鸡血细胞的体外融合(精选)
实验十 PEG法诱导鸡血细胞融合
（7）詹纳绿染液。
四、方法与步骤
（一）鸡血细胞的体外融合
1.鸡血细胞的获得 用肝素溶液润洗注射器，从家鸡的翼根静脉用注射器采血，
注入试管后，速加入肝素（100U肝素/5ml全血）混合，制 成抗凝全血。 2.鸡血细胞储备液的制备 在抗凝全血的试管中，加入4倍体积的0.85%NaCl溶液，制 成红细胞储备液，置于4℃冰箱内可供一周内使用。
• 影响原生质体融合的因素。 （1）首先是酶解条件： 渗透压稳定剂 Ca2+ 、Mg2+、蔗糖 可保持原生质体稳定利于再生；随着酶解时间的增加原生 质体的释放量增大；酶解浓度到达一定浓度后，原生质体 的再生率下降；再就是酶解温度。 （2）原生质体的脱壁是否完全会影响融合效果。有的原生质 体会很快再生细胞壁，因此在洗去酶液后，应立即进行融合 处理。 （3）原生质体的悬浮状况也会影响融合，如果两亲本原生质 体密度相差较大，就难以混和均匀，接触机会减少，这时应 用离心方法强迫它们密集
实验 十 PEG法诱导鸡血细胞融合
College of Life Science and Technology, XINJIANG Univercity
一、实验目的
了解聚乙二醇（PEG）诱导体外细胞融合 的基本原理。
通过PEG诱导鸡血细胞之间的融合实验， 初步掌握细胞融合的基本方法。
二、实验原理
荧光标记的细胞融合
三．实验仪器、材料和试剂
仪器、用具：注射器、刻度离心管、离心 机、血细胞记数板、水浴锅、滴管、显微 镜、烧杯、容量瓶、凹面载玻片、盖玻片、 酒精灯等。
材料：成年家鸡。
■ 试剂
（1）0.85%NaCl溶液:
鸡血细胞融合实验报告
鸡血细胞融合实验报告鸡血细胞融合实验报告引言细胞融合是一种重要的实验技术，通过将两种或多种细胞融合在一起，可以研究细胞间的相互作用、基因表达调控以及细胞发育等方面的问题。
在本次实验中，我们选择了鸡血细胞作为研究对象，通过融合不同类型的鸡血细胞，探究其对细胞功能和特性的影响。
实验材料与方法1. 实验材料：- 鸡血细胞样本：从鸡体内提取鲜血样本，分离出鸡血细胞。
- 细胞培养基：含有适宜的营养物质和生长因子，维持细胞生长和分裂。
- 细胞培养器具：培养皿、离心管、移液器等。
2. 实验方法：- 细胞培养与扩增：将鸡血细胞接种于含有细胞培养基的培养皿中，放置于恒温培养箱中，控制适宜的温度和湿度，使细胞能够正常生长和分裂。
- 细胞融合：选取两种不同类型的鸡血细胞，分别标记为A和B。
将细胞A和细胞B分别收集，离心沉淀后，用细胞培养基将其悬浮于一起。
利用电融合或化学融合等方法，使细胞A和细胞B融合为一个细胞群体。
- 细胞观察与分析：观察融合后细胞的形态变化、生长速率、基因表达等特性，并与原始细胞进行对比分析。
实验结果与讨论通过实验观察和数据分析，我们得到了以下结果和结论：1. 细胞融合后形态变化融合前的细胞A和细胞B在形态上存在明显的差异。
然而，经过细胞融合后，新形成的细胞群体呈现出一种中间状态，既保留了细胞A和细胞B的一些特征，又具有自身的特点。
这表明细胞融合可以导致细胞形态的重塑和变异。
2. 细胞融合后生长速率我们观察到，在细胞融合后的细胞群体中，生长速率明显高于单独培养的细胞A和细胞B。
这可能是由于融合后细胞的互补性增强，使得细胞能够更有效地利用培养基中的营养物质和生长因子。
3. 细胞融合后基因表达通过实时荧光定量PCR等技术，我们检测了融合后细胞中一些关键基因的表达水平。
