药典无菌检查方法验证及操作要点
无菌检验方法验证
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无菌检验阳性结果调查
实验室调查：一个合适的调查程序和记录是必要的
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无菌检验阳性结果调查
若产品不合格，必须通过该批生产过程回顾找出污染 原因和污染源 –人 – 物料 – 环境 – 设备 – 方法和工艺
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方法二：用实验确定是否具有抑菌性的方法 在规定量的供试液中加入实验用微生物10~100个，
如微生物生长良好，即说明供试品对该种微生物无抑 菌活性。如已用药典规定的各试验菌试验，结果均能 生长良好，说明供试品无抑菌性，可用常规方法检验 之。将这些试验记录在案——就是证明该供试品无抑 菌性的验证试验部分；如加入的微生物不生长或生长 缓慢，说明供试品有抑菌性，将这些试验记录在案— —就是证明该供试品有抑菌性的验证试验部分；如加 入的微生物中有某一种菌最不能生长或生长最缓慢， 这一种菌就是该样品的敏感菌。
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验证试验和对验证结果技术评价的判断为：如平行3 次的试验中，各管微生物均生长良好，说明供试品 已消除了抑菌活性。可以确定按该方法进行该品种 的无菌检查；如有供试品管的微生物生长微弱、缓 慢或不生长，说明供试品仍有抑菌活性，应考虑进 一步增加冲洗量或中和剂的用量以消除抑菌活性， 并重新验证，直至验证证明已充分消除或有效降低 抑菌活性。
条件 无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行， 其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污 染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物 的检出。
无菌检验方法验证
无菌检验方法验证无菌检查方法是为了检查药典要求无菌的制剂及其他制品是否无菌而建立的试验方法！至于无菌检查具体有哪些验证方法呢？下面就随店铺一起来了解下吧！无菌检验方法验证无菌检查方法验证一般分为前验证和再验证两种。
前验证，也称预验证，指在无菌分析方法正式使用前，按照预定验证方案进行的验证。
如果没有充分的理由，任何检查方法必须进行前验证。
再验证，指某一检查方法经过验证并在使用一段时间后进行的，旨在证实已验证状态没有发生飘移而进行的重新验证及对检查方法进行修订、改变时进行的验证。
通常一个无菌产品的检查流程为：首先基于产品的剂型、溶解度等性质，按照药典的要求确定是否需要进行前处理;然后根据产品的特性是否有抑菌性，确定是否需要增加去除产品抑菌性的方法;最后验证整个检查方法中用到的一切及试验过程中的每一个环节包括样品的预处理方式、检查过程、培养条件等均不影响样品中微生物的生长。
前处理方法直接影响后续步骤的效果和重现性，应是验证的重点。
供试品中抑菌活性的去除是当前验证工作的重点，尤其强调应充分验证供试品本身对微生物生长的影响。
(一)具体的验证方法如下：1. 菌种的选择无菌检查方法验证中通常选择以下6种试验中常用的控制菌的标准菌株，它们分别代表不同类型的菌种：枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]代表药品中常见的污染菌——芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]代表革兰阳性菌、生孢梭菌 [CMCC(B)64 941]代表厌氧菌、大肠埃希菌[CMCC(B)44 102]代表革兰阴性菌、白色念珠菌[CMCC(F)98 001]代表酵母菌、黑曲霉菌 [CMCC(F)98 003]代表霉菌。
2. 菌液的制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30~35 ℃培养18~24h;接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，23~28℃培养24~48h，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。
中国药典(2015年版)无菌检查法
中国药典(2015年版)无菌检查法是用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
如果供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法。
只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。
薄膜过滤法一般应采用封闭式薄膜过滤器，无菌检查用的滤膜孔径应不大于0.45微米，直径约为50mm。
