第九章 实验动物的胚胎工程
胚胎工程ppt
精、卵相遇 接触透明带
顶体酶溶 解透明带
防止多个精子 进入透明带
顶体反应 穿越放射冠
穿越透明带
顶体酶释放 溶解卵丘细胞 （放射冠）
接触卵黄膜
形成第一道屏障 （作用 ）
产生透明带 反应
精子被微 绒毛抱合
精子外膜与卵黄膜融合
精子进入卵
变化① 产生卵黄膜
精 子 变化② 尾部脱离 进 核膜破裂 入 卵 激活卵子完 后 变化③ 成减数第二 次分裂，排 出第二极体
1、下列关于胚胎发育的叙述，正确的是（ D ） A.胚胎发育早期随细胞不断分裂体积增大 B.在桑椹胚阶段，胚胎内部出现空腔 C.原肠胚阶段的每一细胞都属于全能细胞 D.原肠胚阶段出现胚层分化 2、下列叙述正确的是（多选）（ ACD ） A．胚胎发育的早期有一段时间是在透明带内 进行的 B．内细胞团将来发育成胎盘和胎膜 C．哺乳动物早期胚胎在一定时间内不与母体 子宫建立组织上的联系 D．早期胚胎发育到一定阶段才可从培养液取 出向受体移植
2.排卵是指卵子从卵泡中排出，还是指卵泡从 卵巢中排出？
答：是指卵子从卵泡中排出。
3.刚排出的卵是成熟的卵子吗？它在母体的什 么部位与精子受精？
答：刚排出的卵子尚未完全成熟，仅完成第一次 减数分裂，需要在输卵管内进一步成熟，直到减数第二 次分裂的中期才能与精子结合完成受精过程。排出的卵 子是在输卵管内与精子受精的。
精子进入卵 子后,其细胞核 变大到和卵子细 胞核相似,精子 细胞核(雄原核) 和卵子细胞核(雌 原核)同时向细胞 中部靠拢,并相 互融合成一个细 胞核,这时称受 精卵。
3.形成受精卵：
3、受精的意义
对于进行有性生殖的生物来说， 通过减数分裂和受精作用可以维 持每种生物前后代体细胞中染色 体数目的恒定 ；这对于生物的遗 传和变异十分重要。
胚胎工程
第二阶段： （ 精子细胞）的形成 是初级母细胞经（ 减数分裂）的结果 减数第一次分裂：一个初级精母细胞（两个）次 级精母细胞 减数第二次分裂：两个次级精母细胞 分裂成 （ 单倍 ）染色体的（精子 ）细胞，一个初级精母 细胞经过减数分裂形成（ 4 ）个精子。 第三阶段：变形－精子细胞形成（ 精子）
精 第一阶段 子 发 生 第二阶段 的 过 程 第三阶段
哺乳动物精子和卵子的发生的不同点： 比较项目 精子发生 卵子发生 场所 睾丸中的曲细精管 卵巢、输卵管 性别分化后多数哺乳动物 初情期后到生 时间 殖机能衰退 卵子的形成和在卵巢内的 贮备是胎儿出生前完成的。 过程特点 MⅠ和MⅡ是连续 MⅠ和MⅡ是不连续 结果 是否需要 变形 重要区别 细胞质均等分裂 细胞质不均等分裂 4个精子 1卵子和3个第二极体 变形 不要变形
3.为什么说关于动物的体内受精和胚胎发育的研究， 会为胚胎工程提供理论基础？请结合本节内容举例 说明。
提示：胚胎工程的许多技术都是 在了解哺乳动物自然条件下受精和早期胚胎 发育的基础上实现的。人们只有了解精子的 获能、卵子的获能、受精过程，才能在体外 进行有效的模拟。
受精阶段 包括精子穿越放射冠 和透明带，进入卵黄膜，原 核形成和配子结合。
Ⅰ精子穿越放射冠和透明带 顶体反应 透明带反应(第一道) Ⅱ精子进入卵黄膜
卵黄膜封闭作用（第二道）
Ⅲ原核形成
雄原核和雌原核形成
Ⅳ配子结合： 雌雄原核融合形成合子(受精卵) 哺乳动物受精过程示意图
5.意义 • 维持每种生物前后代体细胞中染色体数目 的恒定 ； • 对于生物的遗传和变异十分重要。
• 1.一个卵泡中能形成几个成熟的卵子？ 一般一个卵泡只能形成一个成熟的卵子。 • 2.排卵是指卵子从卵泡中排出，还是指卵泡从卵 巢中排出？ 卵子从卵泡中排出 • 3.刚排出的卵是成熟的卵子吗？它在母体的什么 部位与精子受精？ 刚排出的卵子尚未完全成熟，仅完成减数第一次 分裂，需要在（ 输卵管 ）内进一步成熟， 直到第二次减数分裂（ 中期 ）的才能与精子 结合完成受精过程。排出的卵子是在 （ ）内与精子受精的。 输卵管
高中生物知识点：胚胎工程
高中生物知识点：胚胎工程胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子（针对胚胎发育过程）所进行的多种显微操作和处理技术；研究对象主要限定于高等脊椎动物，尤其是哺乳动物；重点内容包括胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等。
（一）动物胚胎发育的基本过程1、受精作用：成熟的精卵融合成为受精卵的过程（获能精子+减II中期的成熟卵细胞）过程：精卵识别、精子附着于卵膜、精卵质膜融合——受精时精卵质膜融合后，次级卵母细胞才最终完成减II，精卵核融合场所：输卵管上段2、胚胎发育：受精卵发育到幼体胚后发育：出生到性成熟个体发育：受精卵发育到性成熟3、动物胚胎发育的基本过程（1）卵裂期（2~8）：细胞数量增加，有机物总量/总体积减小，每个细胞都具有全能性，未出现细胞分化，每个细胞都能发育成完整新个体（2）桑椹胚（16~32）（3）囊胚/胚泡：细胞开始分化，形成滋养层（胚胎附属结构/胚外结构）和内细胞团（胚胎干/ES细胞，发育全能性），之间为囊胚腔注意题目要求填写滋养层细胞还是滋养层原肠胚：三胚层分化，其将分化成各种器官原基；——哺乳动物胚胎有机物总量增加（胚泡期已着床），其他动物有机物减少PS 早期胚胎（桑葚胚和早期囊胚）（二）胚胎干细胞1、哺乳动物胚胎干细胞来源于囊胚内细胞团（ES）或胎儿的原始性腺（EK）2、形态特征：具有胚胎细胞的特性，体积小，核大，核仁明显，二倍体核型功能特征：具有发育全能性胚胎干细胞体外培养：分离早期胚胎中的内细胞团；胰酶处理解离培养——饲养层（胚胎成纤维细胞）：促进生长，抑制分化4、胚胎干细胞的主要用途是：①基因敲除；②用分化诱导因子诱导胚胎干细胞定向分化，组织器官移植；③治疗人类的某些顽疾，修复坏死或退化的部位；④胚胎干细胞核移植，经胚激活、胚胎培养、胚胎移植；⑤改良和创造动物新品种胚胎工程的应用1.