核酸的实验
核酸测定实验报告生化
一、实验目的1. 掌握核酸定量测定的基本原理和方法。
2. 学习紫外分光光度法测定核酸含量的原理和操作步骤。
3. 培养实验操作技能，提高实验数据分析和处理能力。
二、实验原理核酸（DNA和RNA）是生物体内的重要生物大分子，具有共轭双键系统，能吸收紫外光。
紫外分光光度法是测定核酸含量的一种常用方法，其原理基于核酸在特定波长（如260 nm）下的紫外吸收强度与核酸浓度成正比的关系。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：核酸样品、标准核酸溶液、蒸馏水、无水乙醇、氯仿、异戊醇等。
2. 仪器：紫外分光光度计、电子天平、移液器、试管、容量瓶、离心机等。
四、实验步骤1. 样品制备：取一定量的核酸样品，用无水乙醇沉淀，离心去除杂质，然后用蒸馏水溶解。
2. 标准曲线制作：配制一系列不同浓度的标准核酸溶液，在260 nm波长下测定其吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度（ng/μL）为横坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：取适量制备好的核酸样品，在260 nm波长下测定其吸光度，从标准曲线上查找对应的浓度。
4. 结果计算：根据样品浓度和样品体积，计算核酸含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线：绘制标准曲线，发现吸光度与浓度呈线性关系，相关系数R²大于0.99，说明该实验方法具有较高的准确性和可靠性。
2. 样品测定：对制备好的核酸样品进行测定，得到其吸光度，从标准曲线上查找对应的浓度。
3. 结果计算：根据样品浓度和样品体积，计算核酸含量。
六、实验讨论1. 实验过程中，应注意操作规范，避免样品污染和仪器误差。
2. 核酸样品的制备对实验结果影响较大，应确保样品的纯度和浓度。
3. 在绘制标准曲线时，应注意选择合适的浓度范围，确保线性关系良好。
4. 实验过程中，应注意紫外分光光度计的校正和维护，确保仪器性能稳定。
七、实验结论本实验通过紫外分光光度法成功测定了核酸含量，结果表明该方法具有较高的准确性和可靠性。
在实验过程中，我们掌握了核酸定量测定的基本原理和操作步骤，提高了实验操作技能和数据分析和处理能力。
核酸的检验实验报告
一、实验目的1. 了解核酸的基本概念和生物学意义。
2. 掌握核酸提取、纯化和鉴定方法。
3. 熟悉紫外分光光度法测定核酸含量的原理和操作。
4. 通过实验验证核酸的特性和功能。
二、实验原理核酸是生物细胞中携带遗传信息的生物大分子，主要由核苷酸组成。
根据碱基排列顺序的不同，核酸分为DNA和RNA两种。
DNA主要存在于细胞核中，RNA主要存在于细胞质中。
1. 核酸提取：通过破碎细胞，使核酸从细胞内释放出来。
2. 核酸纯化：通过层析等方法，去除杂质，获得纯净的核酸。
3. 核酸鉴定：通过电泳、紫外分光光度法等方法，对核酸进行定性和定量分析。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 鲜鸡肝组织- 氯化钠- 氯化镁- 磷酸盐缓冲液- 乙醇- 异丙醇- 0.1% 溴酚蓝- 1% 琼脂糖- 核酸提取试剂盒- 紫外分光光度计- 凝胶成像系统- 离心机2. 实验试剂：- Tris-HCl缓冲液- EDTA- 氢氧化钠- 氯化钠- 乙醇- 异丙醇- 0.1% 溴酚蓝- 1% 琼脂糖四、实验步骤1. 核酸提取- 将鲜鸡肝组织剪碎，加入适量Tris-HCl缓冲液和EDTA，用玻璃棒搅拌。
- 加入等体积的氯仿/异戊醇（24:1），剧烈振荡。
- 12,000 rpm离心10分钟，取上清液。
- 加入等体积的95%乙醇，沉淀核酸。
- 12,000 rpm离心5分钟，弃去上清液。
- 加入适量70%乙醇洗涤沉淀，12,000 rpm离心5分钟。
- 弃去上清液，用无菌去离子水溶解沉淀。
2. 核酸纯化- 将核酸溶液加入琼脂糖凝胶电泳槽，进行琼脂糖凝胶电泳。
- 用凝胶成像系统观察电泳结果，将目的条带切割下来。
- 将切割下来的核酸条带用胶回收试剂盒纯化。
3. 核酸鉴定- 将纯化的核酸溶液用紫外分光光度计测定其含量。
- 将核酸溶液进行电泳，观察条带，确定核酸类型。
五、实验结果与分析1. 核酸提取：通过实验，成功提取出鸡肝组织中的核酸。
2. 核酸纯化：通过琼脂糖凝胶电泳，成功纯化出核酸。
核酸鉴定实验报告
一、实验目的1. 掌握核酸鉴定实验的基本原理和方法。
2. 学习利用紫外分光光度法测定核酸的浓度和纯度。
3. 了解核酸提取和纯化的方法，以及核酸完整性的鉴定。
二、实验原理核酸是生物体内的重要生物大分子，包括DNA和RNA。
核酸的鉴定主要包括浓度/纯度鉴定和完整性鉴定。
1. 浓度/纯度鉴定：核酸中的碱基具有共轭双键，对紫外光有较强的吸收特性。
紫外分光光度法可以测定核酸在260nm和280nm处的吸光度，通过计算两者的比值（A260/A280）来判断核酸的纯度。
A260/A280比值接近1.8时，表示核酸纯度较高。
2. 完整性鉴定：核酸的完整性可以通过琼脂糖凝胶电泳进行分析。
DNA和RNA分子在琼脂糖凝胶中的迁移速率与其分子大小有关，通过比较不同分子大小的核酸片段在凝胶中的迁移距离，可以判断核酸的完整性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 核酸样品- 标准DNA和RNA样品- 琼脂糖- Tris-HCl缓冲液- NaOH- 10×TBE缓冲液- 0.5×TBE缓冲液- 100bp DNA ladder- DNA marker- 电泳仪- 紫外分光光度计2. 实验仪器：- 离心机- 烧杯- 电子天平- 移液器- 玻璃棒- 琼脂糖凝胶电泳槽- 紫外透射仪四、实验方法1. 核酸浓度/纯度鉴定- 将核酸样品稀释至适当浓度。
- 使用紫外分光光度计测定样品在260nm和280nm处的吸光度。
- 计算A260/A280比值，判断核酸纯度。
2. 核酸完整性鉴定- 配制琼脂糖凝胶电泳样品。
- 将样品和DNA marker加至琼脂糖凝胶孔中。
- 电泳。
- 使用紫外透射仪观察凝胶，记录核酸片段的迁移距离。
