发育生物学实验指南简要
发育生物学试验
发育生物学实验Experiments of Development Biology【课程编号】 【课程类别】限选课程【学分数】 3 学分 【适用专业】 生物科学【学时数】 96 学时 【编写日期】2009年9月15日一、教学目标通过本实验教学，使学生能掌握基本的发育生物学实验操作方法、正确使用仪器、准确取得实验数据，学会实验数据处理和科学表达实验结果的方法。
在确保基础实验训练的基础上，强化综合性实验技能训练，注重学生创新思维的培养和综合技能训练。
使学生对自己所学的解剖学, 生物化学，分子生物学等实验技术充分的实践, 学会用传统生物学方法和现代生物学方法验证动植物发育过程中的生物学现象，学会在科学实验中进行协作和配合；提高学生的科研能力，培养良好的科研素质。
二、教学内容和学时分配实验一、鸡胚培养和发育过程观察层次基础性主要内容：学习和掌握鸡胚胎发育所需要的条件，观察鸡胚胎发育的外部形态变化，掌握器官形成的基本规律。
明确环境因素对胚胎发育和健康的影响。
教学要求：了解鸡胚发育的大体阶段以及各阶段的形态特征；了解实验室鸡胚胎孵化的基本条件，明确环境对胚胎发育和健康胚胎的重要性。
实验二、鸡胚血管发生的阻断实验层次综合性主要内容：在上述鸡胚胎发育的外部形态变化观察的基础上，利用血管阻断剂，通过鸡胚操作，观察药物对血管发育的影响。
明确环境因素对胚胎血管发育和健康的影响。
教学要求：了解鸡胚血管发育的基本规律和形态特征；掌握实验室鸡胚血管阻断实验的基本方法，明确药物对胚胎血管发育和健康胚胎的重要性。
实验三、小鸡骨骼肌卫星细胞的分离、培养与发育观察层次综合性主要内容：在上述鸡胚胎发育的外部形态变化观察的基础上，在小鸡出壳后24小时， 分离培养肌肉组织的卫星细胞，观察骨骼肌卫星细胞的增殖分化能力。
并对分离得到的鸡骨骼肌卫星细胞表达卫星细胞特异的标志基因Desmin 和 Pax7 进行表达分析。
教学要求：了解鸡胚骨骼肌卫星细胞在发育中的作用，掌握鸡胚骨骼肌卫星细胞分离培养的基本方法。
发育生物学实验
发育生物学实验指导2008-2009学年第二学期2009年4月2日实验一1原理卵巢表面为单层立方或扁平的表面上皮，上皮下方为薄层致密结缔组织构成的白膜。
卵巢实质分为皮质和髓质。
皮质含不同发育阶段的卵泡、黄体和白体，卵泡间结缔组织由低分化的梭形的基质细胞、网状纤维及散在的平滑肌纤维构成。
髓质有血管和淋巴管。
近卵巢门处有少量门细胞，其结构和功能类似睾丸间质细胞，可分泌雄激素，在FSH和LH刺激下，每个周期有一批卵泡发育，其中之一发育成熟并排卵。
卵泡的发育分为原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和成熟卵泡四个阶段。
①原始卵泡体积小，由一个初级卵母细胞和一层扁平的卵泡细胞构成。
初级卵母细胞为圆形，直径约40μm，核大而圆，染色浅，核仁明显，胞质嗜酸性。
初级卵母细胞是在胚胎时期由卵原细胞分裂分化形成，并停滞在第一次减数分裂前期，直至排卵前才完成分裂。
②初级卵泡为原始卵泡在FSH的作用下发育形成。
初级卵母细胞增大，在靠近质膜的胞质中出现电子致密的溶酶体，称皮质颗粒。
卵泡细胞增生，由扁平变为立方形或柱状，由单层变为多层；最内一层卵泡细胞为柱状，呈放射状排列，称放射冠。
在初级卵母细胞与放射冠的卵泡细胞之间出现一层均质状、嗜酸性的透明带。
构成透明带的蛋白中，ZP3为精子受体。
③次级卵泡其内出现卵泡腔，腔内充满卵泡液；初级卵母细胞、透明带、放射冠及部分卵泡细胞突入卵泡腔内形成卵丘；卵泡腔周围的数层卵泡细胞形成卵泡壁，称颗粒层，卵泡细胞改称颗粒细胞。
初级卵泡和次级卵泡合称生长卵泡，其周围形成卵泡膜。
卵泡膜内层有多边形或梭形的膜细胞，具有分泌类固醇激素细胞的特征；外层有胶原纤维和平滑肌纤维，膜细胞合成雄激素，雄激素进入颗粒细胞，转化为雌激素，故雌激素由两种细胞联合产生。
④成熟卵泡在LH刺激下，次级卵泡发育为成熟卵泡。
初级卵母细胞直径可达150μm。
由于卵泡液急剧增多卵泡体积显著增大，直径可超过2cm，并向卵巢表面突出。
在排卵前36～48小时，初级卵母细胞完成第一次减数分裂，形成次级卵母细胞和第一极体。
发育生物学实验
精子的发生及成熟精子的构造精巢为一管状腺，外面的白色套膜是白膜，精巢叶中含有很多曲细精管。
曲细精管内部结构：基膜支持细胞与精原细胞不同的是有核仁，细胞核卵形，染色质少五种细胞：精原细胞，初级精母细胞，次级精母细胞，精细胞，精子精子变形：细胞核在细胞的一端，含有密集的染色质，为头部，细胞质为尾部。
