微生物菌落计数及
微生物菌落计数方法公式
微生物菌落计数方法公式
微生物菌落计数方法是一种常用的微生物检测方法，具有快速、简便、实用的特点。
下面我们详细介绍微生物菌落计数方法，并给出具体的
计算公式。
一、微生物菌落计数方法
1. 样品制备：将待检样品用无菌物质稀释到合适的浓度，以便以下操作。
2. 平板涂布：将稀释后的样品倒入培养基中，用无菌铁环平均涂布在
琼脂平板上，使每个平板上菌液涂布均匀。
3. 培养：将涂好的琼脂平板置于恒温恒湿培养箱内，在适宜的培养条
件下进行菌落生长。
4. 计数：菌落生长一定时间后，在合适的光照条件下观察并计数。
二、微生物菌落计数公式
1. 常见单位及定义：
（1）CFU：Colony Forming Unit，即菌落形成单位。
（2）MPN：Most Probable Number，即最可能数量。
2. CFU计算公式：
CFU = （菌落数 / 涂样量）×稀释倍数
3. MPN计算公式：
（1）假定重复涂法：MPN = （a / b）×所需稀释倍数
其中，a为总正涂数，b为总涂数。
（2）浓度穿网法：MPN = 浓度对应格数
对于MPN计算法，还需根据不同的稀释方法，选择相应的查表文献进行计算。
在使用MPN方法时，计算前应根据实际情况，选择合适的稀释倍数。
以上就是微生物菌落计数方法及计算公式的详细介绍。
通过该方法，可以快速、简便、准确地对微生物进行检测，是一种常用的微生物质量控制手段。
微生物菌落总数计数方法
微生物菌落总数计数方法微生物菌落总数计数方法有很多种，下面列举了其中的50种方法并对其进行详细描述：1. 胶平板法：将微生物样品通过稀释后均匀涂布在富营养培养基上，培养后统计菌落数量。
2. 液体计数法：使用专门的装置进行微生物菌落计数，例如波形计数器。
3. 膜过滤法：将微生物样品通过膜过滤器，然后将膜放到富养分培养基上进行培养和计数。
4. 容积法：将微生物样品通过稀释，然后使用容积计数器对其进行计数。
5. 水平采样法：将微生物样品通过固体培养基，然后根据采样水平进行菌落计数。
6. 微阵列计数法：使用微阵列技术进行微生物菌落计数，高通量，自动化程度高。
7. 波数计数法：通过光学检测装置对微生物样品的波数进行计数。
8. 流式细胞技术：通过流式细胞仪对微生物样品中的细胞进行计数和分析。
9. PCR技术：通过定量PCR对微生物样品中的特定基因进行定量，从而间接计算出微生物菌落总数。
10. 分光光度计法：通过分光光度计测定微生物样品中生物的光学密度，进而计算其菌落总数。
11. 过膜法：利用薄膜将微生物分布均匀后计数。
12. 电子计数法：通过电子显微镜进行微生物菌落计数。
13. 温度计数法：根据微生物在不同温度下的生长特性进行计数。
14. 荧光法：利用荧光染料对微生物菌落进行标记并计数。
15. 光学显微镜法：利用光学显微镜对微生物进行直接观察和计数。
16. 超声波法：利用超声技术将微生物分散均匀后计数。
17. 图像分析法：对微生物样品在图像上的特征进行分析，并计算菌落总数。
18. 颜色计数法：通过颜色反应对微生物菌落进行计数。
19. 电泳计数法：通过蛋白电泳对微生物进行计数。
20. 微型生物反应器法：利用微型生物反应器的特性对微生物进行计数。
21. 电化学法：通过电化学技术对微生物样品进行计数。
22. 生物传感器法：利用生物传感器对微生物进行快速计数。
23. 感光计数法：利用光敏感材料对微生物进行计数。
24. 气溶胶计数法：利用气溶胶技术对微生物进行计数。
微生物菌落计数实验报告
微生物菌落计数实验报告实验目的：本实验旨在通过微生物菌落计数方法，确定水样中细菌和真菌的菌落数，以评估水质的卫生安全水平。
实验原理：微生物菌落计数是一种常用的微生物计数方法，通过将待检测样品在适当培养基上培养，促使微生物菌落形成，然后用目镜进行观察计数。
细菌和真菌在不同培养基上生长的特性不同，利用这一特性可以分别计数。
瓶子计数法和平板计数法是常用的微生物菌落计数方法。
实验步骤：1. 做好消毒准备，将取样瓶开盖，取适量水样。
2. 用无菌移液管分别移取水样至含有不同培养基的培养皿中。
3. 均匀涂抹样品，覆膜，进行培养。
4. 培养后观察培养皿上的菌落形成情况，用计数板进行计数。
5. 计算出每毫升水样中的微生物菌落数。
实验结果：根据观察和计数，得出水样中细菌和真菌的菌落数分别为XXX CFU/mL和XXX CFU/mL。
实验分析：通过微生物菌落计数实验，我们可以了解水质中微生物的富集情况，评估水样的卫生安全性。
根据实验结果，可以判断水样是否存在污染，进而采取相应措施提高水质。
结论：微生物菌落计数实验是一种简单而有效的水样检测方法，可以帮助我们及时了解水质情况，保障人们的健康。
在日常生活中，我们应该重视水质安全问题，做好水质检测和管理工作。
实验注意事项：1. 操作时要保持无菌环境，避免外界微生物的污染。
2. 操作时要注意个人防护，避免实验中发生意外伤害。
3. 实验后要及时处理实验用具，保持实验室整洁。
通过微生物菌落计数实验，我们可以更深入了解水质情况，及时采取措施改善水质，保障人们的生活健康。
愿我们在未来的生活中，都能享受清洁卫生的水资源，健康快乐地生活。
微生物学 实验三 平板菌落计数法
微生物学实验三平板菌落计数法微生物学实验三平板菌落计数法微生物学实验三平板菌落计数法实验三平板菌落计数学习菌种的平板菌落计数的基本原理和方法。
平板菌落计数法就是将试样样品经适度吸收之后，其中的微生物充份集中成单个细胞，挑一定量的吸收样液注射至平板上，经过培育，由每个单细胞生长产卵而构成肉眼可知的菌落，即为一个单菌落应当代表原样品中的一个单细胞。
统计数据菌落数，根据其吸收倍数和采样注射量即可折算出来样品中的含菌数。
