小鼠胰岛素(Insulin)说明书
Insulin中文说明书
l
2001-07
374
概述：
胰岛素是一分子量约为６０００Ｄ的激素肽，由胰岛的Ｂ细胞分泌，经门静脉和肝脏进 入血循环。胰岛素的释放呈波段性，并紧随血糖分泌周期之后，约迟２分钟。 胰岛素由二条肽链组成，ａ－链含２１个氨基酸，β－链含３０个氨基酸。胰岛的Ｂ细胞先 合成单链的前胰岛素原，随后迅速裂解成前胰岛素。特异的蛋白酶再将前胰岛素裂 解成胰岛素和Ｃ－肽。全部的Ｃ－肽和一半的胰岛素即刻被释放进入血流，另一半的胰 岛素被储留在肝脏。 血循环中的胰岛素半衰期为３－５分钟，主要在肝脏降解。前胰岛素和Ｃ－肽主要在肾 脏灭活和排泄。 胰岛素的氨基酸序列在进化过程中高度保守。因此，在基因工程人胰岛素之前，已 成功将猪或牛胰岛素用于糖尿病的治疗。 胰岛素的生理作用通过特异的受体传导，主要通过肝脏、脂肪组织和肌肉系统的细 胞摄取血糖，这是胰岛素降血糖作用的基础。 血清胰岛素检测主要用于针对低血糖患者。可帮助了解葡萄糖／胰岛素比值和有关 胰岛素分泌情况，如甲糖宁试验、胰高血糖素试验、口服葡萄糖耐量试验及饥饿激 发试验等。 尽管胰腺合成胰岛素的量经常是通过测定Ｃ－肽来判定，但仍有必要测定胰岛素。例 如，治疗剂量的非人源性胰岛素可导致产生抗胰岛素抗体。在这些病例中，检测血 清胰岛素的浓度反映了游离的、具有生理活性的胰岛素含量，而Ｃ－肽测定反映的是 内源性胰岛素分泌的总量。 胰岛素代谢紊乱可对许多代谢过程产生重大影响。游离的、具有生理活性的胰岛素 含量过低，可导致糖尿病。部分原因可能是β－细胞的破坏（Ｉ型糖尿病）、胰岛素 活性降低或胰腺合成减少（ＩＩ型）、循环抗胰岛素抗体、胰岛素释放延迟或胰岛素 受体缺乏（不足）。 另一方面，自发的、不规则的胰岛素分泌是低血糖的常见原因。这种状况下糖原异 生被抑制，可见于严重的肝、肾功能衰竭，胰岛细胞瘤或癌。也有假性低血糖症。 糖耐量降低人群中有３％的人其代谢状况经一段时间后会恶化成糖尿病。怀孕期间糖 耐量降低需要治疗。胎儿死亡危险性的明显升高要求加强监测。 Ｅｌｅｃｓｙｓ 胰岛素试验采用了二种人胰岛素特异的单克隆抗体。 原理： 采用双抗体夹心法，整个过程１８分钟完成。 · 第１步：２０µl标本、生物素化的抗胰岛素单克隆抗体和钌（Ｒｕ）标记的抗胰岛素 单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。 · 第２步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉 亲和素间的反应结合到微粒上。 · 第３步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质 被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 ·检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过２点定标校正，由从 试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。 试剂： Ｍ：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），１瓶，６．５ｍｌ。粒子浓度０．７２ｍｇ／ｍｌ，生物
小鼠胰岛素(Insulin)说明书
小鼠胰岛素(Insulin)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平。
用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin)，再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)含量。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
碧云天生物技术 Min6 (小鼠胰岛β细胞) 产品说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线：400-168-3301或800-8283301订货e-mail：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站微信公众号Min6 (小鼠胰岛β细胞)产品编号产品名称包装C7406 Min6 (小鼠胰岛β细胞) 1支/瓶产品简介：Organism Tissue Morphology Culture Properties Mus musculus (Mouse) Pancreas Epithelial Adherent本细胞株详细信息如下:General InformationCell Line Name Min6 (Mouse Islet Β Cells)Synonyms Min6; MIN-6; Mouse INsulinoma 6Organism Mus musculus (Mouse)Tissue PancreasCell Type －Morphology EpithelialDisease Mouse insulinomaStrain －Biosafety Level* －Age at Sampling 13 weeksGender －Genetics －Ethnicity －Applications －Category Transformed cell line* Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.CharacteristicsKaryotype －Virus Susceptibility －Derivation －Clinical Data －Antigen Expression －Receptor Expression －Oncogene －Genes Expressed －Gene expressiondatabases －Metastasis －Tumorigenic －Effects －Comments －Culture MethodDoubling Time －Methods for Passages Wash by PBS once then 0.05% trypsin-EDTA solution and incubate at room temperature, observe cells under an inverted microscope until cell layer is dispersed (usually 1 minute)Medium DMEM (high glucose) 10% FBS+0.05mM 2-Mercaptoethanol MCH2 / 5 C7406 Min6 (小鼠胰岛β细胞)400-1683301/800-8283301 碧云天/BeyotimeSpecial Remarks －Medium Renewal －Subcultivation Ratio 1:5 to 1:15 Growth Condition 95% air+ 5% CO 2, 37ºC Freeze medium DMEM (high glucose)+20% FBS+10% DMSO ，也可以订购碧云天的细胞冻存液(C0210)。
小鼠胰岛素自身抗体(IAA)(PCT)ELISA试剂盒产品简介
小鼠胰岛素自身抗体(IAA）(PCT）ELISA试剂盒产品简介小鼠胰岛素自身抗体(IAA）(PCT）ELISA试剂盒产品简介小鼠胰岛素自身抗体(IAA）(PCT）ELISA试剂盒实验原理小鼠胰岛素自身抗体(IAA）(PCT）ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被小鼠胰岛素自身抗体(IAA）(PCT）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的小鼠胰岛素自身抗体(IAA）(PCT）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处理及要求1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。
最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
雷生物小鼠胰岛素ELISA试剂盒使用手册说明书