结果显示，融合后细胞的基因表达模式发生了明显的变化，一些基因的表达水平显著上调或下调。
这表明细胞融合可以影响基因的转录水平，从而影响细胞的功能和特性。
鸡血细胞融合实验报告
鸡血细胞融合实验报告鸡血细胞融合实验报告引言：细胞融合是生物学领域中的一个重要研究课题，通过将两种或多种细胞融合在一起，可以产生新的细胞，从而探索细胞的特性和功能。
本实验旨在通过将鸡血细胞进行融合，观察融合细胞的形态特征和生理功能，以期对细胞融合的机制和应用进行深入研究。
材料与方法：1. 实验动物：选取健康成年鸡作为实验对象。
2. 细胞培养：从鸡体内提取血液样本，分离出鸡血细胞，并进行细胞培养。
3. 细胞融合：选择适当的融合剂，将两种不同来源的鸡血细胞进行融合。
4. 观察与记录：通过显微镜观察融合细胞的形态特征，记录细胞的大小、形状、颜色等信息。
结果与讨论：通过实验观察，我们发现融合细胞在形态上与原始细胞有所不同。
融合细胞的大小较原始细胞更大，形状也更加不规则，颜色也呈现出混合的特征。
这表明细胞融合可能导致细胞的形态改变，从而影响其生理功能。
为了进一步验证融合细胞是否具有新的生理功能，我们进行了一系列实验。
首先，我们检测了融合细胞的代谢活性。
结果显示，融合细胞的代谢活性明显增强，相比于原始细胞，其能够更快地吸收营养物质并释放代谢产物。
这表明细胞融合可能导致代谢途径的改变，从而增强细胞的生理功能。
接下来，我们对融合细胞进行了增殖实验。
结果显示，融合细胞的增殖速度明显加快，相比于原始细胞，其能够更快地分裂并形成新的细胞。
这表明细胞融合可能导致细胞增殖机制的改变，从而增强细胞的生长能力。
此外，我们还对融合细胞进行了细胞凋亡实验。
结果显示，融合细胞的凋亡率明显降低，相比于原始细胞，其更容易存活并继续进行细胞分裂。
这表明细胞融合可能导致细胞凋亡途径的改变，从而增强细胞的生存能力。
综上所述，通过鸡血细胞融合实验，我们发现融合细胞在形态特征和生理功能上与原始细胞有所不同。
细胞融合可能导致细胞形态的改变、代谢活性的增强、增殖速度的加快以及凋亡率的降低。
这些发现为细胞融合的机制和应用提供了新的线索，有望在组织工程、再生医学等领域发挥重要作用。
实验一：鸡血细胞融合
实验一：鸡血细胞融合一、实验目的1、熟悉细胞融合的理论；2、掌握PEG诱导的细胞融合方法。
二、实验原理1、细胞融合原理两个以上的细胞合并成为一个双核或多核细胞称为融合细胞。
在通常情况下，两个细胞接触并不发生融合现象，因为各自存在完整的细胞膜，在特殊融合诱导物的作用下，两个细胞膜发生一定的变化，就可促进两个或多个细胞聚集，相接触的细胞膜之间融合，继之细胞质融合，形成一个大的融合细胞。
利用PEG介导的动物细胞融合，其实验原理到目前为止还没有完全定论。
学者们一般认为，PEG改变各类细胞的膜结构，使两细胞相互接触部位的膜脂双层中磷脂分子发生疏散、进而使其结构发生重排，再加上膜脂双层的相互亲合以及彼此间表面张力的作用，引起相临的重排质膜在修复时相互合并在一起,使两细胞的胞质沟通,从而造成相互接触的细胞之间发生融合。
细胞与组织不同，不排斥异类、异种细胞。
不仅能产生同种细胞融合、种间细胞融合，而且也能诱导动植物细胞间产生融合。
细胞融合(Cell fusion)，即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。
