酶联免疫检测方法的影响因素

合集下载

影响酶联免疫吸附试验结果的常见因素及控制方法

影响酶联免疫吸附试验结果的常见因素及控制方法摘要】酶联免疫吸附试验是免疫酶技术中固相酶免疫测定的一种技术。

ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但是操作中的各个环节对试验的检测结果影响较大，如不注意排除干扰因素，有可能导致显色不全、花板等现象。

现将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。

【关键词】酶联吸附试验影响因素【中图分类号】R392 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）09-0369-021 试剂的因素1.1 试剂的选择试剂的选择是保证血液检测质量的关键要素。

虽然国家采用批批检定的形式对ELISA试剂严格把关，但不同厂家出产的试剂灵敏度与特异性存在一定的差别，要选购知名度相对高、具有“三证”的试剂，不要用无批号的试剂，最好选用与仪器配套的试剂。

更不要使用过期的试剂和混用不同批号的试剂。

使用质劣的试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。

因此。

选择高质量的试剂是保证结果准确的关键之一。

1.2 试剂的准备在临床实验室，对试剂的准备一般不太注意，通常的做法是在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面时间不够的问题，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。

因此，在ELISA测定中试剂的准备最为关键的是，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20～30 min后，再进行测定，使试剂盒在使用前与室温平衡，这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需的温度，以满足后面的测定需求。

2 样本的因素2.1 标本严溶血及混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样的活性，催化底物显色造成假阳性，严重溶血标本禁用。

2.2 标本的污染菌体可能含有内源性辣根过氧化物酶，可使实验出现非特异性显色。

因此，ELISA检测宜采集新鲜标本，如不能当时测定，5 d之内应4℃保存，1周后检测应低温冻存；同时，收集标本采用无菌试管，可防止标本的污染。

影响酶联免疫吸附试验检测结果的原因分析及应对措施

影响酶联免疫吸附试验检测结果的原因分析及应对措施酶联免疫（EliSA）是检验科目前常用的免疫学检测方法之一，其操作方便、简单，不须要特殊设备，使其在各级医院都可应用。

但如果忽视了影响其结果的因素，难免会造成假阴性或假阳性的结果。

因此了解影响结果的因素，是减少差错事故发生很必要的。

1实验室操作人员的基本素质因素实验室人员的素质主要包括五个方面：思想素质、文化素质、技术素质、心理素质、身体素质。

因为我们是为人服务的，所以我们的职业道德水平直接关系到人们的生命健康和生命安全。

如果在工作中出现了张冠李戴，就有可能造成严重后果。

其次文化素质和技术素质很重要，我们必须熟练掌握本专业的基本理论和操作技术。

还要不断努力学习新的理论知识，努力提高业务水平。

有良好的心理素质勇于面对工作中的挫折，在繁忙工作中有条不紊。

所以人员素质问题对检验结果有重要的影响因素。

2标本处理因素实验室人员收到标本后应：“三查七对”，对不符合要求的标本和申请单拒收，合格标本及时分离血清，避免溶血。

提取血清时不能混有大量纤维蛋白或细胞成分，对不能及时检测的标本要妥善保存于4℃冰箱，做好原始记录。

从冰箱取出的标本要预温至室温，对冰冻的样品要融化好，充分混匀再用。

3操作过程的影响因素3.1 操作前应对实验的物理参数有充分的了解，如环境温度（保持在18～25℃），反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等，各种条件必须符合要求。

3.2 正确使用加样器，加样器应垂直加入标本或试剂，避免摩擦包被板底部。

加样过程中避免液体外溅，血清残留在反应孔壁上，加样器吸头要一次性使用，加样次序要与说明书一致，否则易发生错误，造成实验重复性差。

3.3 手工洗板加洗液时冲击力不能太大，洗涤次数不超过说明推荐的次数，洗涤液在反应孔内滞留的时间不宜太长。

不要让洗液造成孔间污染，导致假阴性和假阳性。

3.4 要保证加液量一致，我们在使用时感觉加样器比滴瓶加样准确，滴瓶加液量不准造成显色不一，造成判断错误。

酶联免疫吸附试验检测的影响因素分析

酶联免疫吸附试验检测的影响因素分析发表时间：2014-05-13T09:24:22.107Z 来源：《中外健康文摘》2013年第41期供稿作者：钱瑞[导读] 因其操作简单，灵敏度高，特异性好，经济安全，不需要特殊设备等特点而在临床上广泛应用。