卵子发生及成熟卵子的构造卵巢结构：生发上皮，初级卵泡、生长中的卵泡，成熟卵泡（放射冠，紧贴卵母细胞的高层柱状卵泡细胞呈冠状排列卵母细胞和放射冠之间有一透明带，滤泡细胞和卵母细胞的分泌物质组成。
实验二草鱼卵巢组织学切片，卵细胞六个时期，精子五个时期各个时期实验三受精马蛔虫受精时卵细胞处于减一期雌核：卵子分出第二极体后染色体组成一核，雌核。
然后在卵细胞内形成雄性原核实验四文昌鱼早期胚胎发育①受精卵，文昌鱼时均黄卵②卵裂期：二细胞期，完全卵裂，第一次经裂四细胞期，第二次经裂，与第一次分裂面垂直，产生四个大小相等的分裂球八细胞期，第三次为纬裂，分裂面在赤道面上方，八个分裂球大小几乎相等十六细胞期及多细胞期③囊胚卵裂知128分裂球时，细胞发生重排，囊胚完全形成。
囊胚是一个中空的球体，中间为囊胚腔，四周为囊胚壁。
④原肠胚文昌鱼的原肠胚为具有两层细胞的腔状结构，中央的是原肠腔，原肠腔与外界相通的是胚孔。
⑤神经胚期神经板期，整个胚体外周为外胚层细胞，胚体背部中央外胚层加厚稍扁平，为神经板。
内层细胞为中内胚层，中央的腔为原肠腔。
神经沟期，神经板部位细胞下陷，形成神经沟，两侧隆起，为神经褶。
原肠背壁细的两侧中胚层带开始与背锁板及内胚层分离，并分节。
中胚层向背侧壁折叠形成肠体腔囊神经管期，神经褶向上向中央在背中线愈合成神经管。
肠体腔囊与原肠分开，形成成对的中胚层体节。
神经管腹面为椭圆形的脊索，原肠在背部愈合形成肠管，中央管腔为消化腔。
实验六蛙的早期胚胎发育受精卵，端黄卵，乱晃集中于植物极。
卵裂期：二细胞期，区别动物极和植物极，卵裂沟没有到达底部四细胞期，第二次卵裂仍为经裂八细胞期，第三次为经裂，赤道面以上，形成四大四小的八个分裂球多细胞期，以后的卵裂过程中，动物极的比植物极分裂的要快的多囊胚囊胚早期，分裂球大，数量小。
发育生物学的实验教学方法
发育生物学的实验教学方法发育生物学是研究生物体从受精卵到成熟个体的发育过程的学科。
实验教学在发育生物学中起着至关重要的作用，通过实验可以直观地观察和理解生物体发育的过程和机制。
本文将介绍一些发育生物学的实验教学方法，以帮助学生更好地学习和理解这一学科。
一、观察胚胎发育过程观察胚胎发育过程是发育生物学实验教学的重要环节。
学生可以通过显微镜观察受精卵的分裂、胚胎的形态变化等。
可以使用小鼠、果蝇、斑马鱼等模式生物进行实验，这些生物的发育过程相对较短，方便学生观察和实验操作。
通过观察胚胎发育过程，学生可以深入了解细胞分裂、器官形成等发育过程的细节。
二、基因敲除实验基因敲除是一种重要的实验方法，通过敲除特定基因，可以观察到这个基因在发育过程中的作用。
学生可以选择一个感兴趣的基因，通过基因敲除技术将其敲除，然后观察敲除个体的发育过程和表型变化。
这种实验可以帮助学生深入了解基因在发育过程中的作用，并探索基因与发育的关系。
三、细胞培养实验细胞培养是发育生物学实验中常用的方法之一。
学生可以通过细胞培养实验观察细胞的分裂、分化和形态变化等。
可以选择动物细胞或植物细胞进行培养实验，通过观察细胞的生长和变化，学生可以更加直观地理解细胞的发育过程和机制。
四、基因表达实验基因表达是发育生物学中一个重要的研究方向。
学生可以选择一个感兴趣的基因，通过基因表达实验观察该基因在发育过程中的表达情况。
可以使用荧光标记等方法来标记基因的表达，然后观察标记物在胚胎或组织中的分布情况。
通过这种实验，学生可以了解基因在发育过程中的动态表达模式。
五、模型构建实验模型构建是发育生物学实验中常用的方法之一。
学生可以选择一个发育过程进行模拟，通过构建模型来观察和理解发育过程中的关键因素和机制。
例如，可以构建一个模拟胚胎发育的系统，通过调控不同因素的作用来观察胚胎发育的变化。
通过模型构建实验，学生可以更加深入地理解发育过程中的复杂性和动态性。
综上所述，发育生物学的实验教学方法多种多样，通过观察胚胎发育过程、基因敲除、细胞培养、基因表达和模型构建等实验，可以帮助学生更好地理解和探索发育生物学的奥秘。
发育生物学实验
方法与步骤 青蛙排卵季节，携带长柄 铁勺，水桶、10%福尔马 林及玻璃小瓶若干，在早 上5点半——6点到达蛙卵采
集地。
如见雌蛙产卵，即用铁勺轻 轻捞取新鲜卵于水桶中（水 和草用原地的）如未见产卵， 可捞取胶膜清新透明，动植 物极黑白分明的新鲜卵团。 并迅速用10%福尔马林固定一 些新鲜卵于小瓶中。
hCG与垂体促性腺激素的 功能相似，有促进卵巢成熟、 排卵、黄体形成与生长，促使 雄性动物排精等作用，其主要 功能是延长黄体的寿命，维持 妊娠黄体，并使雌激素和孕激 素的合成由卵巢顺利地过渡到 胎盘。