人工诱导的细胞融合不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合。
2、细胞融合方法诱导细胞融合的主要方法有：病毒诱导融合，化学融合剂诱导融合和电融合。
1. 病毒诱导融合：有许多种类的病毒能介导细胞融合，最常用的是灭活的仙台病毒（HVJ），为RNA病毒。
病毒诱导细胞融合的过程有：首先是细胞表面吸附许多病毒粒子，接着细胞发生凝集，几分钟至几十分钟后，病毒粒子从细胞表面消失，而就在这个部位邻接的细胞的细胞膜融合，胞浆相互交流，最后形成融合细胞。
2. 化学融合剂诱导融合：化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物、脂质体、钙离子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白质和多肽，其中最常用的是聚已二醇（PEG）。
PEG用于细胞融合至少有两方面的作用：①可促使细胞凝结；②破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个打的双核或多核融合细胞。
细胞生物学实验报告-鸡红细胞的融合
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四、实验步骤
（1）鸡血与Alsever溶液按1:4混匀，4℃冰箱中 保存
（2）取1ml细胞悬液，加Alsever溶液稀释20~25 倍
（3）取上稀释悬液1ml，加5ml0.85%生理盐水混 匀
（4）1000rpm离心上述溶液5min，去上清液， 重复操作3次
4混匀4冰箱中保存2取1ml细胞悬液加alsever溶液稀释2025wwwthemegallerycom20211241000rpm离心上述溶液5min去上清液重复操作3次5第三次离心去上清液后加gkn05ml制成10悬液放在37水浴箱预热23min6逐滴025ml的50的peg溶液边加边摇匀37恒温静置15min7取上述液一滴盖上盖玻片镜检wwwthemegallerycom202112五数据记录及处理观察四个视野中的细胞记录鸡血细胞融合情况如下表所视野细胞核总数视野内融合细胞核数2核细胞3核细胞所有细胞核总数所有融合细胞核总数10512wwwthemegallerycom2021122数据处理
2核细胞 3核细胞
视野细胞核 总数
视野内融合 细胞核数
所有细胞核 总数
所有融合细 胞核总数
1 2
30 26
4 3
2 0
0 1
3
4
28
31
2
3
1
0
0
1
105
12
2、数据处理：由上表原始数据得视野内发生融合 的细胞核数为12个，视野内所有细胞核总数为 105个，由公式： 融合率=视野内发生融合的细胞核数/视野内所有细 胞核数× 100%
（5）第三次离心去上清液后，加GKN 0.5ml 制成10%悬液，放在37℃水浴箱预热2~3min
鸡血细胞体外融合的影响因素研究
１ ． ２ ． ５ 鸡 血细胞 悬液 的 配制【 ‘ ３ Ｉ
红， ＧＫＮ 液． 血 细胞 计 数 板 ， 刻度离心管 ， 离心机 ， 水 浴锅 ， 盖 玻片 ， 容量 瓶 ， 载玻片， 移 液管 等．
１ ． ２ 实 验 方 法
１ ． ２ ． １ ０ ． ８ ５ Ｎａ Ｃ１ 溶 液 的 配 制
１ ． ２ ． ３ Ｈａ ｎ ｋ ｓ液 的 配 制 。 。 。