体外受精(1)卵母细胞的采集和培养：①卵巢经促性腺激素处理超数排卵，使用超声监视器确定卵泡位置，插入穿刺针吸取卵泡液，取出卵母细胞（各阶段卵母细胞均有可能）②体外培养至成熟（减II中）(2)精子的采集和获能（获得能与卵细胞结合的能力）：获能液由相关物质组成非ATP(3)受精：获能精子和成熟卵细胞在体外合适环境中共同培养——试管动物/珍稀动物保护（体外受精）Cf克隆动物（核移植）胚胎体外培养：（1）由于胚胎不同发育时期生理代谢需求不同，需配制一系列含有不同成分的培养液；由于哺乳动物胚胎发育条件复杂，尚不能实现胚胎全体外培养（2）目的：检测受精状况和受精卵的发育能力（3）培养液成分：水、无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、动物血清（4）胚胎去向：①胚胎移植②液氮冷冻保存胚胎移植——胚胎可能来自受精卵/核移植/胚胎分割；8细胞期之后(1)供体：经济价值高、遗传性状优良受体：①同种②生理状态相同/同期发情但未配种③常见或存量大④具有健康体质和正常繁殖能力(2) 胚胎移植的意义：大大缩短供体的繁殖周期，充分发挥雌性优良个体的繁殖能力(3) 生理学基础：①动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的。
胚胎工程课件
原肠腔
原囊肠胚胚
原肠胚的形成
囊胚—次—按序—照向—一内定—运的—动—内胚层——中胚层——原肠胚
滋养层
外胚层 中胚层
内胚层
囊原胚肠腔
胚的发育：
原囊肠胚胚
归纳：早期胚胎发育的几个阶段 桑椹胚：细胞属于全能细胞 。 囊胚：细胞开始 分化 ；内细胞团 将来 发育成 各种组织 ，滋养层 将来发育成 胎膜、胎盘，出现 囊胚腔 后，进一步 扩大会导致 孵化 。 原肠胚：内细胞团 表皮的细胞 形成 外胚层 ，下方的 细胞形成 内胚层 ，出 现 原肠腔 。
胚胎发育
受精卵 ：最初发育在输卵管进行有丝分裂
卵裂期 ：在透明带内进行有丝分裂，细胞数量不断
增加，但胚胎总体积并不增加，或略有减少。
桑椹胚 ：由具有全能性细胞构成，细胞数在32个左右，
排列紧密，形似桑椹
囊胚（内含囊胚腔） 内细胞团：发育成胎儿各组织
滋养层细胞：发育成胎膜和胎盘
外胚层
原肠胚（内含原肠腔） 中胚层
囊胚
桑椹胚这一阶段前的每一个细胞都具有发育成完整 胚胎的潜能，称为全能细胞（或全能干细胞）。
滋养层：发育成胎膜和胎盘，胚胎可通过这些组织 从母体中获得正常发育所需的氧气和营养物质
内细胞团细胞：发育成胎儿的各种组织
原肠胚的形成
囊胚—次—按序—照向—一内定—运的—动—内胚层——中胚层——原肠胚
囊原胚肠腔
当胚胎发育到适宜阶段时，可将其取出 移植到受体子宫或冷冻保存
采集良种母牛的卵母细胞 采集良种公牛精子
卵母细胞的体外培养
精子体外获能
良种牛受精卵 体外受精
“
胚胎的早期培养 早期胚胎
试
胚胎移植
管
普通受体牛子宫
《胚胎工程实验技术》 讲义
《胚胎工程实验技术》讲义一、胚胎工程的概念与发展胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术。
它是在胚胎学基础上发展起来的一门新兴学科，主要包括体外受精、胚胎移植、胚胎分割、胚胎冷冻保存、胚胎性别鉴定等技术。
胚胎工程的发展可以追溯到上世纪初。
随着显微镜技术的不断进步，人们对生殖细胞和胚胎的结构与功能有了更深入的了解。
20 世纪 50 年代，科学家成功实现了家兔的胚胎移植，标志着胚胎工程技术开始走向实用化。
此后，各种胚胎工程技术不断涌现和完善，为畜牧业、医学等领域带来了巨大的变革。
二、体外受精技术（一）基本原理体外受精是指将哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。
其基本原理是模拟体内受精的环境，使精子和卵子在适宜的条件下结合形成受精卵。
（二）操作步骤1、卵母细胞的采集卵母细胞的采集方法主要有两种：一种是从卵巢中直接采集未成熟的卵母细胞，然后在体外培养成熟；另一种是通过超数排卵技术，使雌性动物排出更多的卵子，再从输卵管中采集成熟的卵母细胞。
2、精子的采集与获能精子的采集通常通过人工采精的方法获得。
采集后的精子需要在体外进行获能处理，使其具备受精能力。
获能的方法有化学诱导法和培养法等。
3、受精将成熟的卵母细胞和获能的精子在体外共同培养，使精子穿过卵母细胞的透明带和卵膜，完成受精过程。
（三）应用体外受精技术在畜牧业和人类辅助生殖领域都有广泛的应用。
在畜牧业中，可以快速扩繁优良家畜品种；在人类辅助生殖领域，为不孕不育夫妇带来了生育的希望。
三、胚胎移植技术（一）基本原理胚胎移植是指将雌性动物体内的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。
（二）操作步骤1、供体和受体的选择供体应选择具有优良遗传性状和生产性能的个体，受体则要求具有良好的繁殖性能和健康状况。
2、同期发情处理对供体和受体进行同期发情处理，使它们的生殖生理状态同步化，为胚胎移植创造适宜的条件。
整理全部：动物胚胎工程
1.绪论动物胚胎工程就是以胚胎为研究对象，为了加速繁育经济动物，培育动物的优良品种，或挽救濒危动物使用的一系列工程技术方法，一般来说包括胚胎移植、试管动物（体外受精）、胚胎冷冻、胚胎分割、胚胎干细胞、核移植（克隆）技术等。
动物胚胎工程又称胚胎生物工程或胚胎生物技术，主要是对动物的卵子、精子和胚胎在体外条件下进行各种操作，以加速繁育经济动物，培育优良品种，或挽救濒危动物而使用的一系列工程技术方法。
生物工程包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程。
胚胎工程是细胞工程中的分支。
