试述微生物回复突变试验在药物毒理学研究中的应用
Ames试验的基本原理和应用
Ames试验的基本原理和应用一、Ames试验简介Ames试验是一种常用于评估化学物质是否具有致突变性的基因毒理学试验方法。
它由美国科学家Bruce N. Ames在20世纪70年代初开发。
二、Ames试验的原理Ames试验的基本原理是利用特定菌株的突变敏感性，检测化学物质对DNA的突变诱发能力。
1. 菌株选择Ames试验通常使用两种丝氨酸依赖突变株：Salmonella typhimurium TA98和TA100，以及具有人类代谢酶活性的肝脏S9混合酶系。
2. 测试样品的处理测试物质首先在试管中与菌株和肝脏S9酶系一起孵育，然后观察菌落是否出现变化。
3. 测试结果的评价根据菌落的数量，可以判断是否存在突变现象。
如果突变菌落的数量明显增加，则表明被测试物质具有致突变性。
三、Ames试验的应用Ames试验在环境、药物、农药、食品添加剂等领域都有广泛的应用。
1. 环境领域Ames试验可以帮助评估空气、水和土壤中的化学物质对人类和环境的潜在危害。
特别是对于可能致癌或突变的化学物质，可以通过Ames试验进行筛选和评定。
2. 药物研发Ames试验也被广泛应用于新药研发。
在药物研究过程中，通过Ames试验可以评估化合物是否具有潜在的致突变性，从而提前发现潜在安全问题，避免对人类产生危害。
3. 食品与添加剂安全评估Ames试验在食品和添加剂的安全评估中扮演重要的角色。
通过对食品或添加剂样品在Ames试验中的突变情况进行评估，可以快速判断其是否具有致突变性，保护公众健康。
四、Ames试验的局限性Ames试验虽然是一种常用的基因毒理学试验方法，但也存在一些局限性。
1. 缺乏组织和器官的复杂性Ames试验主要依靠细菌株进行评估，缺乏与人体组织和器官的复杂性相一致的模型。
2. 无法评估慢性毒性Ames试验主要评估急性和亚急性暴露情况下的致突变性，无法评估长期暴露情况下的慢性毒性。
3. 无法评估毒性代谢产物Ames试验主要评估化合物本身的致突变性，而无法评估其代谢产物的致突变性。
毒理复习资料
名解：1.蓄积作用：指毒物逐次进入生物体，而在靶器官内积和/或毒物对生物体所致效应的累加现象。
当较长时间连续、反复给药，或者说给药的时间间隔和剂量超过机体消除药物的能力时，出现药物进入机体的速度（或总量）超过排除的速度（或总量）的现象，这时药物就有可能在体内逐渐增加并贮存起来，也就是说出现了蓄积作用。
蓄积作用可以分为药物积蓄和功能性积蓄。
2.近似致死量：近似致死量（Approximatal Lethal Dose,ALD）是介于最小致死量（Minimum Lethal Dose, MLD)与最大非致死量（Maximum Non-Lethal Dose, MNLD)之间的剂量。
MLD是指药物在最低剂量组的一群实验动物中仅引起个别动物死亡的剂量，在急性毒性试验中可表示为LD10或LD5；MNLD实际上是急性毒性试验中以死亡为毒效应时的一种最大耐受量，指药物不引起实验动物死亡的最大剂量，可表示为LD0。
3.染色体畸变：药物或化合物对遗传物质的影响涉及到整个染色体，表现为染色体结构或数目的变化称为染色体畸变。
4.S9：肝脏微粒体酶。
指1经酶诱导剂处理后制备的肝匀浆，2再经离心分离所得上清液，3再加上适当的缓冲液和辅助因子。
/ 它主要含有混合功能氧化酶（MFO），是国内常规应用于体外致突变实验的代谢活化系统。
其缺点是S9随实验动物种属或器官不同而有差异；S9含有的大量亲核物质有可能影响实验的敏感性。
选用200g左右的雄性大鼠，ip多氯联苯，500mg/kg。
杀死12小时前开始禁食。
诱导处理后d5断头法处死大鼠，无菌条件下取出肝脏，用冷KCL溶液洗涤后称重。
剪碎肝脏，制备肝匀浆。
肝匀浆以9000xg速度离心，取上清液分装小试管。
置液氮罐内速冻，-80或-20度保存备用，此即S9上清液，简称S9。
5.微核：染色体发生畸变导致断裂，断裂的碎片在分裂间期留在子代细胞中形成的规则的圆形或椭圆形结构的小块物质，又与他比普细胞核小，故称微核。
细菌回复突变试验目的和原理
细菌回复突变试验目的和原理
目的：
细菌回复突变试验旨在研究细菌在不同环境条件下的突变现象，以及突变对细菌生存和适应能力的影响。
通过该实验，我们可以更好地了解细菌的遗传变异机制，揭示突变对细菌进化和抗药性的重要作用，为抗菌药物研发和感染疾病治疗提供理论依据。
原理：
细菌回复突变试验是基于细菌的遗传可变性原理进行的。
细菌具有高度的遗传可变性，这是由于细菌的DNA复制过程中容易发生突变。
在实验中，我们通过给予细菌一定的诱变剂（如紫外线辐射或化学物质），诱发细菌的DNA发生突变。
随后，我们将突变后的细菌分成不同的组，分别培养在不同环境条件下。
这些环境条件可以是高温、低温、高盐、低氧等。
通过对各组细菌生长情况的观察和比较，我们可以发现突变对细菌生存和适应能力的影响。
在实验过程中，我们还可以进一步提取突变菌株的DNA，通过测序技术确定其突变位点和突变类型。
