番茄的植物组培

番茄的植物组培

14生物科学一班

201412200501026 朱少峰

摘要

目的：传统西红柿中的番茄红素含量相当少，并且大量存在于西红柿籽周围的类脂物中，所以我们希望通过植物组培的方法获得高产量番茄红素的番茄。方法：先对番茄种子进行杀菌消毒，进行培育，再利用培养的幼苗选取外植体进行愈伤组织培养，发育成成熟植株。结果：得到了高产量番茄红素的番茄。结论：利用组织培养而成的番茄番茄红素的产量较传统种植多。

关键词：番茄红素愈伤培养激素配比外植体培养

前言

番茄营养丰富，风味香郁，深受人们的喜爱，在世界各地被广泛种植，成为各国的主要蔬菜作物之一。由于它是典型的双子叶植物，具有自花授粉、染色体图谱较清楚、较易栽培等优点，成为生物学领域研究最多的模式植物之一。近年来发现番茄中的番茄红素和胡萝卜素具有抗氧化、治疗各种癌症等功能，因此其食用价值和经济价值备受关注。

一、试验主要仪器和试剂

仪器

烧杯（100ml 3个，用于放初步处理后的外植体；1L 1个，用作废液缸；250ml 3个，包好牛皮纸后灭菌，分别装酒精、升汞和无菌水）、电子天平、称量纸（若干）、钥匙（若干）、玻璃棒（一根）、量筒（100ml和10ml各1个），胶头滴管（1个）、高压灭菌锅、超净工作台、保鲜膜、酒精灯、记号笔（或标签纸）、培养皿、试管

试剂

75% 酒精、大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、铁盐母液、无菌水、

0.1%HgCl2、蔗糖、琼脂、6-BA、NAA

二、实验方法

1培养基的选择

番茄汁50mL 酵母抽提液5g 肉膏10g 乳糖20g 葡萄糖2g k2HPO4 2g 吐温80 1g 乙酸钠5g 琼脂15g 水加至1000mL pH6.8±0.2

2.MS培养基（1L）

大量元素50ml 钙盐50ml 微量元素10ml 维生素10ml 铁盐5ml 糖50g 肌醇0.1g 琼脂4.5g

注意：1）要在前种物质全部溶解后才能加入后种物质。

2）加热过程中要不停地搅拌。

当半成品的溶液沸腾时立即从电炉上取下搪瓷杯，放在实验桌上，用玻璃棒沾取少量的液体滴在酸性ph试纸上，用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调整液体的pH至5.6—5.8，最后在搪瓷杯中用蒸馏水定容至1L

3.培养基的分装

准备30支试管，分成两组，一组不添加任何激素，一组添加6-BA、NAA激素

4.番茄种子的处理

自来水冲洗种子20min；0.1%氯化汞的浸泡5~10min，依照种皮硬度而定，所以番茄种子我们只消毒5min；然后用无菌水冲洗4次；

5.接种

1）将所需物品放入超净工作台：三种实验材料、灭菌好的培养基、无菌水、培养皿、吸水纸、操作工具、空烧杯、75%酒精、0.1%升汞溶液、废液缸、刀片、酒精灯、打火机

2）进入接种室前，需要洗净手和手腕。进入超净工作台内需用75%酒精纱布擦拭手、手腕，再擦培养基瓶和超净工作台。

3）剪、镊消毒：接种前剪、镊应插入75%酒精瓶中，取出后置于酒精灯外焰上彻底灼烧，灼烧时应将剪口、镊口张开，烧至剪、镊上火焰熄灭为止，冷却后方可进行接种。接种后仍需灼烧并插回75%酒精的磨口瓶待用。注意每次取出时剪口并拢，不可接触磨口瓶和其它器皿，并保持尖端向下。

4）种子接种：将处理好的种子无菌操作放进准备好的果酱瓶培养基中，一般放2~3颗

5）外植体的处理

1.选取番茄的茎尖。再生能力强，其次是遗传稳定性好。

2.外植体的初处理。将外植体置于医用口缸内，用皂粉清洗干净附着在材料上的泥沙等杂质；并用自来水冲洗干净。

3.外植体的消毒灭菌。将初处理过的材料在无菌操作台上用75%酒精表面消毒10s，再用无菌水冲洗2—3次；然后再用10%次氯酸钙消毒10—15min（此步骤能有效杀灭真菌），再用无菌水冲洗2—3次；然后再用3‰升汞（Hgcl2）消毒10min（此步骤能有效钝化细菌），再用无菌水冲洗2—3次，洗净附着在材料上的药剂。

4.将消毒灭菌后的外植体置于灭过菌的滤纸上，吸干水分。

5.接种时，用剪刀去除外植体取材时的伤口部位，以尽力保障接种材料不带菌。6）注意事项

①操作人员的头、胳膊等不得进入台内

②操作人员不得随意谈话、说笑，以免造成污染

③用酒精对双手消毒时，务必待酒精彻底挥发后再靠近酒精灯火焰，以免火焰伤

④台外人员走动要轻、动作要小

6.培养：

培养室的温度应控制在25~28℃，每日光照时间为10~12h，光照强度为

1600~2000lx。此外还要定期观察是否出现污染。

7.实验结果观察和分析

在接种后的一周、两周和三周，分别观察各锥形瓶内愈伤组织的形成情况和污染情况，做好记录工作。在三次记录工作完成之后对结果进行分析，计算出诱导率和污染率，并做相应的实验结果分析。

诱导率（%）=形成愈伤组织数/总接种数×100

污染率（%）=污染数/总接种数×100

8.实验结果

试管中种子成功发芽，但仍有很多种子因污染问题不能发芽。

9.讨论

本次实验首先第一感觉是很难，因为教学与实验之间相隔一个很大的空白期，所以实验的时候并没有很好的运用理论课的只是，而是盲目的跟随他人的操作，导致污染率其高。有些组的外植体完全被污染了，所以实验失败。对番茄种子的消毒过程操作不熟练。然而，有些添加的激素的试管中，番茄种子成功发芽，也变命了通过完善的激素配比，可以使番茄发芽率进一步提高

10.参考文献

1.雷0柱，胡0荣生物工程下游技术实验手册北京.科学出版社，2010-11

2.薛殿恩．浅谈无公害番茄的栽培技术［J］．农村经济与科技，2011(1) :39 －43．

3.陆云华，张新，马立新．蕃茄叶片再生系统建立的研究［J］．江西农业学报，2005(4) :25 －27．

4.刘庆昌，吴国良．植物细胞组织培养［M］．北京: 中国农业大学出版社，2003: 242 －245．

5.潘瑞炽，王小菁，李娘辉．植物生理学［M］．北京: 高等教育出版社，2008: 175