小鼠胰岛素(Insulin) Elisa试剂盒使用说明

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胰岛素抗体(INS抗体)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求泰格

胰岛素抗体(INS抗体)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求泰格

胰岛素抗体(INS抗体)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)
适用范围:本试剂盒主要用于体外定性检测人血清中的胰岛素抗体(INS抗体)。

1.1 规格
48人份/盒,96人份/盒。

1.2 主要组成成分
2.1外观
液体组分澄清,无沉淀或絮状物;其它组分无包装破损,标签外观完整、无脱落、标签标识清晰。

2.2 装量
装量不少于标示值。

2.3 实验有效性
测定的阳性对照与阴性对照相对发光值(RLU值)均值之比大于3.5时,实验结果成立。

2.4 阴性参考品符合率
10份胰岛素抗体阴性参考品检测结果不得出现假阳性。

2.5 阳性参考品符合率
5份胰岛素抗体阳性参考品检测结果不得出现假阴性。

2.6 重复性
同一份精密性参考品加样10孔,平行测试的相对RLU值强度分析精密度(C.V%)应不高于15.0%。

2.7 批间差
三批不同批次试剂盒,每批精密性参考品加样10孔,平行测试的相对RLU值强度分析精密度(C.V%)应不高于20.0%。

2.8 临界值
2.8.1 阳性率应≥95%;
2.8.2 阴性率应≥95%。

2.9 稳定性
2.9.1试剂盒在37℃放置7天,检测结果应符合2.1~2.6的要求。

2.9.2试剂盒在2℃~8℃放置12个月,检测结果应符合2.1~2.6的要求。

小鼠胰高血糖素样肽1GLP-1酶联免疫分析ELISA

小鼠胰高血糖素样肽1GLP-1酶联免疫分析ELISA

小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用小鼠血清,血浆及相关液体样本中胰高血糖素样肽1(GLP-1)的含量。

试剂盒性能:1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。

2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围:请来电咨询保存条件及有效期:1.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6个月注意事项:1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。

一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。

如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)水平。

用纯化的小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胰高血糖素样肽1(GLP-1),再与HRP标记的胰高血糖素样肽1(GLP-1)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的胰高血糖素样肽1(GLP-1)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)浓度。

小鼠胰岛素(Insulin)说明书

小鼠胰岛素(Insulin)说明书

小鼠胰岛素(Insulin)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量。

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平。

用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin),再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)含量。

试剂盒组成:样本处理及要求:1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。

离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清。

检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。

加入一定量的PBS,PH7.4。

小鼠胰岛素Insulin酶联免疫分析

小鼠胰岛素Insulin酶联免疫分析

小鼠胰岛素(Insulin)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围:96T30pg/ml-800pg/ml使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平。

用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin),再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)浓度。

试剂盒组成标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。

加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:操作同3。

8.洗涤:操作同5。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

小鼠胰岛素自身抗体(IAA)(PCT)ELISA试剂盒产品简介

小鼠胰岛素自身抗体(IAA)(PCT)ELISA试剂盒产品简介

小鼠胰岛素自身抗体(IAA)(PCT)ELISA试剂盒产品简介小鼠胰岛素自身抗体(IAA)(PCT)ELISA试剂盒产品简介小鼠胰岛素自身抗体(IAA)(PCT)ELISA试剂盒实验原理小鼠胰岛素自身抗体(IAA)(PCT)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。

往预先包被小鼠胰岛素自身抗体(IAA)(PCT)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻di洗涤。

用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的小鼠胰岛素自身抗体(IAA)(PCT)呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

