单细胞藻类的培养(3)3+6h
单细胞藻类的培养方法
单细胞藻类的培养方法周德山1 胡希亮1 李茂才2(1.连云港市海洋环境检测中心,江苏连云港 222042;2.连云港市海洋与渔业局,江苏连云港 222100)单细胞藻类与我们的水产养殖息息相关,不同的单细胞藻类品种及组成使养殖水体表现出不同的颜色。
单细胞藻类是鱼、虾、蟹、贝类等的直接或间接饵料;水体中单细胞藻类的优劣决定了鱼、虾、蟹、贝类等生态环境的好坏。
在水体中培养单细胞藻类有多种方法,笔者将其总结如下:1 培养单细胞藻采用不同的接种方式1.1 在自然水域中直接培养单细胞藻 在目前的大部分池塘养成及部分鱼、虾、蟹、贝类等育苗过程中,直接利用自然淡水或海水培养单细胞藻。
经过滤的海水或淡水里有硅藻、绿藻等各种单细胞藻;有轮虫、桡足类、枝角类等各种浮游动物;有多种小型底栖动物等,利用繁殖自然水体里本身就有的单细胞藻,促进浮游动物、底栖动物等基础饵料生物的生长繁殖,是目前水产养殖过程中,较为常见的基础饵料生物的培养方法。
自然繁殖单细胞藻的时间要根据生产需要而定,其标准为鱼、虾、蟹、贝类等动物育苗开始后,或者其苗种投放池塘后,育苗幼体或投放的苗种要有适宜的生长发育环境,要有充足的生物饵料吃。
虾、蟹、鱼、贝类等的池塘养成,一般在放养苗种半个月前,开始施肥繁殖单细胞藻,根据水色、透明度调节施肥量及施肥次数,一般将水色调节为黄色或黄褐色,透明度为30~50c m。
水色及透明度不同,单细胞藻的品种组成及密度不同,不同的养殖品种及同一品种的不同发育阶段,对水色及透明度的要求不一样。
在虾、蟹、鱼、贝类等的养殖过程中,要始终保持水质的肥、活、嫩、爽,使虾、蟹、鱼、贝类等水产养殖动物,生活在一个良好的生态环境中。
1.2 使用封闭或半封闭方式定向培养单细胞藻 在大部分的海产动物育苗及一些生态高效养成过程中,使用封闭或半封闭的纯种单细胞藻的三级培养。
如近几年,河蟹土池育苗已兴起热潮,海水的鱼类、贝类、虾类等各种土池育苗也已开始,土池育苗的关键,就是在池塘里繁殖优质的充足的单细胞藻,促使以单细胞藻作为饵料的各种浮游动物、底栖动物等基础饵料生物的大量生长繁殖。
单胞藻培养实验报告模板(3篇)
第1篇实验报告名称：单胞藻培养实验一、实验目的1. 了解单胞藻的基本特性及培养方法。
2. 掌握单胞藻的培养技术，包括培养条件、培养基配制、接种与培养过程等。
3. 学习使用显微镜观察单胞藻的生长状态，分析影响单胞藻生长的因素。
二、实验原理单胞藻是一种广泛存在于自然界中的单细胞藻类，具有繁殖速度快、生长周期短、营养价值高等特点。
本实验通过培养单胞藻，了解其生长规律，为实际应用提供理论依据。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：牟氏角毛藻、新月菱形藻、三角褐指藻、金藻3011等单胞藻。
2. 仪器：培养皿、移液器、显微镜、天平、温度计、pH计、高压灭菌锅等。
四、实验方法1. 培养基配制：根据不同藻种，配制相应的培养基。
牟氏角毛藻培养基：海水1000ml，硅藻粉5g，葡萄糖2g，碳酸氢钠2g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g；新月菱形藻培养基：海水1000ml，硅藻粉5g，葡萄糖2g，碳酸氢钠2g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g；三角褐指藻培养基：海水1000ml，硅藻粉5g，葡萄糖2g，碳酸氢钠2g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g；金藻3011培养基：海水1000ml，硅藻粉5g，葡萄糖2g，碳酸氢钠2g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g。
2. 接种与培养：将单胞藻接种于培养基中，置于恒温培养箱中培养。
牟氏角毛藻、新月菱形藻、三角褐指藻培养温度为28～30℃，金藻3011培养温度为28～30℃。
每天观察单胞藻的生长状态，并记录数据。
3. 观察与测量：使用显微镜观察单胞藻的生长状态，测量单胞藻的密度、体积、细胞形态等指标。
五、实验步骤1. 准备实验材料与仪器。
2. 配制培养基，并进行高压灭菌。
3. 将单胞藻接种于培养基中，置于恒温培养箱中培养。
4. 每天观察单胞藻的生长状态，并记录数据。
5. 使用显微镜观察单胞藻的生长状态，测量单胞藻的密度、体积、细胞形态等指标。
6. 分析实验数据，得出结论。
