第16章 免疫球蛋白检测及应用 1504

补体结合
CH3
Fc受体结合
C端
IgG、 IgA、 IgM、 IgE、 IgD

Ig存在于血液中，约占血浆蛋白总量的 20%，也可存在于其他体液和外分泌液中 *g/L水平： 血清中IgG、IgA、IgM *mg/L水平：血清中IgD、IgE 体液中的IgG、IgA、IgM


亚类：

IgG：IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 IgA：IgA1, IgA2，分泌型IgA IgM: IgM1, IgM2
粘膜抗感染 免疫调理
激活补体
ADCC
中和作用
第一节 体液中IgG、IgA、IgM 测定的临床应用
IgG



抗细菌 抗病毒 抗毒素
唯一通过胎盘Ig
由脾脏和淋巴结中的浆细胞合成与分泌 占血清总Ig的75%

如果待测血清标本与某型免疫球蛋 白重链及轻链抗血清产生相同迁移 度的特殊沉淀弧，提示存在单克隆 丙种球蛋白（M蛋白），此现象多见 于IgG、IgA或IgM型多发性骨髓瘤或 原发性巨蛋白血症等

轻链病：血清仅与其中一型抗轻链 抗血清产生一特殊沉淀弧，与抗重 链血清不见沉淀弧 重链病：仅与抗重链血清产生一特 殊沉淀弧
三种检测方法精密度（CV%）比较
IgG 6.6% IgA 4.9% IgM 8.0%
速率散射比浊法 单向免疫扩散法
终点散射比浊法
8.7%
7.6%
10%-13%
9.7%
沉 淀 物 形 成 量
Ab Ab Ab Ab Ag Ab Ab Ab Ab
抗体过剩带
Ab Ab Ab Ag AbAgAb A A Ag Ab b AbAg b A Ab Abb
不同年龄组IgG亚型参考范围（g/L）
IgG亚类：随年龄增长升高，青春期达成人水平 注意：需按IgG亚型参考值来进行分析判断
IgG亚类测定临床意义

IgG亚类缺陷： 某一IgG亚类含量低于年龄对应的参考范围

儿童：

男女比例3：1，IgG2缺陷最常见 男女比例4：2， IgG1、 IgG3缺陷最常见
免疫固定电泳图谱示例（IgA-λ 型M蛋白） κ 、λ 、G、A、M分别代表覆盖含抗κ ，抗λ ，抗IgG， 抗IgA和抗IgM的抗血清；箭头所指为加样处


量取沉淀环的直径要求准确度达0.1mm 加样时，吸取每份标本均应更换塑料吸 头 如果待测样品中抗原含量过高，超出标 准曲线的线性范围，应当稀释后重新检 测
出现误差的原因



抗原或标准溶液溢出加样孔； 因抗体或抗原过量而致沉淀环过小或过大； 加样量不足或过多，或混有气泡； 加样孔破损，使沉淀环不规则； 板浇注后保存时间长，引起板内水分蒸发或变 形； 浇注琼脂时不在水平台面，使胶板厚薄不均； 打孔后挑取琼脂时将胶板挑起，与玻璃板剥离， 以致检孔在孔底流溢； 扩散时湿盒不平，导致沉淀环不圆。
（二）临床意义:

波动较大。 IgD的生物学功能未完全阐明（B细胞分化
成熟标记）。

妊娠末期、大量吸烟者、IgD型骨髓瘤患者
血清中IgD含量升高。
二、IgE含量测定
（一）测定方法 化学发光免疫分析法 放射免疫测定法 酶联免疫试验 乳胶颗粒免疫浊度法—将IgE吸附在乳胶颗
粒上，遇到抗原发生凝集
二、脑脊液Ig定量的临床意义
正常脑脊液中免疫球蛋白含量极少，主要为IgG，含量 在10-40mg/L。在蛋白总量不高时，一般不能检测出 IgA、IgM、IgE等 多发性硬化症、Guillain-Barre综合症、播散性脑脊 髓炎等免疫性疾病，可使IgG含量升高。有人认为，若 发现IgM，提示存在中枢神经系统感染。其增高的机理， 主要是由于血脑屏障功能的破坏和CSF中存在免疫细胞 等。 结核性脑膜炎和化脓性脑膜炎时，CSF中IgG和IgA可升 高。


Blood Thickening Infections Retinal Vascular Dilation
(一) 血清蛋白区带电泳
+
患 者 血 清
-
ALB α1 α2
β
γ
正常人血清蛋白电泳图
Alb α1
α2
β
γ
(一) 血清蛋白区带电泳
这种M区带较多见于γ或β 区，偶可见于α区。M区带 的电泳位置可大致反应出免 疫球蛋白的类型。
带负电荷的蛋白质通过。 • 基膜是一层有孔的基质。 • 相邻足细胞的足突互相交错对插，形成 滤过裂隙膜。