由于hCG具有促进性腺活 动的作用，且在妊娠早期开始 分泌，月经过期15天左右，孕 妇尿中已含有足量的hCG，临 床上即利用这些特点来作早期 妊娠诊断。
方法与步骤
①蟾蜍试验 将受试尿注入雌蟾蜍背部 皮下，8—16小时后蟾蜍
排卵为阳性。
②雄蛙试验 将受试尿注入雄蛙腹部或 背部皮下，2-4小时后， 从其穴肛取出尿液，显微 镜下观察有精虫者为阳性。 ③可注射生理盐水为对照。
方法三
绒毛膜促性腺激素对蛙卵 巢、精巢的作用
目的要求
观察绒毛膜促性腺激 素制剂对蛙卵巢、精 巢的作用、精子的形 态、活动、精原细胞 分裂、精子的变态。
按固定顺序，用吸管吸取卵于 载玻片上，于双目解剖镜下(或 显微镜低倍下)观察蛙卵的发育 时期。 如蛙卵上有尘土，可 将蛙卵吸到手心里，用解剖针 压破胶膜，并在手心里来回拨 动几次，使胶膜与卵分离。然 后用吸管将卵吸回载玻片上观 察。
方法二 蟾蜍的早期胚胎发育
基本原理 原理同上 方法与步骤 用绒毛膜促性腺激素的方 法使卵受精。镜下观察卵 裂至囊胚的发育过程。并 加以描述。
方法与步骤
①从池塘捉一些蝌蚪并将 它们带回实验室。
水稻的发育生物学实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除水稻的发育生物学实验报告篇一：发育生物学实验发育生物学实验指导20XX-20XX学年第二学期20XX年4月2日实验一1原理卵巢表面为单层立方或扁平的表面上皮，上皮下方为薄层致密结缔组织构成的白膜。
卵巢实质分为皮质和髓质。
皮质含不同发育阶段的卵泡、黄体和白体，卵泡间结缔组织由低分化的梭形的基质细胞、网状纤维及散在的平滑肌纤维构成。
髓质有血管和淋巴管。
近卵巢门处有少量门细胞，其结构和功能类似睾丸间质细胞，可分泌雄激素，在Fsh和Lh刺激下，每个周期有一批卵泡发育，其中之一发育成熟并排卵。
卵泡的发育分为原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和成熟卵泡四个阶段。
①原始卵泡体积小，由一个初级卵母细胞和一层扁平的卵泡细胞构成。
初级卵母细胞为圆形，直径约40μm，核大而圆，染色浅，核仁明显，胞质嗜酸性。
初级卵母细胞是在胚胎时期由卵原细胞分裂分化形成，并停滞在第一次减数分裂前期，直至排卵前才完成分裂。
②初级卵泡为原始卵泡在Fsh的作用下发育形成。
初级卵母细胞增大，在靠近质膜的胞质中出现电子致密的溶酶体，称皮质颗粒。
卵泡细胞增生，由扁平变为立方形或柱状，由单层变为多层；最内一层卵泡细胞为柱状，呈放射状排列，称放射冠。
在初级卵母细胞与放射冠的卵泡细胞之间出现一层均质状、嗜酸性的透明带。
构成透明带的蛋白中，Zp3为精子受体。
③次级卵泡其内出现卵泡腔，腔内充满卵泡液；初级卵母细胞、透明带、放射冠及部分卵泡细胞突入卵泡腔内形成卵丘；卵泡腔周围的数层卵泡细胞形成卵泡壁，称颗粒层，卵泡细胞改称颗粒细胞。
初级卵泡和次级卵泡合称生长卵泡，其周围形成卵泡膜。
卵泡膜内层有多边形或梭形的膜细胞，具有分泌类固醇激素细胞的特征；外层有胶原纤维和平滑肌纤维，膜细胞合成雄激素，雄激素进入颗粒细胞，转化为雌激素，故雌激素由两种细胞联合产生。
④成熟卵泡在Lh刺激下，次级卵泡发育为成熟卵泡。
初级卵母细胞直径可达150μm。
由于卵泡液急剧增多卵泡体积显著增大，直径可超过2cm，并向卵巢表面突出。
发育生物学实验教案
发育生物学实验教案集团文件发布号：（9816-UATWW-MWUB-WUNN-INNUL-DQQTY-发育生物学实验教案实验一模式生物蛙、海胆胚胎发育各阶段切片观察一、实验目的了解模式生物发育过程中的形态变化。
二、实验原理在多种动物中，胚胎发育经历受精、桑椹胚、囊胚、原肠时期、神经时期，不同时期具有不同的特点，在发育中其形态和构造经历明显的阶段性变化。
三、试剂与材料1. 实验试剂香柏油、显微镜2. 实验材料模式生物切片、装片（蛙、海胆）四、实验步骤观察模式生物发育各时期的胚胎形状变化。
五、实验作业记录形态学变化。
实验二模式生物鲫鱼、鸡胚胎发育各阶段切片观察一、实验目的了解模式生物发育过程中的形态变化。
二、实验原理在多种动物中，胚胎发育经历受精、桑椹胚、囊胚、原肠时期、神经时期，不同时期具有不同的特点，在发育中其形态和构造经历明显的阶段性变化。
三、试剂与材料1. 实验试剂香柏油、显微镜2. 实验材料模式生物切片、装片（鲫鱼、鸡）四、实验步骤观察模式生物发育各时期的胚胎形状变化。
五、实验作业记录形态学变化。
实验三两栖类变态过程的观察一、实验目的了解两栖类动物变态过程中的形态变化。
