单细胞培养
第七章植物细胞和次生物质生产详解
（三）成功的悬浮细胞培养体系必须满足 三个条件：
• 悬浮培养物分散性良好，细胞团较小，一般 在30～50个细胞以下
• 均一性好，细胞形状和细胞团大小大致相同。
• 细胞生长迅速，悬浮细胞的生长量一般2～3 天甚至更短时间便可增加一倍。
• 1悬浮培养体系的建立
①材料
• 愈伤组织
• 外植体：幼苗、胚轴、子叶。
如果使处在静止期的细胞悬浮液保存时间太 长，则会引起细胞的大量死亡和解体。因此，当 细胞悬浮液达到最大干重产量之后，即在刚进入 静止期的时候，须尽快进行继代。
• （2）连续培养
指在培养过程中，不断注入新鲜培养基， 排掉用过的培养基，保持培养物的容积恒 定，使培养液中的营养物质得到不断补充。 类型分为封闭型和开放型两种
例如： 麻醉药物：莨菪碱 健身药品：人参皂苷、人参三醇 心血管系统方面：芸香苷、槲皮素 天然色素：叶黄素、类胡萝卜素 香水香料类：挥发油
• 3、植物细胞大规模培养是生产植物次生产 物的理想途径 保护生态环境 提高生产效率 发展新型生物技术产业
植物次生代谢产物市场潜能
产品成分 用途
年销售额（亿美元）
• 例如：新疆紫草愈伤组织的诱导
• 种子 消毒 萌发 根、胚轴、子叶（作 为外植体） 接种到含2.4-D和KT的MS培养基 上诱导愈伤组织。
② 筛选方法
• 愈伤组织外观为大小均一的小颗粒，疏 松易碎、外观湿润、，细胞色泽呈鲜艳 的乳白或淡黄色。
• 挑出愈伤组织培养于高有机质、高激素、 低糖的培养基中培养，诱导出更多得到 愈伤组织。
平板培养技术
二、植物细胞的悬浮培养
• （一）定义： • 细胞悬浮培养（cell suspension culture）：
单细胞生物分批培养过程中,结合生长曲线图,阐述实践指导意义
单细胞生物分批培养过程中,结合生长曲线图,阐述实
践指导意义
在培养细胞生产代谢产物时,产物的最大形成速率往往是在生长受到限制的情况下得到。
采用适当的限制性基质限制细胞的生长,有利于提高产物的生产效率。
酵母菌Y33::YFD71。
3是腺嘌呤,组氨酸和亮氨酸缺陷的基因工程菌,摇瓶培养,当菌体生长受腺嘌呤限制时分泌的蛋白量明显增加；
而当菌体生长受亮氨酸限制时,则蛋白的合成受到影响。
这是因为生长受到腺嘌呤限制时,过量的氨基酸可用于蛋白质的合成,而生长受亮氨酸限制时,蛋白质的合
成也受到了限制。
分批培养过程中,瑞士乳杆
菌(Lactobacillushelveticus)
在延滞期,对数期,减速期和稳
定期均可利用乳糖产生乳酸,而
在衰亡期开始就不再合成乳酸。
人们将瑞士乳杆菌的延滞期和对数期统称为生长偶联期。
在适宜的发酵条件下,瑞士乳杆菌在减速期的短短2h内产生的乳酸量几乎占总产量的50%,最大的产物形成速率是在最大生长速率之后的0。
5h-1h,即减速期的开始阶段。
而在生长偶联期,产物的形成速率仅接近于分批培养全过程的平均值。
与之相反,在稳定期乳酸的产率则比较低。
植物组织培养复习资料
植物组织培养复习资料一、名词解释。
（每个3分，共24分）１、植物组织培养：在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或发育成完整植株的技术。
又称植物离体培养。
２、细胞的全能性：指植物体的任何一个有完整细胞核的活细胞都具有该植物的全套遗传基因和产生完整植株的潜在能力。
3、脱分化：离体培养条件下生长的器官、组织、细胞，经过细胞分裂或不分裂而恢复分生状态，形成无组织结构的细胞团或愈伤组织或成为未分化细胞特性的细胞过程。