钱瑞（山丹县人民医院 734100) 【摘要】目的通过对酶联免疫吸附试验检测的影响因素分析，探讨各因素对结果的影响，以便寻找解决的方法和加强质量控制，从而保证检测结果的准确性和精确性。

【关键词】酶联免疫吸附试验影响因素分析【中图分类号】R446.61 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）41-0059-02 酶联免疫吸附试验(ELISA)是将抗原抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来，可敏感地检测生物标本中微量的特异性抗体或抗原的临床检验方法，而且其反应中各组分的成本较为底廉，特别是对肝炎病毒的检测，最基层的医院也能开展。

因其操作简单，灵敏度高，特异性好，经济安全，不需要特殊设备等特点而在临床上广泛应用。

为辅助临床诊断与生物科研起到了积极的推动作用。

在从事检验工作多年中深知ELISA测定中影响因素较多，由于其操作步骤复杂，操作过程中每个环节都会对试验结果产生影响，甚至出现错误的结果，因此，必须加强ELISA检测的全面质量控制，保证其结果的准确可靠。

现将影响因素做以分析。

1 材料1.1试剂的准备目各种ELISA试验均有商品化的专用试剂盒。

应选择质量优良、有批准文号且在有效期内的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作。

从冰箱中取出的试剂应放在室温下或37℃平衡30分钟再进行测试。

保存试剂盒的冰箱应经常检查储存温度并做好记录，冰箱应避免频繁开关,试剂使用前应摇匀。

1.2标本的准备酶联免疫吸附实验中标本的质量也是影响结果的关键因素之一，标本的干扰物质容易引起假阳性或假阴性的结果。

1.2.1严格执行样本的查对制度，接受标本应将标本上的标签与申请单逐一核对，验收签字。

酶联免疫吸附试验的常见影响因素及处理方法

成污染或效价降低，可引起假阴性，因此应尽量用新鲜标本。冰
冻标本应避免反复冻融，因冰冻标本的反复冻融产生的机械力
查找原因可能是这批试剂在进入科室前储存温度出现了问题，
与试剂商联系更换新的批号试剂后，此现象消失。
对标本中的蛋白分子有破坏作用，可引起假阴性鹳。
箱中取出，检测时试剂盒可与室温平衡。２标本因素
吸附试验。该试验用已知抗原检测未知抗体，或用已知抗体检
测未知抗原，虽然操作简便，但影响因素诸多，一个环节出现问题，都可能会导致检测的失败。现将酶联免疫吸附试验常见影响因素及处理方法总结如下。
酶联免疫吸附试验的常见影响因素及处理方法
董文婷
（夏县人民医院，山西夏县Ｏ４４４Ｏ０）
临床免疫室开展的乙肝系列、丙肝抗体、艾滋病抗体、梅毒
特异性检测等日常检测工作，最为常用的检测方法为酶联免疫
疫吸附试验中，试剂准备最关键的是使试剂盒在使用前与室温平衡，以满足检测要求，一般检测前３０ｍｉｎ即应将试剂盒从冰
的质量，试剂盒从出厂到用户手中，均要历经运输（如送检、检
定、发货等）及运输中的储存环节，某一环节不当，均影响试剂盒的临床使用质量。去年我科有一段时间所做的表面抗原项
目，今天阳性，同一份标本明天复检有可能是弱阳性甚至阴性，
结果比较ｑ值分别为１．９７，２．０４和１．１２，Ｐ均＞０．Ｏ５。