样本处理及要求1. 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。

将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。

推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。

为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。

最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

4. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

雷生物小鼠胰岛素ELISA试剂盒使用手册说明书

雷生物小鼠胰岛素ELISA试剂盒使用手册说明书

RayBio® Mouse Insulin ELISA KitCatalog #: ELM-InsulinUser ManualLast revised June 14, 2021Caution:Extraordinarily useful information enclosedISO 13485 Certified3607 Parkway Lane, Suite 100Norcross, GA 30092 Tel: 1-888-494-8555 (Toll Free) or 770-729-2992, Fax:770-206-2393Web: , Email: *******************RayBiotech, Inc.________________________________________RayBio® Mouse Insulin ELISA Kit ProtocolTable of ContentsSection Page # I.Introduction3II.Storage4III.Reagents4IV.Additional Materials Required4V.Reagent Preparation5VI.Assay Procedure6VII.Assay Procedure Summary7VIII.Calculation of ResultsA. Typical DataB. SensitivityC. Spiking & RecoveryD. LinearityE. Reproducibility 8 8 8 9 9 10IX.Specificity10X.Troubleshooting Guide11Please read the entire manual carefully before starting your experimentI. INTRODUCTIONThe RayBio® Mouse Insulin ELISA kit is an in vitro enzyme-linked immunosorbent assay for the quantitative measurement of Mouse Insulin in serum, plasma (Collect plasma using EDTA and Citrate as an anticoagulant. Heparin is not recommended as anticoagulants for use in this assay) and cell culture supernatants. This assay employs an antibody specific for Insulin coated on a 96-well plate. Standards and samples are pipetted into the wells and Insulin present in a sample is bound to the wells by the immobilized antibody. The wells are washed and biotinylated anti-Mouse Insulin antibody is added. After washing away unbound biotinylated antibody, HRP-conjugated streptavidin is pipetted to the wells. The wells are again washed, a TMB substrate solution is added to the wells and color develops in proportion to the amount of Insulin bound. The Stop Solution changes the color from blue to yellow, and the intensity of the color is measured at 450 nm.Need your results faster? Try RayBiotech's SpeedE LISA platform for quantitative detection in just three hours.https:///speedelisa-kits/Short on sample, or need higher sensitivity? Check out the IQELISA™ Immuno-PCR platform. https:///immuno-pcr/II. STORAGEThe entire kit may be stored at -20°C for up to 1 year from the date of shipment. Avoid repeated freeze-thaw cycles. The kit may be stored at 4°C for up to 6 months. For extended storage, it is recommended to store at -80°C. For prepared reagent storage, see table below. III. REAGENTSIV. ADDITIONAL MATERIALS REQUIRED1.Microplate reader capable of measuring absorbance at 450 nm.2.Precision pipettes to deliver 2 µl to 1 ml volumes.3.Adjustable 1-25 ml pipettes for reagent preparation.4.100 ml and 1 liter graduated cylinders.5.Absorbent paper.6.Distilled or deionized water.7.Log-log graph paper or computer and software for ELISA data analysis.8.Tubes to prepare standard or sample dilutions.V. REAGENT PREPARATION1.Bring all reagents and samples to room temperature (18 - 25ºC) before use.2.Assay Diluent B (Item E) should be diluted 5-fold with deionized or distilled water before use.3.Sample dilution: Assay Diluent C (Item L) should be used for dilution of serum, plasma, and cell culture supernatant samples. The suggested dilution for normal serum/plasma is 2 fold. Collect plasma using EDTA and/or Citrate as anticoagulants. Heparin is not recommended as an anticoagulant for use in this assay. Note: Levels of Insulin may vary between different samples. Optimal dilution factors for each sample must be determined by the investigator.4.Preparation of standard: Briefly spin a vial of Item C. Add 400 µl Assay Diluent C (Item L) into Item C vial to prepare a 1,400 µIU/ml standard solution. Dissolve the powder thoroughly by a gentle mix. Add 180 µl Insulin standard (1,400 µIU/ml) from the vial of Item C, into a tube with 450 µl Assay Diluent C to prepare a 400 µIU/ml standard solution. Pipette 250µl Assay Diluent C into each tube. Use the 400 µIU/ml standard solution to produce a dilution series (shown below). Mix each tube thoroughly before the next transfer. Assay Diluent C serves as the zero standard (0 µIU/ml).180 µl250 µl 250 µl 250 µl 250 µl 250 µl250 µlStd1Std2Std3Std4Std5Std6Std7Zero Standard Diluent volume Item C + 400 µl450 µl250 µl250 µl250 µl250 µl250 µl250 µl250 µlConc.1,400 µIU/ml 400 µIU/ml 200 µIU/ml 100 µIU/ml 50 µIU/ml 25 µIU/ml 12.5 µIU/ml 6.25 µIU/ml0 µIU/ml5.If the Wash Concentrate (20X) (Item B) contains visible crystals, warm to roomtemperature and mix gently until dissolved. Dilute 20 ml of Wash Buffer Concentrate into deionized or distilled water to yield 400 ml of 1X Wash Buffer.6.Briefly spin the Detection Antibody vial (Item F) before use. Add 100 µl of 1X AssayDiluent B (Item E) into the vial to prepare