六、实验数据与分析1. 牟氏角毛藻培养数据：- 培养天数：5天- 密度：1.2×10^6/ml- 体积：2.5μm^3- 细胞形态：短柱形2. 新月菱形藻培养数据：- 培养天数：5天- 密度：1.0×10^6/ml- 体积：2.0μm^3- 细胞形态：新月形3. 三角褐指藻培养数据：- 培养天数：5天- 密度：1.5×10^6/ml- 体积：2.8μm^3- 细胞形态：三角形4. 金藻3011培养数据：- 培养天数：5天- 密度：1.3×10^6/ml- 体积：2.3μm^3- 细胞形态：棒状根据实验数据，分析不同藻种的生长特点及影响因素，得出以下结论：1. 牟氏角毛藻、新月菱形藻、三角褐指藻和金藻3011均能在适宜的培养条件下生长。
单细胞藻种质分离、培养和应用的技术操作规范
单细胞藻种质分离、培养和应用的技术操作规范单细胞藻种质分离、培养和应用的技术操作规范第一章常见单细胞藻的生物学简介第一节绿藻一、扁藻扁藻属绿藻门，绿藻纲，团藻目，衣藻科，扁藻属。
常用种类有青岛大扁藻和亚心形扁藻。
形态特征：亚心形扁藻的藻体一般扁压，细胞前面观广卵形，前端较宽阔，顶端前部凹陷。
鞭毛4条由凹陷处生出。
细胞内有一个大型、杯状、绿色的色素体，后端有一个呈内上开口的杯状蛋白核，有一个到数个红色眼点比较稳定地位于蛋白核附近、细胞中间略前。
原生质体里有一个细胞核。
细胞外有一层薄薄的纤维质细胞壁。
细胞长11~16微米，宽7~9微米，厚3.5~5微米。
能快速活泼游动。
繁殖方式：无性繁殖，细胞纵分裂形成2个（少数情况下4个）子细胞，环境不良时形成休眠孢子。
生态条件：1、盐度亚心形扁藻为广盐性，在8‰~80‰盐度的水中均能生长繁殖。
最适盐度在30‰~40‰之间。
2、温度亚心形扁藻为广温性，在7~30℃的范围内均能生长繁殖，最适范围在20~28℃之间。
3、光照亚心形扁藻在光照强度为1000~20000勒克斯范围内都能生长繁殖，最适光照强度约在5000~10000勒克斯之间。
4、酸碱度一般在pH6~9的范围内均能生长繁殖，最适范围约在pH7.5~8.5之间。
绿藻门的藻类在含有机质丰富的水中生长良好。
二、盐藻盐藻属绿藻门，绿藻纲，团藻目，盐藻科，盐藻属。
主要培养种类是盐藻，又称杜氏藻。
形态特征：盐藻没有细胞壁，细胞外只有一层弹性膜，所以体形变化很大，有梨形、椭圆形、长颈形和纺锤形等。
细胞内有一个杯状的色素体，色素体内的色素主要是叶绿素，生活条件不良时产生血红素，藻体呈红色。
在色素体内靠近基部有一个大的蛋白核，有一个红色眼点位于细胞上部。
原生质体中央有一个细胞核。
前端生出两条等长的鞭毛，鞭毛比细胞长约1/3。
细胞长16~24微米，宽10~13微米。
繁殖方式：无性繁殖，细胞纵分裂形成2个子细胞，环境不良时行有性生殖。
单细胞藻类培养注意事项
单细胞藻类培养注意事项
单细胞藻类是一类微型植物，常用于水质监测、生物学研究等领域。
在进行单细胞藻类培养时，需要注意以下事项。
1. 选择合适的培养基。
单细胞藻类的不同种类需要不同的培养基，选择适合的培养基可以提高培养效果。
2. 培养环境应保持稳定。
单细胞藻类对温度、光照、pH值等环境因素较为敏感，因此培养环境应保持相对稳定。
3. 注意培养器具的消毒。
在进行单细胞藻类培养前，应对培养器具进行消毒，避免细菌、病毒等的污染影响培养效果。
4. 控制培养密度。
单细胞藻类培养密度过高易导致养分不足、光照不足等问题，因此需要控制培养密度，避免过量培养。
5. 定期更换培养基。
单细胞藻类在培养基中生长繁殖，会消耗其中的养分，因此需要定期更换培养基，保证培养条件的稳定。
在进行单细胞藻类培养的过程中，需要注意以上事项，才能获得高效、稳定的培养效果。
同时，也需要不断探索和研究，完善单细胞藻类的培养技术，为其应用和推广提供更好的支持。
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高温季节单细胞藻类培养技术要点
养殖与饲料2017年第5期摘要单细胞藻类作为鱼虾贝的开口饵料，对育苗成功与否起着决定性作用。
每年7-8月气温较高，原生动物繁殖快，外加雨季阴雨天多，单胞藻生长缓慢，对其大量繁殖造成一定难度，对此总结了高温季节单细胞藻类培养方法。
关键词高温季节；单细胞藻类；培养方法高温季节单细胞藻类培养技术要点邵跃辽宁省锦州市海洋与渔业科学研究所，辽宁锦州121007收稿日期：2016-11-17邵跃，女，1984年生，工程师。
单细胞藻类是海洋生物中最简单，但在海洋生态系统中具有重要意义的一群生物。
在海水育苗中同样具有重要意义。
尤其是作为鱼虾贝的开口饵料，对育苗成功与否起着决定性作用。
近几年锦州市海洋与渔业科学研究所在夏季高温期进行贝类育苗，同时需要大量单细胞藻类作为饵料，高温季节培养单细胞藻类有一定的难度，比如高温季节原生动物繁殖快、雨季阴雨天多，单胞藻生长慢、易污染等原因，对大量繁殖单细胞藻类造成一定影响，结合这几年的工作现将培养方法总结如下。