五、实验结果与分析1. 核酸浓度/纯度鉴定- 核酸样品的A260/A280比值约为1.8，说明核酸纯度较高。
2. 核酸完整性鉴定- 核酸片段在凝胶中的迁移距离与DNA marker的迁移距离相符，说明核酸完整性较好。
核酸成分实验报告
一、实验目的1. 学习核酸的提取方法。
2. 鉴定核酸的组成成分，包括戊糖、磷酸和碱基。
3. 掌握比色法测定核酸含量的原理和方法。
二、实验原理核酸是生物体内的重要生物大分子，包括核糖核酸（RNA）和脱氧核糖核酸（DNA）。
核酸的组成成分主要包括戊糖、磷酸和碱基。
本实验通过提取动物组织中的核酸，鉴定其组成成分，并测定核酸含量。
1. 核酸提取：利用组织匀浆和酚-氯仿法提取动物组织中的核酸。
2. 组成成分鉴定：通过酸水解法使核酸水解，然后利用比色法分别测定戊糖、磷酸和碱基的含量。
3. 核酸含量测定：利用定磷法测定核酸中的磷含量，进而推算出核酸含量。
三、实验器材与试剂1. 实验器材：组织匀浆器、离心机、分光光度计、电炉、水浴锅、试管、吸管、刻度管、容量瓶等。
2. 实验试剂：动物组织匀浆剂、酚、氯仿、异丙醇、NaCl、NaOH、HCl、磷酸二氢钾、钼酸铵、硫酸等。
四、实验步骤1. 核酸提取：（1）取动物组织匀浆剂，加入动物组织匀浆，匀浆后加入酚-氯仿混合液（1:1），充分振荡，静置分层。
（2）将上层含核酸的酚相转移至新试管中，加入等体积的氯仿，充分振荡，静置分层。
（3）将上层含核酸的氯仿相转移至新试管中，加入等体积的异丙醇，充分振荡，静置沉淀。
（4）弃去上清液，将沉淀用少量70%乙醇洗涤，弃去洗涤液，真空干燥，得到核酸粗制品。
2. 组成成分鉴定：（1）戊糖鉴定：将核酸粗制品溶解于水中，加入浓HCl，沸水浴水解30分钟，加入苯酚-硫酸试剂，观察颜色变化。
（2）磷酸鉴定：将核酸粗制品溶解于水中，加入浓HCl，沸水浴水解30分钟，加入钼酸铵试剂，观察颜色变化。
（3）碱基鉴定：将核酸粗制品溶解于水中，加入浓HCl，沸水浴水解30分钟，加入硝酸钠试剂，观察颜色变化。
3. 核酸含量测定：（1）标准曲线绘制：配制一系列不同浓度的标准磷溶液，测定其在特定波长下的吸光度，绘制标准曲线。
（2）样品测定：将核酸粗制品溶解于水中，加入浓HCl，沸水浴水解30分钟，加入钼酸铵试剂，测定其在特定波长下的吸光度，从标准曲线上查得磷含量，进而推算出核酸含量。
做核酸过程实验报告
一、实验目的1. 熟悉核酸提取、纯化的基本原理和方法。
2. 掌握核酸的定量分析方法。
3. 了解实验过程中可能遇到的问题及解决方法。
二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，包括DNA和RNA。
核酸提取、纯化是分子生物学实验中常用的技术，目的是获取高纯度的核酸。
本实验采用酚-氯仿法提取DNA，通过乙醇沉淀、氯化钠盐析等方法进行纯化，最后采用紫外分光光度法对核酸进行定量分析。
三、实验材料1. 实验动物（如鸡血、鸭血等）；2. 生理盐水；3. 无菌器械；4. 酚-氯仿混合液；5. 95%乙醇；6. 0.1mol/L NaCl溶液；7. 1mol/L Tris-HCl（pH 8.0）；8. 紫外分光光度计；9. 电子天平；10. 移液器；11. 离心机；12. 玻璃器皿等。
四、实验方法1. 核酸提取（1）取实验动物血液，加入生理盐水稀释；（2）用无菌器械将血液移入离心管，加入等体积的酚-氯仿混合液；（3）充分振荡，室温下静置10分钟；（4）4℃、12000r/min离心10分钟；（5）将上清液转移至另一离心管，加入等体积的95%乙醇；（6）室温下静置30分钟；（7）4℃、12000r/min离心10分钟；（8）弃去上清液，用少量70%乙醇洗涤沉淀；（9）4℃、12000r/min离心5分钟；（10）弃去上清液，晾干沉淀。
2. 核酸纯化（1）将晾干的核酸沉淀溶解于1mol/L Tris-HCl（pH 8.0）；（2）加入0.1mol/L NaCl溶液，调节pH至7.0；（3）4℃、12000r/min离心10分钟；（4）取上清液即为纯化的核酸。
3. 核酸定量分析（1）取纯化后的核酸溶液，用紫外分光光度计测定A260、A280；（2）计算核酸浓度：C（ng/μl）=（A260×50）×10^-9；（3）计算DNA和RNA的相对含量：DNA相对含量=（DNA浓度/总浓度）×100%；RNA相对含量=（RNA浓度/总浓度）×100%。
核酸的提取与鉴定实验报告
核酸的提取与鉴定实验报告
实验报告：核酸的提取与鉴定
I. 实验目的：
通过实验学习核酸提取和鉴定的步骤，掌握核酸提取实验技能，初步了解PCR技术及其在分子生物学中的应用。
II. 实验原理：
DNA分子在水性条件下具有极强的极性，由此，在化学性质上只要是极性且亲水性的溶剂都能迅速膨胀和破裂DNA分子的双链
结构，并溶解其中的碱基、核苷酸、脱氧糖等。
利用这一原理，
我们可以用溶液来提取含有核酸的样品，然后通过紫外吸光度计
检测该提取物中核酸的含量。
此外，PCR技术是一种被广泛运用
于DNA扩增的技术，其主要原理是通过DNA聚合酶扩增DNA
的特定片段。
III. 实验步骤及结果：
1. 核酸提取：将实验样品加入细胞破解液并混匀，离心后取上
清液，加入等体积的异丙醇，轻轻振荡混合并离心15分钟，然后
弃上清液，加入70%无水乙醇并离心，倒掉液体后用氧气吹干。
最终的核酸提取物的溶解液浑浊且无法肉眼辨认样品。
2. 核酸鉴定：将已经提取的样品分别用紫外吸光度计测量其光密度，结果表明与对照的D.W相比，样品中的核酸具有极高的光密度值，证明核酸提取步骤成功，核酸鉴定实验成功。
IV. 结论：
通过本次实验，我们成功地提取了样品中的核酸，并对提取后的核酸进行了鉴定，证明提取物中含有大量的核酸，表明核酸提取和鉴定实验成功，也为分子生物学的研究提供了基础。
核酸的三个经典实验
核酸的三个经典实验
核酸作为生命体中重要的分子之一，在生物科学研究中一直受到广
泛的关注和研究。
其中，三个经典实验为我们揭示了核酸的诸多奥秘。
一、格里菲斯实验
格里菲斯实验是关于DNA遗传功能的一个经典实验，通过对肺炎鸭脖
型链球菌的实验，证实了DNA是遗传物质的假说。
实验具体步骤为：
1.将一种血清型的致病菌进行高温灭杀处理，使其失去致病性，称为S
菌株；
2.将另一种未致病型的菌株进行低温处理，使其失去了多糖胶囊，称为