繁殖技术：同期发情、超数排卵、人工授精胚胎移植、体外受精、胚胎冷冻、胚胎分割、性别控制、动物克隆、发情鉴定、妊娠诊断、生殖免疫、助产技术、生殖疾病控制技术繁殖管理：从群体角度研究提高动物繁殖效率的理论与技术措施繁殖障碍及其防治：从畜牧学的角度分析动物繁殖障碍的发病率和病因，探讨防治繁殖障碍的方法与技术措施。
动物胚胎工程的研究内容：胚胎移植，胚胎分割，胚胎冷冻，体外受精，胚胎干细胞技术，转基因技术，动物克隆，性别控制，嵌合体技术胚胎移植：是指将一头良种母畜配种后的早期胚胎取出，移植到另外一头或数头同种的、生理状况相同或相似的母畜生殖道的适当部位，使之继续发育成新个体的过程。
胚胎分割技术：通过对胚胎进行显微操作，将一枚胚胎用显微手术等方法分割成二分、四分甚至八分胚，经体内或体外培养,然后移植入受体中，以得到同卵双生或同卵多生后代的技术。
其理论依据是早期胚胎的每一个卵裂球都具有独立发育成个体的全能性胚胎冷冻：胚胎的冷冻保存，是将胚胎贮存在－196℃，超低温下长期保存的方法。
胚胎的冷冻方法大体分为常规冷冻方法（慢速冷冻法）和玻璃化冷冻法两种。
胚胎干细胞技术：胚胎干细胞（embryonic stem cells，ES细胞）主要来自囊胚的内细胞团、早期胚胎的种细胞或胎儿的原始生殖细胞。
转基因技术：转基因动物就是用实验室方法将人们需要的目的基因导入动物的受精卵，使外源基因与动物本身的基因整合在一起，并随细胞的分裂而增殖，在动物体内得到表达，并能稳定地遗传给后代。
动物胚胎工程
动物胚胎工程介绍动物胚胎工程是一门综合性的学科，涉及到胚胎学、细胞生物学、遗传学、生物工程等多个学科的知识和技术。
它的目的是通过利用胚胎发育的特点和机制，对动物进行改良和调控，以达到人类所需的目的。
胚胎发育的基本过程胚胎发育是一个复杂而精细的过程，涉及到细胞分裂、细胞迁移、细胞分化等多个阶段和环节。
在动物的胚胎发育过程中，可以观察到从无形到有形、从单一到多样化的变化。
胚胎发育的基本过程可以总结为以下几个阶段：1.受精与分裂：雌性动物的卵子被雄性动物的精子受精，形成受精卵。
受精卵经过一系列的细胞分裂，逐渐分裂成多个细胞。
2.胚胎的团块形态：受精卵的细胞逐渐分裂成一个个细胞团块，形成囊胚。
3.胚胎的腔室形态：囊胚内部出现腔室，形成囊胚腔。
4.胚胎的胚层形态：囊胚的细胞分化成不同的胚层，包括外胚层、内胚层和中胚层。
5.胚胎的器官形态：胚层的细胞进一步分化成不同的组织和器官，形成完整的胚胎。
动物胚胎工程的研究方向动物胚胎工程有多个研究方向，主要包括以下几个方面：基因编辑基因编辑是指通过操作某个基因的结构或功能，改变生物体的性状或特性。
在胚胎工程中，基因编辑可以用于研究基因功能、修复遗传缺陷，或者改良动物的性状。
胚胎植入和移植胚胎移植是将一个胚胎移植到另一个动物体内，使其在新宿主体内发育成熟。
这种技术可以用于动物的繁殖和保护。
胚胎干细胞研究胚胎干细胞是胚胎发育早期的一类细胞，具有多能性和自我复制能力。
通过胚胎干细胞的培养和分化，可以研究细胞分化的机制，以及治疗细胞相关的疾病。
胚胎发育机制研究胚胎发育过程中涉及到多个分子和信号通路的调控，研究这些调控机制对于了解胚胎发育的原理和规律具有重要意义。
动物胚胎工程的应用动物胚胎工程的研究成果可以应用于以下几个方面：动物繁殖和保护通过胚胎移植和胚胎植入技术，可以实现不同物种之间的交叉繁殖和保护濒危物种。
动物品质改良通过基因编辑和选择性繁殖等技术，可以改良动物的性状和品质，提高其经济和科研价值。
实验动物胚胎工程ppt课件
3
学会感恩
感激伤害你的人，因为他磨练了你的心 态；感激绊倒你的人，因为他强化了你 的双腿；感激欺骗你的人，因为他增进 了你的智慧；感激蔑视你的人，因为他 觉醒了你的自尊；感激遗弃你的人，因 为他教会了你该独立。凡事感激，学会 感激，感激一切使你成长的人！”
4
李嘉诚儿子被绑架的故事
最高排卵数：KM小鼠：83枚/只 兔：88枚/只 金黄地鼠：72枚/只
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二、超数排卵的意义 充分利用雌性动物的繁殖潜能 在科研上可以在短时间内取得大量
各个发育阶段上实施体外操作技术。
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我国50年代首先对四大家鱼进行人工排 卵和授精；
有些专家利用外刺激的方法使未受下几个方面： 一、超数排卵（Superovulation）
二、同期发情（estrus synchronization）
三、胚胎移植（Embryo transfer） 四、胚胎培养（Embryo culture） 五、胚胎保存（Embryo preservation） 六、胚胎分割（Embryo split） 七、体外受精（In Vitro fertilization）
16
八、显微受精（Microfertilization）
九、胚胎干细胞（Embryonic stem cell） 十、细胞核移植与克隆技术（Nuclear
transplation and clone ） 十一、卵的激活与孤雌发育（Ocyte activation
and parthenogenetic development）
发上等愿，结中等缘，享下等福;择 高处立，就平处坐，向宽处行 ---左 宗棠
最喜欢青菜白饭，很少吃肉 ，创办 汕头大学
胚胎工程课件
胚胎工程课件contents •胚胎工程概述•胚胎培养技术•胚胎干细胞研究与应用•辅助生殖技术及其伦理道德问题•动物克隆技术及其应用前景•基因编辑技术在胚胎工程中应用•总结与展望目录01胚胎工程概述定义与发展历程定义胚胎工程是指通过对胚胎进行显微操作和分子水平的修饰，以获得人们所需要的具有优良性状的新个体或新物种的技术。