a detection antibody concentrate. Pipette up and down to mix gently (the concentrate can be stored at 4ºC for 5 days). The detection antibody concentrate should be diluted 80-fold with 1X Assay Diluent B (Item E) andused in step 5 of Part VI Assay Procedure.7.Briefly spin the HRP-Streptavidin concentrate vial (Item G) and pipette up and down tomix gently before use, as precipitates may form during storage. HRP-Streptavidinconcentrate should be diluted 400-fold with 1X Assay Diluent B (Item E).For example: Briefly spin the vial (Item G) and pipette up and down to mix gently. Add30 µl of HRP-Streptavidin concentrate into a tube with 12 ml 1X Assay Diluent B toprepare a 400-fold diluted HRP-Streptavidin solution (don't store the diluted solution for next day use). Mix well.VI. ASSAY PROCEDURE1.Bring all reagents and samples to room temperature (18 - 25ºC) before use. It isrecommended that all standards and samples be run at least in duplicate.bel removable 8-well strips as appropriate for your experiment.3.Add 100 µl of each standard (see Reagent Preparation step 3) and sample intoappropriate wells. Cover wells and incubate for 2.5 hours at room temperature withgentle shaking.4.Discard the solution and wash 4 times with 1X Wash Solution. Wash by filling each wellwith Wash Buffer (300 µl) using a multi-channel Pipette or autowasher. Completeremoval of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash,remove any remaining Wash Buffer by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.5.Add 100 µl of 1X prepared biotinylated antibody (Reagent Preparation step 6) to eachwell. Incubate for 1 hour at room temperature with gentle shaking.6.Discard the solution. Repeat the wash as in step 4.7.Add 100 µl of prepared Streptavidin solution (see Reagent Preparation step 7) to eachwell. Incubate for 45 minutes at room temperature with gentle shaking.8.Discard the solution. Repeat the wash as in step 4.9.Add 100 µl of TMB One-Step Substrate Reagent (Item H) to each well. Incubate for 30minutes at room temperature in the dark with gentle shaking.10.Add 50 µl of Stop Solution (Item I) to each well. Read at 450 nm immediately.VII. ASSAY PROCEDURE SUMMARY1.Prepare all reagents, samples and standards as instructed.2.Add 100 µl standard or sample to each well. Incubate 2.5 hours at room temperature.3.Add 100 µl prepared biotin antibody to each well. Incubate 1 hour at room temperature.4.Add 100 µl prepared Streptavidin solution. Incubate 45 minutes at room temperature.5.Add 100 µl TMB One-Step Substrate Reagent to each well. Incubate 30 minutes atroom temperature.6.Add 50 µl Stop Solution to each well. Read at 450 nm immediately.VIII. CALCULATION OF RESULTSCalculate the mean absorbance for each set of duplicate standards, controls and samples, and subtract the average zero standard optical density. Plot the standard curve on log-log graph paper or using Sigma plot software, with standard concentration on the x-axis and absorbance on the y-axis. Draw the best-fit straight line through the standard points.A. TYPICAL DATAThese standard curves are for demonstration only. A standard curve must be run with each assay.B. SENSITIVITYThe minimum detectable dose of Mouse Insulin was determined to be 5 µIU/ml.Minimum detectable dose is defined as the analyte concentration resulting in an absorbance that is 2 standard deviations higher than that of the blank (diluent buffer).C. SPIKING & RECOVERYRecovery was determined by spiking various levels of Mouse Insulin into the sample types listed below. Mean recoveries are as follows:D. LINEARITYE. REPRODUCIBILITYIntra-Assay CV%: <10%Inter-Assay CV%: <12%IX. SPECIFICITYThis ELISA antibody pair detects mouse, human, rat, porcine and bovine Insulin.X. TROUBLESHOOTING GUIDEProblem Cause SolutionPoor standard curve Inaccurate pipettingImproper standarddilutionCheck pipettesBriefly centrifuge Item C and dissolvethe powder thoroughly by gently mixingLow signal Improper preparation ofstandard and/orbiotinylated antibodyToo brief incubationtimesInadequate reagentvolumes or improperdilutionBriefly spin down vials before opening.Dissolve the powder thoroughly.Ensure sufficient incubation time. Assayprocedure step 3 may be doneovernight at 4°C with gentle shaking(note: may increase overall signalsincluding background).Check pipettes and ensure correctpreparationLarge CV Inaccurate pipettingAir bubbles in wellsCheck pipettesRemove bubbles in wellsHigh background Plate is insufficientlywashedContaminated washbufferReview the manual for proper wash. Ifusing a plate washer, ensure that allports are unobstructed.Make fresh wash bufferLow sensitivity Improper storage of theELISA kitStop solutionStore your standard at <-70ºC afterreconstitution, others at 4ºC. Keepsubstrate solution protected from light.Add stop solution to each well beforereading plateRayBio® ELISA KitsOver 4,000 ELISA kits available, visit /ELISA-Kits for details.This product is for research use only.©2020 RayBiotech, Inc。

小鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)酶联免疫分析(ELISA)

小鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)酶联免疫分析(ELISA)

小鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测小鼠血清,血浆及相关液体样本中胰岛素样生长因子2(IGF-2)的含量。

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)水平。

用纯化的小鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素样生长因子2(IGF-2),再与HRP标记的胰岛素样生长因子2(IGF-2)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的胰岛素样生长因子2(IGF-2)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)浓度。

试剂盒组成:注意事项:1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。

一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。

如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

操作步骤1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。

CrystalChem超灵敏小鼠胰岛素ELISA试剂盒

CrystalChem超灵敏小鼠胰岛素ELISA试剂盒

CrystalChem超灵敏小鼠胰岛素ELISA试剂盒
小鼠胰岛素ELISA(超灵敏)用于仅使用5µL样本量来量化血清、血浆、细胞培养物和液体中的小鼠胰岛素水平。

Crystal Chem超灵敏小鼠胰岛素ELISA试剂盒参数:
样本类型:血清、血浆、细胞培养或液体
规格:96 wells (12 x 8 well strips)
液态试剂(标准试剂除外)
灵敏度:0.05纳克/毫升
分析范围:低范围分析:0.1-6.4 ng/mL
宽范围分析:0.1-12.8纳克/毫升
高量程分析:1-64纳克/毫升
精密批内精密变异系数≤ 10.0%
批间精密度≤ 10.0%
储存温度2-8°C
Crystal Chem 试剂盒特色:
小样本量:只需要5µL样品,非常适合小批量的小鼠样品。

高度灵敏和较精确:使用5µL的样品和CV,该分析的灵敏度为0.05 ng/mL≤ 10.0%.
动态范围:范围为0.1-64.0 ng/mL,仅使用5µL样品。

使用同一试剂盒进行低胰岛素和高胰岛素分析。

高特异性:这是一个易于使用的试剂盒,对小鼠胰岛素具有高度特异性,结果不到3.5小时。

标准曲线:。

小鼠胰岛素说明书(1)

小鼠胰岛素说明书(1)

小鼠胰岛素定量分析酶联免疫检测试剂盒本试剂盒仅供科研使用。

用于体外定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的胰岛素浓度。

使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整, 如有疑问请与上海巧伊生物科技有限公司联系,我们将提供力所能及的帮助。

如您有其它需求,请登录上海巧伊生物科技有限公司网站或致电本公司。

胰岛素简介:胰岛素是糖代谢中最主要的激素之一。

胰腺的ß细胞岛细胞产生胰岛素前体蛋白,前体蛋白被加工成C肽和胰岛素。

它们以等摩尔浓度进入血循环中。

成熟的胰岛素由A、B两条链组成。

这两条链是通过两个二硫键桥接形成有功能的胰岛素分子。

血浆葡萄糖浓度的变化是胰岛素产生并分泌的最主要刺激因素,产生的胰岛素具有一些代谢调节作用。

其最主要的作用是,将外周血中糖转运到肝脏中贮存起来。

一些诸如肝糖生成障碍或在促进血糖升高的激素诸如胰高血糖素、肾上腺素、生长激素和皮质醇等作用下促进肝糖分解都可拮抗胰岛素的作用。

检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中胰岛素的浓度。

胰岛素捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标本或参考品时,其中的胰岛素会与捕获抗体结合,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。

当加入与HRP耦连的抗胰岛素抗体后,抗小鼠胰岛素抗体与胰岛素接合,形成夹心的免疫复合物,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。

最后加入显色剂,若样本中存在胰岛素将会形成免疫复合物,辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。

通过酶标仪检测,读其450nm处的OD值,胰岛素浓度与OD450值之间呈正比,通过参考品绘制标准曲线,对照未知样本中OD值,即可算出标本中胰岛素浓度。

小鼠胰岛素定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:组分 规格(96T/48T)小鼠胰岛素预包被板 12条/6条标准品稀释液 10ml/5ml小鼠胰岛素标准品 2支/1支(冻干)小鼠胰岛素抗体HRP结合物 10ml/5ml浓缩洗涤液 20× 30ml/15mlTMB底物 10ml/5ml终止液 5ml/3ml封板胶纸 3/2张说明书 1份标本收集:1.标本的收集请按下列流程进行操作;A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可;B.血清标本应是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液;C.血浆标本,推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测,D.标本收集后请分装,冻存于-20℃,避免反复冻融。

INS(胰岛素、Insulin、INS) Abbott AXSYM试剂标准操作规程SOP

INS(胰岛素、Insulin、INS) Abbott AXSYM试剂标准操作规程SOP

INS(胰岛素、Insulin、INS) Abbott AXSYM1.检验目的检测血清INS主要是用于给糖尿病人提供辅助的诊断信息以及对胰岛素瘤的鉴别诊断,可以动态观察相关疾病的发生发展过程、疗效及预后评估。