但是，由于试样样品往往难于全然集中成单个细胞，所以，孵出的一个单菌落也可能将源自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往相对较低，为了确切地阐释平板菌落计数的结果，现在已女性主义采用菌落形成单位（colony-formingunits,cfu）而不以绝对菌落数去则表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水（包括水源水）等的含菌指数或污染程度的检测。
1．菌种：大肠杆菌菌悬液。
2．培养基：lb培养基。
3．仪器或其他用具：1ml无菌液体，无菌平皿，器皿4.5ml无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。
取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10、10、10（稀释度）各3套，另-1-2-3-4-5挑6支盛存有4.5ml无菌水的试管，依次标是10、10、10、10、10、用1ml无菌吸管吸取1ml已充分混匀的大肠杆菌菌悬液（待测样品），精确地放-10.5ml至10的试管中，此即为10倍吸收。
将多余的菌液送回原菌液中。
-6-4-5-6将10试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀。
另取一支1ml吸管插入10试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。
吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸管伸入管底，吹时离开液面，以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢。
实验四 微生物的菌落形态观察、平板菌落计数及菌种保藏(张理珉)
浊度与微生物生物量测定
原理：
①细胞的存在会 造成光的散射， 降低光线的透过；
②在一定范围内 细胞浓度与吸光 度成正比
二、平板菌落计数的优缺点
优点：反映的是微生物活菌数量，可获 得活菌的信息，所以被广泛用于生物制 品检验（如活菌制剂），以及食品、饮 料和水（包括水源水）等的含菌指数或 污染程度的检测。 缺点：操作较繁，所需时间较长，测定 结果易受多种因素的影响。
（3）菌体浊度的测定（只针对单细胞微 生物）； 利用分光光度计在600nm测定吸光度 值。 （4）细胞干重和湿重的测定（有时湿重 以体积计量）； （5）各种细胞物质含量的测定（蛋白质、 核酸、 ATP、磷、叶绿素等定量测 定）——建立了多种快速检测方法； 说明：后两种对丝状菌比较有意义。
2、常见微生物检测项目
10-3
3 平均 1 2
10-4
3 平均
霉 菌
cfu数/平板 每毫升中的cfu数
实验内容四
——介绍菌种保藏的原理和方法
一、菌种保藏的重要性
微生物基本特性所决定的——微生 物个体微小、代谢活跃、生长繁殖 快、易变异、易污染。 研究工作的连续性需要。 工业及科研菌种要注意菌种的衰退 和复壮。
4、若所有稀释度的平均菌落数均大于 300，则应按稀释度(倍数)最高的平均菌落数 乘以稀释倍数（见下表，例4）。
5、若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则应按稀释度(倍数)最低的平均菌落数乘以 稀释倍数（见下表，例5）。
6、若所有稀释度的平均菌落数均不在 30～300之间，则以最近300或30的平均菌落 数乘以稀释倍数（见下表，例6）。
计算公式说明：
①如样品来源为液体其表示为CFU/ml；
②所加样品量为每个平板所加入的相应稀释液的体积（ml）。
微生物限度-直接接种方法以及菌落计数
菌落总数百科名片菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
目录菌落总数介绍检验方法说明（一）样品的处理和稀释：（二）倾注培养（三）计数和报告菌落总数介绍菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。
国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。
检验方法参见：GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定》SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品菌落计数》说明（一）样品的处理和稀释：1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。
菌落总数、霉菌和酵母菌总数等微生物检验方法
菌落总数、霉菌和酵母菌总数等微生物检验方法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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统计菌落数目的方法
统计菌落数目的方法一、引言菌落是微生物繁殖形成的可见现象，可以用来估计菌落的数量。
统计菌落数目是微生物学中的重要研究方法之一。
本文将介绍统计菌落数目的方法及其应用场景。
二、直接计数法直接计数法是最简单、直接的方法之一，适用于较少数量的微生物菌落计数。
该方法通常使用显微镜和计数盘来进行菌落计数。
具体步骤如下：1.准备好培养基，并将待测样品在培养基上均匀涂布。
2.将培养基放置在适宜的环境中，培养一段时间，使菌落生长。
3.使用显微镜观察培养基，使用计数盘对菌落进行计数。
4.根据计数盘上的单位格数和菌落的平均大小计算总菌落数量。
三、稀释平板法稀释平板法适用于菌落数量较多的情况。
该方法通过连续稀释样品，将其均匀涂布在培养基上，然后计算每个稀释液中的菌落数量。
具体步骤如下：1.准备一系列含有不同菌落数量的稀释液。
2.取一定体积的稀释液，将其均匀涂布在培养基上。
3.培养一段时间后，使用计数盘对菌落进行计数。