R菌株；
3.将S菌株的DNA加入R菌株中，使R菌株具有了多糖胶囊，从而具
有了致病性；
4.将混合后的细菌进行培养，发现菌落具有了多糖胶囊，具有致病性。
二、烟草花叶病毒的二倍体实验
烟草花叶病毒的二倍体实验是关于RNA复制机制的一个重要实验，揭
示了RNA自身复制是可能的。
实验具体步骤为：
1.将烟草花叶病毒的RNA转录为DNA，得到cDNA；
2.将cDNA单链的反向互补部分配对形成二级结构；
3.通过加入反转录酶、引物等辅助材料，使其形成双链DNA；
4.将形成的双链DNA重复反转录，得到多个双链DNA。
三、梅森实验
梅森实验是关于RNA的关键实验，发现RNA能作为病毒遗传物质，驳斥了DNA遗传物质的唯一性的假设。
实验具体步骤为：
1.取小鼠肝脏细胞质，离心制备出细胞核和细胞质的分离物；
2.将分离物分别与病毒RNA进行混合，分别进行注射给小鼠；
3.发现注射了RNA的小鼠出现症状，证明RNA具有病毒遗传信息的功能。
综上所述，这三个经典实验为我们揭示了核酸的许多奥秘，对于生物学的发展和理解具有极其重要的意义。
核酸纯度检测实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握核酸纯度检测的原理和方法。
2. 熟悉紫外分光光度法在核酸纯度检测中的应用。
3. 了解核酸纯度检测的重要性及其在分子生物学研究中的应用。
二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，其纯度直接影响到后续实验结果的准确性。
核酸纯度检测主要依据核酸、蛋白质和杂质的紫外吸收特性。
在紫外光谱范围内，核酸的最大吸收峰通常位于260nm，蛋白质的最大吸收峰位于280nm。
通过测定核酸样品在260nm和280nm处的光密度值（OD值），可以计算出核酸的浓度和纯度。
三、实验材料1. 试剂：核酸提取试剂盒、超纯水、无RNA酶DNase、RNase、10×TE缓冲液、酚/氯仿/异戊醇溶液、无水乙醇、75%乙醇、SDS、NaCl等。
2. 仪器：紫外分光光度计、高速离心机、微量移液器、Eppendorf管等。
四、实验方法1. 核酸提取：按照核酸提取试剂盒说明书进行操作，提取DNA或RNA。
2. 核酸纯度检测：（1）核酸样品的制备：取适量提取的核酸，用无RNA酶DNase或RNase处理，去除杂质。
（2）核酸浓度测定：取适量处理后的核酸样品，用超纯水稀释至合适浓度。
将稀释后的核酸样品在260nm和280nm处测定光密度值。
（3）核酸纯度计算：根据核酸浓度和光密度值，计算核酸纯度。
公式如下：纯度（%）=（OD260/OD280）× 100%五、实验结果与分析1. 核酸浓度测定结果：实验结果显示，所提取的核酸样品在260nm处的OD值为0.6，在280nm处的OD值为0.4。
2. 核酸纯度计算结果：根据公式计算，核酸纯度为（0.6/0.4）× 100% = 150%。
3. 结果分析：实验结果显示，所提取的核酸样品纯度较高，符合实验要求。
这表明实验过程中操作规范，核酸提取效果较好。
六、实验结论1. 本实验采用紫外分光光度法对核酸纯度进行了检测，结果表明该方法操作简便、快速，适用于实验室常规核酸纯度检测。
核酸测定实验报告
一、实验目的1. 掌握核酸定量测定的原理和方法。
2. 熟悉紫外分光光度法在核酸含量测定中的应用。
3. 学会使用紫外分光光度计进行核酸含量测定。
二、实验原理核酸是生物细胞中重要的生物大分子，由核苷酸单体聚合而成。
核酸的定量测定在生物学、医学等领域具有广泛的应用。
本实验采用紫外分光光度法测定核酸含量，其原理如下：1. 核酸、核苷酸及其衍生物具有共轭双键系统，能够吸收紫外光。
RNA和DNA的紫外吸收高峰在260 nm波长处。
2. 在一定浓度范围内，核酸的紫外吸收值与其浓度成正比。
3. 通过测定核酸溶液在260 nm波长处的吸光度，可以计算出核酸的浓度。
三、实验器材1. 紫外分光光度计2. 10 mm光程比色皿3. 移液器4. 移液管5. 超纯水6. 核酸标准品7. 核酸样品8. 容量瓶9. 试剂：NaOH、HCl、NaCl、EDTA等四、实验步骤1. 标准曲线绘制（1）准确称取一定量的核酸标准品，用超纯水溶解并定容至一定体积，配制成一系列不同浓度的核酸标准溶液。
（2）取核酸标准溶液适量，加入比色皿中，用紫外分光光度计在260 nm波长处测定吸光度。
（3）以核酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定（1）准确称取一定量的核酸样品，用超纯水溶解并定容至一定体积。
（2）取核酸样品适量，加入比色皿中，用紫外分光光度计在260 nm波长处测定吸光度。
（3）根据标准曲线，计算核酸样品的浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制根据实验数据绘制标准曲线，如图所示。
从图中可以看出，核酸浓度与吸光度呈线性关系，相关系数R²为0.999。
2. 样品测定根据标准曲线，计算核酸样品的浓度为X mg/L。
六、实验讨论1. 实验过程中，应注意避免样品和试剂污染，确保实验结果的准确性。
2. 在绘制标准曲线时，应选择合适的浓度范围，以保证线性关系良好。
3. 实验过程中，应注意比色皿的清洗和干燥，避免吸光度值偏低或偏高。
核酸_实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握从细胞中提取核酸的方法。
2. 掌握核酸的鉴定方法。
3. 了解核酸在生物学研究中的应用。
二、实验原理核酸是生物体内的重要生物大分子，包括DNA和RNA两种。
DNA主要存在于细胞核中，负责遗传信息的传递；RNA主要存在于细胞质中，参与蛋白质的合成。
核酸提取是研究核酸结构和功能的基础。
本实验采用酚-氯仿法提取细胞中的DNA，通过苯酚和氯仿的相溶性，将蛋白质和杂质去除，得到较纯的DNA。
然后利用琼脂糖凝胶电泳对提取的DNA进行鉴定。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠肝细胞2. 试剂：酚、氯仿、异丙醇、琼脂糖、DNA ladder、Tris-HCl缓冲液、NaCl、EDTA等3. 仪器：离心机、紫外分光光度计、电泳仪、凝胶成像系统等四、实验步骤1. 样本处理：取小鼠肝细胞，加入适量Tris-HCl缓冲液，用匀浆器匀浆。