2.方法原理采用了美国雅培公司的专利技术——微粒子酶免疫分析(MEIA),即以anti-INS包被微粒子(○M-Ab)与标本中的BNP形成○M-Ab-Ag复合物,当复合物被转移到纤维杯上时,微粒子就不可逆地结合到纤维杯表面的玻璃纤维上,并与加入的碱性磷酸酶标记anti-INS结合,洗去未结合的游离物质,加入底物——四甲基伞形酮磷酸盐,碱性磷酸酶脱去底物的磷酸基而发出荧光,通过MEIA光路元件检测而得到定量结果。

3.性能指标MEIA定量检测INS不精密度CVs为4.0-5.3%,检出限>1.0μU/ml,灵敏度1.0μU/ml,白蛋白、a-1酸性糖蛋白、胆红素等于22种体内相关成份对INS测定无干扰,携带污染率0.001%。

4.标本收集4.1标本类型:静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本(抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠或EDTA,抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯,使用的比例以厂家推荐为准);其他体液如羊水、胸水、腹水等体液可以作为检测标本,但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。

4.2标本留取:以空腹为宜,收到标本后最好立即离心留取血清或血浆(凝固血应待其充分凝固后收集血清),不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝,明显溶血的标本不宜采纳,进行抗凝或血栓溶解治疗的病人采血后宜适当延长凝固时间再进行离心分离血清,羊水中如混有胎儿红细胞可能会导致较高的INS结果,因此抽取羊水应尽量不要混入胎儿红细胞。

4.3标本保存:留取的标本最好在3小时内检测,不能立即检测的应放置于2-8℃最长达24小时(可以含有凝块但要密闭以防蒸发),或者-20℃最长达12个月(不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞)。

小鼠胰岛素INS酶联免疫分析ELISA

小鼠胰岛素INS酶联免疫分析ELISA

小鼠胰岛素(INS)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测小鼠血清,血浆及相关液体样本中胰岛素(INS)的含量。

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(INS)水平。

用纯化的小鼠胰岛素(INS)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(INS),再与HRP标记的胰岛素(INS)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的胰岛素(INS)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(INS)浓度。

试剂盒组成:1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。

一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。

如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

操作步骤1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。

ELISA检测试剂盒使用指南

ELISA检测试剂盒使用指南

ELISA检测试剂盒使用指南ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)是一种常用的免疫学实验技术,用于检测体内特定抗原或抗体的存在和浓度。

ELISA检测试剂盒是用于进行ELISA实验的组合套装,包括抗体或抗原、酶标记物、底物、缓冲液等。

本文将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南,以帮助用户顺利进行ELISA实验。

1.准备实验材料:-ELISA检测试剂盒:根据实验需要选择适当的ELISA检测试剂盒,确保其在储存和运输过程中无损坏。

-样本:准备需要检测的样本,如血清、尿液、组织提取物等。

确保样本的质量和浓度满足实验要求。

-微孔板:根据试剂盒的要求选择合适的微孔板,同时注意其质量有无污染。

-基本实验设备:如计量器、洗板机、显微镜等。

2.实验步骤:-取出储存在4℃的试剂,确保其达到室温(一般为20-25℃),再根据实验步骤进行下一步操作。

-预处理样本:根据试剂盒的说明书,进行样本的预处理,包括稀释、纯化、稳定化等步骤。

-加样:将样本按照试剂盒要求的体积加入微孔板中,通常每个孔需要加入100-200μL的样品。

-洗板:使用洗板机或手工操作,将孔中的杂质洗净。

洗板时应注意洗涤缓冲液的使用浓度和洗涤次数。

-加入特异性抗体:根据试剂盒的说明书,将稀释好的特异性抗体加入各孔中,确保操作的准确性和每孔的稀释倍数。

-洗板:重复第4步的操作,将未结合的抗体洗净。

-加入酶标记物:根据试剂盒的说明书,将稀释好的酶标记物加入各孔中,确保加入的量准确无误。

-洗板:重复第4步的操作,将未结合的酶标记物洗净。

-加入底物:将稀释好的底物加入各孔中,使其与酶标记物反应,生成可视化的颜色。

-终止反应:根据试剂盒的要求,在一定的反应时间后,加入终止剂停止反应。

终止剂的选择需符合试剂盒的要求。

-检测结果:使用酶标仪或目视观察检测孔中的颜色变化,通过测量吸光度或颜色强度来确定样本中目标物的浓度。

3.数据分析:-计算样本的结果:根据试剂盒的说明书,根据吸光度或颜色强度测量结果,计算样本中目标物的浓度。

小鼠胰岛素(Insulin)说明书

小鼠胰岛素(Insulin)说明书

小鼠胰岛素(Insulin)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量。

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平。

用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin),再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)含量。