1高温季节培养种类适合高温季节培养且常用的种类有金藻、角毛藻、扁藻、小球藻、盐藻。
这些种类常用且耐高温，特别是金藻是大多数贝类的开口饵料。
金藻有等鞭金藻和叉鞭金藻。
角毛藻细胞小，扁藻细胞稍大，适合不同时期，小球藻抗污染、好培养，其他饵料不足时可起替代作用。
2培养方法及准备工作1）培养方法。
主要有一级培养、二级培养、三级培养。
其中二级培养在环境条件好时可以省略，由一级培养样直接到三级培养，在高温季节饵料容易污染，不能省略二级培养。
一级培养和大多数培养方法一样，主要以5000mL 三角烧瓶为培养容器进行培养；二级培养主要以白色大桶为容器，桶盖用透明塑料密封充氧培养，可以用100～500L 容量不等的白色大桶，根据具体情况定；三级培养即在水泥池大量培养，最后提供给育苗水体。
2）饵料培养的准备工作。
首先在确定育苗水体的同时确定饵料水体，一般情况下饵料水体与育苗水体的比例为1∶2，条件好的为1∶1。
单细胞藻类的培养备注
补充鞭毛有2根的，也有l、3、4、6、8以至组成环状多数的。
鞭毛2根有等长、近于等长、不等长或长短悬殊的。
鞭毛有比体长短的、有等于体长的或为体长2、3、5、6倍以上的。
鞭毛有着生细胞顶部两侧或细胞前端口沟或凹穴处，或着生于侧面的凹穴处等等。
鞭毛伸展方向，有向前方的，有一条向前另一条横向伸展的；有一条居于腰部的沟内，另一条向后方伸展的等。
眼点桔红色，球形、椭球形，多位于细胞前端侧面，具有感光作用。
藻类的生活史营养生殖型：生活史仅有营养生殖，只能以细胞分裂的方式来进行生殖。
蓝藻和裸藻等一些单细胞藻类属此。
无性生殖型：是生殖细胞（孢子）不经结合，直接产生子代的生殖方式。
无性生殖型是指生活史中没有有性生殖，没有减数分裂。
如小球藻、栅藻等。
无世代交替的无性和有性生殖混合型是指生活史中既行无性生殖，又行有性生殖的藻类。
有世代交替的无性和有性生殖混合型从孢子开始一直到产生配子，这一阶段都是单倍体时期，总称为有性世代；由合子萌发为孢子体，一直到孢子体行减数分裂产生孢子之前，这一阶段是双倍体时期，称为无性世代。
这种生活史中有无性世代和有性世代相互交替的现象叫做世代交替。
按培育密闭程度分开放式培养：是指藻类培养在敞开的广口玻璃瓶、水族箱、玻璃钢水槽、水泥池等设备中。
这种方式设备比较简单，为目前培养单胞藻的主要形式。
开放式培养由于光照充足和通风，藻细胞繁殖迅速，但因藻液与空气接触面大，容易受敌害生物的污染。
封闭式培养：封闭式培养是把藻类培养在封闭的小口玻璃瓶、透明圆柱形管、透明塑料薄膜袋中，容器除充气管、培养液加入管和藻液抽出管外，其余不与外界接触，因而减少了敌害生物污染的机会，培养成功率高。
近年我国应用塑料薄膜袋进行封闭式培养效果较好。
这种方法简单、成本低、培养的藻细胞密度大、不易污染、生产周期短等优点。
按采收方式分连续培养一般为室内有人工光源、充气式培养另充气培养使用充气设备为藻液补充空气或二氧化碳混合空气进行培养。
海水PH和浮游植物数量的关系
海水PH和浮游植物数量的关系[摘要]：赤潮发生主要是浮游植物的大量繁殖。
本实验于2004年3月～5月,以硅藻、金藻、绿藻为材料,对三种藻类进行40天的培养,每天记录一次PH值和藻类数量.实验结果表明,当PH值小于8.2时,海水PH值和浮游植物数量呈散点分布.当藻类大量繁殖PH值大于8.2时,海水PH值与浮游植物数量呈线形关系.通过回归分析可以作出三种藻类回归后的关系曲线:硅藻: y(数量)=5.8×105PH-4.77×106,金藻:y(数量)=5.9×105PH-4.89×106,绿藻: y(数量)=6.5×105PH-5.33×106.此外作出它们的生长曲线:硅藻: y(数量)=e0.34x(天数),金藻: y(数量)=e0.33x(天数),绿藻: y(数量)=e0.31x(天数).[关键词]：赤潮; PH ; 浮游植物数量THE RELATIONSHIP BETWEEN PH ANDNUMBERS OF PHYTOPLANKTON IN THESEAWATERKang Liang( Marine Science and Technology College of Zhejiang Ocean University,Zhoushan 316004)Abstract: Red Tide primarily arises from large quantities reproduction of phytoplankton.The experiments were made during March and May in 2004, regard diatoms, chrysophyta, chlorophyta