
三、操作步骤（一）牛肉膏蛋白胨培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
其配方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g，Nacl5g，琼脂15～20g，水1000mL，PH7.4～7.61．称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。
牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放入热水中，牛肉膏使与称量纸分离，立即取出纸片。
蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。
2．加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。
若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入己溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。
3．调pH 检测培养基的pH，若pH偏酸，可滴加lmol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。
若偏碱，则用lmol/L HCl进行调节。
pH的调节通常放在加琼脂之前。
应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
4．过滤液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利培养的观察。
但是供一般使用的培养基，这步可省略。
微生物学实验教案
微生物学实验教案引言：微生物学是研究微生物的结构、生长、代谢、生态和应用等方面的科学。
微生物实验是微生物学教学中重要的一环，通过实验可以帮助学生深入了解微生物的特性和应用，提高学生对微生物学的兴趣和理解。
本教案将结合教学目标和实验内容，设计一系列的微生物实验，旨在培养学生的观察和分析能力，提高实验操作技巧，加深对微生物学知识的理解。
一、教学目标：1.了解微生物的概念、分类和特性；2.学习微生物的培养、观察和鉴定方法；3.掌握微生物的常用实验技巧和操作规范；4.培养学生的科学思维和实验设计能力。
二、实验一：微生物的分类与观察实验目的：通过观察不同类型的微生物，了解微生物的形态特征和分类方法。
实验材料与仪器：显微镜、玻璃载片、消毒剂、甲苯、甘露醇、无菌培养皿、细菌培养基、酵母菌培养基。
实验步骤：1.准备工作：（1）消毒显微镜和工作台，用无菌培养皿收集微生物样品。
（2）取适量的微生物样品，分别涂抹于玻璃载片中。
2.显微镜观察：（1）对比观察不同微生物的形态特征，如菌落形态、颜色、大小等。
（2）用不同放大倍数的镜头观察微生物细胞的结构特征。
3.制备细菌涂片：（1）取少量细菌培养液，挖取细菌菌落，均匀涂抹在玻璃载片上。
（2）用火焰烘烤杀灭细菌，用甲苯固定细菌。
4.观察细菌涂片：（1）用40倍镜头观察细菌涂片，观察细菌形态和排列方式。
（2）用100倍镜头观察细菌细胞的结构特征。
5.制备酵母涂片：（1）取酵母菌培养液，从菌落中取适量的酵母。
（2）用甘露醇固定酵母。
6.观察酵母涂片：（1）用40倍镜头观察酵母细胞的形态特征。
（2）用100倍镜头观察酵母细胞的结构特征。
实验结果：通过观察不同类型的微生物涂片，学生能够熟悉不同微生物的形态特征和细胞结构。
讨论与总结：1.微生物的形态特征对其分类具有重要意义。
2.不同微生物类群有不同的细胞结构。
3.观察微生物涂片的方法和技巧。
三、实验二：微生物的培养与鉴定实验目的：通过微生物的培养和鉴定，学习微生物的生长条件和鉴别方法。
微生物培养实验方法_
微生物培养实验方法_一、选材和操作环境1.选材：根据实验目的，选择适当的微生物进行培养。
可以选择广谱微生物培养基来适应多种微生物的生长，或者选用特定的微生物培养基来培养其中一种特定的微生物。
2.操作环境：为了避免实验污染和交叉感染，实验室应该严格执行无菌操作，使用无菌操作台进行培养实验。