酶联免疫吸附试验的影响因素分析及控制方法

的方法是：要注意采血手法，心速度，育温度， ① 离孵避免组织液过多的进入血液。 ② 采用二步法操作可以排除Ｈ对ＥＩＡ的影响。③ 良好的洗涤效果可减少ｂＬＳ
非特异吸附的干扰。
事，能有丝毫差错，须克服一切困难，得最满不必取意的效果。
参考文献
１ＣａｏＨ．，ａｃＷ．ＣａｎｚｏｈｍｐｉｎＲＳｃｏＪ，ｒａｚＡ．ＴｅＪ，ｈＴｒｕＳｏｅ．ａｍａｃｒ
３ｍｎ热血清使Ｃｑ活 ‘ 溶血的影响主要是反应０ｉ加ｌ灭。板对血清中Ｈｂ非特异性吸附和细ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ胞内液对血清的的
１１ＬＳ．ＥＩＡ是将酶的催化作用与抗原抗体免疫反应相结合的一种分析技术，低温试验材料影响抗原与抗体免疫反应的特异性，降低酶本身的催化活性，也
从而影响实验结果，故从冷藏环境中取出的试剂及
稀释作用。具有类过氧化物酶活性，以辣根过氧Ｈｂ在
化物酶为标记的ＥＩＡ测定中，如果反应板非特异性ＬＳ吸附Ｈｂ而残留，可催化底物显色引起假阳性。制则控
热变性ＩＧ的固相吸附剂处理。 ③ 检测抗原时，可用ｇ２基乙醇加入到标本稀释液中使Ｒ降解。补体的一巯Ｆ

酶联免疫试验法检测梅毒的影响因素及结果分析

ａｎａｌｙｓｉｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＡｔｏｔａｌｏｆ８８ｐａｒｔｓｏｆｓｙｐｈｉｌｉｓａｎｔｉｂｏｄｙｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｂｌｏｏｄｓａｍｐｌｅｓ，ａｆｔｅｒＴＰ．ＥＬＩＳＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｎｚｙｍｅ — ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙｔｅｓｔｓｙｐｈｉｌｉｓｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇｆａｃｔｏｒｓａｎｄｒｅｓｕｌｔ
ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｆｏｒｓｙｐｈｉｌｉｓａｎｔｉｂｏｄｙｎｅｇａｔｉｖｅ．ＥａｃｈｉＳｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｈｒｅｅ．ｔｈｒｅｅｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｐｒｅｐａｒｅ．ＭｅｔｈｏｄＯｎｅ：Ｐｌａｃｅｔｈｅｓｐｅｃｉｍｅｎｉｎａｒｅｆｒｉｇｅｒａｔｏｒａｔ４ｏＣｏｖｅｍｉｇｈｔ。ｎｄａｓｅｒｕｍｓｅｐａｒａｔｉｏｎ；ＭｅｔｈｏｄＴ１】ｌ，０：Ｄｏｎｏｔａｄｄｎａｎｔａｉｃｏａｇｕｌａｎｔｒａｐｉｄｓｅｒｕｍｓｅｐａｒａｔｉｏｎ；Ｍｅｔｈｏｄｔｈｒｅｅ：ＡｄｄｔｈｅＥＤＴＡａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｅｄｈｕｍａｎｃａｕｓｅｓｖａｒｙｉｎｇｄｅｇｒｅｅｓｏｆｈｅｍｏｌｙｔｉｃｏｒｆｐｌａｓｍａｓｅｐａｒａｔｉｏｎ．Ｕｓｉｎｇａｕｔｏｍａｔｉｃｍｅｔｈｏｄｓｏｒｆｓｙｐｈｉｌｉｓａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｐｏｓｉｔｉｖｅｓａｍｐｌｅｓｂｅｒｅｔｅｓｔｅｄｉｎｔｈｅｎｅｘｔｄａｙ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓａｎｄｍｅｔｈｏｄｓｏｆｔｈｒｅｅｍｅｔｈｏｄｓｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｓｗｅｒｅｌ１．４％，２０．５％，１．１％，ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｅｔｈＯｄ０ｆａｄｉｆｅｒｅｎｃｅｗａｓｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ，