原 液 Ａ： 称取 Ｎ ａ Ｃ １ １ ６ ． ０ ｇ 、 Ｋ Ｃ １ ８ ． ０ ｇ 、 Ｍｇ Ｓ Ｏ ４・ ７ Ｈ２ ０ ２ ． ０ ｇ 、 Ｍｇ Ｃ １ ２・６ Ｈ２ Ｏ ２ ． ０ ｇ 、 Ｃ ａ Ｃ １ ２ （ 无水 ）
称取 Ｎ ａ Ｃ １ ８ ． ０ ｇ 、 葡 萄糖 ２ ． ０ ｇ 、 Ｎａ ２ ＨＰ Ｏ ・
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ４～０ ５—１ ７ ； 修 回 日期 ： ２ ０ １ ４—０ ６—２ ０
（ ２ ） 向 抗 凝 全 血 的 试 管 中加 入 ４倍 体 积 的
４ ． ０℃ ：
原液 Ｂ ： 葡 萄糖 ２ ０ ． ０ ｇ 、 Ｎａ ＨＰ Ｏ ・１ ２ Ｈ２ Ｏ
０ ． ０ ６ ｇ 、 ＫＨ ２ Ｐ Ｏ １ ． ２ ｇ 、 双 蒸水 ８ ０ ０ ｍＬ， 用 滤 纸 过
学 内容ｌ 】 ］ ． 在实 际 操作 中 ， 该 方 法 易 受 许 多 因 素 的
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 实 验 材 料 及 仪 器
公鸡 全 血， Ｐ Ｅ Ｇ， Ｎａ Ｃ １ ， Ｈａ ｎ ｋ ｓ液 ， ０ ． ５ 酚
（ ３ ）向 ４个小 烧杯 中分 别加 入 预热 至 ５ Ｏ℃ 的
Ｇ ＫＮ 液 混 匀 ， 配制成 １ ０ ， ３ Ｏ ， ５ ０ ， ７ ０ 的
鸡血细胞的体外融合(修改版)
实验鸡血细胞的体外融合【实验目的】了解乙二醇（PEG）诱导体外细胞融合的基本原理。
通过PEG诱导鸡血细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合的基本方法。
【实验原理】细胞融合（cell fusion）又称体细胞杂交，是指用人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成异核体细胞，随后，异核体同步进入有丝分裂，核膜崩溃，来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的杂种细胞（hybrid cell）。
细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段。
依据融合过程采用的助融剂不同，细胞融合可分为：①病毒诱导的细胞融合，如仙台病毒（hemagglutinating virus of Japan,HVJ）;②化学因子诱导的细胞融合，如聚乙二醇（polyethyleneglycol,PEG）;③电场诱导的细胞融合；④激光诱导的细胞融合。
PEG是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子质量的多聚体。
PEG可改变各类细胞的膜结构，是两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组，引发细胞融合。
该方法应用相对分子质量为400～6000的PEG溶液引起细胞的聚集和粘连，产生高频率的细胞融合。
融合的频率和活力与所用PEG的相对分子质量、浓度、作用时间、细胞的生理状态与密度等有关。
【实验仪器、材料和试剂】仪器、用具：注射器、刻度离心管、离心机、血细胞计数板、水浴锅、滴管、显微镜、烧杯、容量瓶、凹面载玻片、盖玻片、酒精灯等。
材料：成年家鸡。
试剂1）0.85%NaCl溶液。
