实验十九 (6) 糖化型淀粉酶活力测定

目前，工业中广泛使用黑曲霉(Aspergillus niger)、泡盛曲霉 (Aspergillus awamori)、米根霉(Rhizopus oryzae)和臭曲霉 (Aspergillus foetidus)为生产菌株来发酵生产糖化酶。

今天的实验用酶就是利用黑曲霉变异菌株进行液体深层通风 发酵后提取获得。
三、试剂与仪器
1.糖化酶试剂： 2. 仪器
2%可溶性淀粉溶液
0.1 mol/L的HAc-NaAc缓冲液(pH4.6) 0.1 mol/L碘液； 0.1 mol/L氢氧化钠溶液 20%氢氧化钠溶液
酸式滴定管
滤纸 烧瓶 漏斗 移液管
2.0 mol/L硫酸溶液
0.05 mol/L硫代硫酸钠溶液 0.5%淀粉指示剂。
COONa
3NaOI ＝NaIO3+2NaI
NaIO3+5NaI+3H2SO43Na2SO4+3H2O+3I2
未与葡萄糖作用的次碘酸钠在碱性溶液中歧化生成NaI和NaIO3，当酸化时NaIO3 又恢复成I2析出，用Na2S2O3标准溶液滴定析出的I2，从而可计算出葡萄糖的含量。 I2＋2Na2S2O3 = Na2S4O6 ＋ 2NaI
糖用次碘酸钠法定量测定。以单位时间内分解α–
１，４糖苷键生成葡萄糖所需的酶量为酶的活力 单位。
二、实验原理
糖化型淀粉酶可催化淀粉水解生成葡萄糖。本实验在一定条件下用一定量的糖化 型淀粉酶作用于淀粉，然后用碘量法测定所生成的葡萄糖的含量来计算淀粉酶的 活力。 碘量法定糖原理： 淀粉经糖化酶水解生成葡萄糖，葡萄搪具有还原性，其羰基易被弱氧化剂次碘酸 钠所氧化：
百度文库思考题
酶活力测定前为什么控制酶液到合适的稀释比
确加入0.1 mol/L碘液10 mL，再各加0.1 mol/L的NaOH溶液15 mL，
边加边摇晃，于暗处放置 15 min 后加入 2 mol/L 硫酸 2 mL ，用 0.05 mol/L硫代硫酸钠滴定至无色为终点。
酶活力计算方法
1 32.2 60 酶活力(U/g)=(VA-VB)×c×90.05× × × ×n 2 30 5
酶活测定方法
测定糖化酶的方法有次碘酸钠法、兰–爱农法(SP 法) 、Schoorl法(DU法)和对硝基苯酚葡萄糖法(NPG 法)、3,5-二硝基水杨酸(DNS) 等方法。 本试验测定糖化酶活力采用次碘酸钠法。糖化酶
以可溶性淀粉为底物在一定条件下（pH范围是4～
6, 温度范围是40～60℃）进行反应，生成的葡萄
pH计
250 mL碘量瓶；
四、操作步骤
1. 取甲、乙2个带塞的试管，分别吸取2%可溶性淀粉液25 mL，加 入pH4.6乙酸缓冲液5 mL，混匀后于40 ℃水浴中预热5 min。 2. 在甲管中加入酶液2 mL（酶活力为110~170 U），立即计时，于 40 ℃，反应30 min后，立即往两管中各加20%NaOH溶液0.2 mL， 摇匀，取出两管迅速用水冷却，并在乙管中补加待测酶液2 mL 作为对照组。 3. 取上述反应液5 mL（甲管2份，乙管1份）于3只碘量瓶中，各准





VA对照组（乙管）消耗的硫代硫酸钠体积(mL) VB样品（甲管）消耗的硫代硫酸钠体积(mL) c硫代硫酸钠浓度（mol/L） 90.05，1mL 1mol/L硫代硫酸钠所相当的葡萄糖质量（mg） 60/ ，转化为1小时的反应量 30 ½ ，加入2mL酶液，换算成每毫升中的酶单位数 32.2，反应液总体积（mL） 5，测定葡萄糖时吸取的反应液体积（mL） n, 样品稀释倍数
实验十九
糖化型淀粉酶活力测定
一、实验目的
1、 学习碘量法测定葡萄糖含量的原理。
2、 了解糖化型淀粉酶活力的测定方法和操作。
糖化酶在工业生产中的应用
糖化酶是淀粉糖化发酵生产酒精和葡萄糖浆的主要酶类。 特别是酿酒酵母利用淀粉原料发酵时，淀粉液化后的糖化 作用是必不可少的工序，因为大多数酿酒酵母只能利用可 发酵的糖进行酒精发酵。 糖化酶不仅用于酒类、酒精生产和葡萄糖浆的制取，还 广泛地用于抗生素、氨基酸、有机酸的生产。糖化酶是我 国产量最大、应用最广的酶制剂之一。