4.根据每个稀释液中的菌落数量，绘制菌落数量与稀释倍数的曲线图。
5.根据曲线图中最合适的稀释倍数，计算原始样品中的菌落数量。
四、膜过滤法膜过滤法适用于水样和空气样品等液态或气态样品。
该方法通过将样品过滤，将菌落过滤在膜上，再将膜转移到培养基上进行培养和计数。
具体步骤如下：1.准备适用的膜过滤器，并将其放置在过滤装置中。
2.将待测样品通过过滤装置过滤，将菌落过滤在膜上。
3.将膜转移到培养基上，进行培养。
4.培养一段时间后，使用计数盘对菌落进行计数。
5.根据计数盘上的单位格数和菌落的平均大小计算总菌落数量。
五、应用场景统计菌落数目的方法在许多领域都有广泛应用，包括：1.食品卫生检验：通过统计菌落数量可以评估食品的卫生状况，判断是否符合相关标准。
2.环境监测：统计空气、水和土壤中的菌落数量，可以评估环境的卫生状况，指导环境治理工作。
3.医疗卫生：统计医院空气、器械和手术室中的菌落数量，可以评估感染风险，采取相应的防控措施。
微生物的平板菌落计数法
<实验十三微生物的平板菌落计数法>一、实验目的学习微生物的平板计数法。
二、原理概述微生物的稀释平板计数是根据在固体培养基上所形成的一个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成，且肉眼可见的子细胞群体这一生理及培养特征进行的。
也就是说一个菌落即代表一个单细胞。
计数时，首先将待测样品制成均匀的一系列不同稀释液，并尽量使样品中的微生物细胞分散开来，使成单个细胞存在( 否则一个菌落就不只是代表一个菌 ) ，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数，一般用于某些成品检定 ( 如食品等 ) 、生物制品检定、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检定。
三、实验器材1 、待测样品、所需各类培养基2 、天平、称样瓶、记号笔、容量瓶、无菌生理盐水、 1ml 和 5ml 无菌移液管、无菌平板、无菌试管四、操作步骤和内容1 、样品稀释液的制备准确称取待测样品 10g 或 10ml ，放入装有 90ml 无菌水并放有小玻璃珠的 250mL 三角瓶中，用手或置摇床上振荡 20min ，使微生物细胞分散，静置约 20-30s ，即成 10 -1 稀释液；再用 1ml 无菌吸管，吸取 10 -1 稀释液 1ml 移入装有 9ml 无菌水的试管中，吹吸 3 次，让菌液混合均匀，即成 10 -2 稀释液；再换一支无菌吸管吸取 10 -2 菌液 1mL 移入装有 9ml 无菌水试管中，即成 10 -3 稀释液；以此类推，一定要每次更换吸管，连续稀释，制成 10 -4 、 10 -5 、 10 -6 、 10 -7 、 10 -8 等一系列稀释度的菌液，供平板计数使用 ( 如图 13 － 1) 。
图 13 － 1 平板计数法中样品的稀释和稀释液的取样用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。
微生物菌落总数的测定—菌落总数的概念和测定意义
现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生
长。
• 菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，也 不能区分其中细菌的种类，只包括一群在计数平 板琼脂中生长发育、嗜中温的需氧和兼性厌氧的 细菌菌落总数，所以有时被称为杂菌数，需氧菌 数等。
•
2 菌落总数测定的卫生学意义
（1）菌落总数主要作为判别食品被污染程度的 标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁 殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提 供依据。
（2） 食品中细菌菌落总数越多，则食品含有致 病菌的可能性越大，食品质量越差；菌落总数越 小，则食品含有致病菌的可能性越小。须配合大 肠菌群和致病菌的检验，才能对食品做出较全面 的评价。
3、细菌总数
指一定数量或面积的食品样品．经过适当的 处理后，在显微镜下对细菌进行直接计数。其中 包括各种活菌数和尚未消失的死菌数。细菌总数 也称细菌直接显微镜数。通常以1 g或1 mL样品 中的细菌总数来表示。
菌落总数的测定
(GB 4789.2—2010)
• 一、 目的
• 1、 学习并掌握食品中菌落总数测定方法和 原理。 2 、了解菌落总数测定在对被样品进行卫生学 评价中的意义 。
二、原理
•
细菌数量的表示方法由于所采用的计数
方法不同而有两种：处理，在一定条件下
培养后，所得1g或1mL检样中形成的细菌菌落
总数。以 CFU/g（mL）来表示。
•
一定条件包括培养基成分、培养温度和时
间、pH、是否需要氧气等。
•
按国家标准方法规定，即在需氧情况下，
36 ±1℃培养48±2 h，能在平板计数琼脂上生长
发育的细菌菌落总数。所以厌氧或微需氧菌、
有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于
2020版《中国药典》微生物限度计数—酵母菌及霉菌
2020版药典微生物限度计数—酵母菌及霉菌2020版本药典(1)菌液制备取白色念珠菌的新鲜培养物，用0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加5ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，使用移液枪吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的黑曲霉孢子悬液。
菌液制备后保存在2℃冰箱，在24小时内使用。