RayBio® Mouse Insulin ELISA KitCatalog #: ELM-InsulinUser ManualLast revised June 14, 2021Caution:Extraordinarily useful information enclosedISO 13485 Certified3607 Parkway Lane, Suite 100Norcross, GA 30092 Tel: 1-888-494-8555 (Toll Free) or 770-729-2992, Fax:770-206-2393Web: , Email: *******************RayBiotech, Inc.________________________________________RayBio® Mouse Insulin ELISA Kit ProtocolTable of ContentsSection Page # I.Introduction3II.Storage4III.Reagents4IV.Additional Materials Required4V.Reagent Preparation5VI.Assay Procedure6VII.Assay Procedure Summary7VIII.Calculation of ResultsA. Typical DataB. SensitivityC. Spiking & RecoveryD. LinearityE. Reproducibility 8 8 8 9 9 10IX.Specificity10X.Troubleshooting Guide11Please read the entire manual carefully before starting your experimentI. INTRODUCTIONThe RayBio® Mouse Insulin ELISA kit is an in vitro enzyme-linked immunosorbent assay for the quantitative measurement of Mouse Insulin in serum, plasma (Collect plasma using EDTA and Citrate as an anticoagulant. Heparin is not recommended as anticoagulants for use in this assay) and cell culture supernatants. This assay employs an antibody specific for Insulin coated on a 96-well plate. Standards and samples are pipetted into the wells and Insulin present in a sample is bound to the wells by the immobilized antibody. The wells are washed and biotinylated anti-Mouse Insulin antibody is added. After washing away unbound biotinylated antibody, HRP-conjugated streptavidin is pipetted to the wells. The wells are again washed, a TMB substrate solution is added to the wells and color develops in proportion to the amount of Insulin bound. The Stop Solution changes the color from blue to yellow, and the intensity of the color is measured at 450 nm.Need your results faster? Try RayBiotech's SpeedE LISA platform for quantitative detection in just three hours.https:///speedelisa-kits/Short on sample, or need higher sensitivity? Check out the IQELISA™ Immuno-PCR platform. https:///immuno-pcr/II. STORAGEThe entire kit may be stored at -20°C for up to 1 year from the date of shipment. Avoid repeated freeze-thaw cycles. The kit may be stored at 4°C for up to 6 months. For extended storage, it is recommended to store at -80°C. For prepared reagent storage, see table below. III. REAGENTSIV. ADDITIONAL MATERIALS REQUIRED1.Microplate reader capable of measuring absorbance at 450 nm.2.Precision pipettes to deliver 2 µl to 1 ml volumes.3.Adjustable 1-25 ml pipettes for reagent preparation.4.100 ml and 1 liter graduated cylinders.5.Absorbent paper.6.Distilled or deionized water.7.Log-log graph paper or computer and software for ELISA data analysis.8.Tubes to prepare standard or sample dilutions.V. REAGENT PREPARATION1.Bring all reagents and samples to room temperature (18 - 25ºC) before use.2.Assay Diluent B (Item E) should be diluted 5-fold with deionized or distilled water before use.3.Sample dilution: Assay Diluent C (Item L) should be used for dilution of serum, plasma, and cell culture supernatant samples. The suggested dilution for normal serum/plasma is 2 fold. Collect plasma using EDTA and/or Citrate as anticoagulants. Heparin is not recommended as an anticoagulant for use in this assay. Note: Levels of Insulin may vary between different samples. Optimal dilution factors for each sample must be determined by the investigator.4.Preparation of standard: Briefly spin a vial of Item C. Add 400 µl Assay Diluent C (Item L) into Item C vial to prepare a 1,400 µIU/ml standard solution. Dissolve the powder thoroughly by a gentle mix. Add 180 µl Insulin standard (1,400 µIU/ml) from the vial of Item C, into a tube with 450 µl Assay Diluent C to prepare a 400 µIU/ml standard solution. Pipette 