这有助于我们深入研究细菌的遗传变异机制，以及突变对细菌代谢途径、信号传导等方面的影响。
通过细菌回复突变试验，我们可以揭示细菌的遗传可变性和适应性演化的机制，为抗菌药物研发和感染疾病治疗提供理论指导。
此外，
该试验还为研究细菌的进化机制、环境适应性等方面提供了重要的实验手段和依据。
总结：
细菌回复突变试验通过诱发细菌的DNA突变，研究突变对细菌生存和适应能力的影响，以及突变的遗传机制。
该实验为我们深入了解细菌的遗传可变性和适应性演化提供了重要手段，对抗菌药物研发和感染疾病治疗具有重要意义。
通过这一实验，我们可以更好地理解细菌的进化机制，为解决抗菌药物耐药性和感染疾病的挑战提供理论指导。
药物遗传毒性研究技术指导原则
附件四药物遗传毒性研究技术指导原则药物遗传毒性研究技术指导原则一、概述遗传毒性研究（Genotoxicity Study）是药物非临床安全性评价的重要内容，它与其他毒理学研究尤其是致癌性研究、生殖毒性研究有着密切的联系，是药物进入临床试验及上市的重要环节。
拟用于人体的药物，应根据受试物拟用适应症和作用特点等因素考虑进行遗传毒性试验。
遗传毒性试验是指用于检测通过不同机制直接或间接诱导遗传学损伤的受试物的体外和体内试验，这些试验能检出DNA损伤及其损伤的固定。
以基因突变、较大范围染色体损伤、重组和染色体数目改变形式出现的DNA损伤的固定，一般被认为是可遗传效应的基础，并且是恶性肿瘤发展过程的环节之一（这种遗传学改变仅在复杂的恶性肿瘤发展变化过程中起了部分作用）。
在检测此类损伤的试验中呈阳性的化合物为潜在致癌剂和/或致突变剂，即可能诱导癌和/或遗传性疾病。
由于在人体中已建立了某些化合物的暴露和致癌性之间的关系，而对于遗传性疾病尚难以证明有类似的关系，故遗传毒性试验主要用于致癌性预测。
但是，因为已经确定生殖细胞突变与人类疾病有关，所以对可能引起可遗传效应的化合物与可能引起癌症的化合物应引起同样的关注；此外，这些试验的结果可能还有助于解释致癌性的机制和试验结果。
因此，在药物开发的过程中，遗传毒性试验的目的是通过一系列试验来预测受试物是否有遗传毒性，在降低临床试验受试者和药品上市后使用人群的用药风险方面发挥重要作用。
本指导原则重点阐述遗传毒性试验体内外试验的基本原则，并介绍标准试验组合方案，以及对试验结果的综合分析及评价。
本指导原则适用于中药、天然药物和化学药物的遗传毒性试验研究。
二、基本原则（一）实验管理药物的遗传毒性试验属于安全性评价研究，根据《中华人民共和国药品管理法》的规定，必须执行《药物非临床研究质量管理规范》。
（二）具体问题具体分析遗传毒性试验的设计，应该在对受试物认知的基础上，遵循“具体问题具体分析”的原则。
微生物的变异原理及应用
微生物的变异原理及应用1. 引言微生物变异是指微生物在自然界或实验条件下经过长期的演化过程中，产生了与亲代微生物有明显遗传差异的后代微生物。
微生物的变异一直是微生物学研究的重要领域，对于理解微生物的遗传变异机制以及应用于实际生产具有重要意义。
2. 微生物变异的原理微生物的变异是由于其基因发生了突变所导致的。
微生物的遗传信息存储在其DNA分子中，当DNA发生突变时，这些变异基因就会在后代中得以保留和传递。
微生物的突变可以分为两种类型：自然突变和诱变突变。
2.1 自然突变自然突变是指在微生物的自然生长过程中产生的突变。
这些突变通常是由DNA 复制错误、化学修饰、或者DNA损伤修复过程中发生的。
自然突变是微生物进化的基础，也是微生物遗传变异的主要来源之一。
2.2 诱变突变诱变突变是指通过人工手段诱导微生物基因发生突变。
这种突变方法可以通过化学物质、物理因素或者基因工程技术来实现。
诱变突变可以加速微生物的遗传变异进程，从而产生更多的变异体，为微生物的应用提供新的可能性。
3. 微生物变异的应用微生物变异的应用广泛涉及到农业、食品工业、药物研发以及环境修复等领域。
下面列举了几个常见的应用案例：3.1 作物育种通过微生物变异技术可以对作物进行改良育种，以获得具有抗病虫害、耐逆性和高产性的新品种。
例如，通过诱变突变可以筛选到抗除草剂的小麦品种，从而降低农药使用量，减少对环境的污染。
3.2 食品发酵工业微生物的变异在食品发酵工业中具有重要的应用价值。
通过对工业菌株进行诱变突变，可以提高其代谢能力和产酶能力，从而提高发酵过程的效率和产量。
例如，诱变突变后的酿酒酵母可以产生更多的酒精，提高酒的酿造效率。
3.3 药物研发微生物变异在药物研发中也起到了重要的作用。
通过诱变突变，可以获得抗生素产生菌株或者高效酶制剂的产生菌株。
这些变异菌株可以用于生产药物原料或者制备酶制剂，为药物研发和生产提供了新的资源。
3.4 环境修复微生物变异技术在环境修复领域也有着广泛的应用前景。
oecd化学品测试准则,第4部分,细菌回复突变试验”
oecd化学品测试准则,第4部分,细菌回复突变试验”1. 引言1.1 概述在化学品安全评估领域，确保人类和环境的健康至关重要。
为了评估化学品对生物体的影响，国际上采用了一系列的标准测试方法来确定其毒性和潜在风险。