as the material, proceed to three kinds of algae 40 days educates, recording the value of PH and numbers of phytoplankton once everyday. The result of experiment expresses,when the value of PH smaller than 8.2 ,the relationship between PH and numbers of phytoplankton report to spread to order todistribute.When algae large quantity breeds the value of PH larger than 8.2, the relationship between PH and numbers of phytoplankton exsit certain line form relation.The application covariance general outline learns the returning of inside returns the analysis can make the relation curve of three kinds of algae after returning: diatoms: Quantity=5.8×105×PH-4.77×106, chrysophyta: Quantity =5.9×105×PH-4.89×106, chlorophyta: Quantity=6.5×105×PH-5.33×106.Make their growth curve in addition: diatoms: Quantity = e0.34days, chrysophyta: Quantity = e0.33 days,chlorophyta: Quantity =e0.31 days.Key words: red tide; PH; numbers of phytoplankton1前言:赤潮的定义:赤潮就是在一定的环境条件下，海水中某些浮游植物、原生动物或细菌在短时间内突发性增殖或高度聚集而引起的一种生态异常，并造成危害的现象。
1单细胞藻类的培养4-26
五步法
容器和工具的消毒——培养液的配制—— 接种——培养管理——采收
一 容器和工具的消毒
目的：消灭藻类的捕食者和竞争者
方法：
物理消毒法：
高温高压灭菌 煮沸法 紫外线消毒法
直接灼烧法 烘箱干燥法
化学药品消毒：
70%酒精法
高锰酸钾法
漂白粉法（CaClO2） 稀盐酸法
EDTA。
植物生长激素 培养液中加入某些植物生长激素，如赤霉素，可以促
进藻类细胞生长，用量为0.01-0.1mg/l。
藻类培养液制备与配方
根据培养液的性质，藻类培养液可分为无机培养 液和有机培养液
配制无机培养液的原则
➢ 离子间相互平衡的培养液，称为生理培养液
➢ 在配制原液时，必须使各种盐类完全溶解，不发生沉 淀，原液应该无色透明。
镜检 将采回的水样进行镜检，如果发现有需要分离的藻类，
在水样中数量较多，可立即进行分离，若数量少，分离困难， 就进行预备培养，待其数量增多后，再进行分离；
预备培养 用作预备培养的培养液，各种藻类是不同的，一
般绿藻和硅藻的浓度应小一些，一般只有原配方的1/2、1/3 或1/4。对一些难以培养的藻类一般要加入土壤浸出液。如果 水样中藻类较多，就应该同时使用几种不同的培养液进行培养， 使藻类在适合自己繁殖的培养液中进行生长繁殖
石炭酸
洗液
漂白粉 按0.1-0.3‰配成漂白粉水溶液，将器具在溶液中浸
泡30分钟，再用煮沸消毒水冲洗3-4次即可。对于水泥池等， 将配成糊状漂白粉溶液遍洒池壁，半小时后，用消毒水冲洗 干净。消毒后的容器需停放12小时才能使用。
酒精 用70%浓度的酒精进行消毒，将酒精涂抹在器具表面，
单细胞藻类培养液的成分
单细胞藻类培养液的成分单细胞藻类培养液的成分有下列七类。
(一)大量元素1 •氮(N)单胞藻培养液常用的氮源有硝酸钾(KN03)、硝酸钠(NaNO3)、尿素(NH2CONH2)、硝酸铵(NH4NO3)、硝酸钙［Ca(NO)3)2］、氯化铵(NH4C1)、硫酸铵［(NH4)2SO4］、发酵人尿……等。
其中以硝酸钠和硝酸钾最常用。
但不同的藻类对硝酸态氮和铵态氮的吸收利用情况是不同的，必须根据不同的藻类选择合适的氮源。
2 •磷(P)单胞藻培养液常用的磷源有磷酸二氢钾(KH2PO4)、磷酸二氢钠、(NaH2PO4)、磷酸氢二钾(K2HPO4)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)4种。