2. DNA提取：a. 将匀浆液加入等体积的酚，混匀后静置10分钟；b. 取上清液，加入等体积的氯仿，混匀后静置10分钟；c. 取上清液，加入2.5倍体积的异丙醇，混匀后静置2小时；d. 将沉淀用70%乙醇洗涤，干燥后溶解于适量Tris-HCl缓冲液中。
3. DNA鉴定：a. 配制琼脂糖凝胶，加入适量DNA ladder；b. 将提取的DNA加入琼脂糖凝胶孔中；c. 电泳，电压200V，电泳时间60分钟；d. 染色，观察DNA条带。
五、实验结果1. 提取的DNA在紫外分光光度计下有典型的核酸吸收峰（260nm）。
2. 琼脂糖凝胶电泳结果显示，提取的DNA与DNA ladder条带位置一致，表明提取的DNA为纯DNA。
六、实验讨论1. 在DNA提取过程中，酚和氯仿的相溶性起到了去除蛋白质和杂质的作用。
2. 异丙醇的加入使DNA沉淀，便于后续操作。
3. 琼脂糖凝胶电泳是一种常用的DNA鉴定方法，可以观察到DNA的分子量大小。
七、实验结论本实验成功提取了小鼠肝细胞中的DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳对提取的DNA进行了鉴定。
关于核酸的实验报告
一、实验目的1. 掌握核酸提取、纯化的基本原理和操作方法。
2. 了解紫外分光光度法测定核酸含量的原理和方法。
3. 学会使用核酸纯化试剂盒和分光光度计。
二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，包括DNA和RNA。
DNA主要存在于细胞核中，而RNA则主要存在于细胞质中。
核酸提取、纯化是研究核酸结构、功能的基础。
1. 核酸提取：利用细胞壁和细胞膜的破坏，将核酸从细胞内释放出来。
2. 核酸纯化：通过去除杂质，提高核酸的纯度。
3. 核酸定量测定：利用紫外分光光度法，根据核酸的吸光度与浓度的关系，计算核酸的浓度。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大肠杆菌、Tris-HCl缓冲液、NaCl溶液、SDS溶液、酚/氯仿/异戊醇混合液、乙醇、无水乙醇、DNA/RNA提取试剂盒、核酸纯化柱等。
2. 实验仪器：高速离心机、分光光度计、移液器、漩涡混合器、PCR仪等。
四、实验步骤1. 核酸提取（1）将大肠杆菌接种于LB培养基中，37℃培养过夜。
（2）取适量菌液，加入Tris-HCl缓冲液和NaCl溶液，混匀。
（3）加入SDS溶液，混匀。
（4）加入酚/氯仿/异戊醇混合液，剧烈振荡，静置。
（5）取上层水相，加入等体积的氯仿/异戊醇混合液，剧烈振荡，静置。
（6）取上层水相，加入2倍体积的无水乙醇，混匀，静置。
（7）离心，弃上清液，用70%乙醇洗涤沉淀，干燥。
2. 核酸纯化（1）将干燥的核酸沉淀溶于适量TE缓冲液中。
（2）将溶液加入核酸纯化柱中，用TE缓冲液洗柱。
（3）用适量无水乙醇洗柱，收集洗脱液。
3. 核酸定量测定（1）取适量核酸溶液，用紫外分光光度计测定其在260nm和280nm处的吸光度。
（2）根据核酸的摩尔吸光系数（A260=50μM^-1·cm^-1），计算核酸的浓度。
五、实验结果与分析1. 核酸提取实验成功提取了大肠杆菌的核酸，且纯度较高。
2. 核酸纯化实验成功纯化了核酸，且纯度较高。
3. 核酸定量测定实验测定了核酸的浓度，结果如下：A260 = 0.6A280 = 0.5核酸浓度= 0.3 μg/μL六、实验结论1. 实验成功提取、纯化了大肠杆菌的核酸。
核酸定性测定实验报告
核酸定性测定实验报告引言核酸定性测定是基因工程领域中的一项重要实验。
通过核酸定性测定，我们可以确定样本中是否存在特定的核酸序列。
本实验旨在利用PCR技术对给定的DNA 样本进行核酸定性测定，根据结果判断样本中是否存在目标核酸序列。
实验方法1. 提取DNA：- 将待测样本（如细菌培养物等）取出5μL放入含有20μL提取缓冲液的离心管中。
- 添加1μL蛋白酶K，混匀后，在55C恒温水浴中孵育30分钟。
- 加入200μL乙醇混匀，将离心管倒置5-10次，15秒钟。
放置2分钟沉淀。
- 吸取上清液放入新离心管中，加入同等体积的等温甲醇并混匀。
- 在65C恒温下干燥DNA，再加入30μL去离子水将DNA溶解。
2. PCR反应：- 准备PCR反应液，每个反应液总体积为50μL，其中包括5μL提取的DNA 模板。
- 打开PCR仪，设置反应条件（如：94C预变性5分钟，然后重复30次：94C变性30秒、60C退火45秒、72C延伸1分钟）。
- 将反应液加入PCR管，放入PCR仪中进行扩增反应。
3. 凝胶电泳：- 准备1.5%琼脂糖凝胶，加入含有核酸染料的凝胶样品。
- 设定电泳条件，运行电泳30-60分钟。
- 将凝胶置于紫外灯下照射，观察核酸条带并拍照记录结果。
4. 数据分析：- 根据凝胶电泳结果，判断样品中是否有目标核酸序列。
实验结果经过PCR反应和凝胶电泳分析，我们观察到以下结果：- 样品A显示出明显的核酸条带，且大小符合目标核酸序列的预期大小。
- 样品B没有显示出任何核酸条带，说明目标核酸序列在该样品中不存在。
结论根据实验结果，我们可以得出以下结论：- 样品A中存在目标核酸序列，可以进一步进行后续实验。
- 样品B中不存在目标核酸序列，可能是由于提取DNA过程中的问题。
讨论在该实验中，我们成功利用PCR技术对给定的DNA样品进行了核酸定性测定。
通过观察凝胶电泳结果，我们能够判断样品中是否存在目标核酸序列。
然而，该实验也存在一些潜在的问题，可能对结果产生影响。
核酸分离鉴定_实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握核酸分离与鉴定的原理和方法。
2. 了解核酸的组成和结构。
3. 学会使用实验仪器和试剂，进行核酸的分离与鉴定。
二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，包括DNA和RNA。
DNA主要存在于细胞核中，负责遗传信息的存储和传递；RNA主要存在于细胞质中，参与蛋白质的合成和调控。
核酸的分离与鉴定是分子生物学研究的基础。
核酸分离与鉴定主要包括以下步骤：1. 核酸提取：利用细胞破碎技术，将细胞内的核酸释放出来。
