第二章 双碟制备.
第二版生物制药技术习题答案
第二版生物制药技术习题答案The document was prepared on January 2, 2021第一章绪论1、生化药物：从生物体分离纯化所得的一类结构上十分接近人体内正常生理活性物质的,能调节人体生理功能以达到预防和治疗疾病目的的物质. P12、按照药物的化学本质,把生物药物分为氨基酸类、蛋白质类、酶类、核酸类、多糖类、脂类、维生素及辅酶类.P3-53、生物药物的原料来源分为动物、植物、微生物、海洋生物、人体五大类.P54、肝素的化学成分属于一种多糖 ,其最常见的用途是抗血凝 .P45、SOD的中文全称是超氧化物歧化酶 ,能专一性清除氧自由基 .P46、辅酶在人体内的酶促反应中起重要的递H、递e等作用,有药用价值,人体生化反应中重要的辅酶：NAD、NADP、FMN和FAD .P47、前列腺素的成分是一大类含五元环的不饱和脂肪酸 ,重要的天然前列腺素有PGE1、PGE2、PGF2α等.P58、请说明酶类药物主要有几类,并分别举例.P4第二章生物药物的质量管理与控制1、中试：是把已取得的实验室研究成果进行放大的研究过程.P282、热原：是指在药品中污染有能引起动物及人的体温升高的物质.P423、生物检定法：利用药物对生物体的作用以测定其效价或生物活性的一种方法.4、生物药物质量检验的程序包括取样、鉴别、检查、含量测定、写出检验报告.5、药物的ADME表示药物在体内的整个过程,它们分别是吸收Absorption、分布Distribution、代谢Metabolism、排泄Excretion.6、生物药物在表示含量的时候有百分含量和活性效价两种.7、英美等国在药品的质量管理上采取典型的主副典机制,其中美国的药典和副药典分别简称为 USP 和 NF .8、在生物药物的质量管理规范中,GMP、GLP、GCP分别指良好药品生产规范、良好药品实验研究规范、良好药品临床试验规范.9、为了对新兴的基因工程药物进行质量管理,中国在2000年编制并颁布了中国生物制品规程 .10、基因工程生产的重组蛋白药物,须进行蛋白纯度检查,按WHOG规定,须用 HPLC 和非还原SDS-PAGE 两种方法测定,纯度均应达到95%以上.P2011、国外没批准上市的基因工程药物属于Ⅰ类新药,国外已批准上市的是属Ⅱ类药物,前者无临床前研究资料供参考,须作临床前研究.12、基因工程药物的临床试验包括Ⅰ期和Ⅱ期,二者在对象性质和对象的数量上不同.Ⅰ期是在健康自愿者身上进行,一般人数 10-20 人.Ⅱ期在病人上分组进行,总人数一般在 300 以上.13、目前我国使用的药典是 2010年版本,它分为三部.14、进行生物药物的安全检查时,异常毒性检查通常在实验动物小鼠上进行；热原检查一般在实验动物家兔上进行；降压物质检查通常在实验动物家猫上进行. 15、对于进口药,我国执行的检验标准是国外药典,而对于仿制国外药则执行的检验标准为国外药典 .16、对于空气洁净度的100级和10000级这两个级别,其中 100 级的洁净度要求更高.17、在国内,药品的生产与管理主要依据三级标准,请解释该三级标准.国标-中国药典-委员会部标-部颁标准-卫生部1中国药典的补充；2具法律约束力；3新药须经2年试行期地标-地方药品标准-省、市对药典以外的、某地区常用的药品、制剂的规格和标准,常制订地区性的标准.18、请简述新药研发的主要过程.1新化合物实体的发现,药理筛选,化学试验 2临床前研究3研究新药申请IND,即申请临床试验 4临床试验+临床前研究继续补充5新药申请NDA 6上市及监测第三章抗生素概述1、初级代谢产物：微生物通过代谢活动所产生的、自身生长和繁殖所必需的物质,如氨基酸、核苷酸、多糖、脂类、维生素类.2、次级代谢产物：通过次级代谢合成的产物,大多是分子结构比较复杂的化合物,如抗生素、激素、生物碱、毒素.3、抗生素的MIC：能抑制微生物的最低抗生素浓度.4、抗生素的差异毒力：药物对病原菌和宿主组织的毒力差异.5、青霉素的母核为 6-APA 6-氨基青霉烷酸.6、微生物是抗生素的主要来源,其中以放线菌产生的最多,真菌次之,细菌又次之.7、目前国际上抗生素活性单位表示方法主要有两种,一种是指定单位unit ,一种是活性质量μg.8、抗生素分为五大类：9、抗生素药品的热原检查的基本原理与方法原理：热原是指在药品中污染,能引起动物及人的体温升高的物质,认为是由细菌内毒素引起的,因此用过温度是否升高来判断该药品中所含热原是否符合规定.方法：将一定剂量的药液静脉注射注入家兔体内,以其体温升高的程度判断该药品中所含热原是否符合规定.10、请简述管碟法测定抗生素效价的基本步骤,并参考给出的二剂量管碟法的效价计算公式,解释一下式中θ、K、U2H 、S2H、U2L、S2L各参数的含义：lgθ=lgKU2H-S2H+U2L-S2L /S2H+U2H-S2L-U2L管碟法：比较标准品和待检品产生的抑菌圈的大小,来判定待检抗生素溶液的效价.