酶免检测技术原理及影响

2、反应环境条件：电解质酸8·碱5度g/LNaCl溶液
酸碱度 pH6--9为宜
温度温最适度温度为37℃
.
11
二、酶免疫技术的分类、特点及原理
.
12
1、酶免技术的分类
.
酶免疫技术
酶免疫组化组织切片或其它标本中抗原的定位
均相 1、酶放大免疫测定技术EMIT 2、克隆酶供体免疫分析CEDIA 小分子激素、半抗原测定
2加样量不一致3孵育时间不一致4洗涤条件不同5操作人员不同阳性对照不显1把终止液误当作酶结合物或底物使用严格按试剂说明书操作加液时看准标签正确稀释洗涤液不要漏加试剂2漏加试剂如酶结合物底物a3蒸馏水被污染或盛洗涤液桶被污染留有使酶失活的物质换用合格水盛蒸馏水的瓶子要洁净现象可能原因解决方法1底物失效或被污染更换底物2加好底物后在保温时受强光或紫外线照射显色时避光保温3反应时间过长准确定时4水浴箱温度过高调准水浴箱温度5加酶量过多50ul误当100ul
.灰区是客观存在的，没有不存在灰区的试剂，我们只是尽量减少灰区的出现比例。 .减少灰区最有效的方法就是尽量将板洗涤干净。
.
33
五、ELISA法检测常见问题及解决方法
.
34
ELISA实验常见问题及解决方法
内源性标本因素：
p 类风湿因子：一般为IgM型，可与变性IgG Fc段非特异结合，因此可能与包
.
35
现象
可能原因
解决方法
1、试剂盒未平衡至室温 2、水浴箱温度不到37℃
实验前试剂盒置于室温平衡30分钟以上
调整水浴箱温度至37℃ 孵育期间不宜多开门
3、孵育时间不够
显色 4、样品加样量偏少
淡 5、酶结合物加样量偏少

影响酶联免疫检测因素的分析

察洗板机针孔内洗液的通畅状况，板机不用时应用去离子水清洗洗几遍。
实验室人员的素质主要包括五个方面：思想素质、文化素质、
技术素质、理素质、体素质。首先应具备一个良好的思想素心身
量保证体系，在操作过程中时刻注意，质控贯穿到整个实验过将
程，包括待标本的采集、输、运处理、操作过程、检验结果的审核、结果的登记与保存、报告单的发放等全过程，而为临床提供正从确可靠的检测结果。
中外医学研究
２１００年１第８卷１月
第２５期ＣＩＥＥＡＤＦＲＩＮＭＥＩＡＥＥＲＨＨＮＳＮＯＥＧＤＣＬＲＳＡＣ
毫曩 ≯≥ ≯≯曩曩≯≯ 曩曩嚣 ≯≯≯ 曩 ∥≯ ≯≯簪曩 ∥
０≯分曩 ≯≯≯
影响酶联免疫检测因素的分析
黄培胜
崇左市人民医院（西崇左５２０）广３２０
【关键词】影响；检测；酶联免疫
酶联免疫吸附试验（ＬＳ是目前临床上最为常用的免疫ＥＩＡ）测定方法之一，由于ＥＩＡ方法灵敏，异性强不需要特殊设备，ＬＳ特所以被广泛应用于各种抗原和抗体测定Ｊ。但在临床实验检测
中，常出现不同的检验科，同的检测人员所测定的检测结果经不
３操作过程的影响因素３１操作前应对实验的物理参数有充分的了解，环境温度．如（８℃ ～５℃ ）反应孵育温度是否符合实验要求。１２、

酶联免疫吸附试验的影响因素

酶联免疫吸附试验的影响因素酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种常用的实验技术，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。