4、外植体：从活体植物上切取下来，用以进行离体培养的那部分组织或器官。
5、单细胞培养：对分离的到的单个细胞进行培养，诱导其分裂增殖，形成细胞团，再通过细胞分化形成芽、根等器官或胚状体，直至长成完整植株的技术。
6、胚状体：亦称体细胞胚。
指在组培过程中，由植物体细胞所形成的类似于合子胚的结构。
它具有根、茎结构，能够一次性形成再生植株。
7、平板培养：是将悬浮培养的细胞接种到未固化的薄层培养基中，使其与培养基充分配合，再倒入培养皿中进行培养的方法。
8、人工种子：指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽，被包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中，从而形成能发芽出苗的颗粒状。
9、次生代谢产物：指植物生长发育正常运行的非必需的小分子有机化合物，其产生和分布通常有种属、器官、组织以及生长发育时期的特异性。
10、再分化：细胞经过脱分化形成的愈伤组织再次分化，进行器官形成，产丛生芽或胚状体，形成完整植株的过程。
11、无病毒苗:指不含该种植物主要危害病毒的苗木。
二、不定项选择1、培养室里的湿度一般保持在____C_____.A 30~40%；B 50~60%；C 70~80%；D 80~90%2. 下列不属于生长素类的植物激素是____A D____。
A Kt；B IAA；C NAA；D ZT3. 影响培养基凝固程度因素有_______A B C D__.A 琼脂的质量好坏；B 高压灭菌的时间；C 高压灭菌的温度；D 培养基的PH4. 活性炭在组织培养中的作用有_______ABC_。
单细胞藻类的培养3-26
酸碱度
各种单细胞藻类对pH值各有一定的适应范围。
在人工培养单细胞藻类时，由于营养元素的加入， 藻类细胞对CO2和培养液中某些元素的优先吸收 （如酸性盐中的酸根离子元素），导致pH值上升， 影响藻类的生长
所以必须测定pH值的变化，在超出藻类适应范围 时，应采取相应的措施。一般采用加入1mol/l浓 度的盐酸或氢氧化钠溶液的方法调节。
在培养液中加入碳酸盐，如碳酸氢钠等。
盐度
各水域中含盐量的差异很大，淡水水域的含 盐量在0.01-0.5‰，半咸水的含盐量在0.516‰，海水水域的含盐量在16-47‰，超盐水 水域的含盐量在47‰以上。
各种水生生物对盐度变化的适应能力是很不 相同的，按其适应能力的大小，可分为广盐 性生物和狭盐性生物两大类。单细胞藻类对 生活环境中盐度的变化有一定的适应范围。
提供其生长所需的 各种最佳环境因子 和营养水平
3 如何延长指数生长期，推迟相对生长 下降期出现？
适时添加营养盐 人工充二氧化碳
（含1-5%二氧化碳的 混合空气） 定期检测并调整培 养液的pH 增强光照强度 改变培养方式
三 影响单细胞藻类生长的环境因子
光照 （光源，光质，光强，光周期） 温度 盐度 pH 营养素
人工光源：利用白热电灯或白色日光光源。目前 我国的单细胞藻类的培养，主要用太阳光源，在 阴雨天阳光不足时，用人工光源作为补充。
光照强度与光合作用
光在细胞培养液中的吸收与穿透：光透入深 度的大小取决于培养液中藻类细胞的密度， 密度愈大，光透入的深度愈浅
在高密度下，仅表面的藻类细胞能吸收到光 合作用所需要的饱和光照强度，下层细胞只 能得到不足的光照强度，甚至处在“黑暗” 之中。
单细胞育种的流程
单细胞育种的流程下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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单细胞藻类培养技术