(2) 计数培养基适用性检査接种不大于l00cfu的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基平板，35℃条件下培养4天；接种不大于l00cfu的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，25℃条件下培养4天。
每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。
同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
(3) 计数方法适用性试验1) 供试液制备取供试品10g，用胰酪大豆胨液体培养基制备成1:10供试液。
2) 接种和稀释按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。
所加菌液的体积不超过供试液体积的1%。
1、试验组取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每lml供试液中含菌量不大于l00cfu。
2、供试品对照组取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。
3、菌液对照组取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。
3) 供试品中微生物的回收取20ml温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，注人直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用无菌操作台风干的方法使培养基表面干燥。
每一平板表面接种上述照“供试液的制备”和“接种和稀释”制备的供试液0.1ml。
胰酪大豆胨琼脂培养基平板在35℃条件下培养3天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在25℃条件下培养4天。
同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。
化妆品微生物标准检验方法总则的菌落计数及报告方法
化妆品微生物标准检验方法总则的菌落计数及报告方法6 菌落计数方法先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5～10倍的放大镜检查，以防遗漏。
记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。
若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数。
若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以2，以代表全皿菌落数。
7 菌落计数及报告方法7.1 首先选取平均菌落数在30～300个之间的平皿，作为菌落总数测定的范围。
当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数(见表1中例1)。
7.2 若有两个稀释度，其平均菌落数均在30～300个之间，则应求出两菌落总数之比值来决定，若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2则报告其中稀释度较低的平皿的菌落数(见表1中例2及例3)。
7.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例4)。
7.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1例5)。
7.5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300个之间，其中一个稀释度大于300个，而相邻的另一稀释度小于30个时，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例6)。
7.6 若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每g或每mL小于10CFU。
7.7 菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。
为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示(见表1报告方式栏)。
在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。
表1 菌落计数结果及报告方式例一：稀释了100倍就乘上100164x100=16400例二：稀释了100倍菌落总数为295x100稀释了1000倍菌落总数为46x1000两菌落总数之比值（1000倍菌落总数作为分子而100倍菌落总数作为分母）为因为比值少于2，所以应报告其平均数例三：稀释了100倍菌落总数为271x100稀释了1000倍菌落总数为60x1000两菌落总数之比值（1000倍菌落总数作为分子而100倍菌落总数作为分母）为因为比值大于2，所以报告其中稀释度较低的平皿的菌落数稀释了100倍菌落总数为例四：稀释了100倍的平均菌落数为4650>300稀释了1000倍的平均菌落数为513>300按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告在实际生产情况，则需要重新取样进行微生物检验，同时解决生产过程存在的污染因素例五：稀释了10倍的平均菌落数为27<30稀释了100倍的平均菌落数为11<30稀释了1000倍的平均菌落数为5<30按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告27x10=270例六：稀释了100倍的平均菌落数为305接近300305x100=30500。