其中，OECD（经济合作与发展组织）化学品测试准则是行业内广泛认可的标准之一。
1.2 目的本文的目的是详细介绍OECD化学品测试准则中第4部分的内容，即"细菌回复突变试验"。
通过这个试验方法，我们可以评估化学品对细菌群体的遗传突变能力，从而判断潜在的基因毒性。
1.3 重要性基因突变是化学物质对生物体产生毒性作用的主要机制之一，也是判断其潜在危害程度的关键指标。
通过该试验可以获得有关某种特定化学物质与细菌反应后引起遗传突变的信息，进而为该化学物质是否具有潜在致癌性等基因毒性提供判断依据。
此外，在法律法规和标准制定方面，这一试验方法也被广泛应用，以确保化学品的合规性及人类和环境的安全。
综上所述，本文将深入探讨OECD化学品测试准则第4部分中的"细菌回复突变试验"，包括其原理、实施方式与条件、评价标准以及应用范围与限制。
希望通过该文的阐述，读者能够更全面地了解和认识这一重要试验方法，并对化学品的基因毒性评估有更深入的认识和理解。
2. oecd化学品测试准则概述2.1 什么是oecd化学品测试准则oecd化学品测试准则是指由经济合作与发展组织（OECD）制定的规定化学品评估和测试方法的指导原则和标准。
这些准则旨在提供全球范围内评估化学品在环境和人体健康方面的潜在风险所需的科学数据，并确保这些数据具有可比性和可靠性。
2.2 oecd的背景与目标经济合作与发展组织（OECD）是一个由36个成员国组成的国际组织，致力于推动经济增长、就业、社会发展和环境可持续性。
oecd的目标之一是促进在成员国之间协调安全、健康和环境方面相关政策的制定。
对于化学品风险评估和测试方法，oecd通过制定统一的准则来实现这一目标。
471472细菌回复突变试验
471 472 细菌回复突变试验（Bacterial Reverse Mutation Test）1受试物必备受试物的化学鉴定纯度（杂质）溶解特性pH（必要时）稳定性（包括受试物在赋形剂中的稳定性）熔点／沸点2 试验目的2.1目的和意义细菌回复突变试验利用鼠伤寒沙门氏菌和大肠杆菌需要某种氨基酸的菌株来检测点突变，涉及DNA的一个或几个碱基对的置换，插入或缺失。
此试验的原理是检测试验菌株已存在突变的回复，细菌恢复合成必需氨基酸的能力。
通过在缺乏受试菌株所需氨基酸的培养基上的生长来检测回复突变的细菌。
点突变是很多人类遗传病的原因，有很多证据表明在人类和试验动物肿瘤形成涉及体细胞癌基因和肿瘤抑制基因的点突变。
细菌回复突变试验是快速的、费用较低和较易进行的试验。
试验菌株具有一些使其对检测突变更为敏感的特征，如回复突变部位的反应性DNA 序列，增强细菌对大分子的通透性，DNA修复系统缺失或DNA易误修复过程增强。
试验菌株的特异性可为诱发突变的种类提供某些有用的信息。
2.2定义回复突变试验（reverse mutation test）：利用鼠伤寒沙门氏菌和大肠杆菌检测需要某种氨基酸的菌株（分别为组氨酸或色氨酸）成为不需要外源性供应氨基酸的菌株的突变。
碱基置换型致突变物（base pair substitution mutagens）：引起DNA中碱基改变的因子。
在回复突变试验此改变可能发生在细菌基因组的原突变部位或另一个部位。
移码型致突变物（frameshift mutagens）：引起DNA中一个或多个碱基对增加或缺失，故改变RNA的读码框。
3测试原理细菌回复突变试验是利用原核生物（细菌）作指示生物的体外遗传毒理学试验，遗传学终点为基因突变。
（1）在有或无外源性代谢活化系统条件下，细菌悬浮液暴露于受试物。
在平板掺入法，细菌悬浮液与顶层琼脂混合，再立即铺至最低培养基上。
在预保温法，处理混合物经预保温后，与顶层琼脂混合，再立即铺至最低培养基上。
《药物毒理学》试题及参考答案
大学网络与继续教育学院课程考试试题卷类别：网教(网教/成教) 专业：药学 20 年12月课程名称【编号】：药物毒理学【1176】 A卷大作业满分：100分一、论述题（第1小题为必作题，第2～7小题选作3题）1、试述新药临床前药物毒理学研究的内容。
（40分）2、为何现有药物毒理学评价手段尚不能完全排除新药进入临床时的风险?（20分）3、试述新药急性毒性试验的目的和意义。
（20分）答：（1）了解新药急性毒性的强弱:新药研究早期主要用治疗指数来衡量候选化合物的安全性，治疗指数至少大于10，才有进一步作其它新药临床前研究的价值。
(2)为长期毒性和特殊毒性试验的剂量设置提供依据：一般而言，长期毒性和特殊毒性试验的高剂量，都是根据急性毒性资料为依据而设置的。
由于长期毒性试验剂量设计中，有价值的是最低无毒剂量，因此参考急性毒性试验动物出现中毒症状的缓急、持续时间的长短作全面考虑很有价值。
(3)获取新药毒性反应信息：在新药临床前急性毒性试验中获得尽可能多的毒理学信息，如毒性反应症状、靶器官致死原因等，就可以为该药物进一步安全性和临床上尽早识别和处理人体不良反应提供参考。
(4)其它：新药研制过程中，工艺路线尚未定型时，对产品除了理化性质分析外，还可通过LD50值的比较，观察生物效应的显著差异，以明确试验产品的质量。