250µl Assay Diluent C into each tube. Use the 400 µIU/ml standard solution to produce a dilution series (shown below). Mix each tube thoroughly before the next transfer. Assay Diluent C serves as the zero standard (0 µIU/ml).180 µl250 µl 250 µl 250 µl 250 µl 250 µl250 µlStd1Std2Std3Std4Std5Std6Std7Zero Standard Diluent volume Item C + 400 µl450 µl250 µl250 µl250 µl250 µl250 µl250 µl250 µlConc.1,400 µIU/ml 400 µIU/ml 200 µIU/ml 100 µIU/ml 50 µIU/ml 25 µIU/ml 12.5 µIU/ml 6.25 µIU/ml0 µIU/ml5.If the Wash Concentrate (20X) (Item B) contains visible crystals, warm to roomtemperature and mix gently until dissolved. Dilute 20 ml of Wash Buffer Concentrate into deionized or distilled water to yield 400 ml of 1X Wash Buffer.6.Briefly spin the Detection Antibody vial (Item F) before use. Add 100 µl of 1X AssayDiluent B (Item E) into the vial to prepare a detection antibody concentrate. Pipette up and down to mix gently (the concentrate can be stored at 4ºC for 5 days). The detection antibody concentrate should be diluted 80-fold with 1X Assay Diluent B (Item E) andused in step 5 of Part VI Assay Procedure.7.Briefly spin the HRP-Streptavidin concentrate vial (Item G) and pipette up and down tomix gently before use, as precipitates may form during storage. HRP-Streptavidinconcentrate should be diluted 400-fold with 1X Assay Diluent B (Item E).For example: Briefly spin the vial (Item G) and pipette up and down to mix gently. Add30 µl of HRP-Streptavidin concentrate into a tube with 12 ml 1X Assay Diluent B toprepare a 400-fold diluted HRP-Streptavidin solution (don't store the diluted solution for next day use). Mix well.VI. ASSAY PROCEDURE1.Bring all reagents and samples to room temperature (18 - 25ºC) before use. It isrecommended that all standards and samples be run at least in duplicate.bel removable 8-well strips as appropriate for your experiment.3.Add 100 µl of each standard (see Reagent Preparation step 3) and sample intoappropriate wells. Cover wells and incubate for 2.5 hours at room temperature withgentle shaking.4.Discard the solution and wash 4 times with 1X Wash Solution. Wash by filling each wellwith Wash Buffer (300 µl) using a multi-channel Pipette or autowasher. Completeremoval of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash,remove any remaining Wash Buffer by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.5.Add 100 µl of 1X prepared biotinylated antibody (Reagent Preparation step 6) to eachwell. Incubate for 1 hour at room temperature with gentle shaking.6.Discard the solution. Repeat the wash as in step 4.7.Add 100 µl of prepared Streptavidin solution (see Reagent Preparation step 7) to eachwell. Incubate for 45 minutes at room temperature with gentle shaking.8.Discard the solution. Repeat the wash as in step 4.9.Add 100 µl of TMB One-Step Substrate Reagent (Item H) to each well. Incubate for 30minutes at room temperature in the dark with gentle shaking.10.Add 50 µl of Stop Solution (Item I) to each well. Read at 450 nm immediately.VII. ASSAY PROCEDURE SUMMARY1.Prepare all reagents, samples and standards as instructed.2.Add 100 µl standard or sample to each well. Incubate 2.5 hours at room temperature.3.Add 100 µl prepared biotin antibody to each well. Incubate 1 hour at room temperature.4.Add 100 µl prepared Streptavidin solution. Incubate 45 minutes at room temperature.5.Add 100 µl TMB One-Step Substrate Reagent to each well. Incubate 30 minutes atroom temperature.6.Add 50 µl Stop Solution to each well. Read at 450 nm immediately.VIII. CALCULATION OF RESULTSCalculate the mean absorbance for each set of duplicate standards, controls and samples, and subtract the average zero standard