缢蛏_Sinonovaculac_省略_微卫星标记的分离及近缘物种通用性_吴雪萍

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低盐压力下缢蛏血淋巴蛋白的比较蛋白质组学研究

摘要: 应用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术及图像分析技术寻找缢蛏在低盐环境压力下血淋巴内 40 kD 以
下小分子蛋白质组差异, 制成肽质指纹图谱, MALDI - TOF- MS 测序, 通过数据库检索快速鉴定蛋白质或多
肽。研究结果表明: 低盐压力下, 缢蛏血淋巴内有多种蛋白质发生变化, 共鉴定出包括磷脂酶 A2 ( Phospho-
P00993
0143
IBP- CarcrCheloniana Caretta carett a 11 9151 66
P18720
0138
Zinc finger protein Xenopus laevis
)
理论等电点 Theoret ical
PI 81 35
)
101 09 81 19
81 67 )
3讨论
11214 图像及质谱分析用 Investigator HT Analyzer Version 2102 图像分析软件进行差异检测。差异点 PMF 样品制备后利用 ProFlex III MALDITOF 质谱仪进行质谱检测[ 5] 。 11215 数据库搜索肽指纹图谱匹配使用 Peptident ( www1expasy1orgPtoolsPpeptident1pI ) 参数设置, 分别为物种来源 ) 后生动物 ( Metazoa) ; Mw ) 表观分子量 ? 30% ; PI ) 不设限制; 酶 ) 胰酶 ( trypsin) ; 允许忽略的酶切位点 1~ 2; 修饰类型 ) 碘乙酰化。
已有越来越多的证据表明蛋白质的合成和分解是机体抵抗环境压力的一种对策, 无脊椎动物可以通过调节其血淋巴自由氨基酸及其它因子的浓度来维持血淋巴渗透压稳定。盐度调节实际上是渗透压调节。

缢蛏

缢蛏广泛分布于中国、日本和朝鲜等国的沿缢蛏广泛分布于中国、海地区，在我国北自辽宁、山东，南至广东、海地区，在我国北自辽宁、山东，南至广东、福建都有分布。其肉丰腴脆嫩，鲜美清甜，建都有分布。其肉丰腴脆嫩，鲜美清甜，药物功效显著，含有蛋白质5.5%，脂肪0.8%， 1.8%，效显著，含有蛋白质5.5%，脂肪0.8%，糖1.8%，无机盐1.1%。除供鲜食外，还可制成蛏干，无机盐1.1%。除供鲜食外，还可制成蛏干，蛏油是沿海居民和港澳同胞喜爱的海产食品。等，是沿海居民和港澳同胞喜爱的海产食品。
1 研究现状 1.1 养殖技术 1.2 人工育苗技术 1.3分子生物学 1.3分子生物学 2 存在问题 2.1 滩涂老化 2.2 饵料 2.3 种质退化 3 发展前景
1 研究现状
1.1 养殖技术
2000 年以来，缢蛏人工育苗技术逐渐成熟，养殖面年以来，缢蛏人工育苗技术逐渐成熟，积不断扩大，江苏、山东等地纷纷引进缢蛏苗种，积不断扩大，江苏、山东等地纷纷引进缢蛏苗种，发展缢蛏养殖业，使其成为北方滩涂养殖的一个新亮点。缢蛏养殖业，使其成为北方滩涂养殖的一个新亮点。周维武等研究并报道了缢蛏全人工养殖的三个主要工作环节，即室内人工育苗、室外越冬暂养和滩涂围网养作环节，即室内人工育苗、成。为了充分利用现有虾池面积，增加养殖户的经济收入，为了充分利用现有虾池面积，增加养殖户的经济收入，目前还有虾、泥蚶、梭子蟹等与缢蛏混养的立体、目前还有虾、泥蚶、梭子蟹等与缢蛏混养的立体、综合生产模式和养殖技术，不仅经济效益可观，生产模式和养殖技术，不仅经济效益可观，而且有利于净化环境和生态平衡，达到了增产增效的目的。净化环境和生态平衡，达到了增产增效的目的。
3 发展前景 3.2 保鲜加工技术急需解决缢蛏目前除鲜食外就是制作蛏干。缢蛏目前除鲜食外就是制作蛏干。而缢蛏壳薄易碎，加之容易腐败，缢蛏壳薄易碎，加之容易腐败，很难长途运输，只能在靠近产地销售，运输，只能在靠近产地销售，大大减少了缢蛏的市场范围，缢蛏的市场范围，有必要研究开发缢蛏保鲜和加工技术。鲜和加工技术。