实用技术—生物饵料责任编辑 李振龙单细胞藻中含有大量的多聚不饱和脂肪酸（PUFAs）、EPA和DHA，而且多数的单细胞藻具有生长繁殖快、环境适应力强、培养周期短等特点。
可实现在人工控制条件下大量培养获得高产的目的，是鱼、虾、贝类等海产品的理想鲜活饵料，藻类培养质量的好坏将直接影响海产品育苗的成败，因此单细胞藻类的培养技术是育苗成功的基础和关键技术。
随着人工育苗技术的成熟，单细胞藻类在贝类、虾蟹类、鱼类人工育苗中得到了广泛应用。
以下简述一下藻类培养的注意问题：一、培养方式根据藻种培养的目的和要求的不同，单细胞藻的培养方式也有多种。
根据藻的纯度一般分为纯种培养和单种培养。
培养方法主要分为保种室培养和生产性培养。
目前水产养殖过程中最为基础的培养是直接在自然水域中培养单细胞藻。
经过滤的海水或淡水里有硅藻、绿藻等各种单细胞藻；有轮虫、桡足类、枝角类等各种浮游动物；有多种小型底栖动物等，利用繁殖自然水体里本身就有的单细胞藻，促进浮游动物、底栖动物等基础饵料生物的生长繁殖。
而随着土池育苗的发展以及藻类在毒理学科研的需要，也可使用封闭或半封闭方式定向培养纯种单细胞藻。
二、扩种目前的生产性培养主要分为一级、二级和三级培养。
一级是藻种活化培养，一般在单细胞藻的保种室里进行，多采用250mL～5000mL的三角烧瓶，逐渐扩大培养；二级是藻种扩大培养，采用40L或50L的塑料桶、塑料袋充气培养单细胞藻；三级是在土池里投喂饵料的培养。
刚买回来的藻种一般进行一级扩种，扩种过程要求严格的无菌环境，最好每天早上7∶30左右，时间不易过早，待藻种上浮后扩种，取上层活跃藻体转接。
不宜在晚上接种，因为晚上不少藻类沉在底部，而白天藻类进行光合作用，趋光上浮，便于观察其运动能力，还可起到选种的作用；刚买回的藻种第一次转接时不易全部转接，转接其三分之一至二分之一即可，并放在温度较低、光线较弱的地方培养，待藻适应光照条件后再调至其生长所需正常温度、光照条件进行培养，20天左右转接一次。
在较差环境条件下单细胞藻类的培养
消毒用酒 精 ，还 有毛刷 、脱脂棉 、漏 斗、毛 巾、盆 、
皮筋 、温度 计、手套、水 舀等工具 ；二级扩种培养主
要用５１ ０ 白塑料桶 ；三 级培养 主要在 饵料池 中进 行 ， 还 需准备海 绵、刷子 、拖鞋 、吸 管 （ 毫升） 。药 品 ５ 等 主要有盐 酸、次氯酸钠 、硫代硫酸钠 、淀粉 、碘化钾
酸或氢 氧化钠调节 。⑤观察藻类生长情况 ：观察颜色 是否正常 ，一般在接种一周后 ，藻液 的颜 色加深 ，而 且藻 液色 泽 一致 ，无 分层现 象 。出现特 殊 的颜 色变 化 ，说 明藻液受 到污染 。观察藻 类细胞 的运动情 况 ，
暖气设 备，室温较低 ，温度 １ ～１ ￣ ２ ９Ｃ，温度 幅度变 动
－皿 豆
ｌ 旦 塑旦 夔
海参 、海胆 、虾蟹 的育苗 生产都 离不 开单细胞 藻 类 的培养 ，单细胞藻类具有生长快 、易繁殖 、营养价
值 高 的 特 点 ，是 水 生 动 物 幼 体 的 良好 饵 料 之 一 。单 细
扩种，就是将 原来 ２ 瓶扩成 ３ 瓶，１ 升藻液也可 以添加 ０５ ． 毫升 尿 素 。扩 种 时 间最好 控 制 在上 午 ８ Ｏ —９ ：０ ：
盐 的配 制用 淡 水和 扩种 用海 水 ，需沉 淀 、脱脂 棉过
滤 ，煮沸消毒处理 。因为 当地淡水硬度较大 ，淡水 必 须先静 置沉 淀，然后用脱脂棉过滤 ，经煮沸消毒后才
能使用 。海水的过滤主要经砂滤罐处理 。由于室 内无
