过敏原

EUROIMMUN
特异性 IgE
• EUROLINE
DP 3713 E － 吸入性及食物性过敏原
•ALLERCOATTM6
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特异性 IgE EUROLINE
• 简便和快捷的实验操作
• 仅需少量样本 (过夜温育)
• 结果基于广泛应用的EAST分级系统 • 与 Pharmacia CAP具有良好的相关性
• • •
所有的试剂生产商通常都检测特异性IgE 在检测方法上存在差异 结果通常不能避免非特异性反应
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过敏原生产和质量控制
• 来源:
• 由欧蒙生化和分子生物学生产部负责生产
• 从著名的过敏原生产厂商购买商品化的产品 • 质量控制: • 通过电泳分离的方法检测过敏原成分
• 通过免疫印迹的方法检测其过敏原反应性
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过敏原诊断与治疗
• 诊断方面 • 即往病史 • 皮试 • 实验室检测 • 激发实验 • 治疗方面 • 特异性免疫治疗 成功率低于100%
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过敏原血清学检测
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检测IgE
步骤1: 总IgE
• 步骤2: ELISA
特异性 IgE EUROLINE
了免疫力；也可能是破坏性的，即产生了超敏反应。
超敏反应是机体对某抗原初次应答后，再次接受相同抗原刺激时，发
生的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答 。
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过敏原
吸入过敏原 食物过敏原 接触过敏原 输注过敏原
空气中的吸入过敏原 (例如. 植物花粉, 动物毛发, 室内灰尘或虫螨等)
直接输入体内 (例如：昆虫或动物的毒液, 注射类药品等)
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过敏的损害
过敏是以损害粘膜为主要表现的
过敏性结膜炎（眼粘膜） 过敏性鼻炎（鼻粘膜） 过敏性哮喘（气管粘膜） 过敏性紫癜（皮肤粘膜） 过敏性肠绞痛（肠粘膜） 过敏性紫癜肾炎（肾内粘膜） 心脏有粘膜组织，心脏是肯定会受到损 。心肌酶升高，特别是特 异性的CK-MB（肌酸激酶同工酶 ）。 CK-MB分布在心肌和结缔组 织。心电图表现主要是心肌膜的损害，表现为传导阻滞。
• 自动温育
• 通过EUROLineScan程序实现结果的自动判 读
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特异性IgE分级标准及临床意义
类别 0 1 浓度[kU/l] <0.35 0.35-0.7 sIgE水平 未检出 低 临床意义 不过敏 较敏感
2
3 4 5 6
0.7-3.5
3.5-17.5 17.5-50 50-100 >100
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过敏原 II
kDa Mark 12 15 µl 5 µl 1 µl
116 97 66 55
HPLC SDS-PAGE
36 31
+
WB
22 14
6
• • •
过敏原提取物为包含与过敏反应无关的其它成分的混合物 纯化天然相关过敏原通常不太可能实现 目前尚无有关过敏原的国际标准
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中
高 很高（+） 特高（++） 特高（+++）
有临床症状
重 很重 特重 特重
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特异性 IgE EUROLINE 血清温育
温育
颜色反应
60 min 未稀释
AP标记二抗 AKP
过夜 1:11 稀释
底物
色原
清洗 3 x 5min
60 min 二抗反应
抗原提取物
膜条
清洗 3 x 5min
10 min 底物温育 自动化判读或肉眼观察
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总IgE ELISA: 结果解释举例
患者1
特异性 IgE 总IgE 特异性 IgE 总IgE 5 IU/ml (kU/l) 200 IU/ml
患者2
特异性 IgE 5 IU/ml (kU/l)
总IgE
25 IU/ml
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总IgE ELISA: 总结
• 简单和快捷的实验操作 • 低检出限 (1IU/ml) • 高重复性 (批内实验: 5%) • 通过4份标准品计算定量结果 • 标准品采用WHO标准 • 通过ELISA工作站实现自动分析
用点刺针穿过液滴，轻轻刺入皮内
将可疑致敏物质敷贴于患者皮肤上
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不需停止服用抗组胺药物
以往过敏原检测需要患者体检停止服用抗组胺药物。以便 提高试验的准确性。 欧蒙过敏原检测试剂无需患者停止服用抗组胺药物。（常 用的有苯海拉明、异丙臻、扑尔敏、赛庚啶、息斯敏、特 非拉丁等 ）
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针对中国人设计的过敏原
过敏原采集于中国，提高特异性检出率
DP3713-1601E（中国组合）针对中国人设计的组合
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对患者来说不存在风险