此外，复方制剂新药研究时，用以判断配伍后与单药应用的毒性大小。
4、试述微核试验的原理及首选细胞。
（20分）5、从药物毒理学角度论述药物对血红蛋白的影响。
（20分）答：（1）碳氧血红蛋白的形成一氧化碳经呼吸道进入人体后，与Hb结合成碳氧血红蛋白，CO与Hb的亲和力要比O2与Hb的亲和力大300倍；而且在碳氧血红蛋白存在时，又能阻碍氧合血红蛋白的离解，加深组织缺氧。
高浓度的CO还可与还原型细胞色素氧化酶的二价铁结合，使细胞呼吸受到抑制，所以CO对全身组织均有毒性作用，可导致贫血性组织缺氧。
（2）高铁血红蛋白的形成 Hb中的铁离子可发生化学氧化，失去一个电子从二价变为三价，结果血红素的颜色从绿棕色变为黑色，这种带三价铁的Hb称为高铁血红蛋白（MetHb）。
描述Ames试验的原理及其应用
描述Ames试验的原理及其应用1. Ames试验的原理Ames试验是一种常用的基因突变试验，用于评估化学物质对基因突变的诱发能力。
它是由布鲁斯·纳默斯（Bruce Ames）于20世纪70年代初开发的，并被广泛应用于化学品和药物的毒性评估和致癌性评估。
Ames试验的基本原理是利用特定的细菌株，如沙门氏菌（Salmonella）和小肠杆菌（Escherichia coli），暴露在化学物质中，观察是否能够引起染色体突变。
这是通过测定细菌中突变基因的恢复所需的镍胺（histidine）依赖性进行的。
如果化学物质具有基因突变的能力，那么细菌株将无需镍胺即可生存，并在培养基中形成可数的突变菌落。
2. Ames试验的应用Ames试验在化学品的毒性评估和致癌性评估中被广泛应用。
它具有以下几个主要的应用领域：a. 检测环境水、空气和土壤的致突变性Ames试验可以用于评估环境中的化学物质对生物的致突变性。
通过将环境样品（如水、空气、土壤）与细菌接触，并观察是否会导致细菌的突变，可以判断样品中是否存在潜在的致突变物质。
这对于评估环境中的污染程度和风险具有重要意义。
b. 评估食品、饮料和药物的安全性Ames试验也被用于评估食品、饮料和药物等产品的安全性。
通过将这些产品与细菌接触，并观察是否会导致细菌的突变，可以评估其潜在的致突变风险。
这对保护公众健康和确保产品质量具有重要意义。
c. 预测化学品的致癌性Ames试验在化学品的致癌性评估中也被广泛应用。
虽然Ames试验并不能直接说明一种化学物质是否具有致癌性，但它可以提供有关其诱发基因突变能力的信息。
这些数据可以与其他的毒性研究结果相结合，用于判断化学物质的致癌潜力，并为制定相关的安全标准和法规提供依据。
d. 研究突变机制及基因毒理学Ames试验还可以用于研究基因突变的机制和基因毒理学。
通过对不同化学物质对细菌的影响进行比较分析，可以揭示基因突变发生的机理，进而深入了解基因毒理学的相关过程。
ames试验的原理和应用
Ames试验的原理和应用原理Ames试验是一种常用的遗传毒性测试方法，用于评估化学物质的致突变活性，即其对基因突变的潜在影响。
首次由Bruce Ames等人在20世纪70年代开发，作为一种快速、简便和经济的方法，Ames试验在毒理学领域得到广泛应用。
Ames试验基于细菌的基因突变现象，采用Salmonella菌株作为试验对象。
其中使用的菌株往往具有某种突变，使其无法合成氨基酸的能力。
通过将试验物与突变基因菌株接触，若试验物具有致突变活性，将导致原本无法合成氨基酸的细菌恢复其自我养活的能力。
通过观察细菌的生长，可以评估试验物对基因突变的潜在危害性。
应用Ames试验被广泛用于检测化学物质的致突变活性，可以有效地帮助人们判断其对生物体的潜在毒性。
以下是Ames试验的常见应用场景：1.药物研发：在药物研发过程中，Ames试验被用来评估候选药物是否具有突变性，从而帮助研发人员选择最安全的药物候选物。
2.食品添加剂评估：在食品工业中，Ames试验可以用来评估添加剂对人体基因的潜在突变危害，以确保食品的安全性。
3.化学品安全评估：Ames试验也被广泛用于化学品的安全评估，特别是对于接触频繁的职业环境中使用的化学品。
4.环境监测：Ames试验可以用来评估环境中的化学物质对生物体的潜在突变危害，帮助监测环境质量和提高环境保护意识。
5.遗传学研究：Ames试验作为一种快速、简便的遗传毒性测试方法，被广泛应用于基因突变研究领域，以增进对基因变异机制的理解。
Ames试验的优点和局限性优点•快速：Ames试验可以在较短的时间内得出初步的结果，节约了研究时间和成本。
•简便：Ames试验的操作相对简单，无需复杂的设备和高级实验技术。
•经济：Ames试验所需的材料和试剂成本低，适用于大规模筛选。
局限性•仅适用于细菌：Ames试验基于细菌突变，不能直接对多细胞生物进行评估，因此需要进一步的研究来验证其结果。
•无法考虑代谢产物：Ames试验无法考虑化学物质在生物体内的代谢过程和产物，可能会导致一些评估结果的偏差。
说明Ames试验的原理及应用
说明Ames试验的原理及应用原理Ames试验是一种常用的遗传毒性测试方法，用于评估化学物质对生物体的突变性。