二、实验原理在多种动物中，胚胎发育经历一个幼虫期，幼虫具有与成体非常不同的特点，在发育中其形态和构造经历明显的阶段性变化，其中有一些器官退化消失，有些得到改造，有些新生出来，从而结束幼虫期，建成成体结构，这种现象统称为变态。
三、试剂与材料1. 实验试剂何尔夫列他溶液（氧化钠0.35g，氯化钾0.005g，二氯化钙0.01g，碳酸氢钠0.02g，蒸馏水100mL）2. 实验材料蛙的蝌蚪四、实验步骤人工饲养青蛙，观察其变态过程中的形态变化。
五、实验作业记录蛙变态过程中的形态学变化。
[附] 蛙的饲养方法卵和蝌蚪的培养最好用洁净的自来水，并加上稀释5-6倍的何尔夫列他液（氧化钠0.35g，氯化钾0.005g，二氯化钙0.01g，碳酸氢钠0.02g，蒸馏水100mL），这样可以增加胚胎和蝌蚪发育所必需的钠、钙、钾离子。
植物发育生物学实验指导
实验一低拷贝质粒的大量提取——碱法【实验原理】质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA，是进行DNA重组的常用载体。
作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于细胞的主染色体之外，质粒DNA上携带了部分的基因信息，经过基因表达后使其宿主细胞表现相应的性状。
在DNA重组中，质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。
从宿主细胞中提取质粒DNA，是DNA重组技术中最基础的实验技能。
分离质粒DNA有三个步骤：培养细菌使质粒扩增，收集和裂解细菌，分离和纯化质粒DNA。
在质粒提取过程中，由于机械力、酸碱度、试剂等的原因，可能使质粒DNA链发生断裂。
所以，多数质粒粗提取物中含有三种构型的质粒：共价闭合环状DNA（cccDNA）：质粒的两条链没有断裂；超螺旋开环DNA（ocDNA）：质粒的一条链断裂；松弛的环状分子线形DNA（lDNA）：质粒的两条链均断裂；线性分子质粒DNA的分子构型。
质粒DNA琼脂塘凝胶电泳模式图可分为：松弛线性的DNA；松弛开环的OC构型；超螺旋的SC构型。
由于琼脂糖中加有嵌入型染料溴化乙锭，因此，在紫外线照射下DNA电泳带成橘黄色。
道中的SC DNA走在最前沿，OC DNA则位于凝胶的最后边；道中的L DNA 是经核酸内切限制酶切割质粒之后产生的，它在凝胶中的位置介于OC DNA 和SC DNA 之间。
碱法提取质粒是Ｒ．Ｔreisman尚未发表的方法，同时也是Brinboim和Doly(1979)及Ish-Horowicz和Burke(1981)所用方法的改进。
该方法对于目前使用的所有大肠菌菌株都卓有成效，并可与随后的纯化步骤，如聚乙二醇沉淀或氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心等，一并联合使用。
【药品试剂】1、溶液I：50 mmol/L葡萄糖、 25 mmol/L Tris.Cl（pH8.0）、10mmol/L EDTA（pH8.0）。
溶液I可成批配制，在10 lbf/in2（6.895x104Pa或者是115 ℃）高压下蒸气灭菌15min，贮存于4 ℃。
发育生物学实验
实验一植物总RNA的提取一、目的掌握提取RNA基本方法，该方法提取的RNA可用于Northern印迹分析、cDNA合成和体外翻译等。
二、原理Trizol 是一种新型的总 RNA 抽提试剂，主要成分是异硫氰酸胍和酚。
细胞在异硫氰酸胍作用下被裂解，同时核蛋白体上的蛋白变性，核酸释放。
释放出来的DNA和RNA由于在特定pH下溶解度不同而分别位于整个体系中的中间和水相，从而得以分离。
再利用异丙醇把上清液中的RNA在低温下沉淀下来。
三、材料、试剂及仪器1、材料新鲜的大豆叶片。
2、试剂Trizol液氮无水乙醇75%乙醇（0.1% DEPC水稀释）氯仿异丙醇0.1% DEPC水： 200 mL双蒸去离子水加0.2 mL DEPC混匀，37℃放置过夜后高压灭菌。
3、仪器用品制冷离心机、高压灭菌锅、旋涡混合器、研钵、紫外仪、1.5 mL离心管、一次性手套、棉手套、微量移液器及吸头等。
四、操作步骤（1）液氮研磨幼叶（100 mg），研磨的粉末转移至预冷的1.5 mL离心管中。
（2）加入1 mL Trizol，用漩涡混合器混匀。
（3）室温放置5-10 min, 使得核蛋白与核酸完全分离。
（4）12000 rpm/min离心10 min， 4℃，取上清。
（5）上清放置室温5 min，加入0.2 mL氯仿，用力颠倒混匀15 s。
（6）室温静置10 min。
（7）12000 rpm/min离心10 min, 4℃。