2）GKN液：8.0g NaCl，0.4g KCl，1.77g Na2HPO4·2H2O,0.69g NaH2PO4·H2O,2.0g葡萄糖，0.01g 酚红，溶于1000ml重蒸水中。
3）50%（m/V）PEG溶液：①取50g PEG(相对分子质量=4000)放入100ml瓶中，高压灭菌20min。
②让PEG冷却至50～60℃，勿让其凝固。
实验六鸡血原生质体融合
实验六鸡血细胞的体外融合2017.11.10 6.1实验结果
A B C
D E F
图1.鸡血细胞体外融合情况
A：开始融合的两个鸡血细胞B：融合中期的两个鸡血细胞
C：完成融合的两个鸡血细胞D：完成融合的三个鸡血细胞
E：多细胞融合后涨破F：未发生融合的鸡血细胞
A B
C D
图2鸡血细胞体外融合
（1）统计图2可得鸡血细胞体外融合率为：融合细胞数/细胞总数=23/223=10.31％
（2）分析：总体来说，细胞融合率较低。
从观察结果来看，存在许多多个细胞融合后涨破的现象而单个未融合的细胞较少，所以我认为应该是由于加入PEG后或是水浴后没有很好地分散细胞团，从而导致多个细胞融合使面积过大从而涨破最终导致细胞融合率较低；也有可能是因为离心速度过高从而破坏了细胞使融合率降低。
6.2回答问题
为了提高融合率，某同学打算选用5种分子量PEG、各设5种浓度、5个融合时间，探索最佳条件组合。
按常规设计，共5*5*5=125组合，因而工作量大。
请你帮助该同学找到一种设计方法，能够科学地减少组合而不影响结果；列出组合表，用一句话解释该设计的原理。
答：设5种相对分子质量分别为：M1，M2，M3，M3，M4，M5
5种浓度分别为：c1，c2，c3，c4，c5
5个时间为t1，t2，t3，t4，t5
步骤一：
步骤二：
2.探究细胞融合最适PEG浓度
表
步骤三：
通过计算细胞融合率可得细胞融合最适时间T，最适浓度C，最适相对分子质量M，则最佳组合为（T，C，M）
设计原理：三个变量是独立的，其对细胞融合的作用不存在相互影响。
实验五 鸡血细胞融合
实验五鸡血细胞融合一、实验目的掌握细胞融合技术二、实验原理PEG是乙二醇的多聚化合物，PEG可与水分子以氢键结合，在高浓度（50％）的PEG溶液中自由水消失，导致细胞脱水而发生质膜结构的变化，引起细胞融合三、实验用品（1）器材：离心机显微镜水浴锅血球计数板离心管滴管注射器盖玻片载玻片（2）试剂：①Alsever溶液：葡萄糖2.05g 柠檬酸钠0.80g Nacl 0.42g 溶于100Ml,ddH2O中②0.85％生理盐水③GKN溶液：Nacl 8g Kcl 0.4g Na2HPO4·12H2O 3.75g NaH2PO4·2H2O0.78g 葡萄糖2g 酚红0.01g 溶于100ML ddH20中④苏木精和伊红（HE）染液⑤ 50％PEG溶液，，取一定量PEG（WM=4000）水域加热溶解后（50℃）与GKN（50℃）等体积混合⑥鸡血四、方法与步骤注射器吸2ML Alsever 溶液取鸡血2ML→加入离心管→加入6MLAlsever （1:4）→取1 ML鸡血悬浮液加4ML 0.85％Nacl→离心1500r／min 3 min 后弃去上清液反复三次→加GKN 4 ML离心弃去上清液→加GKN（1：9）制成10％悬液→利用血球计数板计数控制在3-4×107个／ML取1 ML于离心管→37℃水浴同时水浴温度恒温（3-4 min）→加入50％PEG液0.5 ML（慢慢沿离心管流下融合），边加边摇匀放入水浴锅中→20-30 min后加GKN至8 ML（沿器壁）静止水浴锅中20 min→1500r／min 3 min 离心，弃上清液加GKN溶液离心→弃上清液加适量混匀取少量于载玻片上进行HE染色（可在水浴锅上适当烤片）,进行观察。