其原理是通过检测化学物质对细菌DNA的诱变作用，从而评估其对人类可能造成的突变风险。
Ames试验一般使用Salmonella typhimurium菌株进行。
这种细菌有一个缺陷，即无法合成组氨酸。
而在培养基中添加化学物质和微量的组氨酸，如果化学物质对细菌DNA产生突变，使细菌能够自身合成组氨酸，就能形成可见的转变。
Ames试验有两个关键要素，一是实验菌种，二是检测方法。
实验菌种通常是Salmonella typhimurium，根据需求还可以使用其他菌种。
而检测方法则是通过数观察转变的数量和颜色来评估化学物质对DNA的突变作用。
应用Ames试验在毒理学研究和化学安全评估中有着广泛的应用。
以下是Ames试验的一些主要应用领域：1.药物开发与评估：通过Ames试验，可以对候选药物进行突变性评估，在早期筛选阶段排除潜在的突变原因，提高药物研发的效率和安全性。
2.致癌物质筛选：Ames试验可用于筛选可能存在致癌风险的化学物质，帮助人们更好地了解和评估潜在致癌物质的风险程度。
3.环境污染监测：Ames试验可以用于评估环境中的污染物对生物体的突变风险，为环境保护和治理提供科学依据。
4.食品安全评估：通过Ames试验，可以对食品中可能存在的突变原因进行评估，确保食品的安全性。
5.化学品安全评估：Ames试验可以用于评估化学品对人类的遗传毒性，为化学品的安全使用提供依据。
除此之外，Ames试验还在基础科学研究、医学诊断和法医学等领域发挥着重要的作用。
通过对化学物质的突变风险评估，Ames试验为人类的生活和健康提供了保障。
结论Ames试验是一种常用的遗传毒性测试方法，通过检测化学物质对细菌DNA的诱变作用，评估其对生物体的突变风险。
它在药物开发、化学安全评估、环境保护和食品安全等领域有着广泛的应用。
Ames试验在突变性评估中起着重要的作用，为人们的生活和健康提供了保障。
鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验原理及注意事项
鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验，Salmonella Typhimurium / Reverse Mutation Assay）于 1975年建立并不断发展完善，目前已被世界各国广为采用，已经成为毒理学实验室必需开展的重要实验项目。
Ames实验用于检测待分析物质的致突变作用，该验灵敏、高效、检测范围广。
Ames 试验原理Ames 试验利用鼠伤寒沙门氏组氨酸营养缺陷型菌株，该缺陷型菌株不能合成组氨酸，故在缺乏组氨酸的培养基上，仅少数自发回复突变的细菌生长；假如有致突变物存在，则营养缺陷型的细菌诱导回复突变成原养型，因而能生长形成菌落，据此判断受试物是否为致突变物。
某些致突变物需要代谢活化后才能引起回复突变，故需加入经诱导剂诱导的大鼠肝制备的S9混合液。
北京汇智泰康医药技术有限公司针对Ames试验开发Ames试剂盒，本试剂盒省去了培养基成分准备、诱导 S9 制备、菌株鉴定、菌株培养等时间，可以直接使用，大大缩短了实验周期；试剂盒各成分均经过严格的质量检测，无杂菌污染，菌株特性与活菌数目以及诱导 S9 活性均符合 Ames 试验要求，实验结果准确、可靠、重现性高。
Ames试剂盒应用广泛，可进行食品与饮用水、化学品、洗涤剂、消毒剂、食品添加剂、药物残留、化妆品、容器与包装材料等多个方面的遗传毒理学检测。
Ames试验导则1 范围本规范确定了鼠伤寒沙门氏菌／回复突变试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于化妆品原料及其产品的基因突变检测。
2 规范性引用文件OECD G uidelines for Testing of Chemicals (No.471,Adopted:21,July 1997)。
3 定义3.1回复突变（R everse mutation）细菌在化学致突变物作用下由营养缺陷型回变到原养型(prototroph)。
3.2基因突变（G ene mutation）在化学致突变物作用下细胞DNA中碱基对的排列顺序发生变化。
药物遗传毒性研究技术指导原则
附件四则编号:药物遗传毒性研究技术指导原则药物遗传毒性研究技术指导原则一、概述遗传毒性研究(Genｏtｏｘiｃiｔy Study)是药物非临床安全性评价的重要内容,它与其他毒理学研究尤其是致癌性研究、生殖毒性研究有着密切的联系，是药物进入临床试验及上市的重要环节。
拟用于人体的药物,应根据受试物拟用适应症和作用特点等因素考虑进行遗传毒性试验。
遗传毒性试验是指用于检测通过不同机制直接或间接诱导遗传学损伤的受试物的体外和体内试验,这些试验能检出DNＡ损伤及其损伤的固定。
以基因突变、较大范围染色体损伤、重组和染色体数目改变形式出现的DNA损伤的固定,一般被认为是可遗传效应的基础，并且是恶性肿瘤发展过程的环节之一(这种遗传学改变仅在复杂的恶性肿瘤发展变化过程中起了部分作用）。
在检测此类损伤的试验中呈阳性的化合物为潜在致癌剂和／或致突变剂,即可能诱导癌和/或遗传性疾病。