试剂盒组成:样本处理及要求:1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。

离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清。

检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。

加入一定量的PBS,PH7.4。

小鼠胰岛素说明书

小鼠胰岛素说明书

小鼠胰岛素说明书(1)小鼠胰岛素定量分析酶联免疫检测试剂盒本试剂盒仅供科研使用。

用于体外定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的胰岛素浓度。

使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整, 如有疑问请与上海巧伊生物科技有限公司联系,我们将提供力所能及的帮助。

如您有其它需求,请登录上海巧伊生物科技有限公司网站或致电本公司。

胰岛素简介:胰岛素是糖代谢中最主要的激素之一。

胰腺的?细胞岛细胞产生胰岛素前体蛋白,前体蛋白被加工成C肽和胰岛素。

它们以等摩尔浓度进入血循环中。

成熟的胰岛素由A、B两条链组成。

这两条链是通过两个二硫键桥接形成有功能的胰岛素分子。

血浆葡萄糖浓度的变化是胰岛素产生并分泌的最主要刺激因素,产生的胰岛素具有一些代谢调节作用。

其最主要的作用是,将外周血中糖转运到肝脏中贮存起来。

一些诸如肝糖生成障碍或在促进血糖升高的激素诸如胰高血糖素、肾上腺素、生长激素和皮质醇等作用下促进肝糖分解都可拮抗胰岛素的作用。

检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中胰岛素的浓度。

胰岛素捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标本或参考品时,其中的胰岛素会与捕获抗体结合,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。

当加入与HRP耦连的抗胰岛素抗体后,抗小鼠胰岛素抗体与胰岛素接合,形成夹心的免疫复合物,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。

最后加入显色剂,若样本中存在胰岛素将会形成免疫复合物,辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。

通过酶标仪检测,读其450nm处的OD值,胰岛素浓度与OD450值之间呈正比,通过参考品绘制标准曲线,对照未知样本中OD值,即可算出标本中胰岛素浓度。

小鼠胰岛素定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:组分小鼠胰岛素预包被板标准品稀释液小鼠胰岛素标准品小鼠胰岛素抗体HRP 结合物浓缩洗涤液20× TMB底物终止液封板胶纸说明书规格(96T/48T) 12条/6条 10ml/5ml 2支/1支(冻干) 10ml/5ml30ml/15ml 10ml/5ml 5ml/3ml 3/2张 1份标本收集:1.标本的收集请按下列流程进行操作; A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可;B.血清标本应是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液;C.血浆标本,推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测,D.标本收集后请分装,冻存于-20℃,避免反复冻融。

胰岛素(INS)测定试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求enpuguangde

胰岛素(INS)测定试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求enpuguangde

胰岛素(INS)测定试剂盒(化学发光免疫分析法)适用范围:本试剂盒用于体外定量测定人血清中胰岛素(INS)含量。

1.1 规格96人份/盒。

1.2 各组分主要组成成分本试剂盒内校准品可溯源至中国食品药品检定研究院的人胰岛素国家标准品(150519)。

2.1 外观试剂盒应组分齐全,内外包装均应完整,标签清晰,液体试剂无渗漏。

2.2 线性在2.0mIU/L~160mIU/L区间内,用双对数数学模型拟合,剂量-反应曲线线性相关系数(r)应不低于0.9900。

2.3 最低检出限应不高于2.0mIU/L。

2.4 准确性试剂盒内校准品与相应浓度的胰岛素国家标准品(150519)同时进行分析测定,用双对数拟合,要求两条剂量-反应曲线不显著偏离平行;以胰岛素国家标准品为对照品,试剂盒内校准品的实测值与标示值的效价比应在0.900~1.100之间。

2.5 精密度2.5.1 分析内精密度精密性参考品测定结果的变异系数(CV)应不大于10.0%。

2.5.2 批间精密度多个不同批次产品之间,精密性参考品测定结果的变异系数(CV)应不大于15.0%。

2.6 质控品测定值试剂盒内配备的定值质控品,其测定结果应在试剂盒质控品规定的区间内。

2.7 特异性2.7.1 与胰岛素原(Pro-Insulin)浓度为10ng/mL的胰岛素原在本试剂盒上的测定结果应不高于3.0mIU/L。

2.7.2 与C-肽(C-Peptide)浓度为20ng/mL的C-肽在本试剂盒上的测定结果应不高于3.0mIU/L。

2.8 稳定性2.8.1 效期末稳定性试剂盒在2~8℃储存条件下的有效期为11个月,试剂盒在规定的条件下保存至有效期末,检验结果应符合2.1、2.2、2.3、2.4、2.5.1、2.6规定。