五、作业1、计算融合率融合率=视野内发生融合的细胞核总数／视野内所有细胞核总数2、绘图显示能观察到的细胞融合（要注明是何倍数下的结果）附：HE染色 1、染色划片晾片 2、苏木精（蒸馏水冲洗）15-20 min 3、伊红3 min（蒸馏水冲洗）。
实验五 鸡血细胞融合
实验五鸡血细胞融合一、实验目的掌握细胞融合技术二、实验原理PEG是乙二醇的多聚化合物，PEG可与水分子以氢键结合，在高浓度（50％）的PEG溶液中自由水消失，导致细胞脱水而发生质膜结构的变化，引起细胞融合三、实验用品（1）器材：离心机显微镜水浴锅血球计数板离心管滴管注射器盖玻片载玻片（2）试剂：①Alsever溶液：葡萄糖2.05g 柠檬酸钠0.80g Nacl 0.42g 溶于100Ml,ddH2O中②0.85％生理盐水③GKN溶液：Nacl 8g Kcl 0.4g Na2HPO4·12H2O 3.75g NaH2PO4·2H2O0.78g 葡萄糖2g 酚红0.01g 溶于100ML ddH20中④苏木精和伊红（HE）染液⑤ 50％PEG溶液，，取一定量PEG（WM=4000）水域加热溶解后（50℃）与GKN（50℃）等体积混合⑥鸡血四、方法与步骤注射器吸2ML Alsever 溶液取鸡血2ML→加入离心管→加入6MLAlsever （1:4）→取1 ML鸡血悬浮液加4ML 0.85％Nacl→离心1500r／min 3 min 后弃去上清液反复三次→加GKN 4 ML离心弃去上清液→加GKN（1：9）制成10％悬液→利用血球计数板计数控制在3-4×107个／ML取1 ML于离心管→37℃水浴同时水浴温度恒温（3-4 min）→加入50％PEG液0.5 ML（慢慢沿离心管流下融合），边加边摇匀放入水浴锅中→20-30 min后加GKN至8 ML（沿器壁）静止水浴锅中20 min→1500r／min 3 min 离心，弃上清液加GKN溶液离心→弃上清液加适量混匀取少量于载玻片上进行HE染色（可在水浴锅上适当烤片）,进行观察。
五、作业1、计算融合率融合率=视野内发生融合的细胞核总数／视野内所有细胞核总数2、绘图显示能观察到的细胞融合（要注明是何倍数下的结果）附：HE染色 1、染色划片晾片 2、苏木精（蒸馏水冲洗）15-20 min 3、伊红3 min（蒸馏水冲洗）。
细胞生物学实验-鸡血细胞的体外融合
鸡血细胞的体外融合
注意事项： 1. 高Ca2+浓度能够提高细胞融合率。有些抗凝剂中含有和Ca2+结合的化合
物，导致血液中的Ca2+浓度降低，故起抗凝血作用，但是会降低细胞的 融合效率。 2. 用滴管小心吸取上清，可以留下0.5 ml的溶液以避免损失血细胞。 3. 必须严格控制PEG的作用时间，通常处理细胞1～2 min。PEG和二甲基 亚砜并用时可以提高细胞的融合率。 4. PEG一定要缓慢加入并不断摇晃混匀，以尽量减少对细胞的毒性。 5. 注意区分融合的细胞和重叠的细胞。
实验试剂：