缢蛏致病菌假单胞菌的分子生物学分析

Ｍｅｅ１（ｉｇｕＫｙＬｂｒｔｙｏｒｅＢｏｃｎｌｙｕｉａＩｓｔｅｏｅｈｏｇ，ｉｎｕｇｎａｉｔ．１Ｊｎｓｅａｏａｒｆｉｉｅｈｏｇ，ＨａｉｎｔｕｆｃｎｌｙＬａｙｎａｇａａｏＭａｎｔｏｈｉｔＴｏ
ｔｄｗｉｈｔｅｔａｉｉｎｍｅｈｄ．Ｔｈ６ＳＤＮＡｒｇｅｔｗａａｌｆｅｒｅｔｈｒｄｔｏｔｏｅ１ｒｆａｍｎｓｍｐｉｉｄｆｏｍｓｒｉｔａｎｌ＃ｂｙＰＣＲ．Ｉｓｅｅｆａｍｅｔｏｔｉｓｔｇｎｒｇｎｓｃｎａｎ１３８４ｂｐ．ＵｓｎｇｔｅＡｌｇｏｔｒｉｈｅＭｇｉｎｓｆｗａｅ，ｔｅｈｏｏｏｕｓｑｎｅｒｏａｅａｈｅｈｍｌｇｓｅｕｅｃｓｗｅｅｃｍｐｒｄｎｄｔｍｏｅｕａｙｏｅｅｉｔｅｗａｌｃｌｒｐｈｌｇｎｔｃｒｅｓ
２２０，ｈｎ；ａｙｉｅｅｈｉｌｘｅｓｎＣｎｅ，Ｇｎｕ２２０，Ｃｉａ２０５Ｃｉ２ＧｎｕＦｓｒＴｃｎａＥｔｉｅｔａｈｙｃｎｏｒａｙ２１０ｈｎ）
ＡｂｔａｔＴｅｅｗｓｏｅｐｔｏｅｉｔａｎｉｏａｅｏＳｎｎｖｃｌｏｓｉｔ，ｗｉｈｗｓｎｍｅ＃ｈｓｒｃ：ｈｒａｎａｈｇｎｃｓｒｉｓｌｔｄｆｍｉｖｏａｕａｃｎｔｃａｈｃａａｄ１．ＴｅＤＮＡｗａｘｒｃｒｒｓｅｔ。ａ

刺参微卫星DNA分子标记的分离及筛选

１３基因组ＤＡ片段同接头的连接．Ｎ
１３１接头的制备．．
ｌｆｅｔｒｈｉｔｇ
将两组寡核苷酸等比例混合，使每组的终浓度为２ｍｌＬ５￣ｏ，降温条件下进行／
５’ＧＡＣＣＴＧＴＧＡＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＴＣＴＴ３’ ＡＧＣＧＣＡＴＣＡＡＧＡＣＴＣＧＧＴｒＡＣＴＧ
ｅ．件设计引物６ｒ０软５５对。
微卫星ＤＡ分子标记的关键技术在于根据微卫星的两翼序列设计出适用的引物。本试验中，作Ｎ
者采用磁珠富集法分离刺参Ａｏｉｏｕ｝ｏｌｓｐｓｃｐｓａｎｕ的微卫星序列，并对其进行分析和初步筛选，以期ｔｈｐｃ
为刺参群体遗传标记研究和良种选育提供有力的分子遗传学研究工具。鉴于微卫星位点的侧翼序列保
究、个体亲缘关系鉴定、遗传病鉴定、分子进化和生物遗传作图等方面。在水产动物方面，李琪等¨ 应用杂交选择法分离出８对皱纹盘鲍微卫星标记，并采用磁珠富集
法对长牡蛎的微卫星克隆进行快速分离；孙效文等采用小片段法和磁珠吸附法获得了普通鲤的微卫星序列并进行了分析；鲁翠云等采用经典生物学方法获得了８个鳙的微卫星序列，并通过Ｐｉ— ２ｒｍ
摘要：采用磁珠富集法分离刺参Ａｏｉｏｕｊｏｉｓ的微卫星分子标记，ｐｓｃｐｓａｎｕｔｈｐｃ共获得阳性克隆１３个，２
其中１６０个含微卫星ＤＡ序列。分析结果表明：Ｎ完美型有４个，占４．８，非完美型有３个，占８５２％９
３．９％，复合型有１，占１．２；重复碱基数以双核苷酸重复最常见，占８．１，双核苷酸６７９个７９％４９％中又以Ｃ／Ｔ重复所占比例最大；在重复次数方面，以重复数为３一Ｉ、ｌ —ｌＡＧＯ次ｌ８次和ｉ３最为＞５次常见，各占３．２、２．２９６％６４％和１．８，重复数达１０次以上的有５个，最多的达到１８次，有２６９％０４８个微卫星序列微卫星含量丰富。筛选的２２对引物中，可产生出扩增产物的有ｌ，其中１引物７对６对

缢蛏基因组DNA的提取及其效果分析(1)

生物技术通报ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹＢＵＬＬＥＴＩＮ・研究报告・２００７年第５期收稿日期：２００７－０４－０４基金项目：大连水产学院科研基金项目作者简介：于颖（１９８２－），女，在读硕士生，研究方向：海洋生物技术通讯作者：王秀利（１９６４－），男，博士，教授；研究方向：水产动物基因工程，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｉｕｌｉｗａｎｇ４１７＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ缢蛏（ＳｉｎｏｎｏｖａｃｕｌａｃｏｎｓｔｒｉｃｔａＬａｍａｒｃｋ）属软体动物门、瓣鳃纲、异齿亚纲、帘蛤目、竹蛏科、缢蛏属，俗称蛏子、青子。

它们大多分布于热带和温带，特别是在我国分布很广，北起辽东半岛，南至海南都有分布。

因其蛋白质和多糖的含量高，肉味鲜美，营养丰富，是我国沿海居民和港澳同胞所喜爱的海产贝类之一。

随着我国经济的快速发展，人们的生活水平不断提高，广大群众对海产品的需求量也日益增大，进而推动贝类养殖业不断发展，缢蛏的养殖业也相继不断扩大，而环境的污染给缢蛏养殖业的发展带来很大的压力。

种质退化［１］是水产养殖业日益面临的三大问题之一，优良的种质是养殖生产实现可持续发展必不可少的物质基础。

基于人们需求和养殖业的可持续发展来说，保护和保存缢蛏的优良性状及种质、防止生产过程中出现种质退化、培育经济性状优良的增养殖新品种对缢蛏养殖业可持续发展具有重要的意义。