发展历程胚胎工程起源于20世纪初，随着生殖生物学、发育生物学和细胞生物学等学科的发展，以及显微操作技术和分子生物学技术的不断进步，胚胎工程得以迅速发展，并在畜牧业、医学、农业等领域得到广泛应用。
研究领域及意义研究领域胚胎工程的研究领域包括胚胎移植、胚胎分割、性别控制、胚胎干细胞研究、克隆动物生产等。
意义胚胎工程在畜牧业中可以提高优良种畜的繁殖效率，加快家畜品种改良；在医学领域，胚胎工程可以用于研究人类生殖和发育过程，以及治疗不孕不育等疾病；在农业领域，胚胎工程可以用于培育转基因动物生产药用蛋白等。
与遗传学关系遗传学研究生物遗传信息传递的规律及其与生物性状表现之间的关系，为胚胎工程提供基因编辑、基因诊断等方面的理论指导。
与生殖生物学关系生殖生物学是胚胎工程的理论基础，为胚胎工程提供生殖细胞培养、受精、胚胎发育等方面的理论指导。
与发育生物学关系发育生物学研究生物体从受精卵形成到发育成为成熟个体的过程及其机理，为胚胎工程提供胚胎发育调控机制等方面的理论指导。
与细胞生物学关系细胞生物学研究细胞的结构、功能及其生命活动规律，为胚胎工程提供细胞培养、细胞凋亡等方面的理论指导。
胚胎工程与其他学科关系02胚胎培养技术通过特定的培养液和处理方法，使精子获得穿透卵子透明带的能力。
精子获能处理卵子成熟培养精子与卵子结合将未成熟的卵子在体外进行成熟培养，以达到受精的条件。
在体外环境下，将处理后的精子与成熟的卵子结合，形成受精卵。
030201体外受精技术胚胎移植技术受体准备选择适合的受体，进行同期发情处理，以保证胚胎移植后与受体的生理状态相协调。
胚胎工程课件
冷冻保护剂通过渗透进入细胞，与细胞内水分结合，降低细 胞内冰点，减少细胞内冰晶形成。同时，它们还能够稳定细 胞膜和细胞器，防止冷冻过程中细胞结构的破坏。
解冻过程操作要点与注意事项
解冻操作要点
在解冻过程中，需要快速将胚胎从冷冻状态恢复到正常生理状态。一般采用快速升温的方法，将胚胎从冷冻保存 液中取出后迅速放入预热的培养液中，避免长时间暴露在空气中。
卵子成熟培养
将未成熟的卵子在体外培 养至成熟，以备受精。
精子与卵子共培养
在特定的培养条件下，将 处理后的精子与成熟的卵 子共同培养，以促进受精 过程。
胚胎培养液成分及作用
基础培养基
提供胚胎生长所需的基 本营养物质，如氨基酸 、维生素、矿物质等。
能量物质
如葡萄糖等，为胚胎发 育提供能量。
生长因子和激素
体外受精-胚胎移植（IVF-ET）
从卵巢内取出几个卵子，在实验室里让它们与男方的精子结合，形成胚胎，然后转移胚胎 到子宫内，让胚胎在妈妈的子宫内着床，发生妊娠。
卵胞浆内单精子注射（ICSI）
使用显微操作技术将精子注射到卵细胞胞浆内，使卵子受精，体外培养到早期胚胎，再放 回母体子宫内发育着床。
伦理道德问题探讨与规范建议
促进胚胎细胞增殖和分 化，如胰岛素、转铁蛋
白等。
抗氧化剂
防止胚胎培养过程中的 氧化应激反应，如谷胱
甘肽等。
胚胎发育阶段观察与评估
原核期评估
观察受精卵原核的形成和数量，判断受精是否 正常。
卵裂期评估
观察胚胎卵裂球的大小、形状和均匀度，评估 胚胎质量。
囊胚期评估
观察囊胚的形成、扩张程度和内细胞团与滋养层细胞的发育情况，预测胚胎着 床潜力。
胚胎工程课件
胚胎工程知识点总结
〖3.1 体内受精和早期胚胎发育〗胚胎工程的建立场所：睾丸的曲细精管时间：从初情期开始，到生殖机能衰退精子的发生 1）精原细胞→多个初级精母细胞（通过数次有丝分裂）过程 2）1个初级精母细胞→2个次级精母细胞→4个精子细胞（通过减数分裂，即MI和MII）3）精子细胞→精子（通过变形）场所：卵巢时间：从胎儿时期开始（胎儿时期完成了卵泡的形成和在卵巢内的储备）卵子的发生 1）卵原细胞→初级卵母细胞过程 2）1个初级卵母细胞→1个次级卵母细胞＋第一极体（排卵前后完成）3）1个次级卵母细胞→1个卵子＋第二极体（精子和卵子结合过程中完成）概念：精子和卵子结合成合子（受精卵）的过程。
受精场所：雌性的输卵管内1）受精前的准备阶段1：精子获能过程 2）受惊前的准备阶段2：卵子的准备a.精子穿越放射冠和透明带：顶体反应，透明带反应3）受精阶段 b.进入卵黄膜：卵黄膜封闭作用c.原核形成和配子结合卵裂期：细胞在透明带中进行有丝分裂早期胚胎发育桑椹胚：胚胎细胞达32个左右，每一个细胞都是细胞囊胚：有囊胚腔，出现了囊胚从透明带中伸展出来的孵化过程原肠胚：内细胞团细胞形成外胚层和内胚层，滋养层发育成胎膜和胎盘，内胚层包围着原肠腔〖3.2 体外受精和早期胚胎培养〗试管动物技术：通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精，并通过培养发育为早期胚胎后，再经移植产生后代的技术。
方法一：用促性腺激素处理，使其超数排卵，从中输卵管冲取精子（针对卵母细胞的采集实验动物，家畜猪、羊等）方法二：从屠宰母畜卵巢中采集方法三：借助超声波探测仪、内窥镜、腹腔镜等工具直接从活体母畜卵巢中吸取（针对大家畜或大型动物，如牛）体外受精卵母细胞的培养：在体外人工培养成熟精子的采集：方法有假阴道法、手握法和电刺激法等精子的获能：方法有培养法（通过获能培养液）、化学诱导法（通过肝素或钙离子载体A23187）获能溶液或专用的受精溶液受精：获能的精子＋培养成熟的卵子完成受精胚胎早期培养条件：受精卵在发育培养液中培养培养液成分：无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清等〖3.3 胚胎工程的应用及前景〗概念：是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。
胚胎工程ppt课件
03
操作流程：包括胚胎活检、单细胞遗传学分析、诊断结果判读和胚胎移植等环节。 其中，胚胎活检通常在胚胎发育的第3天或第5天进行，取一定数量的细胞进行遗 传学分析。
染色体异常筛查方法
荧光原位杂交（FISH）技术