二、无菌技术1.灭菌：使用高压蒸汽灭菌器或者乙醇灭菌器将培养器具、培养基和植物培养基灭菌，以杀灭存在的菌种。
2.无菌操作：将培养器具放在无菌操作台上，进行接种、移植以及采样等操作，确保操作过程中不受外界菌种污染。
三、液体培养实验1.静态培养：在无菌培养基中接种微生物，放入试管或培养瓶中，静置培养。
根据需求，可以在静态培养过程中添加适量的养分补充剂。
2.摇床培养：将含有微生物的培养基放在摇床上进行培养，设置合适的温度和摇动速度，可以促进微生物的生长和代谢。
3.发酵罐培养：将含有微生物的培养基放入发酵罐中进行大规模培养。
控制发酵罐内的温度、pH值、氧气供应等条件，可以实现微生物的高密度培养。
四、固体培养实验1.平板培养：将含有微生物的培养基倒入培养皿中，使其均匀分布在培养皿表面，待其凝固后，将微生物接种于其上。
培养过程中可以观察到微生物的孤悬、菌落的形成和生长情况。
2.涂布法：将含有微生物的培养基均匀涂布在玻璃片、培养皿或者培养瓶内壁上，形成薄膜状，待其凝固后，进行微生物的接种。
3.动植物体内培养：将微生物接种在动植物的体内，如动物的腹腔、皮肤或者植物的叶片、根系等，利用动植体提供的养分来满足微生物的生长需求。
五、检测微生物生长和代谢特性1.可视方法：通过观察培养基上微生物的生长情况、菌落的形态和颜色等，判断微生物的生长情况。
2.双抗法：使用特定的抗体和染料来染色微生物，使其表现出不同的颜色或者形态，以便于鉴别和分析微生物。
3.生化检测方法：通过检测微生物在培养基上产生的特定代谢产物，如酶活性、气体产生等，来评估微生物的生长情况和代谢特性。
微生物与微生物学的实验研究方法
微生物与微生物学的实验研究方法微生物是指体积很小的生物体，如细菌、真菌、病毒、藻类等。
微生物学是研究微生物及其在生态、医学、工业、农业等领域的应用。
微生物在自然界中分布广泛，它们不仅参与着有机物的分解、循环和转化，还能制造多种生物产物。
因此，对微生物的研究是非常重要的。
一、微生物实验研究的基本方法1.纯化和鉴定微生物将含有微生物的物质加入含有为其提供营养的培养基，并考虑习性和生理学条件选择合适的温度、氧气和营养素等因素，使其只有一种微生物生长，即可得到该微生物的单纯培养物。
利用显微镜观察微生物形态和生理学等特征，准确鉴定微生物种类。
2.生长曲线测定通过连续取样检测微生物的生长曲线，得到壮菌期、平衡期和死亡期等生理阶段的生长速率、氧气需求量、营养物利用率、产物释放量等信息，揭示微生物生长机制，从而进行相关应用研究。
3.对微生物进行转化将微生物中的某一基因改变，使其生产更多特定的物质，如生产啤酒、酒精、酸奶等工业品，从而使得该微生物具有更高的经济价值。
4.微生物代谢产物的提取和分离纯化提取和分离微生物代谢产物是微生物学重要的应用研究方向。
目前，有色谱、质谱、高效液相等方法可用于分离纯化微生物产物，如抗生素、化学物质等，为微生物学的产业应用打下基础。
二、微生物实验研究的实验设备和条件1.无菌操作台：为防止微生物污染，通常将操作平台及某些设备对空气进行滤过处理，使空气中无微生物存在，保证实验中微生物纯净度，减少试验中的干扰。
2.培养器：培养器需控制温度、湿度、氧气和二氧化碳等条件，以适应微生物的生长和菌群的变化。
3.显微镜：常见的有普通显微镜、相差显微镜和荧光显微镜等，可用于观察微生物的外貌形态及生理特征，实现微生物种类鉴定和生长状态观察。
4.微生物灭菌器：用于杀灭微生物，消除污染源，保持单一的微生物纯种，以保证实验得出准确结果。
5.控制温度、湿度和光照的设备，如电热板、控温箱、恒温恒湿器、光周期计等，可为表现微生物生长特性提供条件。
《医学微生物学》实验目的和要求及实验室规则及注意事项
《医学微生物学》实验目的和要求及实验室规则及注意事项医学微生物学是医学专业的基础课程之一，主要研究微生物在人体中的生理和病理过程。
实验是医学微生物学学习的重要环节，通过实验可以加深对理论知识的理解和应用，提高学生的实际操作能力。
本文将详细介绍医学微生物学实验的目的和要求，以及实验室规则和注意事项。