近些年来，分子生物学技术飞速发展，并已广泛应用于人及哺乳动物，但在水产业中的应用却方兴未艾。

目前的研究绝大多数应用于种质鉴定、种群遗传结构分析、遗传多样性研究、遗传图谱的构建等方面［２］。

常用的分子技术大多以ＤＮＡ为研究对象，所以ＤＮＡ提取的质量就直接影响下一步的研究结果，稳定的、高质量的ＤＮＡ提取技术就显得尤为重要。

对缢蛏基因组ＤＮＡ的提取方法进行了优化并对所提取的基因组ＤＮＡ进行了质量分析，希望对缢蛏优良种质资源的保存、新品种的培育、多样性研究以及分子标记辅助育种提供技术保障。

缢蛏基因组ＤＮＡ的提取及其效果分析于颖王秀利郑明洁单雪（大连水产学院生命科学与技术学院，大连１１６０２３）摘要：应用酚／氯仿抽提法提取缢蛏基因组ＤＮＡ，并以所提取的基因组ＤＮＡ为材料进行酶切反应及ＲＡＰＤ分析。

缢蛏群体微卫星分析中样本量对遗传多样性指标的影响

供参考。
收稿日期：０９０ — ２２０ — ３１
资助项目：家高技术研究发展计划项目— — 缢蛏高产、逆品种培育（０６国抗２０ＡＡ１Ａ４０；建省海洋与渔业局重点项目—— 缢蛏优良０１）福品种选育与高产养殖技术研究（海渔２００５闽０７１）
法ｎ。关于样本量与群体遗传多样性之间的相关性分析，在部分脊椎动物例如鸡［、］仅１棉铃虫［、蝗］镜］２飞］、鲤ｌ、＿草鱼［的群体遗传分析中有所报道，软体动物的相关研究还未见报道。４］５而利用微卫星标记开展海洋贝类群体遗传结构的研究屡见不鲜，样本量多少缺乏可以借鉴的标准。川但
淡水注入的内湾潮间带中、区软泥滩，下是我国四大养殖贝类之一。关于缢蛏的群体遗传学研究，近几年在
才逐步开展起来。
在群体遗传学研究中，本量的确定是首要步骤之一。样本量过少，分析结果可靠度下降，样其而样本量
摘要：用微卫星标记进行缢蛏（ｉｏｏａｕａｃｎｔｉｔ群体遗传研究时，体的样本量多少对遗传多样性指采Ｓｎｎｖｃｌｓｃｏｒａ）群
பைடு நூலகம்
标准确性有影响。实验设置了ｌ个样本量梯度，对观测等位基因数（）有效等位基因数（）表观杂合度１并Ｎａ，Ｎｅ，（）期望杂合度（）Ｎｉｓ传多样性指数（的变化趋势进行了分析。结果表明，本量与观测等位基因Ｈｏ，Ｈｅ和ｅ’ 遗Ｈ）样

缢蛏5个群体遗传多样性和遗传分化的SNP分析

数量
壳高
壳长
壳宽
全重
Size Shell height (mm) Shell length (mm) Shell width (mm) Total weight (g)
40
18.37±1.75
58.32±6.08
12.90±1.41
7.33±2.03
40
20.05±1.47
59.15±4.37
14.60±1.25
(1. 浙江省海洋水产养殖研究所, 浙江省近岸水域生物资源开发与保护重点实验室, 温州市海洋生物遗传育种重点实验室, 温州 325005; 2. 三门县农业农村局, 台州 317100)
摘要: 利用多态性SNP标记, 采用SNaPShot方法分析了缢蛏(Sinonovacula constricta)5个群体(山东东营群体 DY、浙江乐清群体YQ、福建云霄群体YX、广东湛江群体ZJ及广西钦州群体QZ)的遗传多样性和遗传结构。结果表明, DY、YQ、YX、ZJ和QZ的平均有效等位基因数(Ne)分别是1.754、1.555、1.558、1.533和 1.519; 平均香农指数(I)为0.605、0.501、0.502、0.489和0.471; 平均观测杂合度(Ho)为0.317、0.282、0.282、 0.265和0.285; 平均期望杂合度(He)为0.423、0.336、0.338、0.325和0.313; 平均最小等位基因频率(MAF)为 0.336、0.241、0.238、0.234和0.229; 缢蛏5个群体具有较高遗传多样性。STRUCTURE分析显示所有的缢蛏个体可以划分为5个聚类簇, 5个群体在每个聚类簇中占比为0.075—0.397, 均未聚集到单个聚类簇中; AMOVA分析结果显示, 群体间遗传分化系数(Fst)值为–0.0061—0.0829; 群体两两之间遗传距离为0.0023— 0.0537, Nei’遗传相似度为0.9477—0.9977; UPGMA聚类分析表明乐清群体和云霄群体聚为一支, 湛江群体和钦州群体聚为一支, 东营群体与其他4个群体遗传距离最远, 单独为一支。群体遗传结构分析表明, 群体间遗传变异主要来自群体内部, 群体间具有较高的遗传相似度和较低的遗传分化, 推测缢蛏在养殖过程中频繁的亲贝引种和苗种移养可能是导致群体遗传分化程度不高的主要原因。