它的原理是通过特异性抗体与抗原结合，再利用酶标记的二抗介导的颜色反应，来定量分析和检测目标物质。

在进行ELISA实验时，有多个因素会对实验结果产生影响，下面将详细介绍其中的几个主要影响因素。

1.试剂的质量ELISA实验的试剂质量对实验结果至关重要。

这包括酶标记抗体和底物酶的纯度、活性，抗原或抗体的纯度和浓度，以及稀释缓冲液的组成和pH值等。

选择高质量的试剂可以提高实验结果的准确性和重复性。

2.样本处理和储存条件样本的处理和储存条件也会对ELISA结果产生影响。

样本的收集、保存和处理方法需要标准化，以确保稳定性和一致性。

如血液或组织样本的离心速度、温度和时间等要控制一致。

另外，样本的冻结和解冻过程也需要避免反复，以防止损坏细胞结构和影响实验结果。

3.特异性抗体的选择ELISA实验需要选择特异性抗体与目标抗原结合。

抗体的选择要考虑其亲和力、特异性和纯度等特性。

如果抗体不够特异性，可能会导致非特异性结合和假阳性结果。

因此，在实验中选择合适的抗体对实验结果至关重要。

4.孵育条件和时间孵育条件和时间对ELISA实验结果也起着重要影响。

这包括孵育温度、时间和摇床的震荡速度等。

不同的试剂和实验需要不同的孵育条件。

孵育温度过高或过低，孵育时间太长或太短，都可能导致结果的偏差。

5.光度计的精度和校准ELISA测量实验结果时需要使用光度计，光度计的精度和校准对结果的准确性和可重复性至关重要。

定期检查和校准光度计以确保其准确性，并遵循使用指南来保持恒定的测量条件。

6.数据分析和计算ELISA实验得到的数据需要进行合理的分析和计算。

如对标准曲线进行拟合和计算待测样品的浓度等。

合理的统计分析和数据处理能够提高实验结果的可靠性。

酶联免疫吸附试验的常见影响因素及处理方法

酶联免疫吸附试验的常见影响因素及处理方法酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)是一种常用的实验技术，用于测定样品中特定蛋白质或抗原的浓度。

然而，在进行ELISA实验时，存在许多可能影响实验结果的因素。

本文将介绍一些常见的影响因素及如何处理这些问题。

1.样品质量：样品质量是影响ELISA实验结果的一个重要因素。

如果样品质量不合格，可能会导致错误的实验结果。

处理方法包括：-选择合适的样品储存条件，避免样品的变性、降解等问题。

-对样品进行适当的纯化和浓缩处理，以提高样品的纯度和浓度。

2.抗体选择：在ELISA实验中，正确选择适合的抗体也是非常重要的。

处理方法包括：-确保抗体的特异性和亲和力，避免与其他非特定蛋白结合。

-对抗体进行亲和纯化，以提高抗体的纯度和活性。

3.反应条件：ELISA实验中的反应条件包括温度、时间、pH等，这些条件的选择直接影响到实验结果的准确性。

处理方法包括：-对反应条件进行优化，确定最佳的温度、时间、pH等参数。

-控制反应时间，避免反应过长或过短而引起实验结果的偏差。

4.检测方法：ELISA实验中常用的检测方法有酶标记物检测、放射性同位素检测、荧光检测等。

不同的检测方法对实验结果的影响也不同。

处理方法包括：-选择合适的检测方法，根据实验的目的和需要进行选择。

-对检测方法进行优化和标准化，以提高检测的准确性和灵敏性。

5.交叉反应：ELISA实验中，样品中的其他成分可能会引起交叉反应，导致实验结果的误差。

处理方法包括：-使用对特定抗原具有高度特异性的抗体，避免与其他非特定抗原结合。

-对样品进行适当的稀释，以减少交叉反应的可能性。

6.数据分析：ELISA实验的数据分析是实验结果的重要环节。

处理方法包括：-使用适当的统计方法对实验数据进行分析，确定浓度或活性的可靠性。

-进行实验重复和平行实验，以确保实验结果的可重复性和准确性。

酶联免疫吸附试验影响因素的分析

【关键词】酶联免疫吸附试验；临床标本；血清样本
中图分类号：Ｒ４４６．６
文献标志码：Ｂ
文章编号：１６７２—９４５５（２００７）１０—９８５—０２
ＥＩＩＳＡ法以微孔板条为固相的测定模式，操作非常简单，其技术条件要点包括：试剂的制备，反应条件的选择和操作标准化。影响因素一般涉及到样本的收集保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面，其中任一步骤的不当都会影响测定结果，现分述如下。１临床标本的收集和保存
维普资讯
检验医学与临床２００７年１Ｏ月第４卷第１Ｏ期ＬａｂＭｅｄＣｌｉｎ，Ｏｃｔｏｂｅｒ２００７，Ｖｏｌ４，Ｎｏ１０
９８５
４．２．２ｗＢｃ假性降低的因素ＷＢＣ凝集素或非特异性凝集素使ＷＢＣ变性破坏及临床用免疫抑制剂的尿毒症患者等。４．３影响ＰＬＴ的因素４．３．１血小板假性升高的因素（１）末梢采血时，非血液成分的污染；（２）微小ＲＢＣ或ＲＢＣ碎片；（３）ＷＢＣ特别是白血病细胞的碎片；（４）细菌人血或污染；（５）溶血不全；（６）冷球蛋白血症的沉淀物；（７）尘粒等。４．３．２血小板假性降低的因素（１）抗凝不充分；（２）血液细小凝结；（３）ＩｇＧ或ＩｇＭ凝集素与血小板ＥＤＴＡ依赖性凝集；（４）糖尿病患者高凝状态等。同时，糖尿病高凝状态对血小板体积、血小板压积、血小板分布宽度均有影响。