2. 核酸纯化：去除杂质，得到纯净的核酸。
3. 核酸鉴定：通过物理、化学或生物学方法，鉴定核酸的种类和结构。
本实验以酵母细胞为实验材料，采用碱法提取RNA，并通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法进行鉴定。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：酵母细胞2. 试剂：0.04mol/L NaOH溶液、酸性乙醇溶液、琼脂糖凝胶、缓冲液、核酸染料、DNA/RNA Marker等四、实验步骤1. 核酸提取（1）称取1g干酵母细胞，加入2ml 0.04mol/L NaOH溶液，研磨至匀浆状。
（2）加入4ml 0.04mol/L NaOH溶液，混匀，转移至离心管中。
（3）沸水浴加热30min，冷却后离心（2000r/min，15min）。
（4）取上清液，加入等体积的酸性乙醇溶液，混匀，静置2h。
（5）离心（2000r/min，15min），弃去上清液。
（6）加入70%乙醇洗涤沉淀，离心（2000r/min，15min），弃去上清液。
2. 核酸鉴定（1）紫外分光光度法：取适量RNA溶液，在260nm和280nm波长下测定吸光度值，计算RNA浓度。
（2）琼脂糖凝胶电泳：将提取的RNA与DNA/RNA Marker混合，加样至琼脂糖凝胶孔中，电泳（100V，30min）。
观察电泳结果，判断RNA的纯度和完整性。
五、实验结果与分析1. 紫外分光光度法测定结果显示，RNA浓度为0.5mg/ml。
2. 琼脂糖凝胶电泳结果显示，RNA条带清晰，无杂质带，表明RNA纯度和完整性良好。
核酸的理化性质实验报告
一、实验目的1. 了解核酸的基本理化性质。
2. 掌握核酸的紫外吸收特性、变性、复性和杂交等现象。
3. 学会使用紫外分光光度计、电泳仪等实验仪器。
二、实验原理核酸是一类生物大分子，由核苷酸组成，具有多种理化性质。
本实验主要探讨核酸的紫外吸收特性、变性、复性和杂交等现象。
1. 紫外吸收特性：核酸分子中的嘌呤和嘧啶碱基具有共轭双键，能够吸收紫外光。
最大吸收峰在260nm附近，可用于核酸的定量分析。
2. 变性：在高温、酸、碱、尿素等理化因素作用下，核酸分子中的双螺旋结构被破坏，双链解开，形成单链。
此过程称为变性。
3. 复性：变性后的核酸在适当条件下，双链可以重新恢复天然的双螺旋结构，此过程称为复性。
4. 杂交：不同来源的核酸变性后，互补碱基序列可以形成杂化双链，此过程称为杂交。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：DNA、RNA、双链DNA、单链DNA、变性DNA、复性DNA、杂交DNA等。
2. 仪器：紫外分光光度计、电泳仪、恒温水浴锅、移液器、吸管、离心机等。
四、实验方法与步骤1. 紫外吸收特性实验（1）将不同浓度的DNA、RNA溶液分别置于紫外分光光度计的样品池中。
（2）在260nm波长处测定溶液的吸光度值。
（3）根据吸光度值计算核酸浓度。
2. 变性实验（1）将双链DNA溶液置于恒温水浴锅中，分别在不同温度下加热一定时间。
（2）在260nm波长处测定溶液的吸光度值。
（3）分析吸光度值随温度的变化，确定DNA的变性温度。
3. 复性实验（1）将变性DNA溶液置于恒温水浴锅中，在不同温度下加热一定时间。
（2）在260nm波长处测定溶液的吸光度值。
（3）分析吸光度值随温度的变化，确定DNA的复性温度。
4. 杂交实验（1）将不同来源的DNA、RNA溶液混合，置于恒温水浴锅中，在不同温度下加热一定时间。
（2）在260nm波长处测定溶液的吸光度值。
（3）分析吸光度值随温度的变化，确定DNA、RNA的杂交温度。
五、实验结果与分析1. 紫外吸收特性实验实验结果显示，DNA、RNA溶液在260nm波长处的吸光度值随浓度增加而增加，符合朗伯-比尔定律。
核酸的生化实验报告
一、实验目的1. 掌握核酸提取的基本原理和方法。
2. 学习使用不同试剂和设备提取动物组织中的DNA和RNA。
3. 了解核酸鉴定和定量分析的方法。
二、实验原理核酸是生物体中携带遗传信息的分子，包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。
DNA主要存在于细胞核中，而RNA主要存在于细胞质中。
本实验通过提取动物组织中的DNA和RNA，并进行鉴定和定量分析，以了解核酸在生物体中的作用。
三、实验材料与仪器材料：1. 新鲜动物组织（如鸡肝、鸡血等）2. 10% SDS（十二烷基硫酸钠）3. 1M Tris-HCl（pH 8.0）4. 0.5M EDTA（pH 8.0）5. 95% 乙醇6. 70% 乙醇7. 氯仿8. 异丙醇9. 1.5M NaCl10. 淀粉酶11. 蛋白酶K12. 磷标准溶液13. 钼酸铵试剂仪器：1. 组织匀浆器2. 离心机3. 水浴锅4. 分光光度计5. 电子天平6. 移液器四、实验步骤1. 组织匀浆：将新鲜动物组织放入匀浆器中，加入适量缓冲液（1M Tris-HCl，pH 8.0）和蛋白酶K，进行匀浆处理。
2. 蛋白质变性：向匀浆中加入10% SDS，使蛋白质变性。
3. 离心分离：将匀浆液在4℃、12000 rpm下离心15分钟，分离出上清液和沉淀物。
4. DNA提取：将上清液加入氯仿和异丙醇，充分混匀，静置5分钟，离心分离，收集沉淀物。
5. RNA提取：将沉淀物用1.5M NaCl溶液溶解，加入淀粉酶和蛋白酶K，进行消化处理，加入95% 乙醇和70% 乙醇，静置沉淀，离心分离，收集沉淀物。
6. 核酸鉴定：将DNA和RNA沉淀物加入适量缓冲液，用紫外分光光度计测定其吸光度，判断核酸含量。
7. 核酸定量：使用定磷法测定DNA和RNA的磷含量，计算其浓度。
五、实验结果与分析1. 核酸鉴定：通过紫外分光光度计测定，DNA和RNA的吸光度分别为280 nm和260 nm。
2. 核酸定量：定磷法测定结果显示，DNA和RNA的磷含量分别为5.6 μg/ml和2.8 μg/ml，计算其浓度分别为1.6 μg/ml和0.8 μg/ml。
核酸的检测实验报告
一、实验目的1. 了解核酸的基本概念和特性。
2. 掌握核酸提取、纯化及检测的方法。
3. 学会使用紫外分光光度计进行核酸定量分析。
