开题报告3 PPT课件

褪黑激素在体内含量极小，以pg(1×10-12 g)水平存 在。近年来，国内外对褪黑激素的生物学功能，尤其 是作为膳食补充剂的保健功能进行了广泛的研究，表 明其具有促进睡眠、调节时差、抗衰老、调节免疫、 抗肿瘤等多项生理功能。
目前国外MLT在儿科领域已经进入临床试验阶段，而 国内MLT仍仅作为改善中老年人睡眠的保健品。现己 公认，褪黑素水平下降是阿尔茨海默病 (Alzheime:DISease，AD)的一个重要原因。
褪黑激素(Melatonin)主要是由哺乳动物和人类的松果 体产生的一种胺类激素。褪黑激素的分子式为 C13N2H16O2，分子量232.27，熔点116℃～118℃， 化学名称为N-乙酰基-5-甲氧基色胺(N-acetyl-5methoxytryptamine)。
褪黑素(melatonin，MLT)是松果体合成分泌的一种叼} 垛类激素，它除了具有镇静、抑制性腺、调整生物钟 外，还有强大的清除氧自由基、抗氧化作用，以及保 护DNA、膜脂质、线粒体免受氧化损伤和维持神经胶 质细胞功能。
显微镜检查:
HIBD后48小时脑组织切片行HE染色后，400倍光镜 下，在损伤侧海马部位可见较多神经元细胞坏死，呈 细胞肿胀，胞核、胞膜降解、破坏，细胞边界不清， 胞浆嗜酸性变，而假手术组及非结扎侧脑组织切片上 基本未见损伤
3、血浆MLT水平的检测
(1)将血浆标本、I-125抗血清，沉淀剂，标准品A一F， 质控1与2，分析缓冲液，辅酶，辅酶缓冲液室温平衡 15分钟并混匀，其中辅酶用3ml辅酶缓冲液复溶30秒， 标准品A瓶用2ml蒸馏水复溶，标准品B一F瓶各用lml 蒸馏水复溶。鼠缺氧缺血性脑损伤对松果体合成褪黑 素功能的影响材料和方法
开题报告
研究背景
脑缺氧对脑组织的损伤表现在细胞功能的异常，比如 细胞的分泌导致多方面异常，而分泌又会对相应身体 机制有影响，比如，生物钟。
脑中生物钟的代表物质是褪黑素。
Lerner(1960)首次在松果体中分离出一种激素，由于 这种激素能够使一种产生黑色素(melanin)的细胞发亮， 故取其字首Mela；同时由于它从5-羟色胺(serotonin) 衍生而来，故取其后缀tonin，因此，这种松果体激素 取名为Melatonin(褪黑激素)。
HIBD模型制成后48小时将动物断头处死，剪开颅骨 后把整个脑组织固定于10%的中性福尔马林缓冲液中， 固定充分后取海马水平约2一3mm厚组织块常规脱水， 透明，浸蜡，石蜡包埋后切片，切片厚度4微米，加 热脱蜡后用95%乙醇洗两次，蒸馏水冲洗，苏木精染 蓝，盐酸酒精分化，氨水返蓝，蒸馏水冲洗，伊红复 染，蒸馏水冲洗后烤干，封片。
术后将手术鼠放入自制的37℃恒温水浴箱中的密闭缺 氧箱内,向缺氧箱内通入含8% 氧气和92% 氮气的混合 气体，120 分钟后返回母鼠身边继续哺乳喂养。假手 术组术中分离颈前肌群至气管后不结扎左颈总动脉， 直接缝合切口并不作缺氧处理。
注意麻醉时间勿太长，术中操作应精细，尽量减少出 血及剌激周围组织，术后要擦干新生鼠身上的血痕， 以防止母鼠因气味陌生而拒绝哺乳。
假手术组仅分离出左颈总动脉，置线后不予结扎，缝 合皮肤。
60只新生大鼠随机分成10组，每组6只，实验组
T1:HIBD后0小时，TZ:HIBD后6小时，T3:HIBo后12 小时，T4:HIBD后24小时，T5:HIBo后48小时;对应假 手术组:S!，S2，S3，S4，S5。
2、HE染色:
研究意义
通过本次实验，我们小组准备进一步观察新生大鼠缺 氧缺血性脑损伤(HIBD)后外周血中MLT水平的变化， 探讨松果体功能改变在HIBD中的意义，期望为MLT用 于临床治疗新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)以及基因治疗 HIE奠定基础。
研究目的
缺氧对脑组织生化异常变化之褪黑素分泌作用，通过 研究缺氧致使小鼠褪黑素变化，说明褪黑素从合成上 的改变，并为褪黑素应用于治疗HIE提供理论依据的 基础。
研究内容
通过建立大鼠HIBD模型，测量脑组织外周血中MLT水 平的变化
实验动物： 采用无特定病原体(specifiepathogenFree，sPF)级7
日龄远交群（sprague一Dawley，SD）大鼠，雌雄 不分，体重11一149
研究方法和手段
1、新生SD大鼠的分组及缺氧缺血模型建立
7d 新生SD 大鼠8 窝,每窝选取6～9 只，按1∶1 随机 分为HIBD组、假手术组。将新生鼠置于加盖的烧杯内 注入适量的乙醚，2～3 分钟麻醉成功。
将新生鼠颈部常规消毒,颈正中作一长约0.7cm切口。 对HIBD组，切开皮肤后用血管钳分离颈前肌群至气管, 再用眼科镊分离气管左侧暴露颈动脉三角,可见搏动的 颈动脉且有静脉及迷走神经伴行,分离出颈总动脉后用 6-0号无创缝合线双重结扎左颈总动脉,检查断流成功 后缝合切口。
芳香烷基胺一N一乙酞基转移酶
(arylalkylamine一N-aeetyltransferase， AANAT)、
经基11引睬一O一甲基转移酶
(hydroxyindole一O-methyltransferase， HIOMT)
是其合成的最后两个酶，其中AANAT是限速酶。
随着人们对松果体研究的深入，松果体在疾病中的作 用越来越被人们所重视。近来国内有学者注意到成年 人或鼠脑损伤后松果体功能存在变化，但研究结果却 大相径庭，人们分别观察到缺血性脑血管病及老年颅 脑损伤患者血清褪黑素水平降低或升高，然而就其原 因作者们均未作深刻探讨。
(2)将50μl标准品A加入NSB管中。
缺氧（hypoxia ）是指因组织的氧百度文库供应不足或用氧 障碍，而导致组织的代谢、功能和形态结构发生异常 变化的病理过程。缺氧是临床各种疾病中极常见的一 类病理过程，脑、心脏等生命重要器官缺氧也是导致 机体死亡的重要原因。另外，由于动脉血氧含量明显 降低导致组织供氧不足，又称为低氧血症 (hypoxemia ）。