注 意防泥 尘进 入饵料池 。④ 酸碱度 的调节 ：每天 用 ｐ Ｈ 试纸检测酸碱 度的变化 ，如 果过高过低 ，用 １ 当量盐
０ ， 同 时 控 制 好 室 温 ，可 用 电暖 风 和 电炉 子加 热 ， 白 ０
单细胞培养
• 看护培养法 • 有些植物细胞，一旦分离出来，不仅不能分裂、增殖，还 可能死亡。看护培养法是用一块愈伤组织来哺育单细胞， 使其正常分裂和增殖的培养方法。用微量移液管或小勺， 将来自悬浮培养物或愈伤组织的单细胞转移到漂浮的定量 滤纸上，滤纸下是旺盛生长的愈伤组织。几天之后，在愈 伤组织看护影响下，在一般培养基中沉寂的细胞开始分裂 生长。
悬浮细胞的特点以及注意事项
• • • • • • • • 特点： 1.能够提供大量的均匀的植物细胞 2.细胞增殖速度快 我们在进行悬浮细胞分批培养时有五个时期分别是：滞后 期、对数生长期、直线生长期、减慢期、静止期。 注意事项： 1.开始的时候尽可能选择使用松散的愈伤组织 2.缩短两次继代的时间可以一直使悬浮细胞保持对数生长。 3.如果处在静止时期的时间过长，则容易引起悬浮细胞的 解体和死亡。
分离单细胞的方法
1.从组织器官中得到单细胞： 1.1机械法：先把叶片轻轻研碎 ，然后通过过滤和离心把细胞净化。 其中一种方法是叶片和研磨介质用研钵轻轻研磨，之后匀浆用纱布过滤， 之后低速离心即可。 优点是：细胞可以不受到酶的伤害，也无须质壁分离。 缺点：适用于那些薄壁细胞组织排列松散，细胞间的触点少。 1.2酶解法：指用专一的水解酶(纤维素酶、果胶酶、琼脂酶等)在温和条 件下分解胞间层，游离细胞。 优点:能够有效的分离单细胞。 缺点：细胞易受到损害。
• 微室培养法 • 人工制造一个小室，将单细胞培养在小室中的少量培养基上， 使其分裂、增殖形成细胞团的方法，称为微室培养法，亦称为 双层盖玻片法。其操作是将携带1个细胞的1滴培养基置于无菌 载玻片上，并用无菌矿物油包围培养基液滴。再分别在培养基 液滴的两侧滴1滴矿物油，在每一矿物油滴上放一张盖玻片。 然后，把第三张盖玻片放在培养基液滴上，并与其他2张盖玻 片相连，在矿物油内形成包含单细胞的无菌微室，矿物油阻止 微室中的水分散失，但允许气体交换。将微室载玻片置于培养 皿中培养，一旦肉眼可见到细胞团，立即揭开盖玻片，转移到 新鲜液体培养基或半固体培养基上继代培养。微室培养法的特 点是：①能够在显微镜下追踪观察单细胞分裂增殖形成细胞团 的全过程；②培养基少，营养和水分难以保持，pH值变动幅 度大，
单细胞培养
液体培养
悬浮细胞
过筛
要求：松散性好，增殖快，再生能力强。其外观 一般是鲜艳的乳白或淡黄色，呈细小颗粒状，松 散易碎。
适于悬浮培养
适于再生植株
将愈伤组织在液体培养基中培养，建立悬浮培养物
优点：细胞团成小细胞团或单细胞；在培养基 中均匀分布；有空气交流。 注：由愈伤组织分离单细胞的关键是获得均一、 松散的适合悬浮培养的愈伤组织
2、单细胞培养方法：
2.1培养方法 1）平板培养法 2）看护培养法 3）饲喂层培养法 4）微室培养法 2.2 单细胞培养的影响因子 1）细胞植板密度 2）培养基的成分
2.1 培养方法： 1）平板法（plating culture） （薄层培养） 1960年Bergamann首创，是在固体培养基中 培养单细胞的一种方法。
• 优点：可对细胞培养过程连续进行显微观 察，了解一个细胞经过生长、分裂、分化， 形成细胞团的全部过程。
• 缺点：微室培养用的培养基量少，营养和 水分就难以保持。pH值变动幅度大，培养 的细胞仅能短期分裂。
2.2 单细胞培养的影响因子
培养基成分