单纯性膜孔径轻度增大：尿液中IgG增 高为主，形成部分选择性肾小球性蛋 白尿 滤过膜损伤加重，尿液中除IgG增高外， 分子量较大的IgM开始滤出增多，形成 非选择性肾小球性蛋白尿 尿液中游离轻链的检测可用于轻链病 的诊断和多发性骨髓瘤的分型鉴定和 预后判断


鉴别肾小球疾病种类

IgA：

原发性肾小球疾病、慢性肾病高 隐匿性肾炎及急性肾炎少 原发性肾小球疾病、慢性肾病高 仅出现于慢性肾炎

IgG


IgM

脑脊液测定
脑脊液Ig测定的临床意义
• 脑毛细血管壁与神
经胶质细胞形成血
浆与脑细胞之间的 屏障 • 生理情况下血液中 的Ig可以通过BBB

等价带
Ag A Ag b A Ag b A
Ag Ag Ag
抗 原 过 剩 海 德 堡 效 应 曲 线
——
b
抗原过剩带
抗体量恒定，抗原量递增

当抗体量固定时，溶液中待测Ig的含量与免疫复合物的量成 正比。用终点散射比浊或速率(rate)散射比浊法测定溶液的 浊度，即可得出相应Ig的含量。

购买成套商品试剂、效期内、不同批号不同厂 家不混用 设备定期维护、抗原过量校正系统 室内室间质控 影响结果：重度脂血、溶血、黄疸、微小凝块、 细胞微生物污染
IgG型多位于β区至慢γ区 IgA型多位于β-γ区




IgM型多位于γ区
IgD型多位于β-γ区。
Alb α1 α2
β γ
Alb α1
α2
β
γ

在某些情况下还可以出现假的狭区带，易与M蛋
白混淆，应进一步做免疫电泳等分析加以区别

溶血标本中血红蛋白形成的β位区带
陈旧血清中聚合IgG形成的近原位窄区带
存在某种免疫球蛋白片段的M蛋白。

免疫浊度法：更为准确迅速。
临床意义*


有助于丙种球蛋白病的诊断，并对丙种球蛋白 病的良、恶性鉴别具有一定的帮助。 动态观察，对丙种球蛋白病的病情和疗效的判 断有一定的价值。
(三) 免疫电泳
免疫电泳是将
区带电泳和免疫扩
散结合起来的一种
免疫学分析法。
• 根据M蛋白在免疫电泳中形成的特殊沉淀弧，加以鉴定 • 抗血清多用5种 • 抗正常人血清作为对照
IgA

SIgA在局部免疫 中起重要作用
消化道：腹泻 呼吸道：支气管炎 泌尿道：尿路感染 生殖道：阴道炎

主要由肠系淋巴组织中的浆细胞产生 占血清总Ig的10%
IgM
出现最早： 个体发育过程中；受到抗原刺激后 在机体早期的免疫防御中占有重要地位
单向免疫扩散法
• 将抗Ig血清均匀地混合于琼脂或琼脂糖凝胶内，打孔， 加样





血脑屏障受损程度：白蛋白商值、CSFIgG指数 增高有临床意义：多发性硬化症、中枢 神经系统感染、肿瘤、脑血管疾病、精 神分裂
第三节 血清IgG亚类测定及临床意义

4类：IgG1、 IgG2、 IgG3、 IgG4 依据：重链结构、抗原特异性、生物活性 含量：依次递减， IgG1最多，IgG4最少 意义：研究某些免疫缺陷病和变态反应性疾病 检测方法：ELISA
wk.baidu.com
通过程度：易 IgG IgA IgM 难 白细胞商值：脑脊液 血清白蛋白比值


<9：无明显受损 9-15：轻度受损 15-33：重度受损 33-100：重度受损 >100：破裂
第二节 IgE和IgD测定
IgE的测定


亲细胞抗体 能与肥大细胞、嗜碱细胞上 的受体结合 I型变态反应性疾病
免 疫 缺 陷 病
先 天 性
体液免疫缺陷病
联合免疫缺陷病
获 得 性
大量蛋白流失
HIV 免疫抑制剂
尿液测定
尿液Ig定量的临床意义
• 由毛细血管的内皮细胞、基膜和肾小囊 脏层足细胞的足突构成。 • 肾小球毛细血管内皮有窗孔，水、小分 子溶质都能自由地通过这些微孔；内皮
细胞表面有带负电荷的糖蛋白，能阻碍
类风湿因子形成的位于γ区中间的细区带
(二) 免疫球蛋白定量测定