缢蛏和长竹蛏中枢神经系统的显微观察

收稿日期:2006207212 基金项目:国家973计划资助项目(G 1999012005). 作者简介:孙虎山(1962—),男,教授,博士,主要从事贝类免疫学研究,(E -mail )s hushan @.缢蛏和长竹蛏中枢神经系统的显微观察孙虎山,王宜艳,武光全(鲁东大学生命科学学院,山东烟台264025)摘要:采用甲苯胺蓝染色法,对缢蛏和长竹蛏中枢神经系统进行了显微观察.结果表明,两种蛏中枢神经系统结构相似,均由脑神经节、脏神经节和足神经节各1对以及脑脏和脑足神经索组成,其中左右脏神经节及足神经节分别愈合.各神经节均由表面的神经节被膜、周边的胞体层和中央纤维网构成.胞体层分层和分区现象不明显,神经元胞体发出的突起均进入中央神经纤维网.胞体根据其大小可分为直径30—45μm 的大型细胞、15—30μm 的中型细胞和6—15μm 的小型细胞3种类型.缢蛏3对神经节内3种类型的细胞均有,且均为大型细胞的数量最少,其中脑神经节内中型细胞最多,脏神经节和足神经节内小型细胞最多.长竹蛏脑神经节内的神经元胞体主要为中型细胞,小型细胞很少,无大型细胞;脏神经节内中型和小型细胞较多,大型细胞较少;足神经节内中型细胞较多,大型和小型细胞较少.关键词:缢蛏;长竹蛏;中枢神经系统;神经细胞;显微观察中图分类号:Q9591215 文献标识码:A 文章编号:167328020(2006)0320216205 有关贝类神经系统显微结构的研究,已有对蜗牛、钉螺、脉红螺和中国蛤蜊等种类的报道[1—4],主要集中在腹足纲,而对双壳纲种类的研究报道较少[4],对许多重要经济双壳贝类神经细胞的分布情况还不了解,从而影响了贝类神经内分泌免疫调节研究的深入开展.缢蛏(Sinonovacula constricta )和长竹蛏(Solen strictus )同属双壳纲、帘蛤目、竹蛏科,广泛分布于我国南北沿海.其中缢蛏在我国已有数百年的养殖历史,是我国四大养殖贝类之一;长竹蛏天然产量大,也有重要的经济价值[5].有关缢蛏和长竹蛏神经系统显微结构的研究尚未见报道.本文采用组织学方法对缢蛏和长竹蛏中枢神经系统的显微结构进行了观察,以期为贝类神经内分泌系统的研究和比较神经生物学研究积累资料.1　材料和方法缢蛏和长竹蛏购自烟台水产市场,水族箱中充气暂养.选取健壮无伤、对外界刺激反应灵敏的缢蛏和长竹蛏各10只,去壳后立即投入Bouin ’s 固定液中,固定12h ;解剖出各神经节,梯度酒精脱水,二甲苯透明,常规石蜡包埋,连续切片,切片厚度7μm ;1%甲苯胺蓝水溶液于60℃浸染40min [6];脱水,透明后中性树胶封片;镜检并拍照记录结果.2　结果缢蛏和长竹蛏中枢神经系统均由脑、脏和足3对神经节及脑脏和脑足4条神经索组成,神经节和神经的分布位置和形态结构均非常相似.由各神经节发出的神经分布到身体的各个部位.甲苯胺蓝染色,神经细胞和神经纤维均着色较好,神经元胞体胞质、核仁和神经纤维呈深蓝色,核质不着色,反差较大.各神经节均由表面的神经节被膜、周边的胞体层和中央纤维网构成.神经节被膜与神经干被膜相延续,神经干及神经索中无神经元胞体,仅有沿神经索方向分布的神经纤维.各神经节的结构和显微结构分述如下.211　脑神经节缢蛏和长竹蛏脑神经节均在唇瓣基部,左右各一,稍呈菱形.2个脑神经节间有1条短的脑联合.由该神经节侧面发出脑2脏神经索与脏神经节相连,后面发出脑2足神经索与足神经节相连,前　鲁东大学学报(自然科学版)　Ludong University Journal (Natural Science Edition )2006,22(3):216—220　面发出外套膜前闭壳肌神经分布到前端外套膜和前闭壳肌,另外发出较细的神经分布到唇瓣、食道、胃、生殖腺和肝胰脏等器官.脑神经节除了和其他神经节联系外,主要是控制身体前端各器官的生命活动. 从切片看,缢蛏脑神经节(图1A )表面常不平,具有大量小的隆起和凹陷,而长竹蛏脑神经节(图2A )表面较平滑.两种蛏脑神经节神经元胞体均只分布于表层,形成胞体层,且分层和分区现象不明显,只是在各条神经发出部位的周围神经元胞体较少.不同大小的细胞混杂分布于胞体层中,较大的胞体主要位于背侧面和外侧面.中央纤维网内的神经纤维主要横向分布,在两侧通至各神经干.图1　缢蛏神经节的显微结构A 脑神经节纵切;B 脑神经节纵切局部;C 脏神经节纵切;D 脏神经节纵切局部;E 足神经节纵切;F 足神经节纵切局部;CG C脑神经节连接神经;CPC 脑足神经索;CT 结缔组织;CVC 脑脏神经索;PN 足神经;RC B 胞体区;RN 中央纤维网;SS 神经节被膜;△大型神经元;▲中型神经元;↑小型神经元神经元胞体呈圆形、卵圆形、梨形或不规则形,由胞体发出的突起均进入中央纤维网.根据胞体大小可分为大、中、小3种类型.大型细胞的胞体呈梨形或不规则形,约30—45μm ,胞质染色较深;胞核圆形或椭圆形,多居于胞质中央,约13—16μm ,染色很浅,核仁一个,大多居于核的一侧,染色很深.中型细胞的胞体多呈梨形,约15—30μm ,胞核多椭圆形,约10—13μm ,核仁一个,　第3期孙虎山,等:缢蛏和长竹蛏中枢神经系统的显微观察217居于核的一侧或中央,细胞各部分着色与大型细胞相似.小型细胞的胞体多呈圆形,约6—15μm ,胞质很少,胞核圆形,居于胞质中央,约5—8μm ,核仁一个,常居于核中央.缢蛏脑神经节内3种类型的细胞均有,中型细胞最多,大型细胞最少(图1B ).长竹蛏脑神经节内的神经细胞主要为中型细胞,无大型细胞,小型细胞也很少(图2B ).图2　长竹蛏神经节的显微结构A 脑神经节纵切;B 脑神经节纵切局部;C 脏神经节纵切;D 脏神经节纵切局部;E 足神经节纵切;F 足神经节纵切局部;CG C脑神经节连接神经;CPC 脑足神经索;CVC 脑脏神经索;G 生殖腺;NF 神经纤维;RC B 胞体区;RN 中央纤维网;SS 神经节被膜;△大型神经元;▲中型神经元;↑小型神经元212　脏神经节缢蛏和长竹蛏脏神经节均为1对,并在中央愈合,略呈四方形,位于鳃的背面,围心腔膜和后闭壳肌交界之腹面.