optical density. Plot the standard curve on log-log graph paper or using Sigma plot software, with standard concentration on the x-axis and absorbance on the y-axis. Draw the best-fit straight line through the standard points.A. TYPICAL DATAThese standard curves are for demonstration only. A standard curve must be run with each assay.B. SENSITIVITYThe minimum detectable dose of Mouse Insulin was determined to be 5 µIU/ml.Minimum detectable dose is defined as the analyte concentration resulting in an absorbance that is 2 standard deviations higher than that of the blank (diluent buffer).C. SPIKING & RECOVERYRecovery was determined by spiking various levels of Mouse Insulin into the sample types listed below. Mean recoveries are as follows:D. LINEARITYE. REPRODUCIBILITYIntra-Assay CV%: <10%Inter-Assay CV%: <12%IX. SPECIFICITYThis ELISA antibody pair detects mouse, human, rat, porcine and bovine Insulin.X. TROUBLESHOOTING GUIDEProblem Cause SolutionPoor standard curve Inaccurate pipettingImproper standarddilutionCheck pipettesBriefly centrifuge Item C and dissolvethe powder thoroughly by gently mixingLow signal Improper preparation ofstandard and/orbiotinylated antibodyToo brief incubationtimesInadequate reagentvolumes or improperdilutionBriefly spin down vials before opening.Dissolve the powder thoroughly.Ensure sufficient incubation time. Assayprocedure step 3 may be doneovernight at 4°C with gentle shaking(note: may increase overall signalsincluding background).Check pipettes and ensure correctpreparationLarge CV Inaccurate pipettingAir bubbles in wellsCheck pipettesRemove bubbles in wellsHigh background Plate is insufficientlywashedContaminated washbufferReview the manual for proper wash. Ifusing a plate washer, ensure that allports are unobstructed.Make fresh wash bufferLow sensitivity Improper storage of theELISA kitStop solutionStore your standard at <-70ºC afterreconstitution, others at 4ºC. Keepsubstrate solution protected from light.Add stop solution to each well beforereading plateRayBio® ELISA KitsOver 4,000 ELISA kits available, visit /ELISA-Kits for details.This product is for research use only.©2020 RayBiotech, Inc。
胰岛素储存指南说明书
INSULIN STORAGE GUIDEWisconsin Department of Health Services / Division of Quality AssuranceP-01904 (06/2023)Insulin is available from drug manufacturers in two basic packages – vials and pensGeneral insulin storage requirements are as follows:1. Never freeze; frozen insulin should be thrown away.2. Never use insulin beyond the expiration date stamped on the vial, pen, or cartridge that is supplied from thedrug manufacturer.3. Never expose insulin to direct heat or light.4. Inspect insulin prior to each use. Any insulin that has clumps or solid white particles should not be used.Insulin that is supposed to be clear should not have any cloudy appearance.5. Check storage guidelines specific to the insulin formulation. This is usually in the product package insert.6. Unopened, not-in-use insulin should be stored in a refrigerator at a temperature of 36-46º F.7. Opened, in-use insulin should be stored at a room temperature below 86º F.8. If receiving insulin through the mail, always confirm that the insulin is going to be stored under properconditions.Mixing insulin in vials or in syringes is a generally acceptable approach to customize insulin treatment and minimize injections. It is recommended that the same technique or procedure to mix and store these customized preparations be utilized. Some types of insulin, when mixed, may react with each other; therefore, it is recommended that all mixtures be stored for a consistent amount of time before using or that they be used immediately.When