恶性单克隆丙种球蛋白血症

某一类丙种球蛋白显著升高，多在30G/L以上 正常包括与M蛋白同类的丙种球蛋白显著降低

良性丙种球蛋白血症

M蛋白多在20G/L以下
其他免疫球蛋白一般正常
方法

单向扩散法：较为简便 ，如在单向扩散 试验中出现双圈状沉淀环，则标本中可能

自动化免疫分析仪特点
希望的曲线
测 出 浓 度 希望的曲线
钩状效应曲线 错误结果
实际浓度

在检测中已设置抗原过量校正系统，检测时 需启动该系统



如检测到抗原含量过高，对样品 做进一步稀释后再进行测定 仪器能自动识别按照软件程序对 不同的检测标本进行不同的倍数 稀释，以保证检测管中保持最佳 的抗原-抗体反应浓度，获取准 确的光散色信号 仪器能对试剂缺少、样品耗材缺 少或仪器故障进行监测并及时报 警，提示操作者，以保证检测的 准确性及减少操作者的工作强度。

见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性 淋巴瘤
Multiple myeloma, MM
Osteolytic lesions
Metastatic carcinoma
Bence Jones proteinuria Renal tubular changes
Infection
巨球蛋白血症 （macroglobulinemia）

成年：

IgG亚类测定临床意义

IgG亚类缺陷：

检测IgG亚类比测定总IgG更有价值

IgG亚类缺陷也可与其他免疫缺陷并存

IgA缺乏常伴有IgG2缺陷

IgG亚类异常增高：主要见于I型变态反应
第四节 M蛋白测定及临床意义
一、M蛋白检测与鉴定
定义：是B淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增 殖所产生的一种在氨基酸组成及顺序上十 分均一的异常单克隆免疫球蛋白。
a：抗正常人血清 b：抗IgG血清 c：抗IgA血清；
d：抗IgM血清
e：抗κ 血清 f：抗λ 血清

（四）免疫固定电泳
待检蛋白电泳
贴浸有抗血清的滤纸
抗原与对应抗体反应
沉淀
漂洗
染色
某一抗原的存在?
特点

周期短:1.5-2h


敏感性高：50-150mg/dl
分辨清晰：短电泳移动 距离分理处单克隆组分 结果易于分析：直观
由鼻咽部、扁桃体、支气管等粘膜固有层中浆细胞产生 占血清总Ig的0.002%
IgE测定临床意义
I型变态反应性疾病：过敏性哮喘


与IgE有关的非过敏性疾病：

寄生虫感染 IgE型MM

急慢性肝炎、SLE、严重烧伤等
一、IgD含量测定
（一）测定方法


放射免疫测定法 乳胶颗粒免疫浊度法 酶联免疫吸附实验
第十六章 体液免疫球蛋白测定 临床免疫学教研室 张子宁
免疫球蛋白（immunoglobulin）
机体免疫细胞被抗原激活后，由分化成熟的 终末B细胞---浆细胞合成、分泌的一类能与相 应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。
抗原结合部位 VH
可 变 区
N端
CH1
VL CL
恒 定 区
铰 链 区
CH2
• 孔中待测样品的抗原辐射状向含抗血清的胶内扩散， 至抗原与抗体的量达一定比例时形成可见的沉淀环。 • 一定条件下沉淀环的直径或面积与相应的抗原(IgG、 IgA、IgM)含量成正比。
• 用标准抗原或国际参考蛋白制成标准曲线，即 可用以定量检测未知标本的抗原浓度(mg/ml 或 U/ml)。
注意事项
免疫浊度法

原理： 被测血清中的Ig 与加入的相应抗体 发生反应，在抗体 过量的情况下，形 成免疫复合物，后 者在含PEG等沉淀促 进剂的液相中析出， 产生浊度。
透射比浊法 I
I0
θ
检测器A
检测器B
散射比浊法
（一）速率散射比浊法 抗原抗体反应中形成免疫复合物，悬浮在缓 冲液中使散射光信号发生变化，通过测定信号 增长的速率决定抗原浓度。 （二）终点散射比浊法 抗原和相应抗体结合后，经一定时间(约 30～60min)形成复合物，用特定散射比浊仪， 测定复合物散射光值。散射光强度与复合物的 量成正比，即与抗原含量成正比。
血液测定
各年龄组Ig含量参考范围（g/L）
Ig随年龄增长而逐渐升高，到12岁基本稳定。
Ig增高临床意义
IgG、IgM、IgA均增高
单一Ig增高
Ag持续存在
自 身 免 疫 性 疾 病
免疫增殖性疾病
多 发 性 骨 髓 瘤 原发性 巨 球 蛋 白 血 症
各 种 慢 性 感 染
慢 性 肝 病
Ig 降低临床意义