（8）取上清，加入等体积异丙醇，轻轻颠倒混匀。
（9）室温放置5-20 min。
（10）12000 rpm/min离心10 min, 4℃，弃上清。
（11）用75%乙醇1 mL洗涤沉淀，8000 rpm/min离心5 min，4℃。
弃上清，注意防止RNA 丢失。
（12）室温干燥沉淀5 -10 min。
（13）沉淀物溶解在30-50 μL DEPC水中。
所得到的RNA溶液置于-70℃保存。
五、思考题1、为什么RNA不稳定？实验中如何防止RNase污染？2、如何评价RNA提取的质量？实验二总RNA的电泳分析一、目的掌握总RNA的电泳分析方法。
小鼠发育生物学实验内容
小鼠发育生物学实验内容实验一：小鼠卵母细胞和精子的形态观察一、实验目的：掌握胚胎体外操作工具的制备、小鼠超数排卵方法以及小鼠精子和不同发育阶段观卵母细胞的收集方法，观察精子结构和运动状态，评估精子活力，观察卵母细胞结构，了解体外授精操作过程。
二、操作过程：1 胚胎体外操作工具制备在酒精喷灯上将玻璃管拉成直径1mm的细管，连上乳胶管即可。
2 小鼠的抓去与保定3 收集精子断颈处死公鼠，打开腹腔，找到睾丸和附睾，剪取附睾尾，剪碎，置1.5ml离心管底部，加0.5ml 生理盐水，置37度水浴锅20分钟，用吸管从离心管上部取50微升液体，置细胞计数板，观察精子结构、密度和活力。
精子活力计算公式：精子活力＝视野中直线运动的精子数/视野中总精子数4 收集卵母细胞成熟卵母细胞的收集：母鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素PMSG（每只10单位），48小时后再注射人类绒毛膜促性腺HCG（每只10单位），18小时后断颈处死母鼠，打开腹腔，剪下输卵管，用镊子刺破输卵管壶腹部，释放卵母细胞，用透明质酸酶溶液（10毫克/毫升生理盐水）处理卵母细胞以除去颗粒细胞，在实体显微镜下观察卵母细胞的结构。
未成熟卵母细胞的收集：断颈处死性成熟前母鼠，打开腹腔，剪取卵巢，加入1毫升盐水，用刀片或镊子捣碎卵巢，寻找生发泡状态的卵母细胞，观察卵母细胞结构。
5 体外授精将卵母细胞与精子共培养（微滴培养法）（演示）三、实验结果各种精子和卵子的形态绘图；精子活力；精子密度四、实验收获与体会，存在问题和改进意见。
实验二：小鼠早期不同发育阶段胚胎的收集、观察以及胚胎移植一、实验目的：掌握小鼠附植前胚胎收集方法，观察不同发育阶段小鼠胚胎的结构，认识小鼠早期胚胎形态学，并了解体内发育阶段与所处生殖器官位置的关系，了解小鼠胚胎移植的基本原理和操作过程。
二、操作过程：1 小鼠超数排卵程序中午12时腹腔注射PMSG，48小时后腹腔注射HCG并与公鼠合笼交配，次日清晨检查阴道栓，如果发现阴道栓则妊娠0.5天。
小鼠发育生物学实验内容
小鼠发育生物学实验内容实验一：小鼠卵母细胞和精子的形态观察一、实验目的：掌握胚胎体外操作工具的制备、小鼠超数排卵方法以及小鼠精子和不同发育阶段观卵母细胞的收集方法，观察精子结构和运动状态，评估精子活力，观察卵母细胞结构，了解体外授精操作过程。
二、操作过程：1 胚胎体外操作工具制备在酒精喷灯上将玻璃管拉成直径1mm的细管，连上乳胶管即可。
2 小鼠的抓去与保定3 收集精子断颈处死公鼠，打开腹腔，找到睾丸和附睾，剪取附睾尾，剪碎，置1.5ml离心管底部，加0.5ml 生理盐水，置37度水浴锅20分钟，用吸管从离心管上部取50微升液体，置细胞计数板，观察精子结构、密度和活力。
精子活力计算公式：精子活力＝视野中直线运动的精子数/视野中总精子数4 收集卵母细胞成熟卵母细胞的收集：母鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素PMSG（每只10单位），48小时后再注射人类绒毛膜促性腺HCG（每只10单位），18小时后断颈处死母鼠，打开腹腔，剪下输卵管，用镊子刺破输卵管壶腹部，释放卵母细胞，用透明质酸酶溶液（10毫克/毫升生理盐水）处理卵母细胞以除去颗粒细胞，在实体显微镜下观察卵母细胞的结构。
未成熟卵母细胞的收集：断颈处死性成熟前母鼠，打开腹腔，剪取卵巢，加入1毫升盐水，用刀片或镊子捣碎卵巢，寻找生发泡状态的卵母细胞，观察卵母细胞结构。
5 体外授精将卵母细胞与精子共培养（微滴培养法）（演示）三、实验结果各种精子和卵子的形态绘图；精子活力；精子密度四、实验收获与体会，存在问题和改进意见。
实验二：小鼠早期不同发育阶段胚胎的收集、观察以及胚胎移植一、实验目的：掌握小鼠附植前胚胎收集方法，观察不同发育阶段小鼠胚胎的结构，认识小鼠早期胚胎形态学，并了解体内发育阶段与所处生殖器官位置的关系，了解小鼠胚胎移植的基本原理和操作过程。