在一定浓度范围内,对数剂量与抑菌圈直径呈线性关系1.称量；2.稀释；3.双碟制备；4.放置钢管；5.滴加抗生素溶液；6.抑菌圈测量.θ：供试品和标准品的效价比；K:高单位总量与低单位总量之比第四章β-内酰胺类抗生素1、青霉素G的汉语名称为苄青霉素,其结构可以看作由3个“酸”构成,即苯乙酸、半胱氨酸和缬氨酸,请进一步画出青霉素G的分子结构图______________2、各类青霉素的结构由“侧链”加“母环”构成,其中母环称为6-APA,而侧链有一定差异,例如青霉素G的侧链为苯乙酸.工业上制备出的母环可以作为重要的医药中间体,用来合成各种改造的青霉素衍生物.3、青霉素为代表的β内酰胺类抗生素的作用机制主要是通过抑制肽聚糖转肽酶及D-丙氨酸羧肽酶的活性而阻碍了肽聚糖的交联与合成,从而抑制了干扰了细菌的细胞壁合成.4、最早发现产生青霉素的微生物是属于青霉菌类中的点青霉,而目前生产上用于生产青霉素的菌种则属于产黄青霉素,且大多经过诱变育种,大大提高了青霉素产量.5、青霉素在临床上常用其盐类,最常用的为青霉素的钠盐和钾盐.6、从抗菌效力的发挥特点来讲,β内酰胺类抗生素属于在细菌的繁殖期发挥杀菌作用的抗生素,其对革兰氏阳性菌和阴性菌的作用效果有很大不同,即对革兰氏阳性菌效果更佳.7、简述获得青霉素发酵液后从中纯化青霉素的主要步骤.1发酵液的过滤和预处理；2萃取和精制；3结晶.8、简述β内酰胺类抗生素的作用机制1抑制肽聚糖合成→阻碍细菌细胞壁合成,使菌体失去屏障而膨胀裂解2触发细菌自溶酶活性第五章大环内酯类抗生素1、大环内酯类抗生素的结构是以大环内酯为母体,以苷键和1-3分子的糖相连接的一类抗生素物质.2、根据大环内酯结构的差异,大环内酯类抗生素分为三类：多氧类、多烯类和蒽沙类.3、红霉素的结构由三部分构成,分别为红霉内酯、红酶糖和去氧氨基己糖.4、红霉内酯的生物合成是由一分子的丙酰COA和6分子的甲基丙二酰COA重复缩合而成,在反应开始时的关键酶丙酸激酶的活性与红霉素的产量表现出直线关系.5、红霉素的发酵生产需要添加的前体物质为丙酸.6、红霉素发酵采用的菌种为红霉素链霉菌,发酵后主要采用萃取法来提取,在进一步纯化时,则将红霉素粗品溶于丙酮中,再加入2倍体积的水,即可制得红霉素纯品.7、氮源的代谢对红霉素合成影响很大,单独氮源实验表明,缬氨基酸对红霉素影响最大.8、简述红霉素的发酵生产与提取的步骤P77发酵生产：孢子悬液→种子罐→二级种子→发酵罐提取：萃取法第六章四环素类抗生素1、四环素发酵生产使用的菌种是产生金霉素的金色链霉菌菌种,它从微生物的种属分类上来说,属于一种放线菌,是一种原核生物2、四环素类抗生素是以氢化四并苯为母核的一类有机化合物.3、采用金色链霉菌发酵法生产四环素时在培养基中加一定的抑氯剂,其原因是什么P90阻止金霉素合成,促进四环素合成,使金霉素在总产量中低于5%,但浓度较大时对产生菌都有不同程度的毒性.4、为什么培养基中的钙盐有利于提高四环素发酵的产量 P91钙盐能与菌体合成的四环素结合成水中溶解度很低的四环素钙盐,从而降低了水中可溶性四环素的浓度,促进菌丝体进一步分泌四环素.第七章氨基糖苷类抗生素1、氨基糖苷类抗生素的代表性例子是链霉素,其分子结构由氨基环醇、氨基糖和糖三部分以苷键连接而成.2、图7-1是不同PH值的溶液中链霉素不同分子形式的存在浓度.根据该图并结合掌握的知识填空：链霉素从酸碱性上说,应被视为一种碱性,其在溶液中可以以4种形式存在,在从发酵液提取链霉素时如果采用离子交换法,应选择阳离子树脂.链霉素可以经反应生成盐,临床最常用的盐为硫酸盐.3、工业上用于生产链霉素的菌种是灰色链霉菌4、请简述链霉素的发酵生产与提取工艺包括哪些步骤.P103、106发酵生产：斜面孢子培养、摇瓶种子培养、二级或三级种子罐扩大培养、发酵培养及提取精制等提取工艺：发酵液过滤→原液吸附→饱和树脂洗脱→洗脱液脱色、中和、精制→精制液脱色、浓缩→成品浓缩液1、无菌过滤→水针剂2、无菌过滤,干燥→粉针剂5、为了减少损失,生产上采用离子交换法提取链霉素时,常采用三罐或四罐串联法进行吸附,请简述该方法的要点.P107原滤液流向主、副、次交换罐主罐：流出的Str浓度达到进口浓度的95%,就可认为已达饱和,可以解吸副罐：将升为主罐…补个新罐,继续吸附…次罐：…末罐流出液中的单位应＜100U/mL第八章现代生物技术在生物制药中的应用1、抗生素抗性基因：微生物能产生抗生素,须要自身能抵抗该抗生素,其相关基因为抗性基因.2、受体：指存在于细胞核内的生物大分子,其结构的某一特定部位能准确