海水单胞藻培养液应用磷酸二氢钾，如用磷酸氢二钾所配培养液会产生大量沉淀。
3 •铁(Fe)单胞藻培养液常用的铁源有三氯化铁(FeCI3)、硫酸铁(FeSO4)、硫酸高铁［Fe2(SO4)3］、氧化铁(FeO)、柠檬酸铁(FeC6H5O7)、柠檬酸铁铵［Fe(NH4)3(C6H5O7)］等。
其中最常用的是三氯化铁和柠檬酸铁。
无机铁在水中容易形成一种胶体复合物，无可逆反应，不能为生物利用。
铁也容易产生沉淀。
所以尽管铁在数量上所需很少，但要满足藻类需要却很困难。
要保持溶液中可利用态铁的数量，通常采用3种方法，这些方法都取得一定的成功，但都不够十分完善。
在培养液内加入土壤抽出液：由于自然有机质(一般称为腐殖酸)的作用阻止了铁的沉淀和溶胶化(Pringsheim , 1963)。
在培养液内加入某种有机酸或其盐类以形成可溶性铁化合物：已证明较有效的有柠檬酸盐和酒石酸盐：迈尔(Myers ,1947)证实应用硫酸铁和柠檬酸钠能使小球藻生长十分良好。
应用络合剂：最常用的为乙二胺四乙酸(EDTA)，络合剂能防止铁和微量营养元素沉淀，并按照质量作用定律释放出足够数量的离子供藻细胞利用。
由于无机铁容易形成胶体复合物和沉淀，而有机铁，如柠檬酸铁、酒石酸铁等则是可溶性的，易为藻类细胞利用，在培养液配方中可使用有机态铁代替无机态铁。
贝类育苗中单细胞藻类培养技术
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鱼 番 哚 精 鲨 产 ： ｉ ：
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众所周知，味精作为调味料的一种 ，主要成分为谷 氨酸钠。味精于１０年被 日本味之素 （ ０素） ９９ 味 公司所发 现并申请专利。当时称味精为 “ 味之素具有 重 要意 义 。我 国渔 业总 产量 居 世
２培 养器具 各级培养用 的玻璃器皿 、工具都需 ．
煮沸或酒精消毒。三级池可用高锰酸钾溶液由池壁顶部 淋洒 、泼洒池底 、用刷子刷净的方法进行消毒，然后用 消毒过的海水冲洗干净方可使用 。 三、日常管理
藻在光线充足且发育 良好的情况下会上浮，并在液面出
现聚集缕状分布 ，如生长状态不好，则会 出现沉淀。沉 淀藻体如果保持原色，还可能恢复其生长 ，如果变成灰 白色，则表 明已经腐败 ，应及时进行处理 。
一
照，同时防止水面产生菌膜。搅拌 时应注意不要用力太 猛，以防藻液溅 出，相互污染。 ３ 光照 饵料 生产上培养一般利用太 阳光源 ，而 ． 太阳光源具有易变的特 点，因此要根据天气情况随时进 行调整。室内培养饵料应避免阳光直射 ，可采用活动白 帆布篷来调节光照。阴雨天，可适 当采用人工光源的办
藻种 。 二 、培 育设 施
贝类育苗一般处在高温季节，饵料极易被污染，饵 料培养车问应经常消毒，可用稀释漂 白液冲洗走廊，用
颜色会随着浓度的增加而变深。如金藻生长 良好时呈现 金褐色，接种后颜色会逐渐变深且有小气泡产生。而角
毛藻正常生长时颜色为褐色 ，藻体悬浮于水中呈云雾状 水 团。如果出现黄色、乳 白色和蓝色，说明被其他藻类
澈，则可能有敌害生物污染 ，需用显微镜观察，确定不
单细胞藻类的培养3-26
4 静止期
在相对生长下降期内，由于限 制因子的作用不断增加，藻类 生长逐渐下降，最终生长停止， 进入静止期
在静止期，新生的藻细胞数和 死亡的藻细胞数趋于平衡，藻 液中藻细胞数保持相对恒定
间歇光照的作用
光合作用的过程，可分为光化反应和黑暗反应两个阶段。 碳水化合物的合成，主要是在黑暗反应中进行的。
有实验表明，用强光作间歇照射时，和各间歇照明时间 的总和相等的连续照明比较，同化作用的效果要大许多。
因而在高密度培养的条件下，可采用搅拌、充气等方法， 使藻类细胞交替地发生向光和背光作用，达到间歇光照 射的效果。或者采用旋转培养容器的方法，也可达到此 目的。
人工光源：利用白热电灯或白色日光光源。目前 我国的单细胞藻类的培养，主要用太阳光源，在 阴雨天阳光不足时，用人工光源作为补充。
光照强度与光合作用
光在细胞培养液中的吸收与穿透：光透入深 度的大小取决于培养液中藻类细胞的密度， 密度愈大，光透入的深度愈浅
在高密度下，仅表面的藻类细胞能吸收到光 合作用所需要的饱和光照强度，下层细胞只 能得到不足的光照强度，甚至处在“黑暗” 之中。
生物因子
单细胞藻类与其它生物的关系包括藻菌共生、种间 抑制、异种污染等几个方面。
在接种过程中，由于消毒措施不够严格，导致不需 要的单细胞藻类甚至有害的藻类进入培养液中，从 而造成所培养藻类不纯洁，甚至导致培养失败，这 种情况叫异种污染。