根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质，使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。
直接接种法适用于无法用薄膜过滤法进行无菌检查的供试品，即取规定量供试品分别等量接种至硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基中。
无菌检查法-2022版中国药典-电子版
无菌检查法-2022版中国药典-电子版无菌检查应在环境洁净度B级背景下的局部A级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2〜25°C、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
1.硫乙醇酸盐流体培养基酪胨（胰酶水解）15.0g酵母浸出粉5.0g葡萄糖5.0g氯化钠2.5gL-胱氨酸0.5g新配制的0.1%刃天青溶液1.0ml硫乙醇酸钠0.5g琼脂0.75g（或硫乙醇酸）（0.3ml）纯化水1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.1±0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培2养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。
灭菌在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100°C水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
除另有规定外，硫乙醇酸盐流体培养基置30〜35C培养。
2.胰酪大豆胨液体培养基胰酪胨17.0g氯化钠5.0g大豆木瓜蛋白酶消化物3.0g磷酸氢二钾2.5g葡萄糖（一水合/无水）2.5g（2.3g）纯化水1000mL除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节pH值使灭菌后在25C的pH值为7.3土0.2，加入葡萄糖，分装，灭菌。
无菌检查方法验证
无菌检查方法验证：取本品，分别加灭菌注射用水 1ml 溶解，采用薄膜过滤法依法检查(中国药典 2022 年版二部附录Ⅺ H )，应符合规定。
菌液制备： 10 倍稀释法培养基 营养琼脂培养基营养琼脂培养基营养琼脂培养基硫乙醇酸盐培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂斜面 培养基菌悬液制备计数结果菌种 代数 稀释级 菌落数(cfu/ml )枯草芽孢杆菌 4 10-6 61金黄色葡萄球菌 4 10-7 89大肠埃希菌 4 10-6 78生孢梭菌 4 10-6 67白色念珠菌 4 10-7 83黑曲霉菌 4 10-4 401、供试品处理将供试品去掉铝塑盖，外表面用75%酒精全面消毒，然后向每支样品中注 入 1.0ml0.1%的蛋白胨灭菌溶液，备用。
2、检查阳性对照： 将等量的试验菌直接加入到液体硫乙醇酸盐培养基或者改良马丁液 体培养基管中，在相应的温度下培养。
液体硫乙醇酸盐培养基管在 30-35℃下培菌种枯草芽孢杆菌 CMCC(B)63501 金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003 大肠埃希菌 CMCC(B)44102生孢梭菌 CMCC(B)64941白色念珠菌 CMCC(F)98001黑曲霉菌 CMCC(F)98003菌悬液制备用 0.9% 无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌少于 100cfu (菌落行程单 位)的菌悬液加入 5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将 孢子洗脱，再同上制成每 ml 含菌 小于 100cfu 的菌悬液养；改良马丁液体培养基管在23-28℃下培养3-5 天。
观察记录。
阴性对照：将灭菌的液体硫乙醇酸盐培养基或者改良马丁液体培养基管直接放在相应的温度下培养。
液体硫乙醇酸盐培养基管在30-35℃下培养；改良马丁液体培养基管在23-28℃下培养3-5 天。
观察记录。
样品 (薄膜过滤法)：每种实验菌取10 支处理好的供试品溶液，将溶液合并后加入制备好的菌悬液1ml，用0.1%的蛋白胨灭菌溶液稀释至100ml，按薄膜过滤法过滤，取出滤膜，将其分为3 等份，分别置于含硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基的容器中，其中一份作为阳性对照用。
中国药典检验操作规程
• （1）干热灭菌器：装放物品不可过挤，且不能接触箱的四壁。
• （2）大型高压蒸气锅：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不 能过挤。
• （1）检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。