二、实验原理核酸是生物细胞中重要的生物大分子，包括DNA和RNA。
DNA主要存在于细胞核中，RNA主要存在于细胞质中。
核酸的检测方法主要包括提取、纯化和定量分析。
1. 提取：通过化学或物理方法将核酸从细胞或其他生物材料中分离出来。
2. 纯化：去除提取过程中产生的杂质，提高核酸的纯度。
3. 定量分析：通过紫外分光光度计测定核酸的浓度。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大肠杆菌细胞、提取缓冲液、乙醇、RNAase抑制剂等。
2. 仪器：紫外分光光度计、离心机、电子天平、移液器、研钵、试管等。
四、实验步骤1. 核酸提取（1）将大肠杆菌细胞加入提取缓冲液中，充分振荡混匀。
（2）将混匀后的细胞溶液转移至离心管中，离心5分钟，弃去上清液。
（3）向离心管中加入等体积的70%乙醇，充分混匀。
（4）再次离心5分钟，弃去上清液。
（5）将沉淀用少量提取缓冲液溶解，转移至新的离心管中。
2. 核酸纯化（1）向含有核酸的离心管中加入等体积的70%乙醇，充分混匀。
（2）离心5分钟，弃去上清液。
（3）将沉淀用少量RNAase抑制剂溶液溶解，转移至新的离心管中。
3. 核酸定量分析（1）使用紫外分光光度计测定核酸溶液的吸光度。
（2）根据标准曲线计算核酸浓度。
五、实验结果与分析1. 核酸提取：通过观察离心管中的沉淀，可判断核酸是否成功提取。
2. 核酸纯化：通过观察离心管中的沉淀，可判断核酸是否成功纯化。
3. 核酸定量分析：根据标准曲线，计算核酸浓度。
六、实验讨论1. 在核酸提取过程中，注意细胞破碎程度，以确保核酸充分释放。
2. 在核酸纯化过程中，注意去除杂质，提高核酸纯度。
3. 在核酸定量分析过程中，注意标准曲线的制作和吸光度的测定。
七、实验结论通过本实验，成功提取、纯化和定量分析了大肠杆菌细胞中的核酸。
实验结果表明，核酸提取、纯化和定量分析方法在生物研究领域具有重要意义。
核酸检查实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握核酸检查的基本原理和方法。
2. 学会使用核酸提取试剂盒和核酸检测仪器进行核酸提取和定量分析。
3. 了解核酸在生物学研究中的重要作用。
二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，包括DNA和RNA。
核酸检查是通过提取样品中的核酸，然后对其进行定量分析，以了解样品中核酸的浓度和种类。
本实验采用核酸提取试剂盒和核酸检测仪器，通过比色法测定样品中核酸的浓度。
三、实验器材与试剂1. 实验器材：- 核酸提取试剂盒- 核酸检测仪器- 旋涡混合器- 离心机- 移液器- 试管- 烧杯- 水浴锅- 酒精灯- 酸碱滴定管- 比色皿- 酶标仪2. 实验试剂：- 样品- 核酸提取试剂盒（含缓冲液、酶、洗涤剂等）- 标准核酸溶液- 检测试剂- 水浴加热剂- 酸碱指示剂四、实验步骤1. 样品处理：取适量样品，加入适量的缓冲液，进行充分搅拌，使样品充分溶解。
2. 核酸提取：将提取好的样品按照试剂盒说明书进行操作，提取核酸。
3. 核酸纯化：将提取的核酸溶液进行离心，弃去上清液，保留沉淀。
4. 核酸定量：将纯化的核酸沉淀溶解于适量的缓冲液中，按照试剂盒说明书进行核酸定量。
5. 比色法测定：将标准核酸溶液和样品核酸溶液按照一定比例混合，加入检测试剂，进行比色反应。
6. 数据分析：使用酶标仪测定吸光度，根据标准曲线计算样品中核酸的浓度。
五、实验结果与分析1. 样品处理：样品处理过程中，样品溶解度较好，无明显的沉淀现象。
2. 核酸提取：核酸提取过程中，提取效率较高，核酸提取量符合实验要求。
3. 核酸纯化：核酸纯化过程中，沉淀物纯净，无杂质。
4. 核酸定量：根据标准曲线，样品中核酸浓度为X ng/μL。
5. 数据分析：通过比较标准核酸溶液和样品核酸溶液的吸光度，得出样品中核酸的浓度为X ng/μL。
六、实验总结1. 本实验成功提取了样品中的核酸，并对其进行了定量分析。
2. 通过比色法测定，得到了样品中核酸的浓度，为后续的生物学研究提供了数据支持。
核酸大实验(上课)
注意事项:
1.加样时一定要按表格上的顺序先加高氯酸再加 二苯胺，不然会出现白色沉淀，影响后续实验。
2.试管从水浴中取出后应尽早测量OD值，放置时 间过长会导致OD值的改变。
3.可用冷水冷却试管，但不要用冰水冷却，过冷 会导致OD值的改变。
仪器与试剂：
仪器： 研钵、剪刀、各式试管、离心管； 离心机、三用恒温水浴箱，手术器械。
试剂： 柠檬酸钠、20%三氯醋酸（TCA）、10%TCA、无水乙 醇、氯仿-甲醇（体积比2：1）混合液、乙醚、0.3N 氢氧化钾、6N盐酸、0.1N盐酸、5%高氯酸溶液
具体操作流程：
制备鸡 肝匀浆
去酸溶 性杂质
除去脂质
除去残余的TCA与柠檬酸钠
称取0.8g鸡肝， 加入柠檬酸钠
研磨成浆
抗凝血剂 可提高RNA
提取量
加入20%TCA， 搅匀离心
加入10%TCA搅 匀离心
加1mL蒸馏水+7mL无水乙醇， 搅匀离心，重复；
加氯仿甲醇混合液，搅匀离 心，重复；
加乙醚，搅匀离心，重复；
37℃水浴15min蒸干乙醚
使蛋白质变性 沉淀蛋白质
均为脂质的良好溶剂
研磨好的鸡肝匀浆
加入氯仿甲醇后 沉淀在清液上方
加入氯仿甲醇后 沉淀在清液下方
分离RNA
分离DNA
倒出上步所得粉末，加KOH研磨成 糊状，加入试管中37℃水浴1h； 加1.3mL6N盐酸，沉淀完全，离心；
收集上清液；
加6.7mL0.1N盐酸，搅匀离心，收 集合并上清液；
去RNA部分沉淀中加5%高氯酸 6.5mL；95℃水浴15分钟； 水浴后直接离心，取上清液；
实验目的： 掌握用二苯胺法测定DNA含量的原理和方法
核酸的观察实验报告
一、实验目的1. 了解核酸的基本结构和功能；2. 掌握核酸的观察方法，包括显微镜观察和化学染色观察；3. 通过实验，加深对核酸性质的理解。
二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，分为DNA和RNA两大类。
DNA主要存在于细胞核中，负责遗传信息的存储和传递；RNA则主要存在于细胞质中，参与蛋白质的合成。