论影响酶联免疫吸附试验检测结果的常见因素及控制方法

【王国强．身疾病的心理护理原则和目叨．３１心标实用护理杂志，０．２００『吕．４姝心理护理在眼科护理工作的重要性叨．空航天医药，０７１航２０．
ห้องสมุดไป่ตู้
论影响酶联免疫吸附试验检测结果的常见因素及控制方法
李蓉
摘要：免疫吸附试￣（ａｍｋｄｉｍｎｓｒｅｔＥＩＡ是２世纪７年代发展起来的一种检测技术，具有敏感性高、酶联．ｅｙｅｉｕｏｏｎ，ＬＳ）Ｏｎｌｅｍｂ０因其特异性强、操作简单等优点，广泛应用于各种抗原和抗体的测定，被为辅助临床诊断与生物科研起到了积极的作用。但在ＥＩＡＬＳ的测定过程中，影响其测定结果的因素较多，操作过程每个环节都会对试验结果产生影响，导致错误的测定结果。
病人家属期望不是孤立的，会性变量，多种因素的影并能满足期望的服务是非常重要的，是社受当不能满足期望时，一定要坦诚说明理由，对需求和期望表示理解。解释过程中避免以专并响，主要包括医院因素、个人因素和社会因素等。医院因素是指医院经营管理过程中的各种行为及其结果，主家身份压人，保持平等交流，不断认同病人家属观点，使其得到心要包括服务承诺（括明示承诺、包暗示承诺）服务口碑等，些理宣泄而接受解释理由，和这降低期望值。最后还要学会严格控制病人家属期望。医院急诊科在日常工因素都会对服务期望造成一定的影响。诊科承担突发疾病病人急

解读酶联免疫(ELISA)法测定食品中黄曲霉毒素的影响因素

掉落可以恢复原有序列：为使下次进行实验时方便，掰孔时亦应周全考虑加以顾及。（２）取样及加样：使用加样器吸取样本和试剂时均应柔和不可过快或过缓，略有倾斜加入反应孔靠近底端的侧壁，避免刮擦包被板底部。加样过程中避免液体外溅，加样完成后要轻轻震荡加以混匀。加样次序要与说明书致，否则可导致结果错误，实验重复性差。加入各种试剂和质控品前都要轻轻混匀，并弃去一到两滴，同批号试剂不可混用。不还应注意试剂效期，观察有无异样，并在有效期内使用。（）加样过程要快，尽量保持前后孔温育时间～样，每次加样应更换３新的吸头。（）封板、温育：胶纸不可重复使用；温育时间控制准确。抗原４抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，ＥＩＡ固相免疫测定，原、ＬＳ属抗抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有最贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ＥＩＡ反应总是需要一定时间的温育。Ｌｓ（）手工洗板、拍板及终止：５ａ揭去封板胶纸，弃去孔内液体。甩板时应力度适中，将孔液体一次．性甩出。ｂ．第一次注入洗涤液应为半孔，不可溢出；放置数秒，甩出孔内液体。ｃ第二次，第三次洗板同第一次。唯一不同之处是甩板时需调换液体．倾出孔的方向，这么做是为了洗涤掉反应孔不同边缘的残留酶。ｄ第四、第五次洗板可加入多一些洗涤液，特别是最后一次可加满以．至溢出，不必担心交叉污染。ｅ手工洗板加洗液时冲击力不要太大，并应适当倾斜测量板保证无气泡．产生影响洗涤质量；洗涤次数不要超过说明书推荐的洗涤次数，洗液在反应孔内滞留的时间不宜太长。最初一到三次洗涤不要使洗液在孔间窜流，造成孔问污染。ｆ拍板需尽量扣干。．ｇ．色：将洗好后的酶标板平放，加入显色液，３７℃显色５分钟，显若颜色较浅，可适当延长但不宜超过１０分钟。４判读结果的分析：（１）应在规定时间内完成读数，否则影响结果准确性。（）酶标仪判读要与肉眼判读进行比对，仪器亦存在偶然的误差，甚２至有时候得出截然相反的结果，这也是试验引入仪器的共性问题，加以肉眼观察能予以纠正。