识别并特异结合某些专一性配体.3、配体：能与受体特异性结合的物质,包括内源性神经递质、激素、外源性活性物质和各种药物.4、请简述抗生素生物合成基因的特点.1高G-C含量：密码子第3个碱基的G-C比例极高2基因成簇：10-30个基因3位于染色体或质粒2添加保护剂：防止某些生理活性物质活性基团及酶活性中心受破坏.3抑制水解酶作用：根据不同水解酶的性质采用不同方法.4其他保护措施：注意避免紫外线、强烈搅拌、过酸、过碱或高温、高频震荡等6、请简述提取生物活性物质常用的三类方法,并分别举例.P1321用酸、碱、盐水溶液提取：胰蛋白酶用稀硫酸提取.2用表面活性剂提取：十二烷基磺酸钠SDS等可以破坏核酸与蛋白质的离子键合,对核酸酶又有一定抑制作用.3有机溶剂提取：1、固-液提取：丙酮提取脑组织中的胆固醇.2、液-液提取：7、请简述膜分离技术中微滤、超滤、纳滤、反渗透这几种方法的主要区别.1微滤MF：又称微孔过滤,它属于精密过滤,基本原理是筛孔分离过程.适用于细胞、细菌和微粒子的分离,在生物分离中,广泛用于菌体的分离和浓缩,目标物质的大小范围为0.01-10 μm,一般用于预处理.2超滤UF：是介于微滤和纳滤之间的一种膜过程,膜孔径在0.001～0.1微米.是一种能够将溶液进行净化、分离、浓缩的膜分离技术.对大分子有机物如蛋白质、细菌、胶体、悬浮固体等进行分离,广泛应用于料液的澄清、大分子有机物的分离纯化.3纳滤NF：是介于超滤与反渗透之间的一种膜分离技术,其截留分子量在80～1000的范围内,孔径为几纳米.纳滤膜能对小分子有机物等与水、无机盐进行分离,实现脱盐与浓缩的同时进行.4反渗透RO：是利用反渗透膜只能透过溶剂通常是水而截留离子物质或小分子物质的选择透过性,以膜两侧静压为推动力,而实现的对液体混合物分离的膜过程.能够去除可溶性的金属盐、有机物、细菌、胶体粒子、发热物质,反渗透技术是现代工业中首选的水处理技术.第十章氨基酸药物1、氨基酸对应的英文三个字母简写名称：丝氨酸Ser、苏氨酸Thr、苯丙氨酸Phe、酪氨酸Tyr 与色氨酸Trp2、氨基酸的中文名：Lys赖氨酸、Ala丙氨酸、Glu谷氨酸、Asp天冬氨酸3、20种天然氨基酸中属于碱性氨基酸的有赖氨酸、组氨酸和精氨酸.4、20种天然氨基酸中属于酸性氨基酸的有谷氨酸和天冬氨酸5、氨基酸根据侧链的化学结构,可分成脂肪族、芳香族、杂环族和亚氨基酸四类.6、在工业生产上,在各种氨基酸中以谷氨酸的发酵产量最大,赖氨酸的发酵产量次之.7、生产氨基酸的5种方法为蛋白水解法、化学合成法、酶转化法、直接发酵法和微生物合成法.8、赖氨酸是人体的八种必须氨基酸之一,而在食用的谷物中又常常缺乏,所以赖氨酸有重要的食品、医药用途,微生物一步发酵法生产赖氨酸常采用几种杆菌为生产菌,请列举其中常用的2种菌：黄色短杆菌或谷氨酸棒杆菌.9、蛋白水解法制备氨基酸常采用的原料蛋白有毛发、血粉和废蚕丝等,采用的水解方法则有酸水解法、碱水解法和酶水解法.10、某细菌合成赖氨酸的代谢公式如下,请计算赖氨酸对糖的理论转化率：3C6H12O6+4NH3+4O2—>2C6H14N2O2+6CO2+10H20赖氨酸对糖的理论转化率为：2146.19/3180100%=54.14%第十一章多肽与蛋白类药物1、干扰素：是由诱生剂诱导有关细胞所产生的一类高活性,多功能的诱生蛋白质.2、降钙素CT：是由甲状腺内的滤泡旁细胞分泌的一种调节血钙浓度的多肽激素.3、E-玫瑰花结实验：T淋巴细胞表面有针对绵阳红细胞SRBC的E受体,在一定实验条件下,SRBC 与T细胞表面是受体结合,形成以T细胞为中心,四周环绕SRBC,状如玫瑰花结的细胞集团.4、IL-2的中文名是白细胞介素-2,它是Th细胞在抗原或植物凝集素等丝裂原的刺激下而产生的一种糖蛋白成分.它的功能是刺激T淋巴细胞增殖分化,故在免疫方面有重要作用.5、6、胸腺肽组分5是由在80℃温度下热稳定的40-50种多肽组成的混合物,根据它们的等电点可区分成3个区,这些多肽中有活性的命名时习惯上被冠以胸腺素.7、8、ACTH的中文名是促皮质素,它是由腺垂体分泌的,化学成分为一种多肽,其功能是促进肾上腺的皮质激素的合成和分泌.9、白蛋白又称清蛋白,含量比例约占血浆总蛋白的55%,主要功能是维持血浆胶体渗透压10、人血丙种球蛋白的主要成分为免疫球蛋白Ig,Ig分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE五类,其中血中含量最高的,作为抗感染的主力的是IgG.11、胰岛素由51个氨基酸组成,有2条链,它们通过二硫键相连.12、简述在原核工程菌中生产重组干扰素包括哪些环节第十二章核酸类药物1、核苷酸的从头合成途径：利用磷酸核糖、氨基酸、及CO2等简单物质为原料合成核苷酸的过程.2、核酸类药物主要分为核酸、核苷酸、核苷和碱基及其衍生物四个种类3、4、核酸类药物的生产方法主要有酶解法、半合成法和直接发酵法.5、6、1987年3月美国FDA批准使用的抗艾滋药物AZT是全球首个被批准用于临床的艾滋病治疗药物,它是胸苷的衍生物.7、8、pI:C的中文名是聚肌胞苷酸,它可以诱导人体细胞产生干扰素,从而发挥光谱的抗病毒活性.