利用特异性探针与染色体上特定区域的DNA序列杂交，通过荧光显微镜观察杂交信号，从而 判断染色体数目和结构异常。
原理
IVF-ET是指将女性卵子和男性精子在体外受精后，将受精卵培养至早期胚胎阶段， 再将其移植回女性子宫内，以达到妊娠目的的一种辅助生殖技术。
操作流程
包括超排卵、取卵、受精、胚胎培养和移植等环节，其中受精和胚胎培养是关键步 骤，需要优化培养条件和操作技术，提高胚胎质量和着床率。
卵胞浆内单精子注射技术（ICSI）
助生殖技术的提高等。
潜在风险与安全保障
探讨胚胎工程可能带来的潜在风险， 如基因编辑可能导致的遗传问题，以 及如何保障其安全性。
教育普及与伦理引导
提出加强胚胎工程相关知识的教育普 及和伦理引导，提高公众的科学素养 和道德意识。
THANKS
感谢观看
国内法律法规
各国或地区根据自身文化背景 和伦理观念制定相应的法律法 规，如中国的《人类辅助生殖
技术管理办法》。
监管机构与职责
介绍相关监管机构及其职责， 如卫生行政部门、科技部门等。
社会影响及挑战应对
社会接受程度与舆论压力 分析社会对胚胎工程的接受程度以及面
临的舆论压力。
经济发展与技术进步 分析胚胎工程对经济发展和技术进步 的影响，如生物医药产业的发展、辅
冷冻胚胎解冻后移植效果评估
解冻后胚胎存活率
评估解冻后胚胎的存活情况，包括细胞形态、细胞膜 完整性等。
实验动物胚胎工程技术ppt课件
2018/6/12
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第二节
胚胎操作基本技术
2018/6/12
7
胚胎操作的整个过程局限在胚胎的早期发育
2018/6/12
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3.超数排卵（Superovolation）技术：
通过注射激素刺激卵巢大量排卵。经超数排卵处理，动物 卵巢大量的卵泡同时成熟并排出，排卵数可增加几倍至十 几倍，一次可获得大量的卵细胞、受精卵或早期胚胎。 所用激素有促卵泡激素（FSH）、人绒毛膜促性腺激素 (HCG)和孕马血清促性腺激素（PMSG）、孕酮和前列腺素 （PG）等，以前三种常用。
正常人染色体
2018/6/12 17
具体的做法： • 先用DNA特异性染料对精 子进行活体染色，然后精 子连同少量稀释液逐个通 过激光束。探测器根据精 子的发光强度把电信号传 递给计算机，计算机指令 液滴充电使发光强度高的 液滴带正电，弱的带负电。 即X精子带上正电荷，Y精 子带上负电荷。当经过高 压电场时会向不同方向偏 转，达到分离的目的。
2018/6/12
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三、胚胎性别控制
性别控制的研究，是畜牧业生物技术中一项重要 的高新技术。这项技术的应用，可以使畜牧上大动 物的繁殖按照人们的意愿只生产同一性别动物。
在医学上，性别控制的研究也具有积极的意义。 有的遗传性疾病属于性连锁遗传，例如进行性肌营 养不良，为X连锁隐性遗传，男性发病，女性携带异 常基因但不发病。携带此致病基因的女性怀孕后如 做胚胎性别鉴定，则可避免男性患儿的出生。
2018/6/12
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胚胎工程
高中生物一对一辅导讲义课题：胚胎工程（一）动物胚胎发育的基本过程1、胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术，如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。
经过处理后获得的胚胎，还需移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。
2、动物胚胎发育的基本过程（1）受精场所是母体的输卵管上段。
（2）卵裂期：特点：细胞有丝分裂，细胞数量不断增加，但胚胎的总体体积并不增加，或略有减小。
（3）桑椹胚：特点：胚胎细胞数目达到32个左右时，胚胎形成致密的细胞团，形似桑椹。
是全能细胞。
（4）囊胚：特点：细胞开始出现分化（该时期细胞的全能性仍比较高）。
聚集在胚胎一端个体较大的细胞称为内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织。
中间的空腔称为囊胚腔。
（5）原肠胚：特点：有了三胚层的分化，具有囊胚腔和原肠腔。
（二）胚胎干细胞1、哺乳动物的胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或从原始性腺中分离出来。
2、具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为体积小，细胞核大，核仁明显；在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。
另外，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。
3、胚胎干细胞的主要用途是：①可用于研究哺乳动物个体发生和发育规律；②是在体外条件下研究细胞分化的理想材料，在培养液中加入分化诱导因子，如牛黄酸等化学物质时，就可以诱导ES细胞向不同类型的组织细胞分化，这为揭示细胞分化和细胞凋亡的机理提供了有效的手段；③可以用于治疗人类的某些顽疾，如帕金森综合症、少年糖尿病等；④利用可以被诱导分化形成新的组织细胞的特性，移植ES细胞可使坏死或退化的部位得以修复并恢复正常功能；⑤随着组织工程技术的发展，通过ES细胞体外诱导分化，定向培育出人造组织器官，用于器官移植，解决供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题。