前端发出2条脑脏神经索与脑神经节相连,后端发出2条外套膜后闭壳肌神经,向后延伸,分出一支伸入后闭壳肌,另一支通入后端外套膜和水管,腹侧发出2条短而粗的鳃神经,由鳃基部通入鳃中,另外发出2条很细的肾管围心腔神经和1条极细的直肠神经,分布到围心腔膜、肾管和直肠等器官. 缢蛏(图1C )和长竹蛏(图2C )脏神经节胞体层分层和分区现象也不明显.神经元胞体也分为大、中、小3种类型,大中型细胞一般分布于神经218　鲁东大学学报(自然科学版)第22卷　节近表层,而小型细胞多靠近中央纤维网分布,在神经节前背侧和背外侧大中型细胞相对多一些,胞体的形状、胞核的形状与大小和细胞的着色情况与脑神经节相似.各部位神经元胞体发出的突起也均进入中央纤维网,神经节前部的神经纤维主要纵向分布,向前进入脑2脏神经索;后部的神经纤维则横向分布较多,分别进入外套膜后闭壳肌神经、鳃神经和肾管围心腔神经. 缢蛏脏神经节内小型细胞最多,中型细胞次之,大型细胞最少.大型细胞呈圆形或梨形,胞体直径32μm左右,主要分布于背外侧;中型细胞多呈梨形,胞体直径20μm左右,分布于神经节胞体层各部,仅在神经节后部数量较少;小型细胞呈圆形,胞体直径7μm左右(图1D).长竹蛏脏神经节内神经细胞的数量明显比缢蛏的少,其中小型和中型细胞较多,大型细胞较少,大型细胞多呈梨形,胞体直径36μm左右,也主要分布于背外侧,大型细胞的数量较缢蛏脏神经节稍多一些;中型细胞也多呈梨形,胞体直径18μm左右;小型细胞也呈圆形,胞体直径7μm左右(图2D).213　足神经节缢蛏和长竹蛏足神经节均为1对并愈合成豆形,位于足的基部内脏囊内,分出脑足神经索与脑神经节相连,还分出数条足神经分布于足的各部. 缢蛏(图1E)和长竹蛏(图2E)足神经节神经元胞体除了在神经干发出部位没有分布外,在整个足神经节的表层均有分布,且分层现象也不明显,其中背侧神经元胞体较腹侧多,胞体也较大.胞体的形状、胞核的形状与大小和细胞的着色情况与脑和脏神经节均相似.中央神经纤维网内的大部分神经纤维沿两神经节愈合的方向横向分布,从左右两侧进入脑足神经索,部分神经纤维进入足神经.缢蛏足神经节表面具有大量小的隆起和凹陷,而长竹蛏足神经节表面较平滑. 缢蛏足神经节内小型细胞最多,大型细胞最少.大型细胞胞体直径32μm左右,中型细胞胞体直径18μm左右,小型细胞的胞体大小约6μm (图1F).长竹蛏足神经节内中型细胞较多,大型细胞和小型细胞数量较少.大型细胞胞体直径40μm左右,中型细胞胞体直径25μm左右,小型细胞的胞体直径约7μm(图2F).长竹蛏足神经节内神经元的大小较缢蛏同类型神经元普遍要大一些.3　讨论甲苯胺蓝染色法是组织学和神经生物学中用于对神经细胞内尼氏小体进行特殊染色的方法[6],在医学研究中应用较多,而在无脊椎动物研究中应用较少.本实验采用甲苯胺蓝染色法对缢蛏和长竹蛏中枢神经系统进行了显微观察,结果神经元胞体和神经纤维均着色很深,反差大,效果好.缢蛏和长竹蛏属无脊椎动物中比较低等的软体动物门,笔者曾将此方法用于其他几种贝类神经组织的染色,得到了相似的结果,这说明甲苯胺蓝染色法是用于贝类神经组织染色比较理想的方法. 双壳贝类的中枢神经系统一般由脑神经节、足神经节和脏神经节及脑足神经索和脑脏神经索组成,但神经节的愈合程度是不同的.神经节愈合程度高的类群,在进化上相对比较高等.只有帘蛤科和蛤蜊科的种类1对脑神经节彼此连结,而其他双壳贝类1对脑神经节都是彼此分离的[7],这与根据其他分类特征认为此2科贝类是双壳贝类中最高等的类群的观点相一致.本研究表明,同属竹蛏科的缢蛏和长竹蛏的脏神经节和足神经节均愈合程度较高,与帘蛤科和蛤蜊科的种类相似;而脑神经节彼此分离,与帘蛤科和蛤蜊科的种类又有所不同,说明尽管竹蛏科、帘蛤科和蛤蜊科同属帘蛤目,但竹蛏科要较其他2科低等一些.显微观察表明,缢蛏和长竹蛏神经元胞体根据其大小大致可分为直径30—45μm的大型细胞、15—30μm的中型细胞和6—15μm的小型细胞3种类型,与中国蛤蜊神经元胞体分为大(40—54μm)、中(25—40μm)和小(6—20μm)3种类型相似[4],但均相对小一些,是否是因竹蛏科较蛤蜊科低等,有待进一步研究. 贝类缺乏专门的内分泌器官,已有研究表明,其神经系统的部分神经细胞具有内分泌作用,可分泌激素类物质调节其生理活动[8,9].文[10]从贻贝的足神经节分离出了脑啡肽,其分子组成与哺乳动物体内的脑啡肽相同.文[11]证明贻贝体内的脑啡肽参与其免疫调节等.缢蛏和长竹蛏在进化上较贻贝高等,其神经系统肯定也具有内分泌作用,而哪一类神经细胞为神经内分泌细胞、可分泌哪些调节物质、如何实现对其生理活动的调节等问题均需作进一步研究.　第3期孙虎山,等:缢蛏和长竹蛏中枢神经系统的显微观察219参考文献:[1]　戴鸿佐,李瑞秋.褐云玛瑙螺(Achatina fulica Ferus 2sac )脑神经节显微结构的观察[J ].神经解剖学杂志,1989,5(2):229—234.[2]　李国华,程济民,王秋雨,等.脉红螺(Rapana venosa )神经系统解剖的初步研究[J ].动物学报,1990,36(4):345—351.[3]　金志良.钉螺神经系统的显微解剖[J ].动物学报,1993,39(3):229—238.[4]　王晓安,蒋小满.中国蛤蜊神经系统显微结构的初步研究[J ].动物学杂志,1999,34(4):6—9.[5]　齐钟彦,马绣同,王祯瑞,等.黄渤海的软体动物[M].北京:农业出版社,1989:208—213.[6]　龚志锦,詹洲.病理组织制片和染色技术[M].上海:上海科学技术出版社,1994:98—268.[7]　蔡英亚,张英,魏若飞.贝类学概论[M].上海:上海科学技术出版社,1995:64—65.