DNA 合 成 简 介
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50
60
* Optics optimized for FAM; All conditions are same except labels
AllGlo Probe 灵敏度和 灵敏度和Mix的关系 的关系
谢 谢！
多通道荧光选择
(Blue region)
Reactive oligo
(Cy5 region)
(FAM region)
(TexasRedTM region)
(VICTM regioห้องสมุดไป่ตู้)
(TAMRA region)
AllGlo Probe实时定量曲线 实时定量曲线
Relative Fluorescence
MAR-labeled AllGlo MAR Spectra: 500/525 nm (FAM region)
1000 nM 500 nM 250 nM 125 nM
1000 nM 500 nM 250 nM 125 nM
AllGlo (MAR)
TaqMan® (FAM/TAM)
0
10
20
30 40 Cycle Number
二. 技术及理念
工业化给我们的带来了很多！ 工业化给我们的带来了很多！可能丢失了合成其实也是分子生物学一部分
三. 仪器及环境
TaqMan法 法
Taq酶的外切活性 酶的外切活性
如何确定阈值：基线的作用
基线的范围： 阈
标 准 基线范围 偏
值 高 度
差
从第3个循环起 3 到指数增长前3个循环。 一般取3-15循环。 根据实验结果调整。
(末端标记 末端标记) 末端标记
游离状态→ 游离状态 不发荧光
杂交状态→ 杂交状态 不发荧光
酶切之后→ 酶切之后 两端都发荧光
AllGlo Probes(Type II)
(中间标记) 中间标记
5´ 游离状态→ 游离状态 不发荧光 3´
杂交状态→ 杂交状态 不发荧光
酶切之后→ 酶切之后 两端都发荧光
打造最专业的DNA合 合 打造最专业的 成及标记公司
李辉 2008-12-10
DNA 合 成 简 介
亚磷酰胺法
亚磷酰胺法示意图 亚磷酰胺法示意图
• 合成流程
荧光标记的方法
1. 亚磷酰胺法单体
5’-Biotin
3’-Biotin
荧光标记的方法
2. 活化脂
5’-Aminolink
活化脂
影响合成质量的因素
常用荧光基团波长及淬灭基团选择
Black Hole Quenchers
新一代实时定量探针－ 新一代实时定量探针－AllGlo Probe
• • • • • • • 不需要专门的报告或淬灭基团 合成简单 灵敏度高 大大提高tm值 大大提高 值 设计简单 合成周期短 适用领域广
AllGlo Probes (Type I)
一. 原料
1. 超世生物基本合成试剂全部采用原装进口Sigma（Proligo）（DNA合成稳定性） 超世生物基本合成试剂全部采用原装进口 （ ） 合成稳定性） 合成稳定性 2. 超世生物采用的标记及修饰原料全部是经过严格测试筛选，固定下来几家全球 超世生物采用的标记及修饰原料全部是经过严格测试筛选， 知名的染料供应商： 知名的染料供应商：Biotium、Glenresearch、Biosearch Technologies、Proligo等 、 、 、 等 （试剂纯度高、标记效率高、荧光稳定） 试剂纯度高、标记效率高、荧光稳定）