一、实验目的和要求1.实验目的(1)了解微生物的基本概念和分类特征，掌握基本的病原微生物检测技术；(2)学习常见病原微生物的培养和鉴定方法，掌握微生物的培养技术和实验操作；(3)培养学生的实际动手能力、数据分析能力和科学研究思维。
2.实验要求(2)精确记录实验数据，准确并规范地填写实验报告；(3)遵守实验室规则，严格遵循实验安全操作规程。
二、实验室规则1.实验室开放时间实验室开放时间为每周一至周五的08:30-17:30，周六至周日不开放。
2.实验室装备使用(1)学生在使用实验室设备前，必须接受相关培训并取得资质证书；(2)使用实验室设备时要注意操作规程，禁止随意调试和拆卸实验室设备；(3)实验后要及时清洗和归位实验器材，保持实验室的整洁和环境卫生。
3.实验室安全(1)实验室进入前必须穿戴实验斗篷、手套、口罩等个人防护用品；(2)实验结束后必须洗手，并做好实验台面和器材的清洁工作；(3)对于具有较高危险性的实验，需要两人互相检查和确认实验装置和操作步骤。
三、注意事项1.实验前的准备工作(1)查看实验指南，了解实验目的和要求，熟悉实验步骤；(2)检查实验器材和试剂的完整性和可用性；(3)清洁实验台面，并准备所需的清洁消毒用品；(4)穿戴合适的实验服装和个人防护用品。
2.实验中的注意事项(1)操作时要细心、耐心，并注意实验安全；(2)严禁饮食、吸烟或涂抹口红等行为；(3)注意实验器材和实验台面的清洁和整理；(4)在实验中遵循实验步骤，严禁修改或省略步骤。
3.实验后的工作(1)清洗和归位实验器材，保持实验室整洁；(2)保存和整理好实验数据，并根据要求填写实验报告；(3)关闭实验设备和实验室电源，确保实验室安全。
(完整版)微生物学实验指导书
03微生物在自然界和人类生活中的作用阐述微生物在生态系统、工业生产、医疗卫生等领域的重要性。
01微生物的定义与分类包括细菌、真菌、病毒等微生物的基本概念和分类方法。
02微生物的生物学特性介绍微生物的形态、结构、生理生化特性等。
微生物学概述01实验室安全制度包括实验室安全守则、危险标识识别、紧急情况下的应对措施等。
02实验操作规范介绍实验前准备、实验过程中的操作规范、实验后清理等注意事项。
03生物安全阐述生物安全的概念、生物安全级别的划分及相应防护措施。
实验室安全与规范介绍显微镜的种类、使用方法和维护保养。
显微镜介绍离心机的类型、使用方法和维护保养。
离心机阐述培养箱和摇床的工作原理、使用方法和注意事项。
培养箱与摇床包括分光光度计、电泳仪、PCR 仪等设备的简要介绍和使用方法。
其他常用设备常用仪器与设备实验报告格式包括标题、作者、摘要、正文、结论、参考文献等部分的撰写要求。
数据处理与图表制作介绍数据处理的方法、图表的制作规范及注意事项。
实验结果分析与讨论阐述实验结果的分析方法、讨论实验结果的合理性及可能存在的问题。
实验报告提交与评审说明实验报告的提交方式、评审标准及相关注意事项。
实验报告撰写要求03根据实验需求，选择适当的培养基类型，如营养琼脂、马丁氏琼脂等。
选择合适的培养基按照培养基配方准确称量各成分，加入蒸馏水或去离子水，加热溶解后调整pH 值。
配制培养基将配制好的培养基分装到试管、培养皿等容器中，采用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法进行灭菌处理。
培养基分装与灭菌培养基制备与灭菌微生物接种与培养接种前准备准备好无菌操作台、无菌接种环、酒精灯等接种工具，确保无菌操作环境。
微生物接种采用划线法、倾注法等方法将待测微生物接种到培养基上。
培养条件设置根据微生物的生长需求，设置好培养温度、湿度和光照等条件。
观察前准备准备好显微镜、载玻片、盖玻片等观察工具，确保无菌操作环境。
微生物形态观察通过显微镜观察微生物的形态、大小、排列方式等特征，记录并描述观察结果。
微生物学实验
微生物学实验微生物学实验是研究微生物的生长、活动和相互作用的一种科学实验。
通过实验可以了解微生物的生理特性和遗传特性，探究微生物与环境的关系，以及微生物对人类健康和环境的影响。
本文将介绍微生物学实验的常见内容和方法，并举例说明其应用。
1. 常见（1）微生物的培养与分离：将微生物样品接种于培养基上，提供适宜的环境因素使其生长繁殖。