细菌菌落计数实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握细菌菌落计数的原理和方法。
2. 学会使用平板菌落计数法对细菌进行计数。
3. 了解不同细菌的生长特性和培养条件。
二、实验原理细菌菌落计数是微生物学中常用的实验方法，通过在固体培养基上培养细菌，观察并计数菌落，从而了解样品中细菌的数量。
实验原理基于以下步骤：1. 样品处理：将待测样品进行适当的稀释，以使菌落数量达到可计数的范围。
2. 接种：将稀释后的样品涂布在固体培养基上，使菌落分散生长。
3. 培养和观察：在一定条件下培养涂布后的培养基，观察菌落生长情况。
4. 计数：选择平均菌落数在30～300之间的平板进行计数，计算菌落数。
三、实验材料1. 样品：实验室自备的细菌样品。
2. 培养基：营养琼脂培养基、牛肉膏蛋白胨培养基等。
3. 仪器：无菌操作台、移液管、培养皿、酒精灯、恒温培养箱等。
4. 其他：无菌水、酒精、生理盐水、无菌棉签等。
四、实验方法1. 样品处理：将待测样品进行适当的稀释，以使菌落数量达到可计数的范围。
2. 接种：用无菌棉签将稀释后的样品涂布在固体培养基上，使菌落分散生长。
3. 培养和观察：将涂布后的培养基置于恒温培养箱中，在一定条件下培养。
4. 计数：观察菌落生长情况，选择平均菌落数在30～300之间的平板进行计数。
五、实验步骤1. 样品处理：取1mL待测样品，加入9mL无菌水中，进行10倍稀释。
2. 接种：用无菌棉签蘸取稀释后的样品，涂布在营养琼脂培养基上。
3. 培养和观察：将涂布后的培养基置于37℃恒温培养箱中，培养24小时。
4. 计数：观察菌落生长情况，选择平均菌落数在30～300之间的平板进行计数。
六、实验结果1. 样品1：菌落总数为100个。
2. 样品2：菌落总数为200个。
3. 样品3：菌落总数为150个。
七、实验分析1. 样品1的菌落总数较少，可能是因为样品中细菌数量较少或细菌生长条件不适宜。
2. 样品2的菌落总数较多，可能是因为样品中细菌数量较多或细菌生长条件适宜。
微生物菌落总数的测定—菌落总数的计数方法
混合均匀。
•
6、 待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温
箱内培养48±2h，水产品30±1℃温箱内培养72±3h。
•
如样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生
长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼
脂培养基（约4毫升），凝固后培养。
• （二） 菌落记录方法 做平板菌落数记录时，可用肉眼观察，必要
菌落总数的测定
三 、 材料
1、 食品检样 2、 培养基 平板计数培养基，无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液 3、 其它 无菌培养皿，无菌吸管，电炉、恒温培养箱等。
四、 流程
• 1、检样 • 2、做几个适当倍数的稀释液 • 3、选择2~3个适宜稀释度各1 mL,分别加入
灭菌平皿内 • 4、平皿内倾注15～20 mL琼脂培养基，混匀 • 5、36 ±1℃培养48±2小时或（24±2）小时 • 6、记录稀释倍数和相应的各平板菌落数量 • 7、 计算菌落总数 → 报告
10-4
3.1x106
• 2、若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜
计数范围内时，应以两者比值决定。若其比值小 于2，应报告两者的平均数；若大于等于2，则报 告稀释度较小的菌落数。
试样 稀释度
例次 10-2
10-3
1
380
52
平
2 均 526
205
菌
3 落 271
60
数
4
284
152
菌量
10-4 选定计数稀释度 /(个/g 或mL)
菌量
10-4 选定计数稀释度 /(个/g 或mL)
18
10-3
5.2x104
32
10-3，10-4
2.6x105
12
2020版《中国药典》微生物限度计数—酵母菌及霉菌
2020版药典微生物限度计数—酵母菌及霉菌2020版本药典(1)菌液制备取白色念珠菌的新鲜培养物，用0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加5ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，使用移液枪吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的黑曲霉孢子悬液。
菌液制备后保存在2℃冰箱，在24小时内使用。
(2) 计数培养基适用性检査接种不大于l00cfu的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基平板，35℃条件下培养4天；接种不大于l00cfu的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，25℃条件下培养4天。
每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。
同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
(3) 计数方法适用性试验1) 供试液制备取供试品10g，用胰酪大豆胨液体培养基制备成1:10供试液。
2) 接种和稀释按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。
所加菌液的体积不超过供试液体积的1%。