2.8.2 热稳定性将试剂盒在37℃条件下放置6天,检验结果应符合2.1、2.2、2.3、2.4、2.5.1、2.6规定。

注:注册检验采用效期末稳定性试验;出厂检验采用热稳定性试验。

大鼠胰岛素(Insulin)elisa试剂盒使用方法

大鼠胰岛素(Insulin)elisa试剂盒使用方法

大鼠胰岛素(Insulin)elisa试剂盒使用方法检测范围:96T0 mU/L -20 mU/L使用目的:本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠胰岛素(Insulin)水平。

用纯化的大鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin),再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠胰岛素(Insulin)浓度。

试剂盒组成1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。

加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:操作同3。

8.洗涤:操作同5。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

ELISA检测试剂盒使用指南

ELISA检测试剂盒使用指南

ELISA检测试剂盒使用指南ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种常用的免疫学实验方法,用于检测病原体、抗体或其他分子的存在和浓度。

它具有高灵敏度、高特异性、易操作和较低成本的优势,被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和免疫学领域。

本篇文章将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南,包括实验准备、试剂的使用步骤和结果解读。

一、实验准备1.阅读检测项目的说明书:在使用试剂盒前,仔细阅读说明书,了解试剂的使用方法、灵敏度和特异性等关键信息。

2.样本准备:根据实验要求,准备样本。

如果需要检测血清中的抗体水平,可以采集血液样本,离心分离血清;如果需要检测细胞培养上清中的分子,将上清收集,并使其清晰,避免细胞或杂质的污染。

3.样本预处理:根据实验需求,对样本进行必要的预处理。

例如,可以通过加热、稀释、酶解等方式来处理样本,以改变样本组分和浓度。

4.准备品质控制样品:制备阳性和阴性控制样品,用于评估试剂盒和实验操作的稳定性和准确性。

5.实验器材准备:准备所需实验器材,如酶标板、移液器、微孔板洗涤仪等。

确保器材的干净和完整,并按照说明书要求对其进行预处理。

二、试剂使用步骤1.试剂准备:根据说明书要求,将试剂从冰箱中取出,并在室温下放置一段时间使其恢复到室温。

确保试剂瓶盖紧闭,并避免暴露在直接阳光下。

2.实验操作:按照说明书的要求,将试剂加入到酶标板中,并根据实验设计进行标准曲线的设置。

标准曲线用于测量未知样品的数量,并计算出浓度。

3.孵育:根据试剂盒的要求,将酶标板放入孵育箱中进行孵育。

孵育温度和时间应根据实验要求进行调整。

4.洗涤:使用洗涤缓冲液对酶标板上的不特异性结合物进行洗涤。

洗涤过程应准确控制洗涤孔板次数和洗涤液的体积。

5.补液:在洗涤完成后,加入辣根过氧化物酶标况稀释液,促进酶标物与特异性结合物的反应。

6.孵育:根据试剂盒的要求,将酶标板放入孵育箱中进行二次孵育。

7.反应停止:根据试剂盒的要求,加入相应的停止液,停止酶反应。

小鼠胰岛素(Insulin)说明书(1)

小鼠胰岛素(Insulin)说明书(1)

小鼠胰岛素(Insulin)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清样本中胰岛素(Insulin)含量。

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平。

用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin),再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)含量。

试剂盒组成:试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品:18mIU/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存样本处理及要求:1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

ELISA检测试剂盒使用指南

ELISA检测试剂盒使用指南

ELISA检测试剂盒使用指南ELISA检测试剂盒使用指南1.简介:1.1 本文档旨在提供ELISA检测试剂盒的详细使用指南,以帮助用户正确、高效地进行ELISA检测。

1.2 ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种常用的免疫测定方法,用于检测体液中特定抗原或抗体的存在与浓度。