利用孵育箱或培养皿进行培养，观察微生物的孢子、菌丝和菌落等形态特征，通过分离与鉴定，确定微生物的种类和数量。
（2）微生物的生长曲线：利用培养皿或发酵罐等装置，监测微生物在不同时间内的生长情况，绘制生长曲线。
通过分析曲线上的不同阶段，了解微生物的生长特性，包括潜时期、对数期、平稳期和死亡期等。
（3）微生物的代谢分析：通过测定微生物培养过程中的代谢产物，如酸、气体、酶等，分析微生物的代谢途径和代谢产物对生物工艺和环境的影响。
常用的方法包括气相色谱、质谱和高效液相色谱等技术。
（4）微生物的遗传分析：通过构建基因工程菌株或利用遗传标记技术，研究微生物的基因表达、突变和遗传传递等现象。
例如，利用PCR技术检测微生物的特定基因序列，分析其在不同环境条件下的表达水平。
2. 微生物学实验方法（1）杀菌与消毒：在进行微生物实验前，需要对实验器材、培养基和试剂等进行杀菌和消毒处理，以防止外源菌的污染。
常用的方法有高温高压灭菌、酒精喷雾消毒和过滤器材消毒等。
（2）无菌技术：在进行微生物的培养和分离实验时，需要避免外界细菌的污染。
常用的无菌技术包括细菌装液的操作在无菌台上进行，采用无菌培养皿、培养基和工具，以及穿戴无菌手套等措施。
（3）微量液体处理：有些微生物实验需要处理微量的液体，如微生物菌液的接种、稀释和移液等。
在这种情况下，需要使用微量吸管、微量移液器和微量离心机等微量操作工具，保证实验的准确性和可重复性。
（4）统计分析：微生物学实验的数据分析通常需要进行统计处理，以确定实验数据的可靠性和显著性差异。
微生物学实验指导
微⽣物学实验指导微⽣物实验守则微⽣物学实验的⽬的是：加深对微⽣物学理论知识的理解；扎实掌握实验的基本操作，并牢固建⽴⽆菌操作的概念；培养学⽣认真观察、发现问题、分析问题和解决问题的⼯作能⼒；树⽴学⽣实事求是、严肃认真的科学态度和勤俭节约、协作攻关的优良作风。
为了提⾼教学效果，保证实验质量和实验室安全，特提出如下注意事项。
1.每次实验前必须充分预习实验教材，以了解实验的⽬的、原理和⽅法，熟悉实验操作中的主要步骤和环节。
2.⾮必要的物品不要带⼊实验室，必须带进的物品应放在不影响实验操作的地⽅。
3.实验时认真听教师的讲解，仔细观察⽰范操作。
4.许多微⽣物有潜在的致病能⼒。
实验中要严格⽆菌操作，以免培养的微⽣物进⼊外界环境，并保证所培养的微⽣物不受污染。
①实验室内严禁餐饮。
②实验前洗⼿并⽤酒精棉球擦拭⼿和台⾯。
③实验操作过程中，要严格进⾏⽆菌操作，以防⽌菌体间交叉感染或致病菌对⼈体造成危害。
④在进⾏接种操作时，要关闭门窗，以防⽌空⽓对流，要尽量减少⾛动和讲话，以防⽌尘埃飞扬和唾沫四溅。
⑤⽤过的带菌吸管、滴管、玻⽚、涂布棒和移液器枪头等，⽤酒精或来苏尔等浸泡以后再进⾏清洗。
⑥离开实验室之前要⽤肥皂洗⼿。
⑦实验室中的菌种和物品等，未经教师允许，不得携带出实验室。
凡需进⾏培养的材料，都应注明菌种名、接种⽇期、处理⽅法及操作者姓名（或组别），放在制定的培养箱中进⾏培养。
5.如发⽣培养菌的器⽫打破、⽪肤破伤或菌液吸⼊⼝中等意外情况时，应⽴即报告指导教师，及时处理，菌液污染实验台⾯或其他物件时，应及时⽤3％的来苏尔或5％的⽯炭酸液擦拭消毒。
6.爱护仪器、设备，严格按照操作规程使⽤仪器、设备，以确保仪器的安全和学⽣的⼈⾝安全，并做好使⽤记录，确保仪器的正常使⽤。
7.按时观察实验现象，认真及时的做好实验记录，对于当时不能得到实验结果⽽需要连续观察的，则需记下每次的实验结果，以便分析。
清晰填写实验报告作业，科学阐述实验结论。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验一光学显微镜的使用及微生物形态的观察、大小的测定和计数一、实验目的１、掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养2、观察细菌、真菌、原生动物的标本装片,学会绘制生物图3、掌握使用测微尺测量微生物大小的方法４、了解血球计数板的结构，掌握使用和计算方法二、实验器材１、显微镜２、微生物标本装片３、目、物镜测微尺４、血球计数板５、酵母菌液或霉菌孢子液6、载波片、盖波片、烧杯、滴管、擦镜纸、香柏油、二甲苯等三、显微镜的构造、原理及使用方法1、构造现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜,由机械装置和光学系统两大部分组成。