细胞密度
（1） 细胞密度与培养基成分关系 • 当细胞植板密度高时（104～105个/mL） 可使用和愈伤组织培养相同的常规培养基 • 当细胞植板密度低时 要求使用复杂培养基，常采用KM8P培养基 或条件培养基，并结合使用看护培养、饲 喂层培养等方法。
选择起始材料，获得愈伤组织，制备单细胞悬浮系 人工诱变或自发突变
单细胞化 再生植株 突变株的鉴定 栽培 种苗表型： 抗除草剂、抗盐碱、抗病、 抗氨基酸等
（1）选择方法 ①直接选择：将培养细胞置于一定选择压力之下 的选择方法。 选择抗性植株 eg：耐盐、抗除草剂、抗病、抗氨基酸突变体等
植物细胞培养
（2）气升式反应器
●在反应器环流管底部有一个空气喷嘴，空 气以高速度（250-300m/S）喷入环流管， 气泡被分散于环流管液体中 ●借助于环流管内气-液混合物密度与反应主 体密度之差，气-液混合物连续循环流动。 ●培养罐液体中的溶解氧会不断减少，通过 环流管又达到饱和。
（一）植物单细胞的获得
1、从外植体直接分离单细胞
●外植体经过切割、捣碎或酶解，然后经过
一定孔径的不锈钢筛网过滤，得到细胞悬 浮液。 ●悬浮液中所含的完整细胞数量很少， 分散性较好，可以看作是游离的单细胞悬 浮液。
2、从愈伤组织分离单细胞
1）经过愈伤组织诱导获得脱分化愈伤组织 的薄壁细胞团。 2）将细胞团转移到液体培养基中，进行振 荡培养，使细胞团分散成为单细胞，然后用 适当孔径的不锈钢筛网过滤，除去细胞团和 残渣，得到单细胞悬浮液。
2．低温处理法
1) 将收集得到的细胞或小细胞团，在4℃左右 的低温条件下处理1～3d，植物细胞在低温 下全部停止生长繁殖， 2)然后再悬浮于新鲜的液体培养基中，在25℃ 培养，于是细胞几乎同时开始生长繁殖，处 于同步状态。
3．限制营养处理法
1)将细胞或小细胞团悬浮在营养物质受到限 制的培养液中培养几天，由于营养缺乏， 细胞的生长繁殖受到限制，几乎所有的细 胞都停止生长； 2)然后再将细胞转移到新鲜的培养液中，进 行悬浮培养，则细胞几乎同步地开始生长繁 殖。
1. 平板培养法
●概念：将制备好的单细胞悬浮液，按照一定
的细胞密度，接种在1mm的薄层固体培养基 上进行培养，称之为平板培养。
●由Bergman1960年首创的，其目的是
为了获得单细胞系 ，并研究其生理 生化和遗传上的规律。
特
• 自一个单细胞。 •
S9实验九 植物单细胞分离技术(理论)要点
实验九植物单细胞分离技术（理论）一、植物细胞培养概述指以单细胞（single cell）或细胞团（cell aggregate）为单位进行的植物组织培养方式。
1、技术特点：◆操作简单◆试验重复性好◆单次实验群体大2、培养的植物细胞的特点A、培养时生长速度慢B、直径为20 ~ 150um，比细菌大C、纤维素细胞壁非常脆弱D、生理与代谢活性低E、需求营养成分复杂F、不易于保存G、次生物质的合成与积累和细胞分化过程有关3、细胞培养液的性质◆培养液具有一定的黏度◆提供细胞生长发育所需的营养◆黏度随细胞浓度的增加而增大◆需不停搅拌而进行通气二、植物细胞悬浮培养（一）悬浮细胞培养的优点A、提供大量的均匀的植物细胞B、细胞增殖速度比愈伤组织快C、适宜大规模培养D、增加培养细胞与培养液的接触面，改善营养供应E、避免有害物质的过分积累F、保证氧的充分供给（二）悬浮培养细胞的建立与测定1、诱导建立诱导细胞悬浮培养的方法A、选择一块易破碎的愈伤组织，转移到适合的培养液中，经1~2个周期振荡培养，得到呈分散状的细胞培养物。
B、选择有用的培养材料，进行匀浆处理，过滤，转入液体培养基中培养。