由于在人体中已建立了某些化合物的暴露和致癌性之间的关系,而对于遗传性疾病尚难以证明有类似的关系,故遗传毒性试验主要用于致癌性预测。
但是,因为已经确定生殖细胞突变与人类疾病有关,所以对可能引起可遗传效应的化合物与可能引起癌症的化合物应引起同样的关注；此外,这些试验的结果可能还有助于解释致癌性的机制和试验结果。
因此,在药物开发的过程中,遗传毒性试验的目的是通过一系列试验来预测受试物是否有遗传毒性，在降低临床试验受试者和药品上市后使用人群的用药风险方面发挥重要作用。
本指导原则重点阐述遗传毒性试验体内外试验的基本原则,并介绍标准试验组合方案，以及对试验结果的综合分析及评价。
本指导原则适用于中药、天然药物和化学药物的遗传毒性试验研究。
二、基本原则(一)实验管理药物的遗传毒性试验属于安全性评价研究，根据《中华人民共和国药品管理法》的规定,必须执行《药物非临床研究质量管理规范》。
(二)具体问题具体分析遗传毒性试验的设计,应该在对受试物认知的基础上,遵循“具体问题具体分析”的原则。
大学《药物毒理学》试题及参考答案
动物试验的第三个局限，是常规毒性试验所用的动物多系实验室培养的品种，且一般为健康动物，反应较单一。而临床用药的广大病人，他们对药物的敏感性各不相同。有的可能对某种药物非常敏感而出现特异性反应。临床用药的病人则可能同时患有多种疾病，
而某种疾病的存在往往会成为发生某种毒性反应的必要条件。此外，动物毒性试验中采用
大剂量的作法也与临床用药相差甚远，特别是那些毒性低、给药量很大的药物，有时会给
实验结果造成假象。例如，在进行乳糖的长期毒性试验时，大剂量导致钙性肾病，这一结果令人难以理解，后经深入观察分析，才弄清钙性肾病并不是乳糖直接产生的，而是由于
检测系统中还包括大鼠的肝微粒体酶（S9）体外代谢活化系统，使药物在体外受到与体内类似的氧化活化作用，故可测试出间接诱变原。
7、试ห้องสมุดไป่ตู้肾脏易受外源性化学物质损害的原因。（20分）
xx大学网络与继续教育学院课程考试试题卷
类别：网教专业：药学20xx年6月
课程名称【编号】：药物毒理学【1176】 A卷
大作业满分：100 分
请将答案复制到答题框，按试卷上的题号标清！删除没有作答的题目。
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答：新药临床前安全性评价的内容分为两大类，—是一般毒性试验，二是特殊毒性试验。
所谓特殊毒性试验，是指以观察和测定新药能否会引起某种或某些特定的毒性反应为目的而设计的毒性试验，即此类毒件试验观测的毒性指标是明确的。广义的特殊毒性试验包含的面比较广。如遗传毒性试验、生殖毒性试验、依赖性毒性试验、过敏性试验、局部刺激性试验、免疫毒性试验、光敏试验、眼毒试验、耳毒试验及致癌试验等，而狭义的特殊毒性主要是指遗传毒性、生殖毒性和致癌性，即—般常说的“三致”试验。
农药登记毒理学细菌回复突变
农药登记毒理学细菌回复突变范围GB/T 15670的本部分规定了细菌回复突变试验的基本原则、方法和要求。
本部分适用于为农药登记而进行的细菌回复突变试验。
2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
2.1回复突变试验reverse mutation test利用一组鼠伤寒沙门氏菌和/或大肠杆菌检测引起细菌碱基置换或移码突变的化学物质所诱发的需要某种氨基酸的菌株（分别为组氨酸或色氨酸）成为不需要外源性供应氨基酸的菌株的突变，即是由营养缺陷型回变到野生型。
2.2碱基置换型致突变物base pair substitution mutagens引起DNA分子中一个或多个碱基对置换的物质。
在回复突变试验，此改变可能发生在细菌基因组的原突变部位或另一个部位。
2.3移码型致突变物frameshift mutagens引起DNA分子增加或丢失一个或多个碱基对的物质。
3试验目的检测受试物的诱变性，预测其遗传危害和潜在致癌作用的可能性。
4试验概述细菌回复突变试验利用鼠伤寒沙门氏菌和大肠杆菌来检测点突变，涉及DNA的一个或几个碱基对的置换、插入或缺失。
原理是通过观察试验菌株在缺乏所需要氨基酸的培养基上的生长情况，检测试验菌株是否恢复合成必需氨基酸的能力，评价受试物诱发突变的能力。
5培养基和试剂注：培养基成分或试剂至少应是化学纯，无诱变性。
避免重复高温处理，选择适当保存温度和期限，如肉汤保存于4℃不超过6个月，其他详见下述各培养基及溶液说明。
5.1营养肉汤培养基牛肉浸膏5g氯化钠 5 g胰胨10 g磷酸氢二钾(K2HPO4-3H2O) 2.6 g加蒸馏水至1000 mL加热溶解，调节pH至7.4,分装后0.103 Mpa, 20 min灭菌，保存期不超过6个月。
5.2营养肉汤琼脂培养基琼脂粉 1.5 g加营养肉汤培养基至100 mL加热溶解，调节pH至7.4，0.103 Mpa，20 min灭菌。