1. 0.85％NaCl溶液。 2. GKN液：80.0 g NaCl、0.4 g KCl、1.77 g Na2HPO4·2H2O、2.0 g葡萄糖、0.69 g NaH2PO4·2H2O、0.01 g酚红，溶于1000 ml重蒸水中。 3. 50％（m/v）PEG溶液：①取50.0 g PEG（相对分子质量= 4000）放入100 ml瓶中， 高压灭菌20 min；②让PEG冷却至50～60℃，勿让其凝固；③加入50 ml预热至50℃ GKN液，混匀后置37℃备用。 4. Hanks原液（10X）：NaCl 80.0g、Na2HPO4·12H2O 1.2g、KCl 4.0g、KH2PO4 0.6g、 MgSO4·7H2O 2.0g、葡萄糖 10.0g、CaCl2 1.4g。 5.Hanks液：Hanks原液 100 ml、重蒸水 896 ml、0.5％酚红 4 ml，灭菌后4℃保存。 6. 詹纳斯绿染液。
有性繁殖时发生的精卵结合是正常的细胞融合，即由两个配子融合形成 一个新的的二倍体。体细胞融合可形成四倍体或多倍体细胞，最终形成杂种 细胞的特性会有很大变化。
鸡血细胞的体外融合
鸡细胞融合实验报告
一、实验目的1. 了解PEG诱导细胞融合的基本原理。
2. 通过细胞融合实验，初步掌握细胞融合技术。
3. 观察鸡细胞融合过程中的细胞行为与变化。
二、实验材料与用品1. 实验材料：鸡红细胞、Hanks液、PEG（聚乙二醇）。
2. 实验用品：生物显微镜、离心机、恒温水浴箱、试管、离心管、滴管、酒精灯、载玻片、盖玻片、生理盐水、剪刀、镊子等。
三、实验方法1. 准备鸡红细胞悬液：取新鲜鸡血，用生理盐水稀释至10%的悬液。
2. 制备PEG溶液：称取0.5克PEG（分子量4000）放入试管内，在酒精灯上融化，迅速加入0.5ml预热的Hanks液混匀，制成50%的PEG溶液。
放入37℃水浴中待用。
3. 处理鸡红细胞：取10%的鸡红细胞悬液1ml放入离心管中，加入5ml Hanks液混匀，以1000rpm离心5分钟，小心弃去上清，用指弹法将细胞团块弹散。
4. 诱导细胞融合：取上述50%的PEG溶液0.5ml，在1分钟内滴加到鸡红细胞悬液中，边加边轻轻摇动混匀。
待PEG全部加入后静置1分钟左右。
此过程均在37℃水浴中进行。
5. 终止PEG作用：缓慢滴加9ml Hanks液以终止PEG的作用，在37℃水浴中静置5分钟。
6. 离心弃上清：离心弃去上清，取一滴融合后的细胞悬液滴片，加盖片镜检。
四、实验结果与分析1. 镜检观察：在显微镜下观察，可见鸡红细胞融合后的细胞呈现球形，细胞膜较厚，细胞质较为均匀。
2. 实验结果分析：本实验成功诱导鸡红细胞融合，说明PEG诱导细胞融合技术在鸡细胞融合实验中具有可行性。
鸡红细胞融合后的细胞形态较为规则，细胞膜完整，细胞质均匀，说明细胞融合过程较为顺利。
五、讨论1. 鸡红细胞融合实验的成功，为细胞融合技术的研究提供了实验依据。
本实验采用PEG诱导细胞融合技术，具有操作简便、效果显著等优点。
2. 鸡红细胞融合实验过程中，PEG的浓度、处理时间等因素对细胞融合效果有较大影响。
实验中，PEG浓度为50%，处理时间为1分钟，能够获得较好的融合效果。
实验十PEG法诱导鸡血细胞融合ppt实用版
3最、后鸡，血弃细去吸胞上悬清取液液的，细制加备入胞10m悬l的G液KN，溶液在，制凹成鸡面血细玻胞悬片液。上滴一滴，加入詹纳斯绿染液 （85一%）Na鸡C混血l溶细液匀胞，的制，体成外红染融细合胞色储备5液m，置in于4后℃冰盖箱内上可供盖一周玻内使片用。，在显微镜下进行观察细胞 融合情况。 69 g NaH2PO4·H2O，2.