第十三章1、请写出下列酶类药物的中文名：SOD超氧化物歧化酶、SAP去氢淀粉样蛋白、t-PA 组织纤溶酶原激活剂、CytC细胞色素C2、酶的提取主要方法有水溶液法、有机溶剂法和表面活性剂法.3、评价一个酶的纯化工艺的好坏,主要看两个指标：一是酶比活,二是总活力回收率.第十四章及之后章节1、低聚糖：由2-9个单糖组成的多聚糖2、粘多糖：是含氮的不均一多糖,是构成细胞间的主要成分,也广泛存在于哺乳动物各种细胞内.化学组成为和酪交替出现,有时含硫键.也称为.3、前列腺素PG：是存在于动物和人体中的一类不饱和脂肪酸组成的、具有多种生理作用的活性物质.4、超临界萃取法：指以超临界流体为溶剂,从固体或液体中萃取可溶组分的分离操作.5、采用分步提取法可从脑干中分别提取获得卵磷脂、脑磷脂和胆固醇三种重要的脂类药物,首先用丙酮提取出胆固醇；不溶物再用乙醇提取出卵磷脂；此时不溶物中则含有脑磷脂6、维生素：是维持机体正常代谢机能的一类化学结构不同的小分子有机化合物,大多需要从外界摄取.7、辅酶：是一类可以将化学基团从一个酶转移到另一个酶上的有机小分子.8、脂溶性维生素有维A、维D、维E、维K等,水溶性维生素有维B、维C两族.9、维生素与辅酶类药物的一般生产方法有三种,第一种是化学合成法,如维B1的生产；第二种是发酵法,如维C的生产；第三种是直接从生物材料中提取法,如辅酶Q10的生产.P24210、维生素的特点P2411不能供给能量,也不是组织细胞的结构成分,而是一种活性物质,对机体代谢起调节和整合作用；2需求量小；3大多是通过辅酶或辅基的形式参与体内酶促反应体系；4人体每日维生素的需要量甚微,但维生素却是机体不可缺少的营养素,在调节物质代谢过程中起重要作用,一旦缺乏,就会引起相应的疾病发生.11、蛋白同化激素：是一类从睾丸酮衍生物中分化出来的药物.12、非甾体类抗炎药：由于其化学结构和抗炎机制与糖皮质激素甾体抗炎药SAIDS不同,一类具有解热、镇痛,多数还有抗炎、抗风湿作用的药物.13、甾类激素药物根据生理活性可分为肾上腺皮质激素、性激素和蛋白同化激素三大类.它们都是含有环戊烷多氢菲核C17结构的化合物14、肾上腺皮质激素包括盐皮质激素和糖皮质激素两大类.前者主要调节水盐代谢；后者能调节糖、蛋白质、脂肪等的代谢,并有显着的抗炎、抗过敏作用.15、雄性激素的代表种类为睾丸酮,其结构由4个脂环构成,共19个碳原子.16、雌性激素包括雌激素和孕激素两类,前者由卵巢分泌,后者由黄体分泌,它们共同维持女性的性征和性周期.17、生物制品：是指应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备的,用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品.18、弱毒：经过天然或人工改造方法,去除或封闭其毒力因子,使其致病力减弱,一般不引起感染或发病的细菌菌株或病毒菌.19、灭活：利用甲醛等灭活剂杀死培养的病毒,以制成灭活疫苗的操作过程.20、脱毒：利用一定量的甲醛等脱毒剂,将细菌的外毒素去掉毒性,不再具有致病性,但仍保持其抗原性和免疫原性.21、类毒素：由细菌产生的外毒素,经解毒精制而成.22、变量免疫定量攻击法：疫苗经系列稀释成不同的免疫剂量,分别免疫各组动物,间隔一定日期后,各免疫组均用统一计量毒素或活毒攻击.23、疫苗的发展已经经历了三代,第一代疫苗指弱毒苗和灭活苗,第二代指亚单位疫苗,第三代指核酸疫苗.目前利用酵母生产的乙肝疫苗属于第二代疫苗.24、百白破是一种联合型疫苗,可以同时预防百日咳、白喉和破伤风三种疾病.25、利用病毒制备灭活苗时,对病毒进行灭活通常采用的灭活剂为甲醛.26、请解释生物制品保护力测定中常用到的一些术语的中文名：MLD最小致死量、LD50半数致死量、MID最小感染量、ID50半数感染量27、简述病毒类疫苗的生产过程P27428、简述破伤风类毒素的制备工艺。
第二章_双碟制备
待溶化的培养基稍冷却后，按配方要求调 整pH值。先取10毫升培养基装入试管中， 用pH试纸测其自然pH，再用1％NaOH(或 1％HCl)调至所需pH，根据用量计算，换 用10％NaOH(或10％HCl)调整所配全量培 养基的pH。加碱(或酸)溶液时，应边滴加 边搅拌，至应加量将近用完时，再次测试， 最后调至要求的pH值。