5.3底层培养基(即最低营养培养基)5.3.1Vogel-Bonner (V-B)培养基柠檬酸(C6H8O7-H2O) 2.0 g磷酸氢二钾(K2HpO4) 10.0 g磷酸氢铵钠(NaNH4HPO4-4H2O) 3.5 g硫酸镁(MgSO4-7H2O) 0.2 g加蒸馏水至200 mL逐个将化学物在少量蒸馏水中单独溶解后，硫酸镁水溶液在最后缓慢加入，加蒸馏水至200 mL。
毒理学指标及实验操作汇总
毒理学指标及实验操作汇总(总7页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--药物毒性试验指标1.急性毒性试验一、半数致死量（LD50）的测定(一)目的:观察受试物一次给予动物后，所产生的毒性反应和死亡情况。
(二)动物分组和剂量1.动物:一般用小白鼠8周龄，体重18---22g(同次试验体重相差不超过2g)大白鼠6~8周龄，体重120--150g，同次试验体重相差不超过10g。
2.受试物:溶于水的做成溶液，不溶于水的做成混悬液.(三)试验方法1.剂量:一般选用3一5个剂量，各剂量间剂距根据受试物情况和预试结果而定。
2.给药途径和容积:给药途径:应与临床试验的途径相一致。
口服药物应灌胃给药，一、二类新药应采用两种途径给药，其中一种应为推荐临床研究的给药途径。
水溶性好的药物还应测定静脉给药的急性毒性。
给药容积:小白鼠禁食(12~16小时)，不禁水，按体重计算:灌胃(ig)不超过0. 4ml/ 10g体重。
大白鼠禁食(12~16小时)，不禁水、灌胃(ig)，不超过3ml/只。
:将动物按体重随机分组，每组至少10只(雌雄各半)。
给受试3.测定LD50物后立即观察动物反应情况，每天观察一次连续观察七天。
详细逐天记录动物毒性反应情况及死亡分布，并用适当的统计学方法(申报时应说明方法名称)计值及95%可信限。
算出LD504.观察毒性反应:给受试物后应严密观察反应情况，并记录动物的外观、行为活动、精神状态、食欲(饲料消耗量)、大、小便及其颜色、被毛、肤色、呼吸、鼻、眼、口腔有无异常分泌物，体重变化以及死亡等情况。
死亡动物应及时进行尸检，发现病变器官应做病理组织学检查。
若发现中毒反应或死亡率一与动物的性别有明显相关时，则应选择性别敏感的动物进行复试。
(四)试验报告和结果评价应详细具体，包括试验日期、动物的规格、性别、数量、受试物来源及含值及其95%可信限，以及各剂量组的死亡率，或最大耐受量量、试验方法。
药物毒理学考试要点
名词解释1.血脑屏障：是指血液-脑组织间液和血液-脑脊液间的屏障，由血液-脑屏障、脑脊液-脑屏障和血液-脑脊液屏障三个屏障构成。
2.内分泌系统：是一种整合性的调节机制，通过分泌特殊的化学物质来实现对有机体的控制与调节。
3.药物依赖性：也称药物成瘾性，是精神活性物质与机体长期相互作用下造成的一种精神状态（有时也包括身体状态），表现为强制性地连续不断地使用该药物的行为和其他反应，目的是去感受该药物所产生欣快性精神效应，或是为了避免由于停用该药物引发的戒断症状所带来的严重不适感。
4.直接致癌物：指进入机体后不需经代谢活化，直接与细胞生物大分子（DNA、RNA、蛋白质）作用而诱发细胞癌变的化学物质。
5.间接致癌物：指进入机体后需经细胞内微粒体混合功能氧化酶系统等代谢活化后才具有致癌性的化学物质。
6.促癌物：此类物质本身并无致癌性，严格的说不属于致癌物，但它可以与致癌物协同作用，诱发突变细胞克隆扩增，促进癌的发生；或在致癌物作用之后，反复作用与细胞，加速癌细胞发展成为癌瘤。
7.促癌剂：具有促癌作用的物质，通过促进突变细胞的克隆扩增而发挥致癌作用。
8.前致癌物：未经代谢活化的间接致癌物称为前致癌物或原致癌物。
9.辅致癌物：有些化学物质既非引发剂，也非促长剂，本身并不致癌，但能增强引发剂和促长剂的作用，即能加速致癌作用的过程。
10.药物的暴露：通过对暴露、时间依赖性的靶器官剂量与毒性作用关系研究解释毒性作用机制。
11.急性毒性试验：又称单次给药毒性试验，系研究实验动物一次或24小时内多次给予受试物后一定时间内所产生的毒性反应，观察期至少为14天。
最大耐受剂量（浓度）：（MTD）指动物能够耐受的而不引起动物死亡的最高剂量。
最小致死剂量（浓度）：（MLD）引起个别受试动物出现死亡的剂量LD50：（半数致死量）预期引起50%动物死亡的剂量，该值是经统计学处理所推算出的结果。
12.长期毒性实验：又称重复给药毒性试验，是研究实验动物重复给予较大剂量的受试物后产生的毒性反应特征，药物非临床安全性评价的重要内容。
毒理学问答题
一、外源化合物毒性作用的影响因素可归纳哪四个方面，请举例说明。
答：化学物质因素。
机体因素、化学物与机体所处的环境条件，化学物的联合作用（四个方面每个1分，举例说明2分）二、什么是Ames试验，试述其原理。
答：细菌回复突变实验利用突变体的测试菌株观察受试物能否纠正或补偿突变体所携带的突变改变，判断其致突变性，常用菌株为鼠伤寒沙门氏菌（3分）：人工诱变的突变株在组氨酸操纵子中有一个突变。
突变的菌株必需依赖外源性组氨酸才能成长，致突变物可使其基因发生回复突变，使它在缺乏组氨酸的培养基上也能生长（3分）。