（三）胚胎工程的应用1.体外受精和胚胎的早期培养(1)卵母细胞的采集和培养：主要方法：第一种方法：用促性腺激素处理，使其排出更多的卵子，然后，从输卵管中冲取卵子，直接与获能的精子在体外受精。
动物胚胎工程
动物胚胎工程动物胚胎工程是一门研究如何利用细胞和胚胎的特性来改变或改良动物基因组的科学技术。
这一领域的研究对于探究生命的本质、发展新的治疗方法以及保护濒危物种都具有重要意义。
本文将从动物胚胎工程的基本原理、应用领域以及伦理问题等方面进行探讨。
动物胚胎工程的基本原理是利用细胞的分裂和分化特性，通过操纵胚胎发育过程中的细胞命运来实现对动物基因组的改变。
这一过程通常包括以下几个步骤：获取动物胚胎、细胞培养与扩增、基因编辑和胚胎移植。
在获取动物胚胎时，可以通过人工控制动物的交配来获得受精卵或早期胚胎。
细胞培养与扩增是将胚胎中的细胞进行分离培养，并通过特定的培养条件使其增殖。
基因编辑是通过基因工程技术来改变细胞或胚胎中的基因组，如基因敲除、基因修饰等。
胚胎移植是将编辑好的细胞或胚胎重新植入母体，使其继续发育成为具有特定基因组的个体。
动物胚胎工程在许多领域都有广泛的应用。
一方面，它为基因研究提供了有力工具。
通过编辑动物胚胎中的基因，科学家们可以研究特定基因的功能以及与其相关的生理和病理过程。
另一方面，动物胚胎工程也被应用于疾病治疗和生物医学研究。
通过编辑动物胚胎中的基因，科学家们可以模拟人类疾病，并研究和开发新的治疗方法。
此外，动物胚胎工程还可以用于保护濒危物种。
通过编辑动物胚胎中的基因，科学家们可以提高濒危物种的繁殖率和存活能力，从而有效地保护这些濒危物种。
然而，动物胚胎工程也引发了一系列的伦理问题。
首先，动物胚胎工程涉及到对动物生命的操纵和改变，是否符合伦理道德仍然是一个争议点。
其次，动物胚胎工程可能会导致一些意想不到的结果，如基因编辑不准确引起的不良后果等。
此外，动物胚胎工程还涉及到动物实验的伦理问题，如是否必要、如何保证动物福利等。
动物胚胎工程作为一门研究动物基因组的重要科学技术，具有广泛的应用前景。
通过对动物胚胎的操控和改变，可以研究基因功能、开发新的治疗方法以及保护濒危物种。
然而，动物胚胎工程也引发了一系列的伦理问题，需要与科学和社会伦理相结合，加强规范和管理。
胚胎工程
市场
胚胎移植技术
概念:将良种母畜配种后，从其生殖道取出 受精卵或早期胚胎, 移植到的生理状态相 同的同种母畜体内,使之发育为新个体的技 术. （借腹怀胎）
供体：提供胚胎的个体(包括良种的母畜和 公畜）。 良种雌性动物。
受体：接受胚胎的个体。
一般品种的雌性动物。
胚胎来源：
1、雌性动物体内早期胚胎 2、通过体外受精和早期胚胎的培养得到 3、通过哺乳动物体细胞核移植及培养而得到
操作对象：主要是生殖细胞、受精卵、早期胚胎细胞 理论基础：胚胎发育学
体外受精技术
1、概念：是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制 的环境中完成受精过程的技术。
2、基本原理：人工模拟体内 环境（包括营养、温度、PH 等），使初级卵母细胞成熟， 同时使精子获能，最终完成 受精作用，并有计划地保存 胚胎
借助超声波探测仪、内窥 镜或腹腔镜等工具， 接从活体动物的卵巢中吸 取卵母细胞 （屠宰场）
体外受精
在获能 溶液或专用 的受精溶液 中完成受精 过程
➢ 胚胎虽然与受体有生理和组织上的联系,但其遗传 特性不受受体的影响。
.
.
胚
选择 供体母牛
受体母牛
胎
……同期发情处理……(性激素)
移
植
超数排卵（促性腺激素）
的
供体公牛 配种
基 本（人工方法取出早期胚胎）冲卵
胚胎移植
程
质量检查、培养
妊娠检查
序
分娩（胚胎移植的犊牛）
胚胎移植的生理学基础
1)供体和受体相同的生理环境 2)早期胚胎（桑葚胚或囊胚）处于游离状态,为胚胎的
2精子的采集和获能 采集：假阴道法、手握法、电刺激法 获能：培养法、化学诱导法
动物胚胎工程技术
动物胚胎工程技术动物胚胎工程技术这事儿啊，可有点意思。
一、适用范围这技术适用的范围可广了去了。
像那些畜牧业的养殖场，想要培育优良品种的家畜，就可以用到动物胚胎工程技术。
比如说牛啊、羊啊这些常见的家畜。
还有在科研领域呢，研究动物的发育、遗传啥的，这技术也是个得力助手。
就好比你想知道一个种子是怎么长成大树的，这胚胎工程技术就是研究动物从胚胎到出生这个过程的“放大镜”，让咱们能看得更清楚。
二、引用标准在制定动物胚胎工程技术相关的规程时，那可是有根有据的。
比如说国家标准里关于动物实验的一些基本要求啊，像动物的福利标准，不能让动物在实验过程中受到不必要的痛苦，这就像我们做人得有道德底线一样。
还有行业内的一些标准，例如在胚胎移植操作中的无菌标准，这就如同我们吃饭得讲卫生，不干净的东西吃进肚子里准得生病，不按这个无菌标准操作，胚胎也容易出问题。
三、术语和定义咱先说这个“胚胎移植”吧，简单理解呢，就像是搬家。
把胚胎从一个“房子”（供体母畜）搬到另一个“房子”（受体母畜），不过这个搬家可讲究了，得小心翼翼的，就像搬易碎的瓷器一样。
再说说“胚胎分割”，这就好比把一个大蛋糕切成几块，不过这可不是随便切的，每一块都得保证能正常发育成长，就像每一块蛋糕都得是完整美味的才行。
四、职责分工这里面涉及到不少“角色”呢。
科研人员那肯定是主力军啦，他们得掌握专业的知识和技术，就像厨师得精通厨艺一样，负责整个胚胎工程技术的操作流程，从胚胎的采集、处理到最后的移植，每一步都得精心操作。
还有养殖场的工作人员啊，他们得照顾好供体和受体的母畜，这就像照顾自己的孩子一样细心，得保证母畜吃得好、住得舒服，这样胚胎才能健康发育。
另外，质量监管人员也不能少，他们得像裁判一样，严格监督整个过程，看看是不是符合标准。
五、具体流程步骤先从胚胎的采集说起吧。
这就像采果子一样，得找准时机。
对于家畜来说，要在母畜发情后的特定时间段采集胚胎，这个时候的胚胎就像成熟刚好的果子，质量最好。