2、倒菌层 从冰箱中取出菌液，回温 菌液加入融化后的培养基中，摇匀，不得 有气泡 吸取含菌培养基5ml，注入已倒了底层的培 养基表面，均匀摊布，盖上陶瓦圆盖，凝 固即可使用。
注意事项 双碟一定要干燥，不能有冷凝水 刻度吸管要用砂轮将尖嘴割掉一点，变成大口后 用，否则易发生堵塞。 冬季温度低，倒好底层的双碟置于37度恒温箱内 温热，倒菌层时易于摊布水平。 摇匀菌层培养基时不得有气泡 用于倒菌层的培养基温度不可高于48度，否则菌 会被烫死。 动作要迅速
培养基的过滤澄清 液体培养基必须绝对澄清，琼脂培养基也应透明无显 著沉淀，因此 ，须要采用过滤或其它澄清方法以达到此 项要求。一般液体培养基可用滤纸过滤法，滤纸应折叠成 折扇或漏斗形，以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。 琼脂培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤。亦可用 中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤。新制肉、肝、血和 土豆等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去，再用滤纸反复 过滤。如过滤法不能达到澄清要求、则须用蛋清澄清法。 即将冷却至55~60°C的培养基放入大的三角烧瓶内，装 入量不得超过烧瓶容量的1/2，每1000ml培养基加入1~2 个鸡蛋的蛋白，强力振摇3~5分钟，置高压蒸汽灭菌器中、 121°C加热20分钟、取出趁热以绒布过滤即可。
配好的培养基，根据需要趁热分装至试管 或锥形瓶中。分装需用漏斗，以免琼脂粘 在管口或瓶口上。装瓶量一般为瓶容量的 1/3～1/2；装试管一般为试管高度的1/5～ 1/4，以免灭菌时培养基上溢，粘湿棉塞。
抗生素微生物检定法
可分为：稀释法、浊度法、扩散法
管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法[1]，利用管碟法测定抗生素效价，具 有准确、直观、重复性好等优点，因而被广泛采用。但是整个试验过程中影响结 果的因素很多，任何一个环节操作不当或者忽略就会造成很大误差，导致整组试 验失败。根据实际操作中的积累经验，对管碟法中影响试验结果的因素进行如下 分析及提出解决的方法。
（三）按抗生素化学结构分类： 1、β-内酰胺类抗生素：如青霉素类、头孢菌素类及其衍生物。 2、四环素类抗生素：如四环素、土霉素、金霉素及其衍生物。 3、氨基糖苷类抗生素：如链霉素、新霉素、卡那霉素、庆大霉素、巴龙 霉素等。 4、大环内酯类抗生素：如红霉素、柱晶白霉素、螺旋霉素、罗红霉素、 阿霉素等。 5、多烯类抗生素：如制霉菌素、两性霉素B、曲古霉素等。 6、多肽类抗生素：如多粘菌素、杆菌肽、卷曲霉素等。 7、苯羟基胺类抗生素：如氯霉素、甲砜氯霉素、已酞氯霉素等。 8、蒽环类抗生素：如柔红霉素、阿霉素、紫红霉素等。 9、其他抗生素：如磷霉素、环丝霉素、硫霉素等。
牛津杯放置时，要小心地从同一高度垂直放在菌层培养基上，不得下陷，不得 倾斜，不能用悬空往下掉的方法。放置之后，不能随意移动，要静置5min，使 之在琼脂内稍下沉降稳定后，再开始滴加抗生素溶液。
5. 滴加抗生素溶液
滴加抗生素要按照SH→TH→SL→TL（二剂量法）或者 SH→TH→SM→TM→SL→TL（三剂量法）的顺序滴加[3]。滴加之前，滴管至 少要用被滴液体冲洗3次。在滴加抗生素到牛津杯的时候，由于毛细管内抗生 素溶液往往会有气泡或者毛细管开口端有液体残留，继续滴加容易造成气泡膨 胀破裂，使溶液溅落在琼脂培养基表面造成破圈。因此一旦毛细管中出现气泡 或者残留，就重新吸取抗生素溶液进行滴加，毛细管口应避免太细，滴加的时 候离开牛津杯口距离不要太高。滴加中若有溅出，可用滤纸片轻轻吸去，不致 造成破圈。在滴加中还有可能出现抗生素溶液滴入牛津杯后，没有与琼脂培养 基菌层接触，有一段空气被压在溶液与培养基之间，这样是不会产生抑菌圈的。 此时可以小心的用滴管吸出牛津杯内的抗生素溶液，弃去。换滴管重新滴加。 抗生素溶液滴加后，液面应该与牛津杯管口齐平，液面反光呈黑色。（抗生素 液体加入量不能按滴计算，即使同一滴管，每滴的量也有差异。）如果抗生素 溶液滴加过满，可以用无菌滤纸片小心吸去多余部分。
简述双碟的制备过程及原理
简述双碟的制备过程及原理双碟制备是一种常用于制备薄膜的实验技术。
其原理基于薄膜的沉积过程，通过控制反应物与基底之间的转化，使其逐渐沉积形成所需的薄膜。
双碟制备是一种简单实用的薄膜沉积技术，其工作原理是通过两个碟片的对接，形成一个密闭空间，反应物在其中进行反应并最终沉积在基底上。