mixing insulin, it is extremely important that the rapid-acting insulin be drawn into the syringe FIRST, followed by the long acting. Before mixing insulin, a pharmacist or physician should be consulted.The following tables address specific expiration or beyond-use dating guidelines that apply to insulin products. The tables also include onset of action information. Every effort has been made to assure the accuracy of the attached information. This information is not intended to be used as a tool to prescribe medication or provide other clinical services. Please consult with a pharmacist for the most up-to-date information on insulin.INSULIN STORAGENovolog Labeled expiration date 28 days 28 days Novolog: 70/30Labeled expiration date 14 days 14 days Levemir® Labeled expiration date 42 days 42 days Lantus® Labeled expiration date 28 days 28 days Semglee® Labeled expiration date 28 days 28 days Soliqua® Labeled expiration date 28 days Do not refrigerate Tresiba® Labeled expiration date 56 days 56 days Toujeo® SoloStar® Labeled expiration date 28 days 28 days Xultophy® Labeled expiration date 21 days 21 days INSULIN CHARACTERISTICSBrand Action Onset Peak Duration Appearance CommentsApidra Rapid 20 min. 30-60 min. 3-5 hrs. Clear 15 min. before or within 20 minutes after mealsHumalog Rapid 15-30 min. 30-90 min. 3-5 hrs. Clear 15 min. before or immediately aftermealsHumalog: 75/25 Mix Mixed 15-30 min. 1-6.5 hrs. Up to 24hrs. Cloudy Within 15 min. ofmealsHumalog: 50/50 Mix10-15 min. Varies 10-16 hrs. Cloudy Within 15 min.before mealsHumulin: L Intermediate 1-4 hrs. 4-14 hrs. 12-24 hrs. Cloudy 30-60 min. beforemeal or at bed time Humulin: N Intermediate 1-4 hrs. 4-14 hrs. 10-24 hrs. CloudyHumulin: R Short 0.5-1 hr. 2.5-5 hrs. 8-12 hrs. Clear 30-60 min. beforea meal.Humulin: U Long 4-6 hrs. 8-20 hrs. 18-36 hrs. Cloudy 30-60 min. beforea meal or atHumulin: 70/30Mixed 0.5-1 hr. 1.5-16 hrs. 10-24 hrs. Cloudy 30 min. before amealHumulin: 50/50Mixed 0.5-1 hr. 2.5-5 hrs. 10-24 hrs. Cloudy 30 min. before ameal Lantus Long 1.5 hrs. Constant 24 hrs. ClearLevemir Long N/A 6-8 hrs. 12-24 hrs. ClearNovolin: N Intermediate 1-4 hrs. 4-14 hrs. 10-24 hrs. CloudyNovolin: R Short 0.5-1 hr. 2.5-5 hrs. 8-12 hrs. Clear 30-60 min. beforea meal.Novolin: 70/30Mixed 0.5-1 hr. 1.5-16 hrs. 10-24 hrs. Cloudy 30 min. before amealNovolog Rapid 15 min. 1-2 hrs. 3-5 hrs. Clear 5-10 min. before amealNovolog: 70/30Mixed 1-4 hrs. 15-24 hrs. Clear Within 15 min. ofmealsAfrezza Rapid 10-20 min. 12-15 min. 3 hrs. N/A, InhaledPowder At beginning of each mealToujeo Ultra Long 6 hrs. Constant 36 hrs. ClearTresiba Long Acting N/A Constant 24 hrs. Clear/colorless。
小鼠胰岛素说明书(1)
小鼠胰岛素定量分析酶联免疫检测试剂盒本试剂盒仅供科研使用。
用于体外定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的胰岛素浓度。
使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整, 如有疑问请与上海巧伊生物科技有限公司联系，我们将提供力所能及的帮助。
如您有其它需求，请登录上海巧伊生物科技有限公司网站或致电本公司。
胰岛素简介：胰岛素是糖代谢中最主要的激素之一。
胰腺的ß细胞岛细胞产生胰岛素前体蛋白，前体蛋白被加工成C肽和胰岛素。
它们以等摩尔浓度进入血循环中。
成熟的胰岛素由A、B两条链组成。
这两条链是通过两个二硫键桥接形成有功能的胰岛素分子。
血浆葡萄糖浓度的变化是胰岛素产生并分泌的最主要刺激因素，产生的胰岛素具有一些代谢调节作用。
其最主要的作用是，将外周血中糖转运到肝脏中贮存起来。
一些诸如肝糖生成障碍或在促进血糖升高的激素诸如胰高血糖素、肾上腺素、生长激素和皮质醇等作用下促进肝糖分解都可拮抗胰岛素的作用。
检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中胰岛素的浓度。
胰岛素捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的胰岛素会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
当加入与HRP耦连的抗胰岛素抗体后，抗小鼠胰岛素抗体与胰岛素接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
最后加入显色剂，若样本中存在胰岛素将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。
通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，胰岛素浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中胰岛素浓度。