C、选择有用的材料多次转移与液体振荡培养，得到分散程度高的细胞。
悬浮培养的材料：愈伤组织的疏松程度、分散效果的好坏。
2、生长与增殖扩增曲线：◆S形◆延迟期、对数生长期、平台期、衰减期悬浮培养细胞起始浓度：◆一般在0.5 ×105~2.5 ×105个/ml ◆悬浮培养的单个细胞，3~5d 可见分裂状况3、悬浮培养物的保持A、培养瓶◆100ml或250ml的三角瓶作容器◆装20ml或50ml的培养液B、振荡培养装置◆旋转式摇床◆转速控制在120r/min以下◆体积不宜过大，温度可调C、继代培养◆定期继代培养，最适周期为1~2周◆继代时间为1周的可用1：4的接种量◆继代时间为2周的可用1：10的接种量◆移液管口径可稍大，易吸取细胞◆接种前后要用酒精灯灼烧瓶口◆定期检查是否有微生物污染4、生长测定◆对任何一建立细胞系都应进行生长动态测定◆不同培养基及不同条件，细胞的最大生长速率可由细胞数、细胞干重或细胞蛋白的对数对培养时间作坐标而测定◆临界起始浓度：低于此值，细胞无法生长，略高于此值，则延迟期伸长§常用的生长测定方法A、细胞计数血球计数板：计算公式：细胞数/ml = 5大格内细胞总数×5× 104 ×稀释倍数B、细胞体积◆一定量的细胞悬浮液放入15ml刻度的离心管中离心◆以每毫升培养液中细胞体积的毫升数来表示细胞体积C、细胞的鲜重与干重◆将一定量的细胞悬浮液加到预先称重的尼龙布上，用水冲洗并抽滤，然后称重◆测干重时，将离心收集的细胞转移到预先称重的定量滤纸上，然后80℃烘箱内10 ~ 12h，在干燥器中冷却称重◆细胞鲜重与干重一般以每毫升悬浮培养物的重量表示（三）悬浮培养工艺1、成批培养把细胞接种到一个与外界隔绝的只允许气体和挥发性的代谢物质交换的、营养液体积保持不变的密闭系统中培养。
植物单细胞培养和突变体筛选
2019/8/9
3
细
细菌是一群原核生物， 用细胞分裂的方式进行 繁殖，种类约2千多种分 布非常广泛，土壤、大 气、水中，甚至人和动 物的体内外都存在。个 体很小多数在1微米左右， 形态基本有4种， 球状， 杆状，螺旋状和丝状。 可做疫苗和提取抗生素。
菌
2019/8/9
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真菌
第一节 真菌的特征 1、除少数原始种类为单细胞外，其他均为分枝的丝
①层菌纲—银耳、木耳、灵芝、蘑菇等。 ②腹菌纲—马勃、鬼笔等 ③锈菌纲 ④黑粉菌纲
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常见药用植物（1）
茯苓 Poria cocos（Schw．）Wolf． 灵芝 Ganoderma lucidum（Leys．ex Fr．）Karst． 蜜环菌 Armillaria mellea（Vahl．ex Fr．） Kummer． 脱皮马勃Lasiosphaera fenzlii Reich． 猪苓 Polyporus umbellatus（Pers．）Fr． 雷丸 Polyporus mylittae Cook．et Mass． 猴头菌 Hericium erinaceus（Bull．ex Fr．）Pers． 云芝 Coriolus versicolor（Fr．）
2019/8/9
1
第八章 菌类
菌类概述
菌类植物是一个不具自然亲缘关系的类群，它 和藻类一样是一群没有根、茎、叶分化的低等植物，
营养方式是异养 (凡是从活的动植物体内吸取养 分叫寄生。凡是从死的动植物体内或无生命的有机 物质吸取养分叫腐生)。
2019/8/9
2
菌类分类