胚胎工程
哺乳动物胚胎工程讲义绪论一、胚胎工程的概念：应用细胞学、分子生物学、遗传学技术等对动物的生殖和发育进行人为干预，使胚胎按着预先设想的方向发育为个体的一门新兴生物工程技术。
胚胎工程主要是对哺乳动物的胚胎进行某种人为的工程技术操作，然后让它继续发育，获得人们所需要的成体动物的新技术。
实际上是动物细胞工程的拓展与延伸。
二、胚胎工程技术研究内容与意义：胚胎生物工程技术是用人工方法对动物卵母细胞或胚胎进行改造的技术。
包含胚胎移植、体外受精、胚胎性别控制、胚胎分割、胚胎冷冻、胚胎嵌合等内容。
目前, 胚胎工程已在遗传学、医学、发育生物学、动物育种学上得到广泛应用。
三、胚胎工程技术的介绍• 1. 胚胎移植技术（embryo transfer，ET）将良种母畜配种后的早期胚胎取出，移植到具同种生理状态的畜体内，使之继续发育成新个体，所以也成“借腹怀胎”。
即一头母畜（称为“供体”）发情排卵，配种，在一定时间内从其生殖道（输卵管或子宫角）取出受精卵或胚胎，移植到另外一头与供体同时发情排卵、但未经配种的母畜（称为“受体”）的相应部位（输卵管或子宫角）。
这个来自供体的胚胎能够在受体的子宫着床，并继续生长和发育，最后产下供体的后代。
• 2 .体外受精技术（in vitro fertilization,IVF）人为操作使成熟的卵子与精子在合适的体外环境中完成受精过程。
体外受精是以正常体内受精的研究为基础的，尽可能给精—卵提供一个适宜的共培养体系是研究体外受精的目的。
目前受精成功的标志至少是看受精卵是否可发育至囊胚期阶段。
• 3. 胚胎冷冻技术为便于长途运输和随时供移植使用，将那些６～７日龄已有２０～３０个细胞的新鲜活胚胎（或分割后的半胚胎、１／４胎）在－１９６℃的超低温下冷冻贮存。
这是在冷冻精子的技术基础上进一步发展起来的一项新技术。
目前用冷冻胚胎移植的成功率约为鲜胚胎的７０％～８０％。
• 4. 胚胎分割技术为成倍甚至成数倍地提高优良胚胎移植后所得到的成体数，用显微外科的手术方法将一个胚胎分割为２个或多个，制造同卵多仔。
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酶消化透明带显微玻璃针分割法
酶－机械去带分割法
徒手刀片分割法
（1）显微针分割法
该法适用于卵裂球阶段的胚胎。操作时在显微操 作仪下将胚胎固定，用玻璃针在透明带上作一切 口，将卵裂球从透明带中移出，并吹吸卵裂球使 之离散，将其装入2个预先准备好的空透明带内 ，进行移植。该方法具有较高的同卵双生率，但 操作程序复杂。
分化的细胞。若注入的细胞并入内细胞团并参与胚体的形成，
那么就形成了嵌合体。 注射时，选取健康、生长良好的细胞。如果是培养细胞，应该 保证其整二倍体性。将10－12个细胞吸入到注射吸管的顶端。 用固定吸管吸住内细胞团与滋胚层交界处，让内细胞团位于囊 胚的底部位置。调整注射吸管与固定吸管使处于同一焦点平面 ，选择滋胚层细胞间的“间隙处”，将注射吸管插入囊胚腔。
孕马血清促性腺激素（PMSG）
人绒毛膜促性腺激素（HCG）
FSH和LH， PMSG和HCG配合使用，效果较好
2、超数排卵的意义
充分利用雌性动物的繁殖潜能。 在科研上可以在短时间内取得大量的卵和胚胎。
在生产中，可以提高优秀动物的繁殖数量，提高产
量，增加经济效益。
二、胚胎培养
胚胎培养就是在体外仿造类似于体内条 件的环境，使胚胎在体外得到与在体内一样
。如不加抗冷冻剂，细胞也会受到损害，这是冷冻
的化学损伤。
防止冷冻损伤
在冷冻液中，可以加入冷冻保护剂，如DMSO、丙二
醇、乙二醇、丙三醇、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮等。
冷冻保护剂的加入，可保护细胞抵抗低温对细胞产 生的损害。在胚胎冷冻过程中，还需要在稍低于溶 液冰点时，强行致冷，防止溶液过冷现象的发生， 这种促使溶液结冰的方法称为诱发结晶或植冰（ seeding）。一般，在－3℃ - ―7℃之间诱发结晶 。 现在，人们已经使用玻璃化法冷冻胚胎获得成功 ，在冷冻保存液中加入高浓度的冷冻保护剂，使溶 液粘性增强，当处于超低温时，形成玻璃样液体。
胚胎垂直位于另一胚胎之上，借机械压力和PHA的作
用，更易聚合。若放到37℃时，效果更佳，聚合完 毕后，洗除PHA，继续培养，或进行胚胎移植。
第二种：是利用卵裂球或细胞与胚胎聚合，将胚胎卵
裂球解离或用其他游离的细胞，与胚胎聚合。当用一
个已经除去透明带的胚胎时，将卵裂球或细胞在胚胎 的正上方慢慢释放，使两者直接接触，借助PHA的作用
将细胞推入囊胚腔，使之落到内细胞团之上。操作后的囊胚形
态不规则，经短期培养后，可以恢复正常状态。
制作过程
小鼠嵌合体的制 作过程
胚胎嵌合的意义
应用于发育生物学、免役学和医学动物模型的研究领 域：研究分析哺乳动物发生机制的重要手段，例如研 究卵裂球分化潜力、分化机制及胚胎细胞基因表达的 机制等； 生理功能分析的应用，例如对免疫功能、遗传病的研
近20多年来，世界上许多实验室均做了大量工作，
发展迅速。
（一）培养方法
微滴培养法和输卵管培养法
微滴培养法是利用塑料平皿制成50μl培养液小滴数 个，每滴加入一定数量胚胎，在上面覆以灭菌且平 衡好的液体石蜡。或先将液体石蜡倒入平皿中，用 注射器吸培养液和胚胎，垂直伸到平皿底部制成小
滴。然后将培养皿放到5％CO2、95％空气饱和湿
1、不同时期胚胎的体外发育潜能
受精卵和早期胚胎较难培养。
例如，从猪输卵管中收集的受精卵，90%能发育到2
细胞期，但很难超过4细胞期，可是从子宫中收集到
的6-8细胞期胚胎，却有90%的可发育到桑葚胚或囊
胚。 又如，牛受精卵6%可培养到8-12细胞期；2细胞期胚 胎，则有26%可发育到8-12细胞期，8细胞期胚胎则 有51%可发育到桑葚胚。
第九章 实验动物的 胚胎工程