• （2）检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察 是否漏气，压力表与温度计所标示的状况是否吻合，管道有无堵塞。
耐胆盐革兰阴性菌 紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基
培养基或试剂等,应检查是否符合达到灭菌后的色泽或状态,未达到者应废弃。
1第一天：准备用具、培养基、稀释剂，灭菌
需氧菌总数
103cfu（≤2000） 102cfu（≤200）
霉菌和酵母菌总数 沙氏葡萄糖琼脂培养基
霉菌和酵母菌总数 5×100cfu（≤1000） 100 cfu（≤200）
（3）物品取出,
控制菌 • 随即胰检酪大查豆包胨装液体的培完养整基性,若有破坏或棉塞脱掉、包装有明显的水浸者,不可作为无菌物
若木糖赖氨酸品脱使氧胆用酸。盐培琼脂养培基养或基平试板剂上等有疑,应似检菌落查生是长否，且符三合糖达铁琼到脂灭培菌养基后的的斜色面为泽红或色状、底态层,未为黄达色到，者或斜应面废黄弃色、底层黄
点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。
（2）装培养基的三角瓶，内容物不应超过总体积的2/3（例如500mL的三角瓶最好装300～350mL培养基，以防再次加热融化时爆沸）
。
若同稀释级两个平板的菌落数平均值不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1 倍或以上。
大肠埃希菌
不得检出
色或黑色，应。进取一步出进的行物适宜品的掉鉴落定试在验地，或确证误是放否不为沙洁门处菌,。或沾有水液,均视为受到污染,不可作为无菌物品 取（大出2肠）预 埃大培希型养氏高后菌使属压的蒸用 合控气胰制。 格锅酪菌取 物：大供放出 品豆试置胨液的,灭应液，合菌标体置物格培于有品养工灭分灭基作菌别菌台包物上日扎；品期好,，及应直有存接效放放入期于消限贮毒。藏筒内室，或物防品之尘间柜不内能过,严挤。禁与未灭菌物品混放。凡
中国药典2020无菌检查法
中国药典2020无菌检查法《中国药典2020》是中国药典委员会颁布的一部关于药物质量和药品标准的权威性指南。
其中，无菌检查法是一项重要的内容。
本文将从无菌检查法的定义、目的、步骤、设备和评价标准等方面进行详细阐述，以使读者对该法有更深入的了解。
一、无菌检查法的定义无菌检查法是指对药品或其他生物制品是否存在微生物污染的一种检查方法。
通过对样品进行无菌条件下的培养和观察，判断样品中是否有病原微生物或其他有害的微生物存在。
二、无菌检查法的目的无菌检查法的目的是确保药品在生产和使用过程中的无菌状态，保证药品的质量和安全性。
通过检查药品是否受到任何微生物污染，能有效预防细菌感染、交叉感染和其他相关疾病的发生。
三、无菌检查法的步骤1.准备工作：无菌检查需要准备一批无菌培养基、试管、平板和其他无菌实验器具。
2.取样：按照规定的取样方法，从待检测样品中取相应的样品量。
3.培养：将样品转入无菌培养基中，放入培养箱或孵化器中进行培养。
4.观察：培养一定时间后，对培养基进行观察。
根据培养基上是否有生长的微生物形态，判断样品是否存在微生物污染。
5.结果评价：根据无菌检查法所规定的评价标准，对观察结果进行判断，并作出相应的结论。
四、无菌检查法所需设备1.培养箱或孵化器：用于提供适宜的培养温度和湿度条件，以促进微生物的生长。
2.无菌工作台：提供无菌的工作环境，防止外界微生物的污染。
3.试管、平板、培养基：用于收集样品、培养微生物和观察微生物生长情况。
4.显微镜：用于观察培养基上的微生物形态。
五、无菌检查法的评价标准无菌检查法根据不同药品的要求，采用不同的评价标准来判断检查结果。
主要有以下几个方面：1.无菌：表示样品中不含有任何生长的微生物。
2.无菌状态：表示无菌状态有可能受到微生物污染，但在检查时没有检出任何微生物生长。
3.微生物计数：表示检查结果中存在一定数量的微生物，但其数量在可接受范围内，不会对药品的质量和安全产生影响。
中国药典2020无菌检查法
中国药典2020无菌检查法【原创版】目录1.概述2.检查法内容3.实施方法4.注意事项5.结论正文1.概述《中国药典 2020》是我国药品行业的权威标准，对药品的研发、生产、质量控制以及药品的审批上市等环节具有重要的指导意义。
其中，无菌检查法是药品质量控制中至关重要的一环，它关乎到药品的安全性和有效性。
本文将对《中国药典 2020》中的无菌检查法进行详细解读。
2.检查法内容无菌检查法主要包括以下内容：（1）检查原理：通过检测样品中微生物的数量，判断样品是否符合无菌要求。
（2）检查方法：包括直接涂片法、薄膜过滤法等。
（3）检查标准：根据药品的类型和用途，规定了不同的无菌标准。
例如，注射剂要求无菌，而口服制剂则要求微生物限度符合标准。
3.实施方法在实施无菌检查时，需要遵循以下步骤：（1）样品的采集和处理：采集样品，进行适当的处理，如灭菌、稀释等，以保证检查结果的准确性。
（2）检查操作：根据选定的检查方法，进行无菌检查。
