藻类生物学试验

培养液是根据培养液配方配制的。为了减少每次称量的麻 烦，固体的营养元素一般都配成母液（如浓缩1000倍的母 液），在使用时，只要吸取一定的量加入培养液中即成。主 要营养元素可以单项营养元素配成母液，也可以分成若干组， 每组2种或多种营养元素同配在一起。微量元素和辅助生长有 机物质也多种组合在一起，配成母液。在浓营养溶液中一般 生物因不能忍受而死亡。
B液的配制法：先把氧化钙4g溶解于40ml纯水中。另外把磷酸氢二钙4g溶
解于40ml纯水中，再把三氯化铁溶融液2ml，缓慢滴入，摇动，产生白色
沉淀，加热，缓慢滴入浓盐酸2ml，沉淀的白色沉淀即重新溶解。把以上两
溶液混合。
使用时，取A液2ml和B液1ml，加入1000ml海水中，充分混合后加热消毒，
消毒后静置24h，然后将上层清夜倒出使用。
加入海泥抽出液20ml，效果更好。
硅藻培养液配方：
①艾伦-内尔森（Allen-Nelson）培养液{Allen，E.J.et al （1910）}：
A. KNO3
20.2g
纯水
100ml
B. Na2HPO4.12H2O 4.0g
CaCl.6H2O
4.0g
HCl（浓）
2.0ml
纯水
80ml
FeCl3（溶液） 2.0ml
5.E液 500 ml 1000倍
CuSO4.5H2O
0.0098 mg； ZnSO4.7H2O
0.022 mg
CaCl2.6H2O
0.01 mg； MgCl2.4H2O
0.180 mg
Na2MoO4.2H2O 0.0063 mg
A、B、D、E高压灭菌备用
（二）海水处理
沉淀 —— 砂池过滤 ——（抽滤）——灭菌（海水放于三角wk.baidu.com 中，置于电炉上煮沸，可杀来一般细菌）
三、实验材料及用具 1、器材 电炉；灭菌锅；pH计 500ml 试剂瓶（每组5个）； 玻棒、500ml烧杯、50ml容量瓶（每组一个）/牛皮纸、细绵绳 2、试剂： 蒸馏水、海水 各种试剂 NaNO3; NaH2PO4；FeCl3 EDTA；Na2SiO3.9H2O；盐酸硫铵素 (VB1) ；Biotin VH
实验一 微藻的培养基配制
一、实验目： 掌握微藻的培养基配制方法。 以海水单胞藻培养液通用配方“f/2”为例
二、实验原理 藻类的培养液必须具备藻类的生长繁殖所需要的各种营养元
素，并且营养盐的比例应该符合藻类生长繁殖的需要。不同种 类的微藻对营养盐的质和量的需求不同，各有其特殊性，因此， 制定某种微藻的一个培养液配方时，首先必须进行一系列的试 验，了解这该种藻类对营养的要求，并在使用中验证配方的效 果，加以改进，使配方达到更理想的水平。藻类对营养盐的需 求也有很多共同点，因而一些培养液配方（如F/2）可应用于多 种藻类的培养。
掌握单细胞微藻的实验室培养(藻种培养)方法，细胞生长曲线观察。
二、实验材料及用具
1、实验材料：小球藻（500ml）、等鞭金藻、扁藻 2、实验仪器：可见分光光度计、显微镜（1部/组）、血球计数板（一个/
组）、电炉、灭菌锅、pH计、 500ml烧杯（1个/组）、胶头滴管（3支 /组）、 250ml锥形瓶（每组3个）、牛皮纸、细绵绳 3、试剂：蒸馏水、海水、碘化钾
进行微藻培养时，可根据培养藻类对营养的要求，选用合适 的配方，在消毒水中按配方加入各种营养物质配成。所加肥料 应保持清洁，某些不清洁肥料必须消毒，预防敌害生物通过肥 料污染。
绿藻培养液配方：
①海洋三号扁藻培养液（海洋研究所，1960）：
NaNO3
0.1g
2Na3C6H5O7﹒ 11H2O 0.02g
（三）F/2培养基配制
1000 ml (1升) F/2 (+ Si)培养基 = 1000 ml (1升)过滤灭菌海水 + 1ml A 液 + 1ml B液+ 1ml D液+ 1ml E液 (+ 1ml C液)
注意：煮沸的海水放置凉后（50度以下）再加母液，否则会出现沉淀。
实验二 单细胞藻类的培养
一、实验目的
4.D液 500 ml 1000倍
盐酸硫铵素(VB1) 5 mg (试剂 50 mg/ml取100 μl)
Biotin VH
0.025 mg (试剂 0.1 mg/ml取250 μl)
VB12
0.025 mg (试剂 0.25 mg/ml取100 μl)
先用维生素分别用纯水溶解混合，稀HCl将pH调到4.5~5.0，最后用纯水 稀释至1升。膜过滤后冰冻保存。
碘液，常用的配方是：将6克的碘化钾溶于20毫升水中，待完全溶解后加入4克碘，摇 荡，待碘完全溶解后，加入80毫升蒸馏水，贮存在棕色试剂瓶内。）
小球藻
扁藻
球等鞭金藻
1、血球计数板计数方法：
（1） 搅拌：由于藻类细胞在培养液中分布不均匀，所以在取产前必须进行 搅拌，搅拌后立即取样。 （2）固定、稀释：运动细胞需加碘液杀死才能计数。如细胞浓度过大，计数 困难，需把水样稀释到适宜的程度。（附：鲁哥氏液（Lugol‘s Solution）又称
K2HPO4
0.01g
Fe(SO4)3(1%溶液) 10滴
海水
1000ml
②亚心形扁藻培养液（湛江水产学院）：
NaNO3
0.05g
维生素B12
200mμg
KH2PO4(1%溶液) 0.005g
人尿
2ml
FeC6H5O7 0.2ml
维生素B1
200μg
海水
1000ml
培养亚心形扁藻及其他绿藻使用，多用于小型培养和中继培养，如能
三、实验步骤 1、培养基配制：见实验一 2、接种：一般培养的接种量为1/3～1/5. 3、计数：分光光度计测定500nm（OD500）和750nm
（OD750）吸光值；细胞计数板计数。 4、每天测定一次，分别绘制以OD值和细胞绝对数目为纵坐
标、时间为横坐标的生长曲线，分析细胞数目与OD500和 OD750的相关性。 5、观察并描述微藻不同生长时期的特点
三、实验步骤
（一） F/2 (+ Si)培养基母液的配制（用去离子水配制） 1.A液 500 ml 1000倍 NaNO3 37.5 g; NaH2PO4 2.5 g
2.B液 500 ml 1000倍 Fe-EDTA 2.5 g (FeCl3 1.6 g + EDTA 0.9 g)
3.C液 500 ml 1000倍 Na2SiO3.9H2O 10 g