酶联免疫吸附试验技术的影响因素分析

检验医学与临床２１００年１１月第７卷第２２期ＩｂＭｅｌＮｏｅｅＯ０Ｖｏ．，．２ｄＣｉａｎ，ｖｍｂｒ３ｄ结果
ＲＣ贫血；Ｖ值正常，只有ＨｂＲＣ的比值小，就要考ＢＭＣ而／Ｂ那
２讨论
分析和质量控制，实验结果和直方图异常的提示，明原因，对查排出十扰，以便获得准确的实验数据。参考文献
２１冷凝集（Ａ）称冷型自身抗体，Ａ自身或０型人的．Ｃ又ＣＲＣ多发性骨髓瘤，些支原体、Ｂ病毒感染患者，中含Ｂ。某Ｅ血有冷球蛋白可使血中非晶体物质聚集。这例冠心病患者，因受凉而加重心累、嗽，咳双肺感染。但支原体阴性，白细胞总数
体内的水体量要大且保持恒定。使用恒温箱温育时，除保证恒温箱内温度为３７℃ 外，应注意尽量少开启恒温箱门；育时还温
微孔反应板不要叠加。微孔反应板不要置室温温育。严格按
的一检测技术，种因其具有敏感性高、异性强、作简单等优特操
点，广泛应用于各种抗原和抗体的测定［。为辅助ｌ诊断被＝１］临床
与牛物科研起到了积极的推动作用。笔者从事检验工作多年，深知ＥＡ测定中影响因素较多，作过程中每个环节都会ＩＳＩ操

酶联免疫吸附法检测艾滋病抗体的影响因素分析

World Latest Medicne Information (Electronic Version) 2018 Vo1.18 No.40136投稿邮箱：sjzxyx12@·医学检验·酶联免疫吸附法检测艾滋病抗体的影响因素分析梁志辉（通辽市科尔沁区第一人民医院，内蒙古通辽 028000）0　引言自从1981年在美国发现首例由人类免疫缺陷病毒（HIV ）引起的艾滋病以来，初筛实验室越来越重视艾滋病的检测工作。

酶联免疫吸附试验（ELISA ）是检测抗-HIV 最常用的固相酶联免疫试验，定性检测人血清样品中的HIV-1型和HIV-2型抗体和P24抗原。

可用于血清筛查和临床HIV 感染的辅助诊断。

此法特异性强，灵敏度高，重复性好，所用试剂稳定，易保存。

既适合于大批量样本的筛查，也可用于单个样本的测定，但易受到多种因素的影响，造成假阳性或假阴性。

为了提高检测结果的准确性，结合试验对ELISA 法检测抗-HIV 中常见的影响因素进行探讨和分析。

1　材料和方法1.1　材料。

2016年10月至2017年10月，16950例一般住院患者和1080例门诊患者，尽量做到清晨空腹采集静脉血3-5 mL ，分离血清24 h 监测。

1.2　试剂与仪器。

利用北京万泰试剂，采用双抗原夹心法和双抗体夹心法酶联免疫吸附试验法进行检测，注意有效期内使用试剂。

用到的仪器为深圳爱康全自动酶免仪。

1.3　检测方法。

未检测完成的标本可存放冰箱保存，全自动酶免仪检测过程严格按照试剂说明书的具体内容设定和进行操作，建立质控图。

如阴性，出具阴性报告，阳性送至通辽市疾控中心艾滋病确认实验室进行确认，同时做好保密工作。

2　结果全自动酶免仪设定为阴性对照孔两个，平均OD 值≤0.1，同时设定两个阳性对照孔，OD 值≥0.8，临界值=阴性对照孔OD 值+0.12，实验检测的吸光度值不符合阴阳性测定范围，就应检查出现问题的原因，重新检测[1]。