例如，直接涂片法是将样品涂抹在培养基上，观察培养基上是否有微生物生长；薄膜过滤法是将样品通过薄膜过滤器，然后将滤膜在培养基上进行培养，观察培养基上是否有微生物生长。
（3）结果判定：根据检查结果，判断样品是否符合无菌要求。
4.注意事项在进行无菌检查时，需要注意以下几点：（1）采样：采样应具有代表性，以保证检查结果的准确性。
（2）器具：检查过程中使用的器具应严格灭菌，防止外源性微生物的污染。
（3）环境：检查环境应符合无菌要求，避免环境中的微生物对检查结果的影响。
（4）结果判定：结果判定应严格按照标准进行，避免主观判断导致的误差。
5.结论无菌检查法是药品质量控制中至关重要的一环，对保证药品的安全性和有效性具有重要意义。
《中国药典 2020》对无菌检查法进行了详细的规定，为药品企业和研究机构提供了明确的指导。
药典无菌检查方法验证及操作要点
2. 培养基
2.1 培养基的灭菌 配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
2.2 培养基的保存 制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的
环境。培养基若保存于非密闭容器中，一般在三 周内使用；若保存于密闭容器中一般可在一年内 使用。
•
2.3 培养温度 硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃培养
。改良马丁培养基置23～28℃培养。 2.4 培养基的适用性检查
•
黑曲霉
改良马丁琼脂斜面培养基上， 23～28℃培养5～7天，
加入3～5ml 0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗
脱
吸出孢子悬液(用管口带有薄的无菌
棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管)至无菌
试管内
用0.9％无菌氯化钠溶液制成每lml含孢
子数小于l00cfu的孢子悬液。 •
4.3 薄膜过滤法 将规定量的供试品按薄膜过滤法过滤，冲
药典无菌检查方法验证 及操作要点
2020年4月29日星期三
1 前言 1.1 定义
无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药
品、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方
法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明
了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
•
1.2 实验环境条件要求
无菌检查应在环境洁净度10 000级下的 局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔 离系统中进行，其全过程必须严格遵守无 菌操作，防止微生物污染。单向流空气区、 工作台面及环境应定期按《医药工业洁净 室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方 法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔 离系统按相关的要求进行验证，其内部环 境的洁净度须符合无菌检查的要求。
3）枯草芽孢杆菌
(Bacillussubtilis)[CMCC(B)63 501]
无菌检验技术—无菌检查方法验证
• 3.3无菌检查的范围 • 凡进入人体无菌部位(人体的血液循环பைடு நூலகம்统、肌肉、皮下组织)或接触创
伤、溃疡面等部位而发生作用的制品或要求无菌的材料、无菌器具均应 进行无菌检查。对于规定灭菌的药物，包括注射剂及用于体腔、严重烧 伤、溃疡及眼科用药等，必须严格无菌，即在规定检验量的供检品中不 得检出活微生物。
任务3 无菌检验方法验证 知识点3 无菌检查方法
• 3 无菌检查方法 • 3.1无菌检查法概念 • 无菌检查法是指检查《中国药典》要求应无菌的药品、医疗器具、原料、 辅料及其他要求无菌的品种是否染有活菌的一种方法（供试品符合无菌检查 法的规定，仅进表明了供试品在该检查条件下未发现被微生物污染）。 • 为了保证药品的卫生质量，保证药品在临床上的安全使用和保障人民的健 康，《中国药典》规定：注射用药、灭菌的外用制剂等均需做无菌检查。
• 的制剂。心脏瓣膜以及固定金属板和有机器材等。
• (3)冲洗剂，即用于冲洗开放性伤口或腔体的冲洗剂。
• (4)眼用制剂。
• (5)用于烧伤、创伤或溃疡的制剂。包括：用于烧伤或严重创伤的局部用 散剂、凝胶剂、软膏剂、乳膏剂；用于烧伤、创伤或溃疡的气雾剂和喷 雾剂等。
• (6)用于手术、耳部伤口或耳膜穿孔的滴耳剂或洗耳剂。 • (7)用于手术或创伤的鼻用制剂。 • (8)用于止血并可被组织吸收的制剂。如明胶发泡剂、凝血酶等，用于止