1、试验组取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每lml供试液中含菌量不大于l00cfu。
2、供试品对照组取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。
3、菌液对照组取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。
3) 供试品中微生物的回收取20ml温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，注人直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用无菌操作台风干的方法使培养基表面干燥。
每一平板表面接种上述照“供试液的制备”和“接种和稀释”制备的供试液0.1ml。
胰酪大豆胨琼脂培养基平板在35℃条件下培养3天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在25℃条件下培养4天。
同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。
微生物生长的常用检测方法
微生物生长的常用检测方法微生物生长的常用检测方法微生物包括：细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，与人类关系密切。
下面是店铺收集整理的微生物生长的几种检测方法，希望对您有所帮助！一、生长量测定法1.1体积测量法：又称测菌丝浓度法。
通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。
方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。
菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。
这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。
1.2称干重法：可用离心或过滤法测定。
一般干重为湿重的10-20%。
在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1-5次，进行干燥。
干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后称重。
如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40℃下进行真空干燥。
称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（activitydryyeast,ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。
1.3比浊法：微生物的生长引起培养物混浊度的增高。
通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。
对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时，可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。
将侧臂插入光电比色计的比色座孔中，即可随时测定其生长情况，而不必取菌液。
该法主要用于发酵工业菌体生长监测。
如我所使用UNICO公司的紫外-可见分光光度计，在波长600nm处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600，以此监控E.Coli的生长及诱导时间。
菌落计数及报告方法
菌落计数及报告方法1、目的建立微生物实验中菌落计数及报告规范，从实际生长的菌落数中计算出较为科学的结果2、方法说明本文件采用平板计数法，产品中污染的细菌种类不同，每种细菌都有它一定的生理特性，培养时对营养要求，培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等均有所不同。
在实际工作中，不可能做到满足所有菌的要求，因此所测定的结果，只包括在本方法所使用的条件下生长的微生物总数。
3、参考文件GB7918.2-1987化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定4、菌落计数方法先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5～10倍的放大镜检查，以防遗漏。
记下各平皿的菌落数后。
求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。
若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数。
若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。
5菌落计数及报告方法5.1 首先选取平均菌落数在30～300之间的平皿，作为菌落总数侧定的范围。
当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数(见表中例1) ,5.2 若有两个稀释度，其平均菌落数均在30～300个之间，则应求出两者菌落总数之比值来决定。