三、毒物兴奋效应及其生物学意义。
答：指某些毒物具有高剂量抑制和低剂量刺激作用的这种现象称为毒物兴奋效应。
改变了传统的剂量反应关系模式；改变了对毒物低剂量的认识；改变了对卫生标准制定措施。
四、什么是染色体畸变分析。
答：染色体畸变分析：观察染色体形态结构和数目改变称为染色体畸变分析，方法有：缺失，除染色缺失外需作核型分析或用流式细胞仪做电脑图像分析，关于倒位、插入、重复以及易位均需显带技术，对于染色体分离异常，需在染毒后经过一次细胞分裂才能发现，但此时一些不稳定的染色体畸变往往消失。
五、彗星试验的原理。
答：当DNA损伤时，其超螺旋结构受到破坏，在细胞裂解液作用下，细胞膜，核膜等膜结构受到破坏，细胞内的蛋白质，RNA以及其他成分均扩散到细胞裂解液中，而核DNA由于分子量太大只能留在原位置，在碱性电解质作用下，DNA发生解螺旋，损伤的DNA断链及其片段被释放出来。
由于这些DNA的分子量太小且碱变性为单链，所以在电泳过程中带负电荷的DNA会离开核DNA 向正极迁移形成‘彗星’状图像， DNA受损越严重，在相同的电泳条件下迁移的DNA量就愈多，迁移的距离就愈长。
通过测定DNA迁移部分的光密度或迁移长度就可以测定单个DNA损伤程度，从而确定受试物的作用剂量与DNA损伤效应的关系。
六、什么是急性毒性其观察指标可分为哪四个方面答：急性毒性是指实验动物一次接触或24h内多次接触一定剂量的某些外源化学物短期内嗦产生的健康损害作用和致死效应。
细菌回复突变试验的原理
细菌回复突变试验的原理“细菌回复突变试验”是一种常用的实验方法，主要用来研究细菌的基因突变和遗传特性。
这种方法的原理主要是利用细菌在恶劣环境下突变产生的抗性和适应性来进行研究和寻找新的治疗方法。
下面我们来分步骤介绍细菌回复突变试验的原理。
第一步：选取适宜的细菌在进行细菌回复突变试验时，首先需要挑选一种适合的细菌。
比如，对于革兰氏阳性细菌（如金黄色葡萄球菌）而言，其表面覆盖有较厚的多糖、多肽层，这种层可阻挡许多从外部进入的化合物、物质等。
因而，要用某些能穿透这层屏障的化合物及药物，以确定其是否能够刺激革兰氏阳性细菌的突变。
不同种类的细菌对不同物质的反应和敏感度也不尽相同，在实验前需要对细菌种类进行严格筛选和检测。
第二步：制造突变株在毒性或恶劣环境下，细菌可能会出现基因变异，从而产生适应性。
比如，细菌在感受到某些特定的讯息（如耐盐、耐药性）时，就可能对抗这些讯息并产生变异获得更好的适应性。
因此，在实验中，研究者会使细菌在高浓度药物或高温等环境下进行繁殖，从而制造出具有突变基因的细菌株。
第三步：筛选突变株制作突变株后，需要将其进行筛选，以挑选具有理想特性的突变株。
这通常需要对突变株进行一定的筛选和筛查。
比如利用药物抗性、生长速度和代谢等特性进行筛选，以得到具有良好繁殖性和抵抗力的突变细菌。
第四步：鉴定变异位点通过突变细菌的扩散和筛选，可以得到具有特定基因变异的细菌。
随后研究者可以使用基因测序技术，进行变异位点的鉴定和确认。
同时，也可以通过比较突变株和野生株之间的生物学和生化特性等方面进行分析和比对，从而得到突变基因的相关信息。
通过以上几个步骤，就可以成功进行细菌回复突变试验。
通过这种方法，研究者可以深入了解细菌的基因和生物学特性，进而为疾病治疗和预防提供一定的科学基础和参考依据。
同时，该方法也在一定程度上促进了细菌学和基因工程等相关领域的研究发展。
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70、试述微生物回复突变试验在药物毒理学研究中的应用。
本题参考答案：
答：这是一种利用微生物来观察药物可能引起基因突变的方法。
某种可能引起致突变的药物与微生物接触，则可引起细胞内基因的突变，就会导致这种微生物在形态和生理上的相应变化，造成菌落形态、颜色和合成某种氨基酸功能的改变。
这种发生了突变的微生物称突变型，原来的微生物称野生型。
利用这种差别就可将未发生突变的野生型微生物与突变型微生物区别开来。
如果一种药物可使野生型微生物发生突变成为突变型，或者使突变型发生回复突变成为野生型，都有助于确定该种药物是否具有致突变的毒性作用。
微生物回复突变试验目前做得最多的是艾姆斯（Ames）试验，该方法是由美国加州大学伯克利分校生化教授Ames1972年首创。
目前公认Ames 试验作为筛选可能有致突变作用的化学药物，是一种可靠的方法。
我国新药审批方法中亦推荐Ames试验为致突变的首选方法。
Ames试验法是利用组氨酸缺陷型的鼠伤寒沙门氏菌突变株为测试指示菌，观察其在某药物作用下回复突变为野生型的一种测试用方法。
组氨酸缺陷型的鼠伤寒沙门氏菌在缺乏组氨酸的培养基上不能生长，但在加有致突变原的培养基上培养，则可使突变型产生回复突变成为野生型，即恢复合成组氨酸的能力，于是就能在缺乏组氨酸的培养基上生长成为菌落，通过计数菌落出现的数目就可以估算药物诱变性的强弱。
检测系统中还包括大鼠的肝微粒体酶（S9）体外代谢活化系统，使药物在体外受到与体内类似的氧化活化作用，故可测试出间接诱变原。