[8]　Ottaviani E ,Franchini A.Immune and neuroendocrine re 2sponses in m ollusks :the role of cytokines[J ].Acta Biol Hung ,1995,46:341—349.[9]　Nieto 2Fernadez F E ,Alcide K,Rialas C.Heavy metalsand neuroimmunom odulation in Mytilus edulis [J ].Acta Biol Hung ,2000,51:325—329.[10]　Leung M K,S tefano G B.Is olation and iden fication ofenkephalins in pedal ganglia of Mytilus edulis (M ollusca )[J ].Pro Natl Sci US A.1984,81:955—958.[11]　S tefano G B ,Leung M K,Zhao X ,et al.Evidence for theinv olvement of opioid neuropeptides in the adherence and migration of immunocmpetant invertebrate hem ocytes[J ].Proc Natl Acad Sci US A ,1989,86:626—630.Microscopic Observation of the Center N ervous Systems of Tw o R azor ClamsSinonovacula constricta and Solen strictusS UN Hu 2shan ,W ANG Y i 2yan ,W U G uang 2quan(School of Life Science ,Ludong University ,Y antai 264025,China )Abstract :The central nerv ous systems (C NS )of tw o razor clams Sinonovacula constricta and Solen strictus were ob 2served with microscopy by toluidine blue staining procedure.The results are as follows.The C NS of the tw o razor clams are similar ,both of which consisted of one pair of separated cerebral ganglia ,visceral and pedal ganglion cica 2trized with right 2and 2left ganglia ,cerebrovisceral commissure and cerebropedal connective.All of the ganglia have three parts that are a surrounding sheath ,a region of cell bodies and a region of central neuropile.The phenomena of zonation and lamination of neurons in the ganglia are not obvious .Cytoplasmic process from neurons in the gangliaenters central neuropile.According to their sizes ,neurons can be classed into g ood 2sized cells (30—45μm in diame 2ter ),medium 2sized cells (15—30μm in diameter ),pint 2sized cells (6—15μm in diameter ).All the three pairs of ganglia of Sinonovacula constricta have those three kinds of cells ,besides ,the g ood 2sized cells are the least in all of them.Furtherm ore ,the number of medium 2sized cells is the m ost in cerebra ganglia ,while visceral ganglion and ped 2al ganglion have the m ost pint 2sized cells.The majority of neurons in the ganglia of Solen strictus are the medium 2sized ,but fews are the pint 2sized cells and none is the g ood 2sized cells.In its pedal ganglia ,the numbers of the medium 2sized cells are much m ore than that of the g ood 2sized and the pint 2sized.K ey w ords :Sinonovacula constricta ;Solen strictus ;central nerv ous system ;microscopic observation(责任编辑　司丽琴)220　鲁东大学学报(自然科学版)第22卷　。

