大肠埃希氏菌计数 产气

注意：培养时间不得<；接种菌量浓度不 宜过大，否则细菌生长受抑制，因此，接 种量、试管大小应尽量标准化，否则影响 结果判定及重复性差
靛基质试验()原理：细菌(如大肠埃希菌、大 肠菌群等)含有色氨酸酶，将蛋白胨中的色氨 酸分解，生成靛基质。靛基质与对二甲基苯 甲醛作用，形成红色的玖瑰靛基质(红色的醇 层，为醌型结构的红色集约化化合物)，呈红 色。
柠檬酸盐利用试验：将培养物接种于氏柠 檬酸盐肉汤， ℃±℃培养±，记录有无细 菌生长，生长为阳性。
大肠杆菌与非大肠杆菌的生化鉴别
靛基质 甲基红 试验 () 枸橼酸盐()
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鉴定(型别)
典型大肠杆菌 非典型大肠杆菌
典型中间型 非典型中间型
非典型产气肠杆菌 非典型产气肠杆菌
复发酵试验
用接种环分别从所有±内发酵产气的管取培 养物环，移种到已提前预温至℃的肉汤管中， 放入带盖的℃±℃水浴箱内，水浴的水面应 高于肉汤培养基液面，培养±，检查小导管 内是否有气泡产生，如未产气继续培养至±。 记录在和内产气的肉汤管数。如所有肉汤管 均未产气，即可报告大肠杆菌结果。如有产 气者，则进行平板分离培养。
大肠杆菌计数的报告
大肠杆菌为革兰染色阴性无芽胞杆菌、发 酵乳糖、产酸、产气；试验为或。只要有 个菌落鉴定为大肠杆菌，其代表的肉汤管 即为大肠杆菌阳性。
依据肉汤阳性管数查表，报告每或每样品 中大肠杆菌值。
肉汤
肉汤主要成分：乳糖、胆盐、胰蛋白胨。 大肠杆菌因分解乳糖而产气，使小导管
中可见气泡。
根鞭毛，能运动。少数菌有荚膜。 培养特性： 需氧或兼性厌氧。最适温度℃，但在℃也能生长。
最适。
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大肠埃希氏菌计数
“大肠杆菌—平板计数”改为“大肠 埃希氏菌平板计数法” 删除大肠杆菌测试片计数法
大肠杆菌计数
第一法：法 第二法：大肠埃希氏菌平板计数法
第一法 大肠杆菌计数法
样品匀液的值应在之间，必要时分别用氢氧 化钠或盐酸调节。
用无菌吸管或微量移液器吸取：样品匀液，沿 管壁徐徐注盛有磷酸盐缓冲液的无菌试管中 (注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振 摇试管或换用一支无菌吸管或吸头反复吹打， 使其混合均匀，制成：的样品匀液。
根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依 次制成倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释 次，换用支无菌吸管或吸头。从制备样品匀液 至接种完毕，全过程不得超过。
为什么后来又有了大肠菌群和粪大肠菌群 的应用？主要的原因是因为大肠杆菌的检 验过于复杂。
随着食品卫生标准的日益科学和细化，以 及对大肠杆菌检验方法的不断改进，对特 定食品的大肠杆菌的检验需求肯定会越来 越多。
可作为评价消毒效果的指示菌。
大肠杆菌的生化特性
形态与染色： 革兰染色朱阴性无芽胞的短小杆菌；多数菌株有
伊红美蓝平板分离培养
轻轻振摇各产气管，用接种环取培养物划 线分离于伊红美蓝（）平板。℃±℃培养 ±后，检验平板上有无具黑色中心有光泽 或无光泽的典型菌落。
营养琼脂斜面或平板培养
从每个平板上挑选个典型菌落，如无典 型菌落则挑取可疑菌落。用接种针接触 菌落中心部位，移种到营养琼脂斜面或 平板上，℃ ± ℃培养，取培养物进行革 兰染色和生化试验。
大肠杆菌计数法检验程序
检样()稀释液，均质 倍稀释
不产气
选择个连续稀释度样品匀液接种
℃±℃
±
产气
℃±℃
肉汤 ±
查表，报告
不产气
产气
℃±℃
琼脂平板 营养琼脂斜面培养
生化试验，革兰染色
样品的稀释
固体和半固体食品：称取样品，放入盛有 生 理盐水或磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内，于 均质～，或放入盛有 生理盐水的无菌均质袋 中，用均质器拍打～，制成的样品匀液。
肉汤结果判定 ℃ ± ℃培养
接种前的肉汤
不产气为阴性 产气为阳性
琼脂上大肠杆菌的典型菌落 与可疑菌落
典型菌落：具黑色中心有光泽或无光泽的 菌落。
非典型的可疑菌落：粉红色，无黑心
典型的大肠杆菌的菌落
非典型的大肠杆菌的菌落
试验原理
甲基红试验( )原理：本试验是用甲基红指 示剂测定细菌发酵葡萄糖时产生的氢离子 浓度的试验。大肠杆菌和大肠菌群能分解 葡萄糖产生大量酸性产物，使甲基红指示 剂变为红色。
生化试验
靛基质试验：将培养物接种于蛋白胨水， ℃±℃培养 ±，加靛基质试剂，上层出现红 色为阳性。
试验：将培养物接种于培养基，℃±℃培养 ±，移取培养物至×小试管中，加α萘酚乙 醇溶液、氢氧化钾和少许肌酸结晶。振摇后 静置，如出现伊红色为试验阳性。
将试验剩余培养物再培养后，滴加滴甲基 红试剂，培养物变红为甲基红试验阳性； 变黄为阴性。
注意：
在加入试剂时一定要加α萘酚，使其先与丁 二酮和胍基复合物结合，而后再加入氢氧化 钠。
注意：
蛋白胨的色氨酸含量与靛基质试验阳性反应 密切相关，若蛋白胨水中加入的色氨酸或选 用色氨酸高的胰蛋白胨做靛基质试验效果更 佳。
试验()原理：本试验是检查细菌利用葡萄后 所产生的代谢终产物乙酰甲基甲醇的实验。 细菌在葡萄糖代谢中生成丙酮酸，丙酮酸仅 是中间产物。随细菌种属不同而有多种分解 途径，使丙酮酸进一步分解为不同的终产物， 借此鉴定菌种。
大肠埃希氏菌计数
技术支持 田亮 广东微生物研究所 广东环凯微生物科技有限公司
大肠杆菌的定义
广泛存在于人和温血动物的肠道中，能够在 ℃发酵乳糖产酸产气、 生化试验 (靛基质、 甲基红、试验、柠檬酸盐)为 或 的革兰阴 性杆菌。
卫生学意义
大肠杆菌的某些菌株对人有致病性。
相对于大肠菌群和粪大肠菌群，大肠杆菌 与粪便污染的相关性最好，是指示粪便污 染最理想的指标，应用也最悠久。自年被 提议作为粪便污染的指示菌以来，已被应 用了多年 。
初发酵试验
选择适宜的三个连续稀释度的样品匀液（液 体样品可以选择原液）。每个稀释度接种管 肉汤，每管接种（如接种量需要超过 ，则 用双料肉汤），℃±℃培养±，观察小导管 内是否有气泡产生，如未产气继续培养至±。 记录在内产气的管数。如所有肉汤管均未产 气，即可报告大肠杆菌结果；如有产气者， 则进行复发酵试验。