酶联免疫吸附试验检测影响因素探讨

和安伞性好，简便经济的试剂。不同批次的试剂在制作过程且
因受热不均衡所致的周围孑与中央孔结果的吸光度差异（Ｌ即
“ 缘效应 ”）边可将ＥＳ板置于水浴箱中，育时要加封贴１ＡＩ温
检验医学与临床２１００年ｌ１月第７卷第２２期ＩｂＭｅｌ，ｖｍｂｒ０１１！！丝ｄＣｉＮｏｅｅ．！：ａｎ２
酶联免疫吸附试验检测影响因素探讨
杨娜（肃省天水市第三人民医院７１０）甘４００
结果的稳定性。在试剂使用前应先将试剂放置于３ ℃下平衡７
３ｎ以匕。０ｍｉ
影响检测结果，片不能重复使用。封
３３洗涤．洗涤是ＥＡ不同于均相免疫学检测技术的一ＩＳＩ大特征，涤在整个ＥＡ反应过程中虽不是一个反应步骤，洗ＩＳＩ却非常关键。其目的是去除反应体系中与反应无关的成分，包
体的干扰物质。洗涤可采用洗板机或手工洗涤两种方式，般一认为洗板机比手工洗板效果要好。洗板机设置时间、隔、间次
试剂的组成基础上选择多家试剂盒进行比较，选择灵敏度应
３２温育．
３７Ｃ是实验室中最常用的温育温度。温育方式

酶联免疫测定的影响因素

图２
图１：为洗液管和吸液管在同一位置，分内外２
后多次使用，这样会影响检测结果。
圈，其中内圈为加液管，外圈为吸液管，２个孑Ｌ集中为
４洗板机在清洗酶标板反应孔时，加液量应注满（大一个加液管及一个吸液管，其优点是吸干效果较好，残
张春，杨秋婷，隋元德
（河北省承德市北方医院检验科，河北承德０６７０００）
关键词：酶联免疫测定；影响因素；酶标仪；洗板机
中图分类号：Ｒ４４６．１
文献标识码：Ｂ
ＥＬＩＳＡ方法检测各种抗原抗体以其灵敏度高，特
孑Ｌ的边缘，以免造成交叉污染。
次，在加人显色剂后发现出现了假阳性结果，其原因为
６特别提出的是洗板机因其种类较多，国产进口各前排阳性的标本污染第二排所致，特别是做ＨＩＶ时，
异，是造成交叉污染的主要原因，其原理大至两种，如第一次洗板后阳性对照污染其它孔，为吸干时反流造
异性好，方便，简便，易于操作，检测结果可靠性高等原
因，使其在各大、中、小医院得到了广泛应用，由于操作
中所用的酶标仪和洗板机直接关系到检验结果的准确
性，为此，各仪器生产厂家也在不断开发新的产品，国

影响酶联免疫检测因素的分析

折，在繁忙的工作中，有条不紊，冷静沉着地处理有关事务，人员素质是影响检验结果的首要因素。
５采取的措施
要有一个良好的工作环境，洽和谐的工作氛围，融建立ＳＰＯ
２标本处理因素
收到标本后要认真查对，对不符合要求的标本和申请单要
（）２正确使用加样器，应垂直加入标本或试剂，刮擦包被板底部，加样要准，免液体外溅，避血清残留在反应壁上，加样吸头
要用一次性的，避免交叉污染。（）３洗板时（工洗和机洗）应严格按说明书的次数和浸泡手，
查叨．中国皮肤性病学杂志，９８１（）１８１９１９，２３：６－６．
文件，立完善的质量体系；建进行人员的培训，将质控贯彻到整
个实验过程，括待检者的准备，包标本的采集与处理，操作过程，检验结果的审核，果的登记与保存，结报告单的发放等一系列制度，ＩＳ
【中图分类号】Ｒ４４６【文献标识码】Ａ【文章编号】１７ — ７１２０）６１００６３９０（０８０ — ４ — １时间，不要使洗液外溢，造成孔间污染，导致假阴性或假阳性。洗板过程也是影响结果的因素之一，冲力过大，会造成酶结合物丢失，吸光度值偏低。使（）色剂不可过多，４显显色要避光反应，要放够时间，显色时间不够，可使一些滴度低的标本反应不出来，造成假阴性。
【］许萍，３黄锦江．不同温育环境ＥＩＡ检测ＨＶ的比较『ＩＬＳＣＪ．临床检验