二、操作过程：1 小鼠超数排卵程序中午12时腹腔注射PMSG，48小时后腹腔注射HCG并与公鼠合笼交配，次日清晨检查阴道栓，如果发现阴道栓则妊娠0.5天。
发育生物学实验报告
发育生物学实验报告发育生物学实验报告引言发育生物学是研究生物体从受精卵到成熟个体的发育过程的科学。
通过实验研究，我们可以深入了解生物的发育机制，揭示生命的奥秘。
本实验旨在通过观察和记录昆虫的发育过程，探索其发育规律和影响因素。
材料与方法在实验中，我们选择了果蝇（Drosophila melanogaster）作为研究对象，因其短寿命、繁殖力强以及遗传学研究的便利性。
我们从实验室中获得了果蝇的受精卵，并将其放置在特定的培养基中。
我们将实验分为以下几个步骤：1. 取出果蝇受精卵：使用显微镜和细长的玻璃棒，小心地取出果蝇受精卵，并将其放入培养基中。
2. 培养受精卵：将培养基置于恒温箱中，保持适宜的温度和湿度条件。
观察受精卵的发育情况，并记录下来。
3. 观察幼虫的发育：当受精卵孵化为幼虫后，我们将其转移到新的培养基中。
每天观察幼虫的体长、体重和外部形态的变化，并记录下来。
4. 观察蛹的形成：当幼虫进入蛹化阶段时，我们将其转移到另一个培养基中。
观察蛹的外部形态变化，以及蛹壳的颜色和硬度的变化。
5. 观察成虫的出现：当蛹化完成后，成虫开始出现。
我们将其转移到新的培养基中，并观察其外部形态、行为特征和寿命。
结果与讨论通过实验观察和记录，我们得出了以下结论：1. 发育过程的时间：果蝇的发育过程相对较短，从受精卵到成虫出现，大约需要10-14天的时间。
其中，受精卵孵化为幼虫的时间约为3-4天，蛹化过程大约持续5-7天。
2. 发育过程的特征：果蝇的发育过程经历了受精卵、幼虫、蛹和成虫四个阶段。
每个阶段都伴随着特定的形态和生理变化。
例如，幼虫阶段的果蝇会经历多次蜕皮，体长和体重会不断增加。
3. 发育过程的影响因素：果蝇的发育过程受到多种因素的影响，包括温度、湿度、养料和遗传因素等。
例如，较高的温度可以加快果蝇的发育速度，而缺乏养料则会延缓其发育进程。
4. 遗传变异的观察：通过观察果蝇群体中的遗传变异现象，我们可以深入了解基因对发育过程的影响。
生物学(1)实验指南
生物学(1)实验指南
实验简介
本实验指南旨在介绍生物学实验的基本原理和操作步骤，帮助学生正确进行实验，并获取准确的实验结果。
实验材料
下列实验材料将在本实验中使用：
- 试管
- 显微镜
- 培养皿
- 显微镜玻片
- 可用于观察生物样本的显微镜槽
实验步骤
以下是本实验的基本步骤：
1. 准备实验材料并摆放在实验台上。
2. 按照实验要求准备生物样本。
3. 将生物样本放置在显微镜玻片上，并盖上一张干净的玻片。
4. 将样本放入显微镜中，并通过调整放大倍数和焦距来观察样本。
5. 记录观察到的样本特征和细节。
6. 当观察完成后，将样本从显微镜中取出，以便进行下一次观察。
7. 清理实验现场，并妥善保管实验材料。
注意事项
- 在进行实验时，应遵循实验室安全操作规范，戴上适当的实
验手套和眼镜。
- 在使用显微镜时，要小心操作，避免将样本弄脏或损坏仪器。
- 记录观察结果时，要准确详细地描述样本的特征，包括颜色、形状、大小等。
- 在进行实验之前，确保已经理解实验目的和要求，并按照要
求来进行实验。
结论
通过正确进行生物学实验，我们可以观察和了解生物样本的结
构和特征，进一步认识生物学知识，并培养实验操作和观察分析的
能力。
请根据实验要求和具体情况进行实验，并严格遵守实验室的安全规定。
发育生物学实验
方法与步骤 青蛙排卵季节，携带长柄 铁勺，水桶、10%福尔马 林及玻璃小瓶若干，在早 上5点半——6点到达蛙卵采
集地。
如见雌蛙产卵，即用铁勺轻 轻捞取新鲜卵于水桶中（水 和草用原地的）如未见产卵， 可捞取胶膜清新透明，动植 物极黑白分明的新鲜卵团。 并迅速用10%福尔马林固定一 些新鲜卵于小瓶中。
方法与步骤 1、用注射器将1ml垂体提取
物从蛙的皮下注入腹腔， 记上“实验”标签。 2、取另一只蛙，注入lml任 氏液，记上“对照”标 签。
3．放置约90min后，检查每 只蛙的泄殖腔内是否有卵子。 检查方法是用手握蛙，利用其 腹部外翻压力，使输卵管内少 量卵被推出，在泄殖腔的开口 处便可见到。如没有见到卵子， 可以再放些时间再观察。
14天后观察结果，并加以描述。 提示：
1、甲状腺素的用量？ 2、同一饲喂量。 3、同一环境条件。
从药店购买10片甲状素片， 把药片研碎和等量的面粉混 合均匀加水调成糊状，倒在 玻璃片上阴干，然后将阴干 的混合物捏碎贮藏起来备用。