• 3.2验证目的 • 确认所用的无菌检查方法适用于“所有无菌产品”的无菌检查。 • 确保检查结果的准确性、可靠性、准确性和重现性以及检查方法的完整 性。 • 通过对不同批次产品无菌检查的比较，对医用即无菌产品的生产全过程 进行质量监控。 • 3.3验证范围 • “所有无菌产品”的无菌检查。
• 3.4验证条件 • 3.4.1验证用菌株 • 金黄色葡萄球菌 • 菌种传代次数铜绿假单胞菌 • 枯草芽孢杆菌 • 生孢梭菌 • 白色念珠菌
新版《中国药典》中关于无菌检查法的要点
一、概述新版《我国药典》是我国药品质量标准的权威参考书，对药品的生产、质量控制和使用起着重要的指导作用。
其中，无菌检查法作为一项关乎药品安全的重要检验方法，在新版《我国药典》中有着详细的规定和要求。
本文将针对新版《我国药典》中关于无菌检查法的要点进行分析和总结，以帮助广大药品生产企业和相关从业人员更好地遵循新版《我国药典》的要求，确保药品的质量和安全。
二、无菌检查法的定义和原理1. 无菌检查法是指通过一系列的操作和文化方法，检验药品制剂和原料是否受到微生物污染的方法。
其原理在于通过适当的培养基和环境条件，培养并鉴定出可能存在的微生物，从而判断药品的无菌性。
三、新版《我国药典》对无菌检查法的要求1. 无菌检查法的适用范围：新版《我国药典》详细规定了无菌检查法在药品制剂和原料中的适用范围，包括但不限于针剂、眼用制剂、无菌粉针剂等。
2. 无菌检查的方法和步骤：新版《我国药典》对无菌检查的方法和步骤做了具体的规定，包括样品处理、接种培养和培养条件等。
其中，对于各类制剂和原料的不同，还有相应的特殊处理和要求。
3. 无菌检查的检测指标：新版《我国药典》列出了无菌检查的检测指标，包括菌落总数、大肠杆菌、假单胞菌等。
对于不同的药品制剂和原料，还有相应的特殊微生物指标。
4. 无菌检查的结果判定：新版《我国药典》对无菌检查的结果判定做了明确的规定，包括阴性对照、阳性对照、样品处理和培养条件等。
针对不同情况下的结果判定，需要做出相应的处理和记录。
四、新版《我国药典》无菌检查法的实施和注意事项1. 实施要求：新版《我国药典》对无菌检查法的实施做了明确的要求，包括测试环境、培养基的选择、试验设备的保养和校准等。
对从业人员的要求也有相应的规定，包括岗前培训、操作规程和个人卫生等。
2. 质量控制：新版《我国药典》要求药品生产企业建立健全的质量控制体系，对无菌检查法的实施进行全程跟踪和记录。
并对不符合要求的样品做出相应的处理和报告。
无菌检验操作方法验证
无菌检验操作方法验证无菌检验操作方法验证是指对实验室内进行的无菌操作方法进行验证，以确定操作方法是否能够有效地保持实验室内的环境无菌，以及保证实验结果的准确性和可靠性。
无菌检验操作方法验证是实验室质量管理的重要环节，也是一项必要的规范操作。
下面将详细介绍无菌检验操作方法验证的步骤和要点。
1. 准备实验材料和设备：首先，需要准备无菌操作所需的实验材料和设备，包括培养基、无菌培养皿、无菌试剂、无菌滤纸等。
同时，要确保设备的无菌性，如离心机、超净工作台、培养箱等。
2. 设定验证方案：为了确保验证的有针对性和可行性，需要制定详细的验证方案，确定验证的目的、方法、步骤和评价标准等。
验证方案的编制应根据相关规范和实验室的具体情况进行。
3. 进行验证实验：在进行验证实验之前，需要对实验人员进行培训，使其掌握无菌操作的正确方法和技巧。
验证实验的过程中，应按照操作规程进行操作，注意操作的顺序、速度和力度。
实验过程中应严格遵守无菌操作规范，如使用消毒酒精擦拭操作台面和手部、佩戴无菌手套、使用一次性无菌物品等。
同时，要注意控制环境因素对实验结果的影响，如避免空气中的微生物等外源性污染。
4. 评价验证结果：完成验证实验后，需要对验证结果进行评价和分析。
评价内容包括环境无菌状况、培养基的无菌性、操作人员的无菌技术等。
评价可以通过直接培养培养基观察生长情况，或者使用生物指示物进行验证。
5. 记录和整理验证数据：对验证过程中的各项数据、结果和结论进行记录和整理。
记录内容包括验证的日期、操作人员、验证方案、验证结果等。
整理验证数据有助于对验证过程进行追溯和分析，以及后续改进操作方法和提高无菌操作水平。
6. 分析验证结果：根据验证的结果和数据分析，评估操作方法验证的合格性和有效性。
如果验证结果符合规范要求，则该操作方法验证合格；如果验证结果不符合规范要求，则需要分析问题产生的原因，并进行相应的改进和调整。
7. 实施操作方法的修订：根据验证结果的分析和评估，对操作方法进行修订和改进。
中国药典2020版无菌检查法
中国药典2020版无菌检查法
无菌检查是药典中用于评估药品无菌性的一种方法。
以下是中国药典2020版中关于无菌检查的要求：
1. 无菌试验方法：根据药物性质和使用的目的，可以采用常规法、膜过滤法、波动消耗法等无菌试验方法。
2. 试剂和材料：无菌试验需要准备无菌培养基、无菌器皿（如培养瓶、试管、平板等）、无菌针头、移液器、层流罩等试剂和设备。
3. 检测操作：首先要进行无菌状态的确认，包括无菌器具、培养基和环境的无菌检查。
然后将样品加入培养基中，通过适当的方法进行培养，如摇瓶培养、倾斜培养等。
培养时间和温度要根据不同试验要求来设定。
4. 结果判定：检查培养基是否出现细菌、真菌或其它微生物的生长。