4个缢蛏群体遗传多样性和系统发生关系的微卫星分析

4个缢蛏群体遗传多样性和系统发生关系的微卫星分析刘博;邵艳卿;王侃;滕爽爽;柴雪良;方军;张炯明;肖国强【期刊名称】《海洋科学》【年(卷),期】2013(000)008【摘要】采用12个微卫星分子标记,对4个不同缢蛏(Sinonovacula Constricta)群体：福建云霄群体、广东湛江群体、天津塘沽群体以及浙江乐清湾群体进行了遗传多样性和系统发生关系的分析。

研究结果显示,12个微卫星共有46个等位基因,4个缢蛏群体的平均观测等位基因数(Ao)、平均观测杂合度(Ho)、平均期望杂合度(He)和平均多态信息含量(PIC)分别为3.25~3.50、0.59~0.74、0.55~0.58和0.46~0.50。

说明4个缢蛏群体遗传多样性处于中等多态。

UPGMA 聚类分析表明：乐清湾群体、天津塘沽群体间的遗传距离最小,亲缘关系最近,首先聚为一支,福建云霄群体和广东湛江群体聚为另一支。

群体的 F-统计量(Fst)为0.07,表明缢蛏群体分化很微弱。

%Twelve microsatellite markers were used to study genetic diversity and phylogenetic relationship of four geographic populations of razor clam Sinonovacula constricta. The four populations were sampled from Yunxiao City of Fujian, Zhanjiang City of Guangdong, Tanggu City of Tianjin and Yueqing City of Zhejiang. The results showed that total of 46 alleles were found among 12 SSR markers. The average observed numberof alleles (Ao) was from 3.25 to 3.50, the average observed heterozygosity (Ho) was from 0.59 to 0.74, the average excepted het-erozygosity (He) was from 0.55 to 0.58 and the average polymorphism information content (PIC) ranged from 0.46 to 0.50, respectively. All of these results indicated thatgenetic diversity of the four populations was at a medium level. UPGMA cluster analysis showed that Yueqing population was clustered with Tanggu population into one clad, then Yunxiao population and Zhanjiang population were in a second group. The value of the F-statistics was 0.07 and this suggested that the four populations of S.Constricta had a relatively lower genetic variation and its genetic structure between populations was weak.【总页数】7页(P96-102)【作者】刘博;邵艳卿;王侃;滕爽爽;柴雪良;方军;张炯明;肖国强【作者单位】浙江省海洋水产养殖研究所浙江省近岸水域生物资源开发与保护重点实验室,浙江温州,325001;浙江省海洋水产养殖研究所浙江省近岸水域生物资源开发与保护重点实验室,浙江温州,325001;浙江省海洋水产养殖研究所浙江省近岸水域生物资源开发与保护重点实验室,浙江温州,325001;浙江省海洋水产养殖研究所浙江省近岸水域生物资源开发与保护重点实验室,浙江温州,325001;浙江省海洋水产养殖研究所浙江省近岸水域生物资源开发与保护重点实验室,浙江温州,325001;浙江省海洋水产养殖研究所浙江省近岸水域生物资源开发与保护重点实验室,浙江温州,325001;浙江省海洋水产养殖研究所浙江省近岸水域生物资源开发与保护重点实验室,浙江温州,325001;浙江省海洋水产养殖研究所浙江省近岸水域生物资源开发与保护重点实验室,浙江温州,325001【正文语种】中文【中图分类】Q959.2【相关文献】1.浙闽沿海缢蛏群体遗传结构的微卫星和线粒体CO Ⅰ序列分析 [J], 牛东红;冯冰冰;刘达博;沈和定;李家乐2.象山缢蛏养殖群体和野生群体遗传多样性的比较 [J], 王冬群;李太武;苏秀榕3.缢蛏群体微卫星分析中样本量对遗传多样性指标的影响 [J], 牛东红;陈慧;林国文;李家乐4.缢蛏5个群体遗传多样性和遗传分化的SNP分析 [J], 滕爽爽;胡高宇;范建勋;柴雪良;肖国强5.乐清湾养殖缢蛏群体遗传结构的微卫星标记分析 [J], 刘博;邵艳卿;滕爽爽;柴雪良;肖国强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

缢蛏生长因子受体结合蛋白2基因克隆、时空表达及SNP筛查

缢蛏生长因子受体结合蛋白2基因克隆、时空表达及SNP筛查赵家熙;崔宝月;董迎辉;姚韩韩;林志华【摘要】To explore the molecular structure and biological function of GRB2 in Sinonovacula constricta (ScGRB2),its cDNA was cloned by SMART RACE techniques,then the bioinformatics,SNPs in exon and expression profiles in different tissues and developmental stages were analyzed.The results indicated that the full length cDNA of Sc-GRB2 gene was 1 223bp,containing a complete 711 bp ORF encoding 236 aminoparisons of animal acid sequence,Sc-GRB2 has high homology with bivalves of Meretrix meretrix and Tegillarca granosa (64 ％ and59 ％).Sc-GRB 2 has homologous with others share 45 ％-58 ％0 similarity,it indicate GRB 2 is relatively conservative.The result of qRT-PCRin different tissues showed that Sc-GRB2 expressed in all seven tissues,the expression of foot was extremely significantly higher than others (P＜0.01).The relative expression in different stages revealed that the expression of juvenile clams was extremely significantly higher than other stages (P＜ 0.01).A total of 11 SNPs in the exon of Sc-GRB2 were identified.%为了探索生长因子受体结合蛋白2 (GRB2)在缢蛏生长发育中的作用,本实验基于缢蛏转录组文库,利用SMART RACE技术克隆缢蛏GRB2(Sc-GRB2)基因的cDNA全长序列,分析其在不同组织和发育时期的表达差异,并在外显子中进行了SNP位点筛选.结果表明,Sc-GRB2基因cDNA全长1 223 bp,开放阅读框711 bp,编码236个氨基酸;氨基酸序列比对发现,缢蛏与文蛤、泥蚶等双壳贝类同源性较高(64％00、59％),而与其他物种的同源性为45％～58％,表明GRB2基因比较保守;不同组织的荧光定量PCR (qRT-PCR)结果显示,Sc-GRB2基因在缢蛏7个组织中均有表达,其中足中的表达量极显著地高于其他6个组织(P＜0.01);在8个发育时期的表达差异分析发现,该基因在稚贝期表达量极显著地高于其他7个时期(P＜0.01).SNP位点筛选结果表明,在Sc-GRB2基因的外显子区域共发现11个SNP位点.【期刊名称】《海洋学报（中文版）》【年(卷),期】2018(040)002【总页数】8页(P87-94)【关键词】缢蛏;生长因子受体结合蛋白2;克隆;SNP【作者】赵家熙;崔宝月;董迎辉;姚韩韩;林志华【作者单位】浙江万里学院浙江省水产种质资源高效利用技术研究重点实验室,浙江宁波315100;上海海洋大学水产与生命学院,上海201306;浙江万里学院浙江省水产种质资源高效利用技术研究重点实验室,浙江宁波315100;浙江万里学院浙江省水产种质资源高效利用技术研究重点实验室,浙江宁波315100;浙江万里学院浙江省水产种质资源高效利用技术研究重点实验室,浙江宁波315100【正文语种】中文【中图分类】P917.41 引言生长因子受体结合蛋白2 (growth factor receptor-bound protein 2， GRB2)，是一种重要的接头蛋白，它通过对上游受体激酶的调控参与各类细胞的信号转导，从而影响细胞的增殖、生长、分化[1-3]。