若其比值小于或等于2 ，应报告其平均数，若大于2则报告其中较小的菌落数( 见表中例2及例3),5.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300 个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例4)，5.4 若所有稀释度的平均菌落数均少于30个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例5),5.5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300个之间，其中一个稀释度大于300个，而相邻的另一稀释度小于30个时，则以接近30 或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例6), 5.6 若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每克或每毫升小于10 个。
5.7 菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。
微生物菌落计数注意事项
微生物菌落计数注意事项微生物菌落计数是一种常用的测定微生物数量的方法，广泛应用于食品、医药、环境等领域。
但是，在进行菌落计数的过程中，需注意以下几点事项。
1. 遵循操作规范菌落计数是一项精密的实验，实验人员需严格按照操作规范进行操作，尽可能减少误差的发生。
灭菌操作是关键步骤，应严格执行操作流程，遵循灭菌的时间、温度、压力等要求。
同时，在取样、制备培养基、装液、平板和计数等环节也需注意规范。
2. 选择合适的培养基不同菌种对不同培养基的选择是不同的，如果选择了错误的培养基，则会导致培养菌落计数结果的偏差。
因此，在菌落计数前，需了解菌种的特性，选择合适的培养基。
对于不同的样品，如水样、空气样、食品样等，也需选择不同的培养基。
3. 确定合适的样品量样品量的多少会影响到菌落计数的准确性，在确定样品量时需考虑样品的特性、预计的微生物数量等因素。
通常情况下，样品量不宜太多，以避免菌落过于密集，难以区分和计数；也不宜过少，以避免在样品中未能检测到微生物。
4. 选择合适的计数器菌落计数器是进行菌落计数的关键工具，不同的计数器可用于计数不同大小、不同颜色的菌落。
在选择计数器时需了解菌落的大小、颜色等特征，选择合适的计数器。
同时，计数器的灵敏度也要考虑，如果灵敏度不够，可能会漏计或重复计数。
5. 控制环境条件在进行菌落计数时，环境温度、湿度等条件会影响到微生物的生长繁殖，因此需控制好环境条件。
通常情况下，室温保持在20℃~25℃，湿度在50%~60%左右。
6. 记录和计算结果记录和计算结果是菌落计数的最后步骤，在记录时需准确标明样品名称、样品的采集时间和地点，计算时需统计各种形状、颜色的菌落数量，并按照规定的方法进行统计。
同时，在记录和计算结果时，需进行复核，以保证结果的准确性。
总之，菌落计数在实际应用中可以作为检验食品、医药、环境等方面微生物数量的一种手段，但在进行菌落计数之前需要对实验进行严格的操作规范，选择合适的培养基、计数器，同时注意控制环境条件，并在记录和计算结果时进行复核以保证结果的准确性。
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技术参数
• • • • • • 成像 检源自分析功能 测量功能 数据库功能 报表打印 仪器规格与选配
HiCC- 型自动菌落计数、抑菌圈测定、 HiCC-V型自动菌落计数、抑菌圈测定、显微计数分 析系统成像原理 析系统成像原理
• 图像分辨率： 图像分辨率：采用光学分辨率 4800×9600上下双光源可选的高 × 上下双光源可选的高 清晰扫描仪， 清晰扫描仪，物理分辨率最小达 25.4mm/4800像素 像素=0.0053mm/像 像素 像 可分辨大于0.1mm的菌落。 的菌落。 素,可分辨大于 可分辨大于 的菌落 图像调节：放大缩小、视野导航， 图像调节：放大缩小、视野导航， 图象增强、色度调节、 图象增强、色度调节、灰度负相变 换。 高均匀性的正面光源成像和背光光 源成像，扫描成像的亮度、 源成像，扫描成像的亮度、色度可 调。
仪器性能优点
I. 自动识别统计： 自动识别统计：SmartdownTM 菌落智能识别技术， 菌落智能识别技术，可自动识别 大规模团状、 大规模团状、链状粘连的球菌菌 以及显微镜下大规模团状、 落，以及显微镜下大规模团状、 链状粘连的长形杆菌（ 链状粘连的长形杆菌（包括显微 形态相互粘连的大肠杆菌、 形态相互粘连的大肠杆菌、病菌 孢子）。自动计数精度≥96.5%， ）。自动计数精度 孢子）。自动计数精度 ， 最多监视修正3.5%，即达 最多监视修正 ，即达100% 正确。 150～600个菌落 的计数速度， 个菌落/s的计数速度 ～ 个菌落 的计数速度， 每小时最快计数120个平板。 个平板。 每小时最快计数 个平板 颜色识别和专有的背景校正， 颜色识别和专有的背景校正，精 细分割光照不匀的菌落， 细分割光照不匀的菌落，最多同 时计数出15类菌落 类菌落。 时计数出 类菌落。可快速测 定大肠菌群，并可一机多用。 定大肠菌群，并可一机多用。 IV. 可裁剪掉污染目标区， 可裁剪掉污染目标区，能根据菌 落形态、大小差别， 落形态、大小差别，自动剔除杂 有效支持复杂微生物统计。 质，有效支持复杂微生物统计。 可自动形成批操作向导， 可自动形成批操作向导，一键完 成自动计数。清晰、 成自动计数。清晰、可直观验证 的计数自动标记， 的计数自动标记，可自由选择标 记数字/符号 及标记的颜色、 符号， 记数字 符号，及标记的颜色、 大小。 大小。 菌落图像、 菌落图像、检验结果可保存到数 据库，并导出形成PDF、 据库，并导出形成 、 WORD报告，或EXCEL表，满 报告， 报告 表 管理和搜索的需要； 足GLP管理和搜索的需要；可存 管理和搜索的需要 储菌落图像及全部统计结果， 储菌落图像及全部统计结果，免 除了繁琐的记录工作，避免错误。 除了繁琐的记录工作，避免错误。
• 报表打印
• • 在线编辑：提供报告编写模板、 在线编辑：提供报告编写模板、修 改输入、打印预览。 改输入、打印预览。 报表打印：图片、 报表打印：图片、统计数据自动打 印。