双碟制备过程的基本步骤如下：1. 准备反应物：根据所需的薄膜材料，选择合适的反应物，并进行准备。
反应物通常是一种或多种化学物质，如金属粉末、化合物溶液或气体源等。
2. 准备基底：选择适合的基底材料，并进行表面处理，以确保薄膜沉积的均匀性和附着力。
常用的基底材料包括玻璃、硅片、陶瓷等。
3. 搭建实验装置：将两个碟片对接在一起，形成一个密闭空间。
通常情况下，两个碟片的材料要选择与反应物和基底相容的材料，以避免反应物泄漏或固定不良的问题。
4. 放置反应物：将所需的反应物置于一个碟片中，然后将两个碟片对接在一起，使得反应物可以在两个碟片之间流动和反应。
5. 开始反应：在双碟装置内，加热、通入气体或施加外加电场等方法，开始反应物的反应过程。
反应物在双碟装置中自由流动，与基底接触并进行反应。
6. 沉积薄膜：当反应达到一定程度时，薄膜开始在基底上沉积。
沉积过程可以通过控制反应物的流动速度、温度、压力和反应时间等参数来实现。
7. 完成制备：反应结束后，将两个碟片分离，并将基底取出。
经过清洗和干燥等处理，得到所需的薄膜样品。
双碟制备的原理是基于反应物的沉积过程。
反应物在碟片之间的流动以及与基底表面的反应是沉积薄膜的关键步骤。
通过控制反应物的流动速度和时间，可以调节沉积速度和薄膜的厚度。
例如，流动速度较快，反应物在基底上沉积的时间较短，沉积的薄膜厚度较薄。
反之，流动速度较慢，时间较长，沉积的薄膜厚度较厚。
双碟制备的优点：1. 空间利用率高：双碟制备中，反应物在两个碟片之间自由流动，使得反应空间被充分利用，薄膜的均匀性和质量可以得到保证。
2. 灵活性高：双碟制备可以通过调整反应物的流动速度、温度和压力等参数，灵活控制薄膜的沉积速度和厚度。
银耳多糖咀嚼片的制备工艺的实验方案
银耳多糖咀嚼片的制备工艺的实验方案1、银耳粗多糖的提取1.1 提取的工艺流程1.2 操作要点1.2.1 原料粉碎将市售的银耳干品置于70℃电热鼓风干燥箱中干燥4h，之后机械粉碎机完全粉碎1.2.2 热水浸提将粉碎好的银耳干品以料液比1:60置于3000ml的锥形瓶中，90℃水浴，并不断搅拌浸提8h1.2.3 离心及浓缩将浸提好并已冷却的料液4000r/min，20min离心，收集上清液并浓缩至300ml左右1.2.4 乙醇沉淀向浓缩后的多糖溶液中加入其3倍体积95%乙醇并不断搅拌，隔夜后4000r/min，20min离心得沉淀，复溶，连续3次以上1.2.5 真空冷冻干燥2 银耳多糖咀嚼片的制备2.1 工艺流程2.2 操作要点2.2.1 原辅料准备银耳粗多糖粉碎，过100目筛，备用；辅料按照比例粉碎，过100目筛，备用2.2.2 混合将粉碎、过筛的原辅料按照比例混合均匀2.2.3 制软材待原辅料混合均匀后，缓慢加入润湿剂调和，待物料呈“手握成团，轻压即散”的状态，即制成软材。
2.2.4 造粒与干燥将制好的软材过18目筛造粒，后将湿粒置于不锈钢盘中，铺放均匀，于电热鼓风干燥箱中干燥，每20min翻动一次，干燥2-3h，其水分含量控制在2%2.2.5 整粒与压片干燥好的颗粒过20目筛整粒，之后加入其重量1%的硬脂酸镁作为润滑剂，混合均匀后压片，压制成0.3±0.05g/粒的片剂3 组成配方3.1银耳多糖与奶粉的配比本试验设定了银耳多糖与奶粉质量配比为9:1、8:2、7:3、6:4的4种配比比例，通过风味、色泽等感官评价进行筛选3.2 辅料的选择设定4因素3水平进行正交实验因素水平玉米淀粉A微晶纤维素B木糖醇C柠檬酸D 110% 5% 10%0.5%215%10% 15% 1.0%320%15% 20% 1.5%3.3 润湿剂的选择分别以40%、50%、60%、70%四个不同浓度的乙醇3.4 润滑剂的选择选取1%的硬脂酸镁3.5 干燥温度的选择选取50℃、60℃、70℃三个不同温度对湿粒进行干燥，通过颗粒的感官品质筛选出最佳的干燥温度。
双碟制备的实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握双碟制备的原理和方法。
2. 了解双碟在细胞培养过程中的应用。
3. 掌握细胞培养的基本操作。
二、实验原理双碟制备是一种细胞培养方法，其原理是将细胞接种于两个培养皿中，通过比较两个培养皿中细胞的生长情况，观察不同条件对细胞生长的影响。
该方法常用于细胞毒性实验、药物筛选等研究。
三、实验材料1. 细胞：小鼠成纤维细胞。
2. 培养基：DMEM培养基（含10%胎牛血清）。
3. 培养皿：直径为60mm的培养皿。
4. 移液器：200μl、1000μl。
5. 吸管：10ml、1ml。
6. 生理盐水。
7. 灭菌棉签。
8. 消毒剂。
9. 酒精灯。