小鼠胰岛素定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:组分 规格（96T/48T）小鼠胰岛素预包被板 12条/6条标准品稀释液 10ml/5ml小鼠胰岛素标准品 2支/1支(冻干)小鼠胰岛素抗体HRP结合物 10ml/5ml浓缩洗涤液 20× 30ml/15mlTMB底物 10ml/5ml终止液 5ml/3ml封板胶纸 3/2张说明书 1份标本收集:1.标本的收集请按下列流程进行操作；A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测，D.标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。
INS(胰岛素、Insulin、INS) Abbott AXSYM试剂标准操作规程SOP
INS(胰岛素、Insulin、INS) Abbott AXSYM1．检验目的检测血清INS主要是用于给糖尿病人提供辅助的诊断信息以及对胰岛素瘤的鉴别诊断，可以动态观察相关疾病的发生发展过程、疗效及预后评估。
2．方法原理采用了美国雅培公司的专利技术——微粒子酶免疫分析（MEIA），即以anti-INS包被微粒子（○M-Ab）与标本中的BNP形成○M-Ab-Ag复合物，当复合物被转移到纤维杯上时，微粒子就不可逆地结合到纤维杯表面的玻璃纤维上，并与加入的碱性磷酸酶标记anti-INS结合，洗去未结合的游离物质，加入底物——四甲基伞形酮磷酸盐，碱性磷酸酶脱去底物的磷酸基而发出荧光，通过MEIA光路元件检测而得到定量结果。
3．性能指标MEIA定量检测INS不精密度CVs为4.0-5.3%，检出限>1.0μU/ml，灵敏度1.0μU/ml，白蛋白、a-1酸性糖蛋白、胆红素等于22种体内相关成份对INS测定无干扰，携带污染率0.001%。
4．标本收集4．1标本类型：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本（抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠或EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准）；其他体液如羊水、胸水、腹水等体液可以作为检测标本，但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。
4．2标本留取：以空腹为宜，收到标本后最好立即离心留取血清或血浆（凝固血应待其充分凝固后收集血清），不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝，明显溶血的标本不宜采纳,进行抗凝或血栓溶解治疗的病人采血后宜适当延长凝固时间再进行离心分离血清，羊水中如混有胎儿红细胞可能会导致较高的INS结果，因此抽取羊水应尽量不要混入胎儿红细胞。
4．3标本保存：留取的标本最好在3小时内检测，不能立即检测的应放置于2-8℃最长达24小时（可以含有凝块但要密闭以防蒸发），或者-20℃最长达12个月（不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞）。
小鼠胰岛素INS酶联免疫分析ELISA
小鼠胰岛素(INS)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测小鼠血清，血浆及相关液体样本中胰岛素(INS)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(INS)水平。
用纯化的小鼠胰岛素(INS)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(INS)，再与HRP标记的胰岛素(INS)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胰岛素(INS)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(INS)浓度。
试剂盒组成：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
小鼠胰岛素(Insulin)说明书
小鼠胰岛素(Insulin)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平。
用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin)，再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)含量。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
小鼠胰岛素说明书
小鼠胰岛素说明书(1)小鼠胰岛素定量分析酶联免疫检测试剂盒本试剂盒仅供科研使用。
用于体外定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的胰岛素浓度。
使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整, 如有疑问请与上海巧伊生物科技有限公司联系，我们将提供力所能及的帮助。
如您有其它需求，请登录上海巧伊生物科技有限公司网站或致电本公司。
胰岛素简介：胰岛素是糖代谢中最主要的激素之一。
胰腺的?细胞岛细胞产生胰岛素前体蛋白，前体蛋白被加工成C肽和胰岛素。
它们以等摩尔浓度进入血循环中。
成熟的胰岛素由A、B两条链组成。
这两条链是通过两个二硫键桥接形成有功能的胰岛素分子。
血浆葡萄糖浓度的变化是胰岛素产生并分泌的最主要刺激因素，产生的胰岛素具有一些代谢调节作用。
其最主要的作用是，将外周血中糖转运到肝脏中贮存起来。
一些诸如肝糖生成障碍或在促进血糖升高的激素诸如胰高血糖素、肾上腺素、生长激素和皮质醇等作用下促进肝糖分解都可拮抗胰岛素的作用。
检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中胰岛素的浓度。
胰岛素捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的胰岛素会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
当加入与HRP耦连的抗胰岛素抗体后，抗小鼠胰岛素抗体与胰岛素接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
最后加入显色剂，若样本中存在胰岛素将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。
通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，胰岛素浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中胰岛素浓度。
小鼠胰岛素定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:组分小鼠胰岛素预包被板标准品稀释液小鼠胰岛素标准品小鼠胰岛素抗体HRP 结合物浓缩洗涤液20× TMB底物终止液封板胶纸说明书规格（96T/48T） 12条/6条 10ml/5ml 2支/1支(冻干) 10ml/5ml30ml/15ml 10ml/5ml 5ml/3ml 3/2张 1份标本收集:1.标本的收集请按下列流程进行操作； A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测，D.标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。
(完整版)胰岛素耐受实验
1、胰岛素耐受实验（ITT）
胰岛素用量根据小鼠的年龄和性别来决定，一般理想用量是使葡萄糖水平在注射30min 后下降至注射前的40%左右。
小鼠胰岛素耐受实验的胰岛素用量一般为0.5-1.2U/kg，胰岛素用生理盐水稀释，如用量0.5U/kg，配制浓度0.5U/ml。
0.75U/kg，0、15、30、60min测血糖；0.027U/10g=2.7U/kg
上午禁食4小时，正常饮水。
下午试验，称体重，标记序号，注射胰岛素前测血糖，胰岛素按体重计算注射量，在15min、30min、45min、60min分别测血糖，实验完毕，每笼补充上饲料。
2、葡萄糖耐受实验（GTT）
小鼠葡萄糖耐受实验的葡萄糖用量一般为1.5-2g/kg，如葡萄糖2 g/kg，用生理盐水配制20%葡萄糖溶液。