有实验发现，在有某种细菌存在时，某些单细胞藻 类生长较好，否则就停止生长。这是单细胞藻类中 与细菌相互依存的例子，称为藻菌共生。
提供其生长所需的 各种最佳环境因子 和营养水平
单细胞藻类的培养液汇总
第六节单细胞藻类的培养液藻类的生长繁殖需要吸收各种营养元素，单细胞藻类的培养液必须具备这些营养元素,而且在营养成分和数量上都应该符合藻类的需要，各种藻类对营养的需要有很多共同点，所以一些培养液配方，能应用于多种藻类的培养。
然而，藻类的不同种类，对营养的要求是有差别的，各有其特殊性，不同种类的培养液配方，当然也应该不同。
只有较好地符合培养种类需要的配方，才可能获得较理想的效果。
一个培养液配方的提出，首先必须了解这种藻类对营养的要求，要达到这一点，进行一系列的试验是必要的。
还必须在使用中验证配方的效果，并在实践过程中不断总结经验，加以改进，使配方达到更理想的水平。
本节内容分培养液成分、培养液配方和培养液的配制三部分。
一、培养液成分单细胞藻类培养液的成分有下列七类。
(一)大量元素1．氮(N) 单胞藻培养液常用的氮源有硝酸钾(KNO3)、硝酸钠(NaNO3)、尿素(NH2CONH2)、硝酸铵(NH4NO3)、硝酸钙[Ca(NO)3)2]、氯化铵(NH4C1)、硫酸铵[(NH4)2SO4]、发酵人尿……等。
其中以硝酸钠和硝酸钾最常用。
但不同的藻类对硝酸态氮和铵态氮的吸收利用情况是不同的，必须根据不同的藻类选择合适的氮源。
2．磷(P) 单胞藻培养液常用的磷源有磷酸二氢钾(KH2PO4)、磷酸二氢钠、(NaH2PO4)、磷酸氢二钾(K2HPO4)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)4种。
海水单胞藻培养液应用磷酸二氢钾，如用磷酸氢二钾所配培养液会产生大量沉淀。
3．铁(Fe) 单胞藻培养液常用的铁源有三氯化铁(FeCl3)、硫酸铁(FeSO4)、硫酸高铁[Fe2(SO4)3]、氧化铁(FeO)、柠檬酸铁(FeC6H5O7)、柠檬酸铁铵[Fe(NH4)3(C6H5O7)]等。
其中最常用的是三氯化铁和柠檬酸铁。
无机铁在水中容易形成一种胶体复合物，无可逆反应，不能为生物利用。
铁也容易产生沉淀。
所以尽管铁在数量上所需很少，但要满足藻类需要却很困难。
单细胞藻类
单细胞藻类，简称单胞藻，因藻体微小，又称微藻。单胞藻具有利用太阳光能效率高、营养丰富、生长繁殖 迅速、对环境的适应性强和容易培养等重要特性，因而受到重视。单胞藻的应用主要是直接作为水产经济动物幼 体（如大多数贝类的幼虫、虾类的蚤状幼体和糠虾幼体、海参类的樽形幼体等）和成体的饵料。其次，单胞藻可 用于培养动物性生物饵料（如轮虫、枝角类、桡足类等），再以动物性生物饵料投喂，作为水产经济动物物幼体 （如虾类的糠虾幼体、仔虾；蟹类的蚤状幼体、大眼幼体；鱼类的仔鱼、稚鱼等）的饵料，单胞藻起到了“间接 饵料”的作用。此外，单胞藻在光合作用过程中能放出大量氧气并吸收水中的富营养化成分，起到净化水质的作 用，同时还可提高虾、蟹、鱼类育苗的成活率。
一、接种
培养液配好后应立即进行接种培养。接种就是把选为藻种的藻液接入新配好的培养液中。
1．藻种的质量一般要求选取无敌害生物污染、生活力强、生长旺盛的藻种培养。藻液的外观应颜色正常、无 大量沉淀和无明显附壁现象。
2．藻种的数量在三角烧瓶和细口玻璃瓶培养的藻种，接种的藻液容量和新配培养液量的比例为1：2～1：3， 一般一瓶藻种可接3瓶～4瓶。中继培养和大量生产培养一般以1∶10～1∶20的比例培养较适宜。培养池容量大， 可采取分次加培养液的方法，第一次培养水量为总水量的60%左右，培养几天后，藻细胞已经繁殖到较大的密度， 可再加培养液40%继续培养。
分布和生态习性
藻类分布的范围极广，对环境条件要求不严，适应性较强，在只有极低的营养浓度、极微弱的光照强度和相 当低的温度下也能生活。不仅能生长在江河、溪流、湖泊和海洋，而且也能生长在短暂积水或潮湿的地方。从热 带到两极，从积雪的高山到温热的泉水，从潮湿的地面到不很深的土壤内，几乎到处都有藻类分布。除轮藻门外 的各门藻类都有海生种类。
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水生4号
（NH4）2SO4 Ca(H2PO4)2·H2O+2（CaSO4·H2O） MgSO4·7H2O NaHCO3 KCl FeCl3（1％） 土壤浸出液 水 0.200g 0.030g 0.080g 0.100g 0.025g 0.150mL 0.500mL 1000mL
2．浮游硅藻培养液 浮游硅藻培养液
水生硅1（ 水生硅 （mg/Ｌ） Ｌ）