•
仪器规格与选配
• 适合培养皿的直径：50-150mm，显微分析最小分辨率 适合培养皿的直径： ，显微分析最小分辨率0.5-1um。 • HiCC系列病菌孢子、菌落微生物自动计数分析软件。 系列病菌孢子、 系列病菌孢子 菌落微生物自动计数分析软件。 • 标配光学分辨率4800×9600、A4加长的 × 、 加长的Microtek ScanMaker i800 标配光学分辨率 加长的 双光源的真彩扫描仪 1台。 台 • 标配 凤凰光学 高性能的 高性能的PH100-DB310U生物显微镜（内含 生物显微镜（ 生物显微镜 内含310万像 万像 素电子目镜，标配暗场、偏光装置） 台 素电子目镜，标配暗场、偏光装置）1台。 • 仪器总重量：~20公斤（计算机需另配，最好内存>2GB）。 仪器总重量： 公斤（计算机需另配，最好内存 ）。 公斤
高性能的PH100标配 凤凰光学 高性能的 DB310U生物显微镜（内含 生物显微镜（ 生物显微镜 内含310万像素 万像素 电子目镜，标配暗场、偏光装置）。 电子目镜，标配暗场、偏光装置）。
•
•
•
仪器的检测分析功能 仪器的检测分析功能
• • 菌落统计速度： 个菌落/s。 菌落统计速度：150～600个菌落 。 ～ 个菌落 全皿菌落统计： 全皿菌落统计：SmartdownTM菌 菌 落智能识别技术统计菌落总数， 落智能识别技术统计菌落总数，可 自动识别大规模团状、 自动识别大规模团状、链状粘连的 球菌菌落， 球菌菌落，以及显微镜下大规模团 链状粘连的长形杆菌， 状、链状粘连的长形杆菌，并按任 意直径范围分类统计显示特定大小 的菌落。 的菌落。 区域选择统计：可选择圆、半圆、 区域选择统计：可选择圆、半圆、 扇形、矩形、 扇形、矩形、多边形区域的目标进 行统计。 行统计。 鼠标增减统计：快捷、 鼠标增减统计：快捷、方便的修正 手段， 手段，尤其适合修正培养皿边缘菌 落。 颜色识别统计：根据颜色特性筛选， 颜色识别统计：根据颜色特性筛选， 分别计数分析特定颜色的菌落数量。 分别计数分析特定颜色的菌落数量。 • 按菌落形状统计： 按菌落形状统计：自动统计出球菌 数量和其它类菌落的数量。 数量和其它类菌落的数量。 统计效果监视： 统计效果监视：多种标识方式的菌 落分析精度监视，迅速达到100% 落分析精度监视，迅速达到 正确。 正确。 菌落形态分析： 菌落形态分析：自动分析每个菌落 的面积、等效直径、长轴、短轴、 的面积、等效直径、长轴、短轴、 长宽比、圆度、周长。 长宽比、圆度、周长。 大肠菌群测定：依国家标准，快速 大肠菌群测定：依国家标准， 算出大肠菌群值。 算出大肠菌群值。 菌落粘连分割： 菌落粘连分割：自动分割相互粘连 的菌落， 的菌落，可由用户选择分割或不分 割，还能自动分割成片粘连的长形 目标。 目标。 自动换算参数：输入培养皿直径、 自动换算参数：输入培养皿直径、 样本稀释度后，自动换算出结果。 样本稀释度后，自动换算出结果。 全新的菌落平皿自动定位功能， 全新的菌落平皿自动定位功能，快 速地自动取得菌落目标分析区
数据库功能及报表打印
• 数据库功能
• • 数据存储： 数据存储：图像和全部结果以数据 库存储。 库存储。 智能查询：按日期、编号、 智能查询：按日期、编号、备注字 段自动搜索查询， 段自动搜索查询，查询结果以图像 和数据库形式显示。 和数据库形式显示。 数据导出：统计结果能以Excel表、 数据导出：统计结果能以 表 PDF和Word文件导出。 文件导出。 和 文件导出
微生物菌落计数、抑菌圈测量、显 微技术分析系统
产品介绍 性能优点 技术参数
HiCC- 型自动菌落计数、抑菌圈测定、 HiCC-V型自动菌落计数、抑菌圈测定、显微计数分析系统
• 产品介绍
• HiCC-V型自动菌落计数、抑 菌圈测定、显微计数分析系 统由我们开发的数字显微图 像分析软件和附件，与国内 著名品牌的高清晰彩色数码 显微镜以及专业级的双光源 扫描仪组成。其显著优点是： 准确、简便，可1机3用的智 能一体机（自动菌落计数、 药效分析、显微成像计数分 析）。
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• 仪器标定：仪器自带标定功能，实现半自动的尺寸标定。 仪器标定：仪器自带标定功能，实现半自动的尺寸标定。 • 长度测量：具有跟随放大镜功能，通过鼠标拖动精确测量。 长度测量：具有跟随放大镜功能，通过鼠标拖动精确测量。 • 抑菌圈测量：内置美国 抗微生物药物敏感性试验执行标准” 抑菌圈测量：内置美国CLSI“抗微生物药物敏感性试验执行标准”最 抗微生物药物敏感性试验执行标准 新版全部数据，提供了数据输入和修改平台，方便更新， 新版全部数据，提供了数据输入和修改平台，方便更新，为纸片法药 敏分析提供了快捷工具。可按最新的国家药典分析药敏、效价指标。 敏分析提供了快捷工具。可按最新的国家药典分析药敏、效价指标。 点选[抑菌圈测量 图标按钮，自动获得抑菌圈面积/直径 菌落面积/ 抑菌圈测量]图标按钮 直径、 点选 抑菌圈测量 图标按钮，自动获得抑菌圈面积 直径、菌落面积 直径、抑菌圈直径/菌落直径的比值 抑菌圈面积/菌落面积的比值 菌落直径的比值、 直径、抑菌圈直径 菌落直径的比值、抑菌圈面积 菌落面积的比值 等 结果。可在有局部文字干扰的情况下，自动获得抑菌圈面积/直径 直径、 结果。可在有局部文字干扰的情况下，自动获得抑菌圈面积 直径、 菌落面积/直径 抑菌圈直径/菌落直径的比值 抑菌圈面积/菌落面积 直径、 菌落直径的比值、 菌落面积 直径、抑菌圈直径 菌落直径的比值、抑菌圈面积 菌落面积 等结果。测量单个抑菌圈的直径，仪器的重现性≤0.02mm； 的比值 等结果。测量单个抑菌圈的直径，仪器的重现性 ； 效价测量精度≤0.5%；效价重复测量精度 效价测量精度 ；效价重复测量精度≤0.5%；台间测量差异 ； ≤0.5%。 。