1g/kg，0、15、45、75、105min测血糖，10%葡萄糖注射液，注射量0.1mg/10g体重。
前一天下午5点禁食，16h即次日上午9点，饮水正常。
注射前测血糖，腹腔注射葡萄糖，每g注射0.01ml，每只间隔1min，在15min、30min、60min、90min、120min分别测血糖，实验完毕，每笼补充上饲料。
大鼠胰岛素(Insulin)elisa试剂盒使用方法
大鼠胰岛素(Insulin)elisa试剂盒使用方法检测范围：96T0 mU/L -20 mU/L使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠胰岛素(Insulin)水平。
用纯化的大鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin)，再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠胰岛素(Insulin)浓度。
试剂盒组成1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
胰岛素注射液说明书
胰岛素注射液说明书【药品名称】通用名：胰岛素注射液英文名：Insulin Injection汉语拼音：Yidaosu Zhusheye【成份】1. 本品主要成分为：胰岛素(猪或牛)的灭菌水溶液。
每l00ml中含甘油l.4-1.8g与苯酚0.25g。
2. 辅料：甘油、苯酚、注射用水。
【性状】本品为无色或几乎无色的澄明液体。
【适应症】1.Ⅰ型糖尿病。
2.Ⅱ型糖尿病有严重感染、外伤、大手术等严重应激情况，以及合并心、脑血管并发症、肾脏或视网膜病变等。
3.糖尿病酮症酸中毒、高血糖非酮症性高渗性昏迷。
4.长病程Ⅱ型糖尿病血浆胰岛素水平确实较低，经合理饮食、体力活动和口服降糖药治疗控制不满意者，Ⅱ型糖尿病具有口服降糖药禁忌，如妊娠、哺乳等。
5.成年或老年糖尿病病人发病急、体重显著减轻伴明显消瘦。
6.妊娠糖尿病。
7.继发于严重胰腺疾病的糖尿病。
8.对严重营养不良、消瘦、顽固性妊娠呕吐、肝硬变初期可同时静脉摘注葡萄糖和小剂量胰岛素，以促进组织利用葡萄糖。
【规格】l0ml:400单位。
【用法用量】l.皮下注射一般每日三次，餐前15-30分钟注射，必要时睡前加注一次小量。
剂量根据病情、血糖、尿糖由小剂量(视体重等因素每次2-4单位)开始，逐步调整。
Ⅰ型糖尿病患者每日胰岛素需用总量多介于每公斤体重0.5-1单位，根据血糖监测结果调整。
Ⅱ型糖尿病患者每日需用总量变化较大，在无急性并发症情况下，敏感者每日仅需5-l0单位，一般约20单位，肥胖、对胰岛素敏感性较差者需要量可明显增加。
在有急性并发症(感染、创伤、手术等)情况，对Ⅰ型及Ⅱ型糖糖尿病患者，应每4-6小时注射一次，剂量根据病情变化及血糖监测结果调整。
2.静脉注射主要用于糖尿病酮症酸中毒、高血糖高渗性昏迷的治疗。
可静脉持续滴入每小时成人4-6单位，小儿按每小时体重0.1单位/kg，根据血糖变化调整剂量；也可首次静注l0单位加肌内注射4-6单位，根据血糖变化调整。
病情较重者，可先静脉注射10单位，继之以静脉滴注，当血糖下降到13.9mmol/L(250mg/ml)以下时，胰岛素剂量及注射频率随之减少。
小鼠胰岛素(Insulin)说明书(1)
小鼠胰岛素(Insulin)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清样本中胰岛素(Insulin)含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平。
用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin)，再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)含量。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：18mIU/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
小鼠胰岛素过量毒性反应及其解救
小鼠胰岛素过量毒性反应及其解救实验目的：通过观察过量胰岛素对小白鼠引起的低血糖效应，说明胰岛素的生理作用，分析其作用机制。
实验要求：小白鼠在实验前需经过饥饿处理，稀释胰岛素的生理盐水要偏弱酸性实验原理：胰岛素是由胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一种蛋白质激素。
胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成。
实验对象：小白鼠若干实验器材：大烧杯、小鼠笼、镊子、1mL注射器、胰岛素溶液、葡萄糖溶液、生理盐水实验方法及步骤：1.将6只老鼠分为两组，每组3只，第一组为 2013年度细分产业研究报告产业报告调研报告2013年报告行业报告实验组，第二组为对照组。
2.向实验组小白鼠注射0.3ml胰岛素溶液，并向对照组小白鼠注射等量生理盐水。
3.一段时间后观察并比较两组小白鼠神态、姿势及活动状况。
4.待一组小白鼠出现反应后对其注射0.3ml配置好的葡萄糖溶液，观察现象。
实验结果：实验组的小白鼠注射胰岛素后由活跃逐渐变为平静最后基本不活动，部分甚至出现发抖等现象，注射葡萄糖后逐渐恢复；对照组的小白鼠无明显变化。
糖尿病可分为胰岛素依赖性糖尿病（1型）和非胰岛素依赖性糖尿病（2型）两种类型。
第一节胰岛素胰岛素（insulin）是由胰岛β细胞生成和分泌的一种酸性蛋白质。
药用胰岛素多从猪、牛等家畜的胰腺中提取。
目前也可以通过DNA重组技术人工合成胰岛素。
口服无效，注射给药，皮下注射吸收快。
有速效、中效、长效胰岛素制剂之分。
．降低血糖⏹ 2．促进脂肪合成抑制脂肪分解，减少游离脂肪酸和酮体的生成。
⏹ 3．促进氨基酸的转运和蛋白质的合成，抑制蛋白质分解。
4．促进钾离子进人细胞内，血钾浓度降低【临床应用】1.糖尿病：①重症糖尿病（IDDM，I型）。
② II型糖尿病经饮食控制或用口服降血糖药未能控制者，以及口服降糖药不能耐受者，最终需用胰岛素作联合治疗或替代治疗。
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小鼠胰岛素(Insulin)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平。
用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin)，再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)含量。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为12 mIU/L，8.0 mIU/L ，4.0 mIU/L，2.0 mIU/L，1.0 mIU/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：8.0 mIU/L -15 mIU/L保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月Mouse InsulinDrug NamesGeneric Name：Mouse Insulin ELISA Kit.PurposeThis kit allows for the determination of Insulin concentrations in Mouse serum, tissue and other biological fluids.Principle of the assayT he kit assay Mouse Insulin level in the sample, use Purified Mouse Insulin antibody to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add Insulin to wells, Combined Insulin antibody which With HRP labeled, become antibody - antigen - enzyme-antibody complex, after washing Completely, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of