根据结果进行判定，如果培养基无细菌生长，可认为样品为无菌。
如果有生长，则认为样品不符合无菌要求。
需要注意的是，无菌检查方法的选择和具体实施要根据不同药品的特点和要求来确定，且检测结果应符合相关法规和规范的要求。
中国药典2020无菌检查法
中国药典2020无菌检查法
摘要：
1.概述
2.无菌检查法的标准和要求
3.无菌检查法的具体操作步骤
4.无菌检查法的应用范围
5.无菌检查法的重要性
正文：
1.概述
《中国药典2020》是一部由国家药典委员会编写的，包含了我国药品质量标准的权威性文献。
其中，无菌检查法是药典中一个重要的检查方法，主要用于评估药品的无菌状态，以确保药品的质量和安全性。
2.无菌检查法的标准和要求
无菌检查法的标准和要求主要依据我国《药品生产质量管理规范》(GMP) 和《药品注册管理办法》等相关法规制定。
无菌检查法要求药品在生产、储存和运输过程中，必须保持无菌状态，防止微生物污染。
3.无菌检查法的具体操作步骤
无菌检查法的具体操作步骤主要包括以下几个方面：
(1) 采样：在药品生产过程中，按照规定的方法和数量进行采样。
(2) 培养：将采集的样品在无菌条件下，放入培养基中进行培养。
(3) 观察：在规定的时间内，观察培养基中是否有微生物生长。
(4) 结果判断：根据观察结果，判断药品是否符合无菌要求。
4.无菌检查法的应用范围
无菌检查法广泛应用于药品的生产、质量控制和药品检验等领域。
特别是对于注射剂、眼用制剂、无菌制剂等高风险药品，无菌检查法是保证其质量安全的重要手段。
5.无菌检查法的重要性
无菌检查法对于确保药品的质量和安全性具有重要意义。
通过无菌检查法，可以有效地防止微生物污染，降低药品不良反应的发生率，保障患者的用药安全。
同时，无菌检查法也是药品生产质量管理的重要组成部分，对于提升药品生产企业的质量管理水平具有重要作用。
中国药典 无菌检查法
中国药典无菌检查法在当今的医药行业中，无菌检查法是确保药品安全性和有效性的重要手段。
中国药典作为我国药品质量标准的权威法规，对于无菌检查法的规定和实践具有极其重要的指导意义。
本文将详细阐述中国药典中无菌检查法的相关内容，以期为药品生产和质量控制提供有益的参考。
一、中国药典无菌检查法概述中国药典无菌检查法是针对药品中微生物污染进行检查和评估的标准方法。
该方法通过对样品进行适当的处理、培养和观察，以确定样品中是否存在微生物。
无菌检查法对于保证药品质量和安全性具有至关重要的作用，因为微生物污染可能导致药品失效、不良反应甚至危害患者健康。
二、无菌检查法的实践操作1.样品采集与处理在进行无菌检查之前，必须对样品进行适当的采集和处理。
采集的样品应当具有代表性，能够反映药品的整体质量。
处理过程中应避免交叉污染和外界微生物的引入。
2.培养基的选择与制备无菌检查中使用的培养基必须符合中国药典的规定，具有良好的选择性、灵敏度和特异性。
培养基的制备过程需严格按照配方进行，确保质量和稳定性。
3.接种与培养将处理后的样品接种于适宜的培养基中，按照规定的温度和时间进行培养。
接种过程中要保证无菌操作，防止污染。
4.观察与结果判定在规定的培养期结束后，对培养基进行仔细观察，记录任何可见的微生物生长情况。
根据观察结果进行无菌检查的判定，确定药品是否符合无菌要求。
三、无菌检查法的质量控制为确保无菌检查法的准确性和可靠性，必须加强实验室的质量控制。
这包括对实验人员的培训、实验设备的维护与校准、实验环境的监控以及实验过程的规范化和标准化。
同时，应定期进行内部审核和外部质量评估，以确保无菌检查法的执行符合中国药典的要求。
四、结论与展望无菌检查法作为药品质量保证的重要环节，在医药行业中具有举足轻重的地位。
中国药典作为我国药品质量的法规性文件，对于无菌检查法的规定和实践提供了明确的指导。
通过深入理解和严格执行中国药典的相关要求，我们能够更好地保障药品的安全性和有效性，为公众健康事业做出积极贡献。
无菌检查法试验具体操作方法
❖ 对热比较敏感，对一般抗生素不敏感。 ❖ 通常，滤过除菌的方法对支原体是没有作用的。
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四、具体检测方法
❖ 细胞培养（特别是传代细胞）被支原体污染是 个世界性问题。
❖ 在细胞培养中支原体感染发生率达到63%，国 内外研究表明，大约有二十多种支原体能污染 细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支 原体。
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四、具体检测方法
供试品复检 ❖ 无菌试验如经确认无效，应重试。
重试时，重新取同量供试品，依法重试， 如无菌生长，判供试品符合规定 ， 如有菌生长，判供试品不符合规定。
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四、具体检测方法
❖ 支原体：
❖ 支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径 0．2um)并独立生活的微生物 .