菌类分为细菌门、粘菌门、真菌门。 细菌门属于原核生物界 粘菌门和真菌门属真菌界和植物界。
贝类育苗中单细胞藻类培养技术
矗墨匹 目曩
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鱼 番 哚 精 鲨 产 ： ｉ ：
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众所周知，味精作为调味料的一种 ，主要成分为谷 氨酸钠。味精于１０年被 日本味之素 （ ０素） ９９ 味 公司所发 现并申请专利。当时称味精为 “ 味之素具有 重 要意 义 。我 国渔 业总 产量 居 世
２培 养器具 各级培养用 的玻璃器皿 、工具都需 ．
煮沸或酒精消毒。三级池可用高锰酸钾溶液由池壁顶部 淋洒 、泼洒池底 、用刷子刷净的方法进行消毒，然后用 消毒过的海水冲洗干净方可使用 。 三、日常管理
藻在光线充足且发育 良好的情况下会上浮，并在液面出
现聚集缕状分布 ，如生长状态不好，则会 出现沉淀。沉 淀藻体如果保持原色，还可能恢复其生长 ，如果变成灰 白色，则表 明已经腐败 ，应及时进行处理 。
一
照，同时防止水面产生菌膜。搅拌 时应注意不要用力太 猛，以防藻液溅 出，相互污染。 ３ 光照 饵料 生产上培养一般利用太 阳光源 ，而 ． 太阳光源具有易变的特 点，因此要根据天气情况随时进 行调整。室内培养饵料应避免阳光直射 ，可采用活动白 帆布篷来调节光照。阴雨天，可适 当采用人工光源的办
藻种 。 二 、培 育设 施
贝类育苗一般处在高温季节，饵料极易被污染，饵 料培养车问应经常消毒，可用稀释漂 白液冲洗走廊，用
颜色会随着浓度的增加而变深。如金藻生长 良好时呈现 金褐色，接种后颜色会逐渐变深且有小气泡产生。而角
毛藻正常生长时颜色为褐色 ，藻体悬浮于水中呈云雾状 水 团。如果出现黄色、乳 白色和蓝色，说明被其他藻类
澈，则可能有敌害生物污染 ，需用显微镜观察，确定不
植物细胞培养及次生产物代谢生产
细胞固定化培养技术按照其支持物不 同可以分为两大类：
包埋式固定化培养系统：支持物多采 用琼脂、琼脂糖、藻酸盐、聚丙烯酰胺等 ；
附着式固定化培养系统：支持物采用 尼龙网、聚氨酯泡沫、中空纤维等材料。
（四）、利用细胞培养生产有用物质
第四章
植物细胞培养及次生产物代谢生产
一、悬浮培养
二、单细胞培养 三、植物细胞的规模化培养及有
用物质生产
一、悬浮培养（cell suspension culture）
悬浮培养是细胞培养的基本方法，是将单个 游离细胞或小细胞团在液体培养基进行培养增殖 的技术。
1、愈伤组织诱导
要求：松散性好，增殖快，再生能力强。其外 观一般是鲜艳的乳白或淡黄色，呈细小颗粒状， 松散易碎。
Circulation through an external loop
旋转式培养系统 一般用于产品中试或某些必需裂解细
胞才能获得目的产物的培养，其优点是控制 精确，处理灵活，缺点是培养体积较小。
②固定化培养系统
这一技术的优点在于： 可以较容易地控制培养系统的理化环境，从而可以研
究特定的代谢途径，并便于调节； 细胞位置的固定使其所处的环境类似于在植物体中所
平板培养中细胞密度和培养基成分是培养成功的关键，而细胞密度 和培养基成分互相依赖（负相关）。
2、看护培养
看护培养（nurse culture）：是由Muir1954年设计的。
操作方法： 在固体培养基上置入一块 活跃生长的愈组织，再在愈 伤组织上放一小片滤纸，待 滤纸湿润后将细胞接种于滤 纸上。当培养细胞长出微小 细胞团以后，将其直接转至 琼脂培养基上让其 迅速生长