对已长出后肢的甲、乙两组蝌 蚪，对一组（甲组）除每天喂 以蛋黄粒和菜叶外，加喂甲状 腺素片和面粉的混合碎粒。对 另一组（乙组）蝌蚪只喂蛋黄 粒和菜叶，这样处理7天后，再 喂以相同的食物，不再加喂甲 状腺素。
二、两栖类早期胚胎发育 （设计）
方法一 青蛙的早期胚胎发育
目的要求 观察青蛙的 早期胚胎发育
基本原理 蛙卵是观察两栖类早期胚胎
发育的好材料。青蛙一般早上6 时产卵，随即受精，2小时后即 分裂为2细胞期，以后每隔1-1.5 小时分裂一次，依次经过2、4， 8、16．32，64……个细胞期，到
下午已达胚囊期。
16周
主要形态特点 生态特点 前肢长出， 食小植物 尾开始退化 后肢长成， 开始登陆 肺代替鳃， 尾缩短 蝌蚪变成蛙 登陆
发育生物学大实验报告
发育生物学实验报告【实验目的】1.学习掌握发育生物学常用实验方法之一RT-PCR，了解基因表达的研究方法;2.通过SDS-PAGE技术，研究果蝇总蛋白表达情况。
【实验方法】基因表达的研究方法：（一）转录水平-mRNA1.RT-PCR（Real-time RT-PCR）2.Microarray3.Northern blot4.RNA原位杂交（in situ hybridization）（二）翻译水平-蛋白质1.Western blot2.免疫组化（immunohistochemistry）发育生物学常用研究方法：RT-PCR，SDS-PAGE【实验原理】（一）背景知识1、基因表达：单拷贝基因表达存在逐步放大机制，如一个蚕丝心蛋白基因104个丝心蛋白mRNA（每个mRNA存活4d，可以合成105个丝心蛋白）共合成109个丝心蛋白。
因此单拷贝基因的mRNA表达水平对于其功能水平的调控是非常重要的。
2、PCR技术：即聚合酶链式反应。
在模板、引物和四种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促反应，其特异性由两个人工合成的引物序列决定。
反应分三步：A、变性：通过加热使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA；B、退火：将反应混合液冷却至某一温度，使引物与模板结合。
C、延伸：在DNA聚合酶和dNTPs及Mg2＋存在下，退火引物沿5' 3'方向延伸。
以上三步为一个循环，如此反复。
3、逆转录酶和RT-PCR逆转录酶是存在于RNA病毒体内的依赖RNA的DNA聚合酶，至少具有以下三种活性：1、依赖RNA的DNA聚合酶活性：以RNA为模板合成cDNA第一条链；2、Rnase水解活性：水解RNANA杂合体中的RNA；3、依赖DNA的DNA聚合酶活性：以第一条DNA链为模板合成互补的双链cDNA.（二）RT-PCR的准备：1、引物的设计及其原则：1）引物的特异性决定PCR反应特异性。
因此引物设计是否合理对于整个实验有着至关重要的影响。
发育生物学实验报告
发育生物学实验报告篇一：遗传学实验-果蝇杂交实验实验报告传学设计性实验报告实验名称果蝇杂交实验学院生命科学学院专业生物技术班级名称学生姓名学号任课教师完成日期 XX年11月15日教务处制1前言1.1 实验目的通过实验验证分离规律、自由组合规律、伴性遗传和连锁互换规律，掌握果蝇杂交的实验技术和基因定位的三点测验方法，在实验中熟练运用生物统计的方法对实验数据进行分析。
1.2 实验原理果蝇（fruit fly）是双翅目（Diptera）昆虫，属果蝇属（genus Drosophila），约有3000多种，我国已发现800多种。
大部分的物种以腐烂的水果或植物体为食，少部分则只取用真菌，树液或花粉为其食物。
以果蝇作为遗传学研究的材料，利用突变株研究基因和性状之间的关系已近一百年，至今，各种研究遗传学的工具已达完善的地步，果蝇对今日的遗传学的发展有其不可磨灭的贡献；从1980年初，Drs. C. Nesslein-Volhard和E. Weichaus以果蝇作为发育生物学的模式动物，利用其完备的遗传研究工具来探讨基因是如何调控动物体胚胎的发育，也带动了其它模式生物（线虫、斑马鱼、小鼠和拟南芥等）的研究，且有非常具体的成果。
通常用作遗传学实验材料的是果蝇。
用果蝇作为实验材料有许多优点：⑴饲养容易。
在常温下，以玉米粉等作饲料就可以生长，繁殖。
⑵生长迅速。
十天左右就可完成一个世代，每个受精的雌蝇可产卵400～500个，因此在短时间内就可获得大量的子代，便于遗传学分析。
⑶染色体数少。
只有4对。
⑷唾腺染色体制作容易。
横纹清晰，是细胞学观察的好材料。
⑸突变性状多，而且多数是形态突变，便于观察。