核酸的观察方法主要包括显微镜观察和化学染色观察。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）洋葱鳞片叶；（2）酵母菌；（3）细胞培养液。
2. 实验仪器：（1）光学显微镜；（2）显微镜载物台；（3）染色剂（如甲基绿、吡罗红）；（4）烧杯、吸管、滴管等。
四、实验步骤1. 显微镜观察（1）洋葱鳞片叶观察：取洋葱鳞片叶，将其放入载玻片中，滴加适量的蒸馏水，盖上盖玻片，置于显微镜下观察。
注意观察细胞核、细胞质、细胞壁等结构。
（2）酵母菌观察：取少量酵母菌，将其放入载玻片中，滴加适量的蒸馏水，盖上盖玻片，置于显微镜下观察。
注意观察酵母菌的细胞形态、细胞核、细胞壁等结构。
2. 化学染色观察（1）甲基绿染色：取洋葱鳞片叶，将其放入载玻片中，滴加适量的甲基绿染色剂，盖上盖玻片，置于显微镜下观察。
注意观察细胞核、细胞质、细胞壁等结构，观察甲基绿染色后的颜色变化。
（2）吡罗红染色：取洋葱鳞片叶，将其放入载玻片中，滴加适量的吡罗红染色剂，盖上盖玻片，置于显微镜下观察。
注意观察细胞核、细胞质、细胞壁等结构，观察吡罗红染色后的颜色变化。
五、实验结果与分析1. 显微镜观察结果通过显微镜观察，可以看到洋葱鳞片叶细胞核呈绿色，细胞质呈无色或浅绿色，细胞壁呈白色。
酵母菌细胞呈圆形或椭圆形，细胞核较大，呈绿色，细胞质呈无色或浅绿色，细胞壁呈白色。
2. 化学染色观察结果甲基绿染色后，洋葱鳞片叶细胞核呈绿色，细胞质呈无色或浅绿色，细胞壁呈白色。
酵母菌细胞核呈绿色，细胞质呈无色或浅绿色，细胞壁呈白色。
吡罗红染色后，洋葱鳞片叶细胞核呈红色，细胞质呈无色或浅红色，细胞壁呈白色。
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实验操作
(一) DNP与RNP的分离 DNP与RNP的分离 1、 取新鲜肝脏，用表面皿称取0.5g，用0.14mol/L氯化钠 取新鲜肝脏，用表面皿称取0.5g， 0.14mol/L氯化钠 -0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液（含1mmol/L EDTA）冲洗除去血 0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液 柠檬酸钠缓冲液（ EDTA） 水。洗净后立即将肝脏置于冰浴研钵中，边滴加缓冲液边研磨 洗净后立即将肝脏置于冰浴研钵中， (加入 加入2ml），至匀浆状，转移至离心管中，每次用0.5ml缓冲 ），至匀浆状 ），至匀浆状，转移至离心管中，每次用0.5ml缓冲 液冲洗研钵至离心管， 研磨时间不要超过30min） 液冲洗研钵至离心管，3次。（研磨时间不要超过30min） 2、 匀浆液于3000r/min 离心15min，上清液中即含RNP 匀浆液于3000r/min 离心15min，上清液中即含RNP ，沉淀中含DNP。 沉淀中含DNP。 3、将上清液倒入另一支离心管。再往上述沉淀中加入 将上清液倒入另一支离心管。 3.5ml缓冲溶液 同样离心15min， 3.5ml缓冲溶液，同样离心15min，取上清液倒入另一离心管 缓冲溶液， 。向DNP沉淀加入3ml 10%氯化钠溶液，摇匀，置于冰箱内， DNP沉淀加入 沉淀加入3ml 10%氯化钠溶液，摇匀，置于冰箱内， 氯化钠溶液 DNP充分溶解 留至下午用。 充分溶解， 使DNP充分溶解，留至下午用。
实验3 实验3
二苯胺法测量DNA 二苯胺法测量DNA含量 DNA含量
实验目的
学习和掌握二苯胺法测定DNA含量的原理和方法。 学习和掌握二苯胺法测定DNA含量的原理和方法。 含量的原理和方法
实验原理
DNA分子中的 DNA分子中的2—脱氧核糖在酸性条件中脱水生成ω分子中的2 脱氧核糖在酸性条件中脱水生成ω 羟基- 酮基戊醛， 羟基-γ-酮基戊醛，后者与二苯胺试剂一起加热反应生成 蓝色物质， 595nm处有最大吸收 DNA在40~400µg范 处有最大吸收。 蓝色物质，在595nm处有最大吸收。DNA在40~400µg范 围内，光密度与DNA的浓度成正比。在反应液中加入少 围内，光密度与DNA的浓度成正比。 的浓度成正比 量乙醛，可以提高反应灵敏度。 量乙醛，可以提高反应灵敏度。
动物肝细胞内DNA 动物肝细胞内DNA和RNA DNA和 的提取和分离
仪器与试剂
仪器: 仪器: 研钵、离心机、 天平、玻璃棒、恒温水浴锅、25ml容 研钵、离心机、 天平、玻璃棒、恒温水浴锅、25ml容 量瓶、50ml容量瓶及实验常用器皿 量瓶、50ml容量瓶及实验常用器皿 11个离心管 个离心管） （约11个离心管） 试剂: 试剂: 0.14mol/L氯化钠 0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液 0.14mol/L氯化钠 -0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液(含 柠檬酸钠缓冲液( 1mmol/L EDTA)、10%氯化钠溶液、氯仿-异戊醇溶液（ EDTA)、10%氯化钠溶液 氯仿-异戊醇溶液（ 氯化钠溶液、 24:1）、 24:1）、20% 十二烷基硫酸钠（SDS）、95%乙醇（预 ）、20% 十二烷基硫酸钠（SDS）、 ）、95%乙醇 乙醇（ 苯酚-氯仿-异戊醇醇溶液（25:24:1)、 冷）、苯酚-氯仿-异戊醇醇溶液（25:24:1)、 0.1mol/L 氢氧化钠溶液
实验操作
1、RNA标准曲线的制作(空白调零）此步省略 RNA标准曲线的制作 空白调零） 标准曲线的制作( 支试管，按下表操作。 RNA浓度为横坐标 浓度为横坐标， 取6支试管，按下表操作。以RNA浓度为横坐标，光 密度值为纵坐标，绘制标准曲线。 密度值为纵坐标，绘制标准曲线。
试 管 0 0 2.0 2.0 1 0.4 1.6 2.0 2 0.8 1.2 2.0 3 1.2 0.8 2.0 4 1.6 0.4 2.0 5 2.0 0 2.0 100µg/mL标准RNA溶液/mL 100µg/mL标准RNA溶液/mL 蒸馏水/mL 蒸馏水/mL 地衣酚溶液/mL 地衣酚溶液/mL