无痛检测：通过血清中IgE抗体与过敏原结合，测试过敏反应 避免了人体与过敏原直接反应导致的风险 点刺试验 斑贴试验
过敏原血清学检测
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目录
一.过敏原概述 二.过敏原常见方法学比较
三.欧蒙过敏原产品特性及印迹法的特点
四.过敏原体外检测常见问题及解答
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一、过敏原概述
1906年von Piguet提出了allergy一词。其概念为：机体对抗原刺激产生
的一种“改变了反应性”的状态。这种状态可能是保护性的，即产生
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总IgE ELISA
Example for a standard curve
2
标准品 500 IU/ml
1,5
Extinction
1
0,5
100 IU/ml 10 IU/ml 0 IU/ml
WHO 75/502
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0
0
100
200
300
400
500
600
IgE [IU/ml]
食物激发试验 （DBPCFC）
体外
血清学检验
生物共振
无创、快速、检测范围广、无创伤性、但该技术缺乏科学依据， 容易受到人为信号的干扰，难以建立严格的标准
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体外诊断的优势
• 对患者来说不存在风险
• 尤其适合5岁以下儿童，可避免强烈的皮肤反应 • 与其它皮肤病区别
• 不需附加其它药物
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过敏原 II
相关过敏原 ~ 5%
无关成分 ~ 95%
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过敏原 II
过敏原
• 蛋白或糖蛋白 • 小分子量物质, 15 – 20 kDa 过敏原的命名: • 对于纯化过敏原: 拉丁文缩写 + 序号 例如. 桦木花粉(betula verrucosa) : Bet v1; Bet v2...
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过敏原
吸入过敏原 食物过敏原 接触过敏原 输注过敏原
通过胃肠道吸收 (例如. 鱼、肉、蛋、 坚果和蔬菜等)
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过敏原
吸入过敏原 食物过敏原 接触过敏原 输注过敏原
皮肤接触（例如：金属饰品、化妆品和生活日用品等）
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过敏原
吸入过敏原 食物过敏原 接触过敏原 输注过敏原

可能存在过敏反应 一般无过敏反应
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总IgE ELISA: 结果解释
1. 总IgE 超出参考范围大多数是由于过敏反应导致 • 例外: 寄生虫病; 免疫抑制; HIV; 重度烧伤
2. 临床相关特异性IgE结果 • 与总IgE相关的特异性IgE浓度越高，患者临床过敏反应的可能 性就越大.
- 双盲稳定剂控制的食物刺激试验 (DBPCFC)
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二、过敏原常见方法学比较
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二、过敏原常见方法学比较
类别 体内 方法 皮肤针刺试验 （皮内试验点、刺试验或 刺痕试验） 斑贴试验 鼻粘膜激发试验（SNPT） 强烈反应时容易互相混淆结果 价格便宜、快速，但对过敏原的质量控制有严格要求，患者痛苦， 无法避免对于高过敏体质患者具有一定生命危险性的问题 同时试验多种抗原时，容易不同的抗原液交叉混合 斑贴试验主要是检测Ⅳ型变态反应，敏感程度不太高。 患者试验过程较痛苦 无法避免对于高过敏体质患者具有一定生命危险性的问题 操作等较繁琐 食物过敏检测金标准 对于食物过敏反应严重的患者较危险 操作麻烦，需要病床观察 患者试验过程较痛苦 对患者来说使用安全，适合儿童，可避免强烈的皮肤反应 避免其它皮肤病造成的误判 使用方面，少量血清一次即可完成数十种种过敏原的检测 适用于对食物过敏的患者，效应器官不在皮肤 适用于用抗组胺类或激素类治疗而不能停药者 特点
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应用科室
1.皮肤科（30％）：急慢性荨麻疹、异位性皮炎等 2.耳鼻咽喉科（30％）：以过敏性鼻炎为主 3.内科（25％）：以哮喘、过敏性肺泡炎为主 4.小儿科（15％）：儿童变态反应病的诊治 5.变态反应专科（<1％）：仅在少数大型3甲医院设置了变态反应科室， 从事 变态反应病的研究，并承担某些罕见病、疑难病的临床诊治。
• 在膜条上完成功能测试
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免疫反应
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4种过敏反应类型 (超敏反应) by Coombs und Gell (1963)
Type I Type II Type III Type IV
早期反应
细胞毒反应
免疫复合物形成
细胞免疫反应 T-细胞介导反应
IgE-介导肥大细胞脱 IgG/IgM介导血细胞的破 持续产生IgG/IgM 免疫复 核 Platzhalter 坏 合物 Platzhalter 数分钟内 数小时到一天 数小时到一天
过敏原II 影响因素
• • • • • • 提取过程 缓冲液系统 温度 纯化 储存 ...