果蝇的性别及突变性状的鉴别：果蝇的每一体细胞有8个染色体（2n=8），可配成4对，其中3对在雌雄果蝇中是一样的，称常染色体。
另外一对称性染色体，在雌果蝇中是XX，在雄蝇中是XY。
果蝇的雌雄在幼虫期较难区别，但到了成虫期区别相当容易。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验一小鼠骨髓间充质干细胞的分离培养
一、目的要求
1．掌握小鼠骨髓间充质干细胞的分离培养方法。
2．了解小鼠骨髓间充质干细胞的鉴定方法。
3．了解小鼠骨髓间充质干细胞定向分化和鉴定方法。
二、材料与设备
1．动物：SD大鼠。
2．主要试剂：胎牛血清（FBS），DMEM--LG培养基，PBS，抗体（NSE和GFAP）。
3．主要器材与仪器：手术剪，手术镊，眼科剪，眼科镊，培养瓶，培养皿，称量瓶，刻度离心管，吹打管，注射器，倒置相差显微镜，CO2培养箱
三、实验步骤
1．小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSC)的分离培养:
⑴小鼠BMSC的分离和原代培养：
①以颈髓离断法处死小鼠。
在无菌条件下取出小鼠股骨，除去骨表面附着的组织，用PBS 清洗干净。
②用剪刀去除股骨两端，暴露骨髓腔。
无菌条件下用5ml注射器抽取PBS约3-4ml将小鼠股骨内的骨髓冲出，收集骨髓冲洗液，将收获的全部骨髓用注射器反复抽吸，以打散组织成为细胞悬液。
③收集细胞悬液约7ml并将其转入15毫升离心管中，1500r/min离心5min，弃上清液及脂肪层。
④在细胞沉淀中加入5-6ml含10%胎牛血清的DMEM一LG培养基，倒置显微镜下观察，37℃、5%CO2 培养箱中培养。
2. 带学生在电脑上观看以往的小鼠间充质干细胞免疫荧光图片。
实验二大鼠神经干细胞的分离培养
一、目的要求
1．掌握大鼠胚胎神经干细胞的分离培养方法。
2．了解大鼠胚胎神经干细胞的鉴定方法。
3．了解大鼠胚胎神经干细胞定向分化和鉴定方法。
二、材料与设备
1．动物：孕龄约15天的Wistar或SD孕鼠
2．试剂：条件培养基(DMEM/F12+20ng/mlbFGF+20ng/mlEGF+20μl/mlB27)，D-Hank’s液(NaCl 8g, KCL0.4g，Na2HPO4.12H2O 0.1g, KH2PO4 0.06g, NaHCO3 0.35g, 加水1000ml溶解，调PH 值为7.2－7.4，高压灭菌后，4℃储存备用)，0.25％胰蛋白酶（D-Hank’s液配制，过滤灭菌，-20℃储存），抗体(巢蛋白、NSE、GFAP)。
3．主要器材与仪器：青霉素瓶，手术剪，手术镊，眼科剪，眼科镊，注射器，小弯镊，CO2恒温培养箱，倒置相差显微镜等。
三、实验步骤
1．取孕龄约15天的孕鼠一只，腹腔麻醉后，用70％乙醇消毒腹部皮肤，剪开腹部皮肤及打开腹腔，取出子宫，转入冰盆上盛有约D-Hank’s液的培养皿中。
2．从子宫中取出胚胎，转入另一盛有D-Hank’s液的培养皿中，仔细分离，剪下三个脑泡，去处脑膜及血管后，放入装有1ml D-Hank’s液的小青霉素瓶中。
3．用眼科剪反复剪碎脑组织，加入0.25％的胰蛋白酶约1ml ，37℃消化20分钟后，用血清5-10滴中止消化，1000r/min离心5min，弃上清，加入5-6ml条件培养基，吹打细胞，收集单细胞悬液，将其种于装有条件培养基的培养瓶中，倒置显微镜下观察，37℃、5%CO2 培养箱中培养。
4. 带学生在电脑上观看以往的小鼠神经干细胞免疫荧光图片。
实验三大鼠胚胎标本的制作
一、目的要求
1．掌握大鼠胚胎的取材和固定，HE染色方法。
2．了解大鼠胚胎的包埋和切片方法。
二、材料与设备
1. 动物：孕鼠
2. 取材用具：麻醉剂注射器帆布手套手术手套搪瓷盘眼科剪眼科镊大直剪有齿镊
金属镊棉球烧杯酒精灯70%酒精200 ml 固定液广口瓶
3. 染色用具：胚胎组织石蜡切片玻璃瓶漏斗染色缸树胶瓶盖玻片
三、实验步骤
1.HE染色程序
脱蜡二甲苯①20-30min
脱蜡二甲苯②20-30min
100%酒精① 5 min
100%酒精② 5 min
95%酒精 5 min
80%酒精 5 min
水洗1min
苏木素10-15min
水洗1min
1%盐酸酒精15sec
流水冲洗15-30min
伊红10-15min
80%酒精过一道
95%酒精3-5 min
100%酒精①10-15 min
100%酒精②10-15 min
透明二甲苯①10-15 min
透明二甲苯②10-15 min
中性树胶封片
2.带学生在二楼实验室观看胚胎标本HE染色图片。