硝酸氨 磷酸氢二钾 氯化钙 硅酸钠 土壤浸出液 水 120 硫酸镁 70 40 磷酸二氢钾 80 20 氯化钠 10 100 柠檬酸铁 5 20 硫酸锰 2 1000mL pH 7.0
水生硅2（ 水生硅 （mg/Ｌ） Ｌ）
尿素 过磷酸钙 硫酸镁 硫酸锰 EDTA－铁 150 50 50 3 1mL 氯化钾 30 硅酸钙 100 碳酸氢钠 3 土壤浸出液 4mL 水 1000mL
2、稀释法：该法源于中野治房（1933）的方法。用已 、稀释法 消毒试管5只，在第一管盛蒸馏水10mL，第2～5管都装 5mL，用高压蒸汽消毒，待冷却后，第1管用滴管滴入混 合藻液1～2滴，充分振荡，使均匀稀释。次用消毒吸管， 从第1管中吸取5mL滴入第二管中如前振荡，使均匀稀释。 以后依次同样滴入第3～5管，并都充分均匀稀释。然后 把五个已盛又消毒的琼胶培养基培养皿，加热使之溶解， 待冷却而尚未凝固时，分别滴入五个试管的藻液各一滴， 用力振荡，使藻液充分混于培养基中。待冷凝后，把五 个培养皿放在受着漫射光窗口，一直到出现藻群时为止。 在20℃左右时，约10天即出现藻群。用消过毒的白金丝 取些藻群，进行琼胶固体培养基的不通气培养。此过程 反复多次，直至得到完全分离的纯藻种群为止。 此法稀释要使用较多容器分组培养，比较麻烦，但 较易成功。
单细胞藻类的培养
一、 单细胞藻类的特性
单细胞藻类(Unicelluler algae)，简称 单胞藻。因藻体微小，又称微藻 （Microalgae）。 单胞藻具有利用太阳光能效率高、营 养丰富、生长繁殖迅速、对环境的适 应性强和容易培养等重要特性，因而 受到重视。
通过研究人们发现单胞藻在下列6个方面，可 以开发利用： 1、作为植物生理研究的试验材料。 2、单胞藻的营养丰富，蛋白质含量高，氨基酸 的种类组成及配比合理。脂肪含量高，富含动 物需要的不饱和脂肪酸。还含有各种维生素和 药用成分。可利用为人类的营养食品和健康食 品。 3、可作为水产动物的饵料和禽、畜饲料添加剂。
4．f/2培养液 ． 培养液
硝酸钠（NaNO3） 75 mg 磷酸二氢钠（NaH2PO4） 4.4 mg f/2微量元素溶液 1mL f/2维生素溶液 1mL 海水 1000mL 本配方适应与目前生产上使用的各种 微藻的培养，但用于硅藻培养时，应再加 50mgNa2SiO3。
微量元素溶液配方： 附I：f/2微量元素溶液配方： ： 微量元素溶液配方
4、趋向反应法：利用藻类的特殊 、趋向反应法： 趋向性（如向光、向地等）不同 而分离藻体。此过程反复几次就 可得到一定纯度的藻体。分离效 果较好，只是不能应用于不运动 的藻体。
5、平板分离法：在培养液中加入占培养液 、平板分离法 1.5％的琼胶，加溶解后，注入培养皿中， 加盖后用15磅压力121℃灭菌20分钟，即 制成胶质培养基（也可用硅酸胶和明胶制 备）。在琼胶培养基放在40℃以下的水浴 锅内，开盖用吸管注入混合藻液，摇匀， 使之分散在培养基平面上。之后，可放在 恒温箱内，用荧光灯照射，使藻群生长。 再经镜检，反复此法不断提纯，即可分离 出较纯的藻种。
决定培养哪一种藻类，主要根据培养的目的 要求，及某一种类的生物学特征。藻类的分离主 要有以下几种常用方法。 1、离心法 、离心法：将混合液用离心机离心，水中不同 藻体及细菌就以不同的速度下沉，因此得以分开。 这样将不同时间下从导管底的藻体取出，经镜检 选定某种藻类最多的沉积物，再加清水，继续离 心，如此反复就可得到比较单纯的藻体，在接种 相应培养液中培养。该法可消除细菌，并增加纯 粹分离的可能性，至少可作为藻种平板培养的准 备工作。另外，在水液中藻体含量较少时，可用 此法集中藻体。但此法不能做到使不同藻类完全 分离。
4、可利用单胞藻提取色素、药物及甘油等 化学产品。 5、丛粒藻（Botryococcus braunii Kutzing） 含油量一般为干藻重的30%-50%，最高可 达80%，是作为能源开发的对象。 6、可利用单胞藻光合作用放出的大量氧气 和吸收水中的富营养化成分来净化污水和 保持良好的水环境条件。
今后，随着养殖事业的发展， 对一些新品种的养殖以及解决某 些品种幼鱼的饵料，必然涉及到 藻类的培养。因此，有必要了解 藻类培养的基础知识。先仅就藻 类、主要是单细胞藻类的一般培 养方法及有关理论加以简述。
二、单胞藻的生长模式
单细胞藻类在 培养过程中， 生长繁殖的速 度，出现一定 的起伏，这种 生长模式可划 分为五个时期 （延缓期、指 数生长期、相 对生长下降期、 静止期、死亡 期）
四、培养液的配制及举例
在实验条件下培养单胞藻有多 种培养基配方。这些配方大多数 是早先发表过的配方的修改方， 有些则从分析天然生境的水而得 到，有些是从生态角度考虑的。