机械装置包括镜筒、转换器、载物台、镜臂、镜座、调节器;光学系统包括目镜、物镜、聚光器、电光源。
显微镜的总放大倍数为目镜和物镜的放大倍数的乘积。
２、操作在目镜保持不变的情况下,使用不同放大倍数的物镜所能达到的分辨率及放大率都是不同的。
一般情况下,特别是初学者，进行显微观察时应遵循从低倍镜到高倍镜再到油镜的观察程序,因为低倍数物镜视野相对大,易发现目标及确定检查的位置。
四、微生物大小的测量原理和方法微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体很小,只能在显微镜下来测量。
用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和物镜测微尺。
1、目镜测微尺(图1-1）是一块圆形玻片,在玻片中央把5ｍｍ长度刻成5０等分，或把1０mm长度刻成100等分。
测量时，将其放在接目镜中的隔板上（此处正好与物镜放大的中----间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。
由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同,目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用物镜测微尺校正，以求出在一定放大倍数下,目镜测微尺每小格所代表的相对长度。
2、物镜测微尺(图１-２）是中央部分刻有精确等分线的载玻片,一般将lmm 等分为100格,每格长ｌ０μm （即0.0ｌmm),是专门用来校正目镜测微尺的。
校正时，将物镜测微尺放在载物台上,由于物镜测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野,即物镜测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从物镜测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小,所以用物镜测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度,然后移去物镜测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。
3、目镜测微尺的校正把目镜的上透镜旋下，将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上，把物镜测微尺置于载物台上，刻度朝上。
先用低倍镜观察，对准焦距，视野中看清物镜测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与物镜测微尺的刻度平行，移动推动器,使两尺重叠,再使两尺的“０”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度（图1－３)，计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和物镜测微尺的格数。
因为物镜测微尺的刻度每格长l0μｍ，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。
例如目镜测微尺５小格正好与物镜测微尺5小格重叠，已知物镜测微尺每小格为ｌ0μm ，则目镜测微尺上每小格长度为=5×10μm/５=1０μm用同法分别校正在高倍镜下和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。
由于不同显微镜及附件的放大倍数不同,因此校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件(特定的物镜、目镜、镜筒长度）进行，而且只能在特定的情况下重复使用,当更换不同放大倍数的目镜或物镜时,必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。