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过敏原 II 影响因素
• 原材料:
• 例如. 桦树花粉: 除了植物品种个体特征外，树龄、生长环境和过敏 原采集时间和方法等多种因素均会影响到过敏原的质量。
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过敏原 应用过敏原提取物进行诊断
• 满足新过敏原组合的需要:
– 市场信息反馈
– 目标过敏原的定位和其它参数确认 – 提供特殊过敏原的原材料
– 提供阳性血清
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二、过敏原常见方法学比较
既往病史 皮试: 实验室检查: 刺试, 抓试, 皮外试, 皮内试 IgE检测
CAST (细胞抗原刺激实验)
激发试验: (金标准) - 鼻腔激发试验
• 中国食物
• 中国特应性 • 韩国吸入
• 交叉反应
• 儿童 • 昆虫毒液
• 1+2
• 韩国食物 • 1+2 • 东南亚吸入 • 东南亚食物
• Inhal. Screen AE
• Food Screen AE • 海湾吸入 • 海湾食物
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特异性 IgE 欧蒙印迹法各种组合
• 为不同过敏原组合提供可能: – 在一条膜条上包被36种以上过敏原 – 大约170种以上过敏原
• 4 点定标
总IgE ELISA: 参考范围
最高参考上限 1.2 IU/ml 7.2 IU/ml 12.7 IU/ml
年龄
新生儿 1-6 月 7-12 月
1-5 岁
6-9 岁 10-15 岁 > 16岁
60 IU/ml
155 IU/ml 199 IU/ml 100 IU/ml
> 参考范围
< 参考范围
12小时到数周
花粉热
药物过敏
farmers lungs
接触过敏反应 (Ni)
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Ⅰ型变态反应
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I型过敏反应
确认对桦树花粉过敏的患者… …个体分别与不同的桦树花粉过敏原反应，如：Bet v1 ... Bet v8
Bet v7 Bet v1 Bet v2 Bet v3 Bet v2 Bet v6 Bet v8 Bet v1 Bet v4
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同类产品中单一膜条内过敏原数量最多
可一次检测20大项，30小项过敏原
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不添加任何增效剂
现在有些产品为了增大反应强度，在产品中添加增效剂， 加大了反应强度。导致了判定结果与临床有不符现象。 欧蒙产品不添加任何增效剂，本着科学、实事求是的精神 真实、准确的判定实验结果。
• 适合无法进行皮试的食物过敏原的检查
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二、欧蒙过敏原产品特性及印迹法特点
欧蒙过敏原体外诊断的优势
同类产品中单一膜条内过敏原数量最多 不添加任何增效剂 针对中国人设计的过敏原 对患者来说不存在风险


不需停止服用抗组胺药物
独家包被有CCD指示带，解释交叉反应的假阳性结果 所有厂家中样本使用体积最小（100ul） 快速测试过敏原，整个实验完成仅需要2.5-3小时
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EUROLINE检测系统
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特异性 IgE 欧蒙印迹法自动化
• 结果判读: EUROLineScan
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欧蒙印迹法过敏原谱
中欧
• 吸入
亚洲
• 中国吸入
地中海 中东
• 地中海吸入
• 中东吸入 • 中东食物
• 儿童吸入
• 食物 • 特应性