胚胎工程（embryo engineering ）是指利用 人工方法影响、改变动物胚胎品质发育和进 程的一种生物技术。 基本内容包括：超数排卵、胚胎培养、胚胎 保存、胚胎移植、胚胎分割、性别鉴定、胚 胎嵌合、细胞核移植、体外受精、基因导入 以及胚胎干细胞等。
第一节 实验动物胚胎工程的基本内容
冻保存进行了大量的研究。
超低温冷冻保存方法
1、慢速冷冻、慢速解冻法是最早建立起来的哺乳动物 胚胎冷冻方法。 室温开始以1℃/分钟的速度降低到－7℃，平衡5分钟 ，诱发结晶，平衡5~10分钟，再以0.1~0.3℃ /分钟的 速度降到－80℃以下，投入液氮长期保存。
解冻时，须慢速升温，以每分钟上升8℃的速度进行
过程
胚胎分割
（2）显微刀分割法
该法适用于对桑葚胚和早期囊胚进行分割。在显微 操作仪下固定胚胎，用特制显微刀片将胚胎均匀一 分为二，分别装入空透明带中，进行移植。
究分析；分析胎儿和母体的相互关系。
胚胎嵌合的意义
畜牧业生产中的应用：培育杂种个体，甚至是种间杂 种；通过制作各种组合的嵌合体，培育具有特殊皮毛 特性的新品种，提高毛皮的经济价值。 培育含有人类细胞的动物，为人类器官异种移植提供 材料来源。
五、胚胎分割
同卵双生
五、胚胎分割
概念：胚胎分割（embryo splitting）即是将一枚胚
使之聚合。当用两个无透明带胚胎时，以类似“三明
治”的方式，把细胞放到两个胚胎之间，使之聚合。 第三种：利用两种细胞间聚合。聚合时，各取数个细 胞或卵裂球，放入空透明带内，用PHA使之聚合在一起 ，并用琼脂包埋。通过中间受体培养一段时间后，观 察其发育的情况。
2、囊胚注射法
囊胚注射法是把某些种类细胞注射入囊胚的囊胚腔中，注射的 细胞可以是卵裂球、内细胞团细胞、胚胎干细胞，甚至是已经
一、超数排卵
超数排卵（superovulation）：经外源激素处理的雌 性动物，可以改变性周期，可以超常数的排卵，甚至
可以超常数十几倍。
最高排卵量：KM小鼠，83枚/只 兔，88枚/只 金黄地鼠，72枚/只
1、超数排卵方法
通常采用激素进行超数排卵，常用的激素： 促卵泡激素（FSH） 促黄体激素（LH）
（三）胚胎培养的应用
1、未成熟卵通过体外培养，使卵子成熟后，进行体外受精。 2、受精卵经培养成为卵裂球后，可以提供胚胎移植或冷冻保存。 3、冷冻胚胎解冻后，经过培养，然后再提供胚胎移植，可以提高 移植成活率。 4、通过胚胎培养实践，不断完善胚胎培养条件，逐步地揭示胚胎 细胞的新陈代谢、发育生长等生命活动中更深刻的奥秘。 5、导入外源基因的受精卵培养到卵裂球后再实施移植，可提高成 功率。
这在哺乳动物胎全体外培养的道路上前进了一大
步。
三、胚胎保存
保存的方法可以分为非冷冻保存和冷冻保存。
非冷冻保存是1948年，由M.C.Chang 等开创的，他们
将兔2细胞胚胎，在同种血清中37℃保存48小时，移
植后产仔。 非冷冻保存主要有三种方法，即异种动物体内保存法 、卵和胚胎的37℃保存法和冷藏保存法
解冻。 其优点是脱水完全，细胞内不易形成冰，但比较费时 ，冷冻保护剂对胚胎作用时间长。
2、快速冷冻、快速解冻法 是指把胚胎慢速降温到－30――35℃，投入液氮。 两步法、三步法、玻璃化冷冻法等。
解冻可以在30-37℃水浴中进行，20 s。
该方法能较好地克服胚胎脱水少，细胞内冰晶形成 之间的矛盾，获得较高的存活率。解冻后，用蔗糖 洗脱。
织培养液、M12培养液、M16培养液等。
培养液组成成分对早期胚胎发育至关重要， 不同动物种类以及不同发育时期的胚胎对培
养液组成成分的要求不同。
发育阻断
阶段性的胚胎培养液
3、一定的气相条件
早期胚胎的培养液需配合一定的气相条件。 一般用含5%CO2的空气或含5%O2和90%N2的混 合气体调节PH值。 胚胎对培养液酸度变化很敏感，PH值超出 7.2-7.4的范围，会引起胚胎死亡。
冷冻过程中细胞受到的损害
在冷冻过程中，细胞会受到两方面的损害。
快速冷冻时，细胞内形成的冰晶，对细胞膜和内部
结构产生机械性损害，这是指冷冻的物理损伤。 当缓慢降温时，细胞内的水，有足够的时间完全渗 到外面，从冰点缓慢降到细胞完全脱水，往往需要 几个小时或更长时间，细胞一直处于高浓度溶质中
的正常发育，这是胚胎工程研究与应用中非
常重要的步骤。
早在1913年Brachet就尝试对兔囊胚进行体外培养
实验，可是由于对各种动物胚胎所需的体外培养液 配方不清楚，致使这方面的工作在20世纪上半世纪 发展缓慢。 1957年，美国学者Whitten找到了能使小鼠早期胚 胎在体外生长发育的培养液配方，从而为哺乳动物 体外胚胎培养打开了一条通路。
超低温长期冻存胚胎意义
胚胎冷冻技术可以保护珍稀和濒临灭绝的动物, 可以
使利用价值高的品种免于遭受自然灾害、遗传漂变
、传染病等潜在的威胁。 能够使优秀品种品系的种质长期保存下来，并且可
随时复苏、繁殖。
在遗传理论指导下，可改良品种和培育新品种及品 系。 可方便及时地与世界各地交流，推动生命科学蓬勃 发展。
注意
进行体外培养的哺乳动物胚胎，一般只是着 床前的早期胚胎。 胚胎着床后，同母体建立了密切的物质交换 关系，对营养条件的需求更加复杂，因此对 着床后时期的胚胎体外培养更加困难。
自从开展体外培养胚胎技术研究以来，最为成功的
有大鼠、小鼠和兔的胚胎培养。 小鼠胚胎培养时间最长的是Y.O.Hsu和L.T.Chen（ 1983）把受精后3.5天的鼠胚培养到相当于在子宫内 正常发育的第10天胚胎。胚胎发育经过了原肠胚、 神经胚、体节期等阶段，培养到第10天时发育出了 肢芽、眼泡以及肺、肝、胰等器官。
度的37.5℃CO2培养箱中培养所需要的时间。如果 更换培养液，应在实体显微镜下，用注射器或口控 微吸管将培养液吸出，并加入新培养液，继续培养。
输卵管培养法取发情动物的输卵管洗涤后， 置于培养皿中，培养液面超过输卵管，将同 种或异种动物的胚胎自伞口注入输卵管，进