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三、无菌操作要求及注意事项
4.吸取过营养液后的吸管不能再用火焰烧灼，因残留 在吸管头中营养液能烧焦形成炭膜，再用时会把有 害物带入培养基中。 开启、关闭供试品时，火焰灭菌时间要短，防止因 温度过高灭活供试品。 另外胶塞过火焰时也不能时间长，以免烧焦产生有 毒气体，危害供试品。
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四、具体检测方法
当满足下列至少一个条件时，判实验结果无效： ❖ 对无菌检查相关设施的微生物监控数据表明其不符合
其规定； ❖ 对无菌检查过程的回顾，揭示了本操作程序是错误的； ❖ 阴性对照管有菌生长； ❖ 供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证微生物生长
是因无菌检查中使用的物品和无菌操作技术不当引起 的；
四、具体检测方法
检测方法
无
新版中国药典中关于无菌检查法的要点
新版《中国药典》中关于无菌检查法的要点7月2日，国家药品监督管理局、国家卫生健康委发布公告，正式颁布2020年版《中国药典》，新版药典将于今年12月30日起正式实施。
新版药典对环境监测、无菌检查方法、微生物检测、灭菌验证等都做出了相关要求。
本文结合了《医疗器械无菌试验检查要点指南》中的检查内容，对新版《中国药典》中关于无菌检查法的要点进行了整理，供大家参考。
1、无菌检查要求（1）无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
（2）单向流空气区域、工作台面及受控环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
（3）日常检验需对试验环境进行监测。
注意：“受控环境”主要的关注指标应该是悬浮粒子、浮游菌和沉降菌受控，其他如压差、温湿度等的指标和监测频度也应满足《药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则》的要求。
2、培养基的制备及培养条件（1）培养基可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或商品化的预制培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
（2）制备好的培养基若不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在2~25°C 、避光的环境下保存，并在经验证的保存期内使用。
注意：新版药典将“成品培养基”调整为“商品化的预制培养基”。
新版药典不再强调“非密闭-三周”、“密闭-一年”的规定，便于企业实践掌握；但企业应最好具备稳定的验证过程和结果，以支持封闭条件和保存周期。
3、培养基的适用性检查无菌性检查每批培养基一般随机取不少于 5 支（瓶），置各培养基规定的温度培养14 天，应无菌生长。
注意：应考虑实践中用于无菌性检查培养的试管装灭菌培养基与无菌检验用的三角瓶装培养基在灭菌方法验证时的两种包装的温度、F0等结果。
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资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
1.1 定义
无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药
品、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方
法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明
了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
1.2 实验环境条件要求 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
无菌检查应在环境洁净度10 000级下的 局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔 离系统中进行，其全过程必须严格遵守无 菌操作，防止微生物污染。单向流空气区、 工作台面及环境应定期按《医药工业洁净 室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方 法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔 离系统按相关的要求进行验证，其内部环 境的洁净度须符合无菌检查的要求。
2.3 培养温度 硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃培养。
改良马丁培养基置23～28℃培养。 2.4 培养基的适用性检查
无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及改 良马丁培养基等应符合培养基的无菌性检查 及灵敏度检查的要求。
2.4.1无菌性检查 每批培养基随机取不少于5支(瓶)，培养14 天，应无菌生长。
2. 培养基
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2.1 培养基的灭菌 配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
2.2 培养基的保存 制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的
环境。培养基若保存于非密闭容器中，一般在三 周内使用；若保存于密闭容器中一般可在一年内 使用。
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4.1 菌种
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1）金黄色葡萄球菌
(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26 003]
2）铜绿假单胞菌
(Pseudomonasaerugznosa)[CMCC(B)10 104]
3）枯草芽孢杆菌
(Bacillussubtilis)[CMCC(B)63 501]
4）生孢梭菌