Mouse Insulin in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Materials provided with the kitSpecimen requirements1.serum- coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-min at the speed of2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.2.plasma-use suited EDTA, citrate or heparinized plasma as an anticoagulant,mix 10-20mins ,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.3.Urine-collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.4.cell culture supernatant-detect secretory components, collect sue a sterile container,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant,detect the composition of cells, Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）, Cell concentration reached 1 million / ml, repeated freeze-thaw cycles, damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.5.Tissue samples- After cutting samples, check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）, Rapidlyfrozen with liquid nitrogen, maintain samples at 2-8℃ after melting,add PBS（PH7.4）, Homogenized by hand or Grinders, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.remove supernatant.6.extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevantliterature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.7.Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active. Assay procedure1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100μl to the first and the second wel l, then add Standard dilution 50μl to the first and the second well, mix; take out 100μl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separately. then add Standard dilution 50μl to the third and the forth well ,mix ; then take out 50μl from the third and the forth well discard, add 50μl to the fifth and the sixth well ,then add Standard dilution 50μl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution 50μl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50μl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50μl to the ninth and the tenth well, mix , take out 50μl fro m the ninth and the tenth well discard(add Sample 50μl to each well after Diluting ,(density: 12 mIU/L,8.0 mIU/L ,4.0 mIU/L,2.0 mIU/L,1.0 mIU/L)2.add sample：Set blank wells separately (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.4.Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except blank well.7.incubate：Operation with 3.8.washing：Operation with 5.9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color).11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.Important notes1.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes inthe room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.2.washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolvewhen dilute . Washing does not affect the result.3.add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids theexperimental error. add sample within 5 min, if the number of sample is much , recommend to use Volley .4.if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the firststandard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.5.Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.6.The substrate evade the light preservation.7.Please according to use instruction strictly, The test result determination must take themicrotiter plate reader as a standard.8.All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective materialprocess.9.Do not mix reagents with those from other lots.CalculateAssay range8.0 mIU/L -15 mIU/LStorage and validity1．Storage ： 2-8℃. 2．validity ： six months.Take the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor, the result is the sample actual density.This chartis for reference only。