缢蛏 (Sinonovacula constricta) cDNA 文库的构建及肌动蛋白基因的研究

第41卷第1期海洋与湖沼Vol.41, No.1 2010年1月OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICAJan., 2010* 国家高技术研究发展计划(863计划), 2006AA10A410号; 长江学者和创新团队发展计划, 2007—2009; 宁波市科技局资助项目, 2006C100041号; 宁波市海洋渔业局资助项目, 2006—2008。

秦玉明, 硕士研究生, E-mail ：qinym99@① 通讯作者: 苏秀榕, 教授, E-mail ：suxiurong@ 收稿日期: 2008-12-27, 收修改稿日期: 2009-02-21缢蛏(Sinonovacula constricta )cDNA 文库的构建及肌动蛋白基因的研究*秦玉明1 苏秀榕1①李晔1 马斌1 李惠1王孟前1 贺静静1 李太武1, 2(1. 宁波大学生命科学与生物工程学院宁波 315211; 2. 宁波城市职业技术学院宁波 315100)提要采用SMART(switching metchanism at 5’ end of RNA transcript)技术构建缢蛏cDNA 基因文库。

并对cDNA 文库的滴度, 重组率和插入片段的大小进行了检测。

结果表明, 该cDNA 文库的滴度为5.50×104 cfu/ml, 重组率为92.5%, 插入片段的长度大多在1kb 以上。

对478个克隆子进行了测序, 共得到430个有效序列, 其中166个序列无同源性, 264条序列具有同源性。

从中得到肌动蛋白(actin)cDNA 的全长1538bp, 开放阅读框(ORF)为1131bp, 编码376个氨基酸, 其预测蛋白的分子量为41.78kD, 等电点为5.30。

该氨基酸序列与其它物种的同源性大都在90%以上。

关键词缢蛏, cDNA 文库, 序列分析, 肌动蛋白基因中图分类号 S968.3缢蛏(Sinonovacula constricta )俗称蛏子、蜻、海蛏, 属软体动物门(Mollusca), 瓣鳃纲(Lamellibranchia)、异齿亚纲(Heterodonta)、帘蛤目(Veneroida)、竹蛏科(Solcnidoe)、缢蛏属(Sinonovacula )。

缢蛏的染色体研究

缢蛏的染色体研究
王金星;赵小凡;周岭华;相建海
【期刊名称】《海洋与湖沼》
【年(卷),期】1998(29)2
【摘要】于1994年8月在山东省威海和青岛市沿海采集缢蛏，运用PHA每克体重8×10-6g）和秋水仙素（每克体重2—3×10-6g）体内注射法，以其鳃组织为材料，对缢蛏的染色体进行分析研究。

结果表明，缢蛏的二倍体数目为2n＝38，核型为26m＋8sm＋2st＋2t，NF＝72。

C-带核型展示，有7对染色体恒定地出现C-带，均为端带。

银染核型表明，有一对中着丝粒染色体具Ag－NOR带。

银染带可以作为一种遗传标记。

【总页数】1页(P191)
【作者】王金星;赵小凡;周岭华;相建海
【作者单位】山东大学生命科学学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q959.215.4
【相关文献】
1.凡纳滨对虾-缢蛏生态循环养殖池塘中浮游植物群落结构与水质因子相关性研究[J], 骆云慧; 李来国; 赵淳朴; 王丹丽; 徐善良; 徐继林
2.两种前处理对贮藏过程中缢蛏品质的研究 [J], 杨留明;胡远辉;吕春霞;杨华;曹少谦;张慧恩;戚向阳
3.海水池塘养殖缢蛏病原研究 [J], 袁甜
4.斑节对虾、青蟹、缢蛏半咸水土塘生态混养模式研究 [J], 赵艳飞;黄凌光;熊向英
5.拟穴青蟹、斑节对虾和缢蛏不同混养系统氮、磷收支的研究 [J], 赵艳飞;钟声平;王贤丰;黄凌光;刘旭佳;熊向英
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