(Clostridiumsporogenes)[CMCC(B)64 941]
5）白色念珠菌
(Candidaalbicans)[CMCC(F)98 001]
6）黑曲霉
(Aspergillusniger)[CMCC(F)98 003]
4.2 菌液制备
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制备的菌液，一般当日使用。
4. 方法验证试验
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
目的: 1)证明所采用的方法适合于该药品的无 菌检查
2) 确认供试品在该实验条件下无抑菌 活性或其抑菌活性可以忽略不计。
3) 确保在实际检验条件下，该供试品 的无菌检查法的准确性、有效性和重现性。
验证时，按“供试品的无菌检查”的规定 及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进 行验证。
各试验菌及相应的培养基逐一进行验证。
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加
供
试
金 葡
铜 绿
白 念
品
枯
生
黑
草
孢
曲
霉
对
照
金
铜
白
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绿
念
管
枯
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黑
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曲
霉
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4.4 直接接种法
取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙 醇酸盐流体培养基8管，分别接人小于 l00cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、 枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2管；
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、 枯草芽孢 杆菌、生孢梭菌接种至硫乙醇酸盐流体培养 基中30～35℃培养3天；
白色念珠菌、黑曲霉接种至改良马丁培养基 中23～28℃培养5天。
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3. 稀释液、冲洗液及其制备方法 0.1％蛋白胨水溶液 pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液
如含供试品的任一容器中微生物生长微 弱、缓慢或不生长，则供试品的该检验量在 该检验条件下有抑菌作用，可采用1)增加冲 洗量，或增加培养基的用量，2)使用中和剂， 或更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌 作用，并重新进行方法验证。
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5. 供试品的无菌检查 5.1 无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种 法。只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤 法。进行供试品无菌检查时，所采用的检验 方法和检验条件应与验证的方法相同
取符合直接接种法培养基用量要求的改良 马丁培养基4管，分别接入小于l00cfu的白 色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接人规定 量的供试品，另1管作为对照，按规定的温度 培养3～5天。
4.5 结果判断 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
与对照管比较，如含供试品各容器中的 试验菌均生长良好，则供试品的该检验量在 该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以 忽略不计，照此检查法和检验条件进行供试 品的无菌检查。
黑曲霉
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改良马丁琼脂斜面培养基上， 23～28℃培养5～7天，
加入3～5ml 0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗
脱
吸出孢子悬液(用管口带有薄的无菌
棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管)至无菌
试管内
用0.9％无菌氯化钠溶液制成每lml含孢
子数小于l00cfu的孢子悬液。
菌种
菌株传代次数 培养基接种结判断资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
2.4.2 灵敏度检查
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞 菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、 白色念珠菌、黑曲霉
不得超过5代
每种菌接种至2管相应的培养基， 另取一支不接种作空白对照，按 规定温度时间培养。
空白对照管应无菌生长，每种 菌接种后的2管培养基管均生长 良好，该培养基的灵敏度检查符 合规定。
4.3 薄膜过滤法
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
将规定量的供试品按薄膜过滤法过滤，冲
洗，在最后一次的冲洗液中加入试验菌（小于
100cfu），过滤。取出滤膜接种至相应的培 养基中，或将培养基加至滤筒内。
另取一滤桶，不过滤供试品，其它操作同 上，作为对照.
将含培养基的容器按规定温度培养3～5天。
金黄色葡萄球菌（铜绿假单胞菌、枯草芽 孢杆菌) 营养肉汤（或营养琼脂培养基）
生孢梭菌 硫乙醇酸盐流体培养基
30～35℃培养18～24小时；
白色念珠菌 改良马丁培养基（或改良 马丁琼脂培养基）
23～28℃培养24～48小时
上述培养物 用0.9％无菌氯化钠溶液制成每 1ml含菌数小于l00cfu(菌落形成单位)的菌悬 液。