10. 恒温培养箱。
四、实验步骤1. 准备工作（1）将培养皿用消毒剂消毒，然后用灭菌棉签擦拭干净。
（2）将生理盐水加入培养皿中，浸泡5分钟，然后用酒精灯烤干。
（3）将DMEM培养基加温至37℃，待用。
2. 细胞接种（1）将小鼠成纤维细胞从培养箱中取出，用移液器将细胞悬液转移至培养皿中，使细胞均匀分布。
（2）将培养皿放入恒温培养箱中，37℃、5%CO2培养24小时。
3. 制备双碟（1）将细胞悬液分别转移至两个培养皿中，每个培养皿中接种等量的细胞。
（2）将一个培养皿作为对照组，另一个培养皿作为实验组，实验组加入一定浓度的药物。
4. 细胞培养（1）将两个培养皿放入恒温培养箱中，继续培养24小时。
（2）观察细胞生长情况，记录细胞数量、形态等。
5. 数据分析（1）计算两个培养皿中细胞的生长指数，即实验组与对照组细胞数量的比值。
（2）比较实验组与对照组的生长指数，分析药物对细胞生长的影响。
五、实验结果1. 对照组细胞生长良好，细胞数量和形态正常。
2. 实验组细胞生长受到抑制，细胞数量明显少于对照组，形态异常。
六、实验讨论1. 双碟制备方法在细胞培养实验中具有简便、直观、灵敏等优点。
2. 本实验结果表明，药物对细胞生长具有抑制作用，为后续研究药物作用机制提供了依据。
盐酸二甲双胍的制备方法
（19）中华人民共和国国家知识产权局（12）发明专利申请（10）申请公布号CN110256299A（43）申请公布日 2019.09.20（21）申请号CN201910678367.1（22）申请日2019.07.25（71）申请人凯莱英生命科学技术(天津)有限公司地址300457 天津市滨海新区经济技术开发区第七大街71号（72）发明人洪浩;卢江平;陶建;张岩;王帆;米盖尔·冈萨雷斯（74）专利代理机构北京康信知识产权代理有限责任公司代理人梁文惠（51）Int.CI权利要求说明书说明书幅图（54）发明名称盐酸二甲双胍的制备方法（57）摘要本发明提供了一种盐酸二甲双胍的制备方法。
该制备方法包括：利用微波加热包含双氰胺和盐酸二甲胺的原料并使二者在100～160℃之间进行反应，得到包含盐酸二甲双胍的产物体系。
采用微波加热的方式对双氰胺和盐酸二甲胺进行加热，相对于常规加热方式需要热量从外部向内逐渐传递的方式，微波加热可以直接加热到反应物内部各部位，从而可以使反应物内部温度更加均匀，进而减少杂质的产生。
因此，通过使用微波加热合成二甲双胍盐酸盐可以提高二甲双胍盐酸盐的纯度，并且适用于熔融法、溶剂法，从而大大降低生产难度，简化工艺流程，为工业化提供更多的可行性方案。
该制备方法适用于熔融法、溶剂法，从而大大降低生产难度。
法律状态法律状态公告日法律状态信息法律状态2019-09-20公开公开2019-09-20公开公开2019-10-22实质审查的生效实质审查的生效权利要求说明书盐酸二甲双胍的制备方法的权利要求说明书内容是....请下载后查看说明书盐酸二甲双胍的制备方法的说明书内容是....请下载后查看。
双酶法制备淀粉糖工艺流程
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1. 淀粉糊制备，将淀粉与一定量的水在搅拌下均匀混合，加热糊化。
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自养微生物以含氮无机物铵盐、硝酸盐等 为氮素营养
异养微生物以无机物铵盐、硝酸盐或含氮 有机物为氮源
矿质元素、生长因子：微生物生长繁殖需 要P、K、Na、S、Mg、Ca等主要矿质元 素以及Fe、Cu等微量元素，因此培养基中 常加入K2HPO4、KH2PO4、MgSO4、 NaCl、KCl、FeSO4等无机盐类；生长因 子主要是调节微生物代谢活动的B族维生素，
培养基Ⅱ号 胨 牛肉浸出粉 酵母粉 葡萄糖 琼脂 蒸馏水
6g 1.5g
6g 1g 15~20g 1000ml
中国药典2005年版二部附录的抗生素微生 物检定法中收载了13种不同处方的培养基
及制备方法。目前，已有市售干燥培养基，
使用方便。临用时按照使用说明进行配制， 但应注意核对培养基的PH，必要时需调节 PH，使其符合规定。另外，市售干燥培养
基的质量也存在差异，注意选择合适的产 品。
第二章 双碟的制备
配好的培养基，根据需要趁热分装至试管 或锥形瓶中。分装需用漏斗，以免琼脂粘
在管口或瓶口上。装瓶量一般为瓶容量的 1/3～1/2；装试管一般为试管高度的1/5～ 1/4，先制好的棉塞塞住管口或瓶口。棉塞 既有利于通气，又有滤菌作用，故松紧、 大小应适当，以免使用时影响操作(如图)。 最后用牛皮纸或报纸包住棉塞，扎紧在瓶 颈或试管上方，以免灭菌时水蒸汽沾湿棉 塞或脱落。