仪器和试剂 1、仪器： 仪器： 可见分光光度计、移液管、 可见分光光度计、移液管、恒温水浴锅 2、试剂： 试剂： 100ug/mL标准 标准RNA溶液 称取10mg纯RNA用少 溶液： （1） 100ug/mL标准RNA溶液：称取10mg纯RNA用少 量水溶解(若不溶可用0.1mol／ NaOH溶液溶解， 量水溶解(若不溶可用0.1mol／L NaOH溶液溶解，后加等 溶液溶解 0.1mol／ HCL溶液调至 溶液调至pH7.0)，定容至100mL。 量0.1mol／L HCL溶液调至pH7.0)，定容至100mL。 地衣酚试剂： 溶于100mL浓 （2） 地衣酚试剂：取0.1gFeCl3·6H2O溶于100mL浓HCl 配制成0.1%三氯化铁浓盐酸溶液 三氯化铁浓盐酸溶液。 配制成0.1%三氯化铁浓盐酸溶液。使用前再用上述溶液 为溶剂加入0.1g地衣酚配成 地衣酚配成0.1%的地衣酚溶液。（临用 的地衣酚溶液。（ 为溶剂加入0.1g地衣酚配成0.1%的地衣酚溶液。（临用 时配制） 时配制） 样品待测液：用上述实验方法提取的RNA样品 （3） 样品待测液：用上述实验方法提取的RNA样品
摇匀，置沸水浴中煮25 min(严格控制时间），冷却后（水浴冷却5分钟后直接测量）， (严格控制时间） （水浴冷却5 ，在670 nm波长处测各管光密度值 光密度值
0
0.055
0.128
0.176
0.232
0.289
2、RNA样品的测定 RNA样品的测定 取两份2.0 ml样品液于试管中 再各加入2.0 ml地衣 取两份2.0 ml样品液于试管中，再各加入2.0 ml地衣 样品液于试管中， 酚试剂，沸水浴保温25min 酚试剂，沸水浴保温25min (严格控制时间），水浴冷却 5分钟（不要骤冷） ，然后在670nm波长处测定光密度值 分钟（不要骤冷） 然后在670nm波长处测定光密度值 每次测量后拿出比色皿放入重新测量， 。每次测量后拿出比色皿放入重新测量，每支测三次取平 均值。根据测得的光密度值， 均值。根据测得的光密度值，从标准曲线上查得相应的 RNA的mg数 按下式计算待测样品的RNA的含量 RNA的mg数，按下式计算待测样品的RNA的含量。 的含量。 标曲比例系数： 标曲比例系数： 16.5 匀浆RNA含量 比例系数* 匀浆RNA含量=比例系数*待测液吸光度 /肝质量 （mg/g） 含量= mg/g）
核酸大实验
实验1 实验1
实验目的 初步掌握从组织中分离和提纯DNA与RNA的原理和方法 的原理和方法。 初步掌握从组织中分离和提纯DNA与RNA的原理和方法。 实验原理 细胞中核酸以DNP，RNP形式存在 形式存在， DNP,RNP在不同 细胞中核酸以DNP，RNP形式存在，而DNP,RNP在不同 浓度的氯化钠溶液中溶解度不同 DNP在 溶解度不同。 NaCl中 浓度的氯化钠溶液中溶解度不同。DNP在0.14mol/L NaCl中 溶解度最低 最低， RNP却易溶解，故用0.14mol/L NaCl洗涤组 溶解度最低，而RNP却易溶解，故用0.14mol/L NaCl洗涤组 织匀浆，可得到DNP，再用SDS、氯仿-异戊醇除蛋白 除蛋白， 织匀浆，可得到DNP，再用SDS、氯仿-异戊醇除蛋白，乙醇 沉淀后即可得到DNA。 沉淀后即可得到DNA。 RNA的分离提纯目前多用酚仿抽提法。组织匀浆在苯酚 RNA的分离提纯目前多用酚仿抽提法。组织匀浆在苯酚 的分离提纯目前多用酚仿抽提法 存在下， 与变性蛋白质分离。 与氯仿存在下 RNA与变性蛋白质分离 与氯仿存在下，RNA与变性蛋白质分离。酚使蛋白质变性凝 RNA溶解在水相中 用乙醇使RNA从水相中沉淀而达到 溶解在水相中， 固，RNA溶解在水相中，用乙醇使RNA从水相中沉淀而达到 分离。 分离。 提纯核酸（SDS，苯酚，氯仿） 分离核酸 提纯核酸（SDS，苯酚，氯仿） 乙醇沉淀 测定
（三）DNA的提取 DNA的提取 1、下午，从冰箱取出DNP样液，加入约2ml氯仿-异戊醇溶液 下午，从冰箱取出DNP样液 加入约2ml氯仿 样液， 氯仿（24:1）和 0.5ml 20% SDS，上下振荡10min（注意不要 24:1） SDS，上下振荡10min（ 3000r/min离心 离心15min，吸取上面含DNA和 过于剧烈） 过于剧烈），于3000r/min离心15min，吸取上面含DNA和 DNP的水层至另一离心管 弃去中间蛋白层和下层液体。 DNP的水层至另一离心管，弃去中间蛋白层和下层液体。 的水层至另一离心管， 3、再次向取出的上层水相加入约1/2体积 再次向取出的上层水相加入约1/2体积 氯仿-异戊醇溶液，振荡，离心，继续抽提， 氯仿-异戊醇溶液，振荡，离心，继续抽提， 直到离心后两相之间无明显变性蛋白为止。 直到离心后两相之间无明显变性蛋白为止。 一般重复一次即可） （一般重复一次即可） 取两支离心管各加入 各加入约与离心后上层水 4、取两支离心管各加入约与离心后上层水 相等体积的预冷95%乙醇 乙醇， 相等体积的预冷95%乙醇，将水相分两等份 搅拌， 滴入，边滴边搅拌 后于冰箱内静置20min，挑出絮状DNA至 滴入，边滴边搅拌，后于冰箱内静置20min，挑出絮状DNA至 烧杯，再将溶液3000r/min15min离心 倒去乙醇， 离心， 烧杯，再将溶液3000r/min15min离心，倒去乙醇，用氢氧 化钠多次润洗沉淀至上述烧杯，溶解完全后定容至25ml. 润洗沉淀至上述烧杯 化钠多次润洗沉淀至上述烧杯，溶A的提取 RNA的提取 1、各向两支RNA上清液离心管加入与清液等体积的酚仿醇 各向两支RNA上清液离心管加入与清液等体积的 上清液离心管加入与清液等体积的酚仿醇 溶液（25：24： ），剧烈震荡 剧烈震荡10min，平衡后3000 溶液（25：24：1），剧烈震荡10min，平衡后3000 r/min离心 r/min离心15min。重复操作，直到离心后两相之间无明 离心15min。重复操作， 显变性蛋白为止。（一般重复一次即可） 。（一般重复一次即可 显变性蛋白为止。（一般重复一次即可） 2、再取两支离心管各加入约上层水相2.5倍体积的预冷95% 再取两支离心管各加入约上层水相2.5倍体积 预冷95% 各加入约上层水相 倍体积的 乙醇，将两支管的水相对应滴入，摇匀， 乙醇，将两支管的水相对应滴入，摇匀，置于冰箱内静置 20min， 20min， 3000r/min 15min离心，后用蒸馏水多次润洗 15min离心 后用蒸馏水多次润洗 离心， 沉淀至烧杯 并定容至50ml. 至烧杯， 沉淀至烧杯，并定容至50ml.