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5.鸡血细胞融合1
五、实验结果的观察与计算
• 细胞融合的观察，可通过观察细胞内核的数目来
进行鉴别。细胞内只有一个核，定为未融合细胞； 有二至多个核，定为融合细胞。 • 细胞的融合率指在显微镜的视野内，已发生融合 的细胞的核的总数与此视野内的融合细胞. 2.计算细胞的融合率： 融合率=融合的细胞核的个数 总的细胞核的个数 3. 你认为PEG介导的细胞融合实验的关键步骤 是什么？说明理由。
l 利用PEG介导的细胞融合，其融合效果 受以下因素影响： ① PEG的分子量与浓度：D=4000、50％ ② PEG的处理时间：2－5分钟 ③ 融合时的温度：37－40度
④ PEG的 pH值：8.0-8.2
三、实验仪器、材料和试剂
1.仪器、用具：注射器、 离心机、水浴锅、EP管 2.材料：成年家鸡 3.试剂：Alsver溶液 0.85％Nacl GKN溶液 50％PEG溶液 0.2％次甲基兰
依据融合过程采用的助融剂不同，细胞融合可
分3种类型：
病毒诱导的细胞融合，如仙台病毒（HVJ）
化学因子诱导的细胞融合，如聚乙二醇（PEG）；
电场诱导的细胞融合；
病 毒 诱 导 的 细 胞 融 合 过 程
利 用 细 胞 融 合 培 育 杂 种 植 物
• PEG溶液作为助融剂介导动物细胞融 合的原理为：PEG可改变各类细胞的 膜结构，使两细胞接触点处脂类分子 发生疏散和重组，引起细胞融合。
3. 弃上清液(用吸管吸去)，加1mL0.85％Nacl，混匀后1500r／min离心 5min。
4. 重复上述条件，再离心洗涤1次（10min)。 5. 收集最后1次离心沉淀的血细胞，加入1mLGKN液使红细胞重新悬浮。 6. 取悬液1ml到1个试管中，加入0.5～0.8ml预热的50％PEG混匀，置于 37℃水浴中温浴2-5min； 7. 加入GKN5ml以终止PEG的作用，在37℃水浴中静止平衡5min. 8. 取血细胞悬液1滴滴于载玻片上，再加入0.2%次甲基蓝溶液1滴,用牙签混 均，3min后，盖上盖玻片，高倍镜下观察细胞融合情况。 9. 进行多个视野的测定，统计平均融合率。
实验六细胞融合实验
制备细胞悬液
染色和镜检
计算细胞融合率
细胞融合率是指在显微镜的视野内，已 发生融合细胞的细胞核总数与该视野内 所有细胞的细胞核总总数之比，通常以 百分数表示。 测定时要进行多个视野计数，并进行统 计分析。
注意事项
温度、融合时间、PEG的浓度与作用时 间、细胞密度、机械力等因素均影响融 合率，实验操作时应予以注意，并在需 要的时候及时镜检。
细胞生物学实验课件
实验六(二)鸡血细胞的体外融合
动物细胞融合是细胞工程 技术的重要手段之一，是研究 细胞遗传、基因定位、细胞免 疫、病毒和肿瘤的重要手段。
诱导体外细胞融 合的基本原理。 通过PEG诱导鸡血细胞之间的融合实验， 初步掌握细胞融合的基本方法。
实验原理
细胞融合又称体细胞杂交，是指用人工 方法使两个或两个以上的体细胞融合成 异核体细胞，随后，异核体同步进入有 丝分裂，核膜崩溃，来自两个亲本细胞 的基因组合在一起形成只含有一个细胞 核的杂种细胞。
实验原理
依据融合过程采用的助融剂不同，细胞 融合可分为：
病毒诱导的细胞融合，如仙台病毒 （HVJ）； 化学因子诱导的细胞融合，如聚乙二醇 （PEG）； 电场诱导的细胞融合； 激光诱导的细胞融合
PEG诱导细胞融合
吸取1mL鸡血悬液放在离心管中，逐滴加入37℃ 的50%PEG约0.5mL,边加边轻轻摇动试管，混匀后 于37℃水浴静置15min。
方法与步骤
终止PEG作用
缓慢加入5mL Hanks缓冲液，轻轻吹打混匀，于 37℃水浴中静置10min 用吸管轻轻吹打细胞团数次使其分散， 12000rpm离心5min使细胞沉淀，去上清,留少许 Hanks缓冲液,混匀 吸取细胞悬液，在凹面载玻片上滴一滴，加入詹 纳斯绿染液混匀，静置3min后盖上盖玻片，在显 微镜下观察细胞融合情况。