固体培养基：在液体培养基中加入凝固剂，或用 麸皮等固体原料配制。常用的凝固剂是琼脂(又称 琼胶、洋菜)，由石花菜等海藻中提取加工制成。 市售琼脂为条状、片状或粉末状，主要成分为多
聚半乳糖的硫酸酯，绝大多数微生物不能将其分 解，在培养基中仅起支撑作用。其熔点约98℃， 凝固点42℃，1.5～2％的水溶液在一般培养温度 下呈凝胶状态。琼脂固体培养基广泛应用于微生 物的分离培养、菌种鉴定和保藏。
边搅拌，至应加量将近用完时，再次测试， 最后调至要求的pH值。
培养基的过滤澄清 液体培养基必须绝对澄清，琼脂培养基也应透明无显
著沉淀，因此 ，须要采用过滤或其它澄清方法以达到此 项要求。一般液体培养基可用滤纸过滤法，滤纸应折叠成 折扇或漏斗形，以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。
琼脂培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤。亦可用 中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤。新制肉、肝、血和 土豆等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去，再用滤纸反复 过滤。如过滤法不能达到澄清要求、则须用蛋清澄清法。 即将冷却至55~60°C的培养基放入大的三角烧瓶内，装 入量不得超过烧瓶容量的1/2，每1000ml培养基加入1~2 个鸡蛋的蛋白，强力振摇3~5分钟，置高压蒸汽灭菌器中、 121°C加热20分钟、取出趁热以绒布过滤即可。
第二章 双碟的制备
主要内容：
一、培养基的制备 二、双碟的制备方法
一、培养基
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖 或积累代谢产物的营养基质。
任何培养基中均需含有微生物所必需的能 源、碳源、氮源、矿质元素、水和生长因 素
不同营养类型、不同种类的微生物对营养 元素的要求有很大差异。
常由酵母膏、肝浸出液等提供。许多天然
成分的原料如牛肉膏、麦芽汁、玉米粉、
豆芽汁等，含有各种无机元素和生长因子， 不需另外添加。
培养基分类 按物理状态分为 液体培养基 固体培养基 半固体培养基
液体培养基：用各种营养成分加水配成， 或用天然物质的浸汁(麦芽汁、豆芽汁等)制 成。组分均一，适宜各类微生物的营养生 长。广泛应用于实验研究及大规模工业生 产中，有利于广泛获得大量菌体或代谢产 物。
培养基中的物质配比是经过无数论证和实 践的，与自然环境相比，营养物质是极度 丰富的，可以让目标微生物达到“吃喝不 愁”的“小康”状态。
培养基Ⅰ号
胨
5g
牛肉浸出粉
3g
磷酸氢二钾
3g
琼脂
15g
蒸馏水
1000ml
PH7.8～8.0或6.5～6.6
胨：不同来源的蛋白质经部分酶解或酸水 解后，得到的可溶性产物混合物，一般是 （600～3000D），主要作为微生物的培养 基。
5、配制好的培养基，使用期限为一个月，并贮存在冰箱中， 分装培养基的容器应预先高压蒸汽灭菌30min.
待溶化的培养基稍冷却后，按配方要求调 整pH值。先取10毫升培养基装入试管中， 用pH试纸测其自然pH，再用1％NaOH(或 1％HCl)调至所需pH，根据用量计算，换 用10％NaOH(或10％HCl)调整所配全量培 养基的pH。加碱(或酸)溶液时，应边滴加
新买来的琼脂要先试一下它的凝固能力， 一般只要它能稳定地凝固住就不要多加。 通常培养室温度较低时可适当少放一点， 温度高时要多放一点。琼脂以颜色浅，透 明度好，洁净的为上品。近来有些厂家生 产琼脂粉，它比条状的使用更方便。同一 厂家的产品，往往粉状的比条状的用量要 少。
培养基简单来讲就是一种人工提供的生长 环境，但人类提供这种环境的目的并不只 是让其简单的生存，而是要求其在生长、 繁育的同时还要达到人类要求的质与量。
牛肉膏即为主要碳源和能源
葡萄糖、蔗糖或麦芽糖、乳糖等单糖或双糖， 有的可利用淀粉、纤维素等多糖为碳源和 能源
1、将胨、牛肉浸出粉、磷酸氢二钾、琼脂 加入约900ml的蒸馏水内，加热并不断搅拌 使完全溶解
2、加入预热过的蒸馏水定容至1000ml， 3、调PH使比最终PH略高0.2～0.4 4、过滤 5、分装灭菌锥形瓶 6、115 ℃灭菌30min
注意事项
1、要通过预试验选择适当品牌的材料，确定琼脂的具体用 量
2、培养基中的葡萄糖和其他糖类要在其他成分配好，琼脂 融化之后加入
3、制成的培养基凝固后应透明，不得有沉淀。如果产生沉 淀，应在培养基各成分配制好之后，趁热过滤后调PH， 再分装消毒
4、调PH宜为一次性，避免反复加酸、碱影响培养基质量