4、细胞大小的测定移去物镜测微尺,换上待测菌体的装片，先在低倍镜下找到目的物,然后在高倍镜下用目镜测微尺来测量菌体的长，宽各占几格（不足一格的部分估计到小数点后一位数）。
测出的格数乘上目镜测微尺每格的校正值,即等于该菌的长和宽。
结果计算： 长μm=平均格数×校正值宽μｍ＝平均格数×校正值大小表示: 宽μm ×长μｍ 五、微生物细胞数量的测定原理和方法1、血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有4条槽而构成3个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各有一个计数区(图1-4），计数区图1-1 目镜测微尺 图1-2 物镜测微尺 图1-3 目、物镜测微尺的校正 图1-4 血球计数板的刻度有两种:一种是计数区分为１6个大方格(大方格用三线隔开)，而每个大方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。
但是不管计数区是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成。
计数区边长为1mm，则计数区的面积为ｌmｍ2,每个小方格的面积为1/40０mm2。
盖上盖玻片后，计数区的高度为0.１mm,所以每个计数区的体积为0.１ｍｍ3,每个小方格的体积为１／4００0mｍ3。
使用血球计数板计数时,先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液(或每克样品）中微生物细胞的数量。
已知：1mm3体积=10 mm×１0mm×10mm= 1000ｍｍ３所以：1mm3体积应含有小方格数为１０00mm3/1/4０0０mm３=4×１0６个小方格,即系数Ｋ＝4×10６。
图1-5 计数室因此：每ｍl菌悬液中含有细胞数=每个小格中细胞平均数（N）×系数(K）×菌液稀释倍数（d）2、计数方法(１）视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释，以每小格的菌数可数为度。
(２)取洁净的血球计数板一块,在计数区上盖上一块盖玻片。
（3)将酵母菌悬液摇匀,用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多)，让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区,勿使气泡产生,并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。
也可以将菌悬液直接滴加在计数区上，不要使计数区两边平台沾上菌悬液,以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高。
然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。
(４)静置片刻,将血球计数板置载物台上夹稳,先在低倍镜下找到计数区后,再转换高倍镜观察并计数。
由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。
（５）计数时若计数区是由１６个大方格组成，按对角线方位,数左上、左下、右上、右下的4个大方格(即1０0小格）的菌数。
如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央ｌ个大方格的菌数(即８０个小格）。
如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线,以减少误差。
（6)对于出芽的酵母菌,芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。
每个样品重复计数2—3次(每次数值不应相差过大,否则应重新操作),求出每一个小格中细胞平均数（N），按公式计算出每ml（g)菌悬液所含酵母菌细胞数量。