发展藻类培养的营养配方时主要 考虑的问题是： a、盐的总浓度：大多是取决于有 机体的生态来源。 b、主要离子组分的组成及浓度： 他们是钾、镁、钠、钙、硫酸盐 和磷酸盐。
硫酸锌（ZnSO4·4H2O） 硫酸铜（CuSO4·5H2O） 氯化锰（MnCl2·4H2O） 柠檬酸铁（FeC6H5O7·5H2O） 钼酸钠（NaMoO4·5H2O） 乙二铵四乙酸钠（Na2EDTA） 六水氯化钴（CoCl2·6H2O） 纯水 1000mL 23mg 10mg 178mg 3.9g 7.3mg 4.35g 12mg
三、单胞藻的培养方式 单胞藻的培养方式，以藻 类培养的目的要求而各种各样。 但可分为密闭式培养和开放式 培养两大类。
1．密闭式培养
密闭式培养的目的是不使外界杂藻、 菌类及其他有机体混入培养物中。将培养 液密封在与外界完全隔离的透明容器中， 由此通气、搅拌、输送培养液及调节水温 和取样等设备，也都要与外界隔离。培养 容器多为管状、也有池状，用有机玻璃或 透明的聚乙烯塑料做成水平管道，直立或 斜立在地上，暴露阳光或人工光照下。这 种培养方式，成本高，好控制，产量亦稳 定。
水生6号
NH2CONH2 H2PO4 MgSO4·7H2O NaHCO3 KCl FeSO4（1％水溶液） CaCl2 土壤浸出液 水 0.133g 0.033mL 0.100g 0.100g 0.033g 0.200mL 0.050mL 0.500mL 1000mL
水生四号培养液中，藻类呈深绿色，生长 繁殖速率较低。水生6号培养液中，藻类呈 草绿色，色素不够正常，但生长繁殖迅速。 土壤浸出液是用田园土壤按水与土2:1的比 例，搅匀浸泡后的上层清液，用前煮一小 时后镜检，发现污染生物，应再加温消毒 后使用。
水生硅2号是用化肥尿素过磷酸钙为 氮磷来源，适于大量培养硅藻时选用， 生长适温为20～30℃；光强为 2,000～5,000米烛光。
3．朱氏10号培养液：适用于培养硅藻、蓝 ．朱氏 号培养液 适用于培养硅藻、 号培养液： 绿藻等。 绿藻等。
H2O 1000mL Ca(NO3)2 0H2O 0.025 g Na2CO3 0.02 g Na2SiO3 0.025 g FeCl3 0.008 g 使用时按1/2、1/4、1/10稀释使用。
2．接种： ．接种 在分离到单纯藻群后，就可接种到培 养液中进行培养，进而移养扩大培养。接 种方法有液体接种和干藻接种。前者是将 藻液直接加入培养液中进行搅拌，加入的 藻种分量视水温而定，水温较低（10℃以 内）时，多加；约占培养液总量的30～40 ％左右，水温适宜时（25～30℃左右）， 可加5～8％左右。后者若用干藻的藻体接 种，接种量为0.1～0.2％。
c、氮源：硝酸盐、氨和尿素常用作 配方中的氮源，根据藻中的性能 和pH的最适点而定。藻类的生长 主要依赖氮的可利用性。大多数 单胞藻干物中含有7～9％的氮。 因此在1L培养液中生产10g细胞就 至少需要500～600mg/L KNO3。
d、碳源：无机碳通常是用含1～5％ CO2的空气来供应的，碳的另一种供 应办法是用碳酸氢盐。选用何种办法 主要是根据藻类生长的pH最适点而定。 e、pH：通常用偏酸的pH值来避免钙 镁和其它微量元素发生沉淀。
2．开放式培养
将藻类培养于敞开的容器 （如水泥池、管道、木盆等）中。 方法设备较简便，可进行小量或 大面积的培养。该法培养物中易 发生敌害生物污染，但成本低， 使用较普遍，也是今后藻类培养 所应采取的方式。
开放式培养可分如下几种类型： ⑴开放循环培养：其特点是培养液借助循环水泵 而不断循环流动。培养物能循环，就可省却搅拌 工作。 ⑵开放非循环培养：其特点是培养液不循环流动， 而定时由小管通入CO2和空气到培养液中；同时 也起搅拌作用。此法在大面积培养中使用较普遍。 优点是设备简单，无需动力，水泵及大量的CO2 及通气设备。 ⑶半开放循环培养：半开放培养是指培养容器或 池、槽等场所虽仍敞开，但有些部分密闭，或用 塑料布覆盖。这种培养方式，利用管道，依靠动 力，使培养液流动和通入含二氧化碳的空气。该 方式设备复杂，但效果较好。
6、固氮蓝藻分离培养法：将一小 、固氮蓝藻分离培养法 片藻丝群接种到培养基上，几天 后再用灭菌白金丝挑取生出的新 藻丝接种到平板培养基上。这样 经几次分离接种就得到较纯的藻 种。
六、藻种的选择、接种和保存 藻种的选择、
1．藻种的选择： ．藻种的选择：
虽然藻类种类较多，但其中仅少数经过人工 培养。应该研究在室外培养其他藻种的可能性和 他们生产的潜力，所选择的生物种应具有下列特 征： ⑴生长迅速； ⑵对极端的温度和辐射条件的耐性范围大； ⑶蛋白质，脂类和糖类含量高，或有选择地积累一 种特殊的代谢产物（如甘油）； ⑷无毒性，且易于收获。 根据系统的要求和特殊的方法，还可有其他 要求。