(7)测数完毕,取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净,切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。
洗净后自行晾干或用吹风机吹干,放入盒内保存。
六、实验结果和思考题1、结果（１）绘制所观察的一种或两种微生物的形态,并测量其大小。
--2、思考题（1)在显微镜的使用过程中须注意哪些问题?（2)根据你的体会，说明用血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差、力求准确?实验二培养基的配置与灭菌一、实验目的1、明确培养基配置的原理2、掌握配制培养基的一般方法和步骤3、掌握灭菌锅的使用方法二、实验器材1、药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCｌ、HCｌ、NaOH、琼脂、蒸馏水2、高压灭菌锅、电炉3、量筒、铝锅、三角瓶、天平等三、基本原理对照培养基配制的基本原则:目的明确、比例协调、pH适宜、经济节约。
本次需要配制的培养基是为下次从土壤中分离细菌用的,所以选择配制适合细菌生长的牛肉膏蛋白胨培养基。
这是一种应用最广泛最普遍的细菌基本培养基,牛肉膏提供碳原和能源，蛋白胨主要提供氮源,NaCl提供无机盐,用HCｌ和NａOＨ调节pH，还要加入一定量的琼脂最为凝固剂。
琼脂在大于９6ºC时融化，小于40ºC时凝固，通常不被微生物利用。
牛肉膏蛋白胨培养基的配方是:牛肉膏５ｇ蛋白胨10g--NaCl ５g琼脂25g水１00０mlpH ７.2~７．4四、实验内容和步骤(一）配制牛肉膏蛋白胨培养基１、计算：根据下次实验的要求和本组人数,每小组需要牛肉膏蛋白胨培养基的量为分离所用９平皿、划线所用每人一平皿、每人一支试管斜面所需培养基的总和,大概350mｌ。
按照配方,计算出每种药品的需要量。
2、配制溶液：取一定容量的烧杯或搪瓷杯盛入适量蒸馏水,按培养基配方逐一称取各种成分,依次加入水中溶解。
牛肉膏、蛋白胨可加热促进溶解，待全部溶解后，加水补足所需容量。
注意:加热时要不断搅拌,避免琼脂糊底烧焦。
3、调节ｐH:用精密ｐH试纸测量培养基原始ｐＨ值。
若偏酸，逐滴加入1ｍol/L的NａOH溶液,边加边搅拌，随时测pH值,直至达约7．6。
若偏碱,同法用１moｌ/L的HCl溶液调节。
注意不要调过头,避免回滴,否则会影响培养基内各离子的浓度。
4、分装:将配制好的培养基分装入三角瓶和试管中,三角瓶装量不要超过容积的1／2,试管装量不要超过试管高度的1/３,约为5ml。
注意分装速度要快,避免温度过低后琼脂凝固。
5、加塞：分装完毕后,在试管口和三角瓶口塞上棉塞,以阻止外界微生物进入并保证良好的通气性能。
6、包扎：加塞后,三角瓶外包一层牛皮纸或两层旧报纸,用麻绳以活结形式扎好;试管先用橡皮筋全部捆好,再在棉塞外包牛皮纸或旧报纸,防止灭菌时冷凝水润湿棉塞。
用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
７、灭菌:将包扎好的培养基放进高压蒸汽灭菌锅内，0．1０３ＭPa，１21ºC，20miｎ，高压蒸汽灭菌。
8、搁置斜面:将灭菌的试管培养基冷却至５0ºC左右,将试管口端搁在玻棒或其它合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
9、无菌检查：将灭菌的培养基放入3７ºＣ的培养箱中培养2４~48h,检查灭菌是否彻底。
（二）下次实验无菌器材的准备1、无菌水：每组在５支普通试管或刻度试管中装入9ｍl蒸馏水,加塞、包扎、待灭。
2、每组包扎一支1mｌ移液管、1５只培养皿,待灭。
准备好后与培养基一起放入高压灭菌锅灭菌。
五、思考题1、配制培养基的过程中应该注意些什么问题?为什么？2、培养基配制好后,为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的?--附1：棉塞的制作棉塞的作用一是防止杂菌污染，二是保证通气良好。
因此要求棉塞的形状、大小、松紧与容器口尽量适合,过紧则妨碍空气流通,操作不便；过松则达不到滤菌的目的。
棉塞的长度应2/3在容器内，1/3在容器外。