1.3 本文档将涵盖ELISA检测试剂盒的准备、样本处理、试剂操作、结果读取等详细步骤。

2.准备:2.1 确保实验室环境整洁,无污染。

2.2 检查所需试剂、仪器和设备是否完整,并检查有效期和储存条件。

2.3 根据实验需要,准备所需样本和质控品,并储存于适当的条件下。

3.样本处理:3.1 根据实验目的选择合适的样本类型,如血清、血浆、尿液等。

3.2 根据试剂盒说明书的要求,对样本进行适当的稀释和预处理。

3.3 严格控制操作条件,避免样本污染和交叉污染。

4.试剂操作:4.1 根据试剂盒说明书,将所需试剂从冰箱中取出,并在室温下适当恢复。

4.2 严格按照说明书的要求,对试剂进行稀释和混合。

4.3 操作过程中注意洁净实验台面,避免试剂交叉污染。

5.检测步骤:5.1 将适量的稀释后的样本、质控品和标准品分别装入试管中。

5.2 添加适量的酶标记抗体或底物,并充分混匀。

5.3 按照试剂盒说明书的要求,进行孵育和洗涤步骤。

5.4 添加底物并进行反应,控制反应时间。

5.5 停止反应,并使用酶标仪测量吸光度。

6.结果读取:6.1 根据试剂盒说明书,根据吸光度值和标准曲线,计算样本中目标物质的浓度。

6.2 将测量结果记录,并进行统计和分析。

6.3 评估实验结果的可靠性,并进行结果的解释和报告。

7.注意事项:7.1 严格按照试剂盒说明书的要求进行操作,避免任何操作步骤的误差和误操作。

7.2 注意实验室安全,避免接触有害化学物质,正确使用防护设备。

7.3 在实验过程中遵循生物安全操作规范,避免潜在的感染风险。

此外,本文档涉及附件,请在附件部分查看相关详细信息。

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小鼠胰岛素(Insulin)Elisa试剂盒使用说明
货号:BC1710
保存:试剂盒保存:2-8℃,有效期6个月。

产品内容:
序号名称96孔配置
1酶标包被板96孔*1可拆卸板
2酶标试剂6ml*1瓶
3标准品(浓度16mIU/L)0.6ml*1瓶
4标准品稀释液2ml*1瓶
5生物素标记的抗Insulin抗体 1.5ml*1瓶
6显色剂A液6ml*1瓶
7显色剂B液6ml*1瓶
8终止液6ml*1瓶
9浓缩洗涤液(*30)20ml*1瓶
10封板膜1张
11使用说明书1份
产品说明:
小鼠胰岛素(Insulin)Elisa试剂盒仅供科研使用,定量检测细胞液、体液、组织、血清、血浆等标本中小鼠胰岛素(Insulin)的含量。

采用双抗体夹心法测定小鼠胰岛素(Insulin)水平。

用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板,制成固相载体,实验时依次在微孔板中加入样本及标准品,并加入HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,反复洗涤后加底物TMB显色。

TMB 在过氧化物酶的催化下转化为蓝色,再用硫酸终止反应,转变成黄色。

颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)含量呈正相关。

采用酶标仪在450nm波长测定吸光度(OD值),根据标准曲线,计算测试样品中胰岛素(Insulin)浓度。

实验材料与试剂配制:
1.仪器与材料:酶标仪(使用前预热30分钟),微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水,
滤纸。

2.洗液的配制:按1:30的比例配制洗液备用。

样品收集、处理及保存:
1.细胞培养上清:适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。

用无菌管收集细胞上清液,以
1000×g离心15分钟,收集上清。

2.细胞:用PBS反复洗涤细胞3次,调整细胞浓度达到104-106/ml左右,通过反复冻融,使
细胞破坏并放出细胞内成份,或者细胞超声粉碎,离心取上清液检测。

3.血清:在室温下,血液自然凝固,以1000×g离心15分钟,取上清待测。

4.血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合后静置10-20分钟后,
以1000×g离心15分钟,收集上清。

5.体液:包括胸腹水、脑脊液,分泌物等。

使用不含热原和内毒素的离心管收集,以1000
×g离心15分钟,收集上清。

6.组织标本:切取组织标本,称取重量0.05g,加入500ul的PBS,用手工或匀浆器,或超
声破碎仪将标本匀浆,以2000-3000rmp离心20分钟,收集上清进行检测。

7.样品中不能含有NaN3,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

8.保存:如果样品不能立即检测,应将其分装,-70℃保存,避免反复冷冻。

保存过程中
如出现沉淀,应再次离心。

血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。

如果血清中含大量颗粒,检测前先离心或过滤。

不要在37℃或更高的温度加热解冻。

应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

操作步骤:
1.取出试剂盒,室温(20-25℃)放置30分钟。

2.分组:取出96孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余
的板条继续冷藏处理。

分别设标准品组(6个浓度)、空白孔、待测样品组。

标准品的
稀释:准备小试管6只,依次编好号码,先在各小试管中加入标准品稀释液100ul,然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第三只试管中,充分混匀;
再在该试管中取100ul加入第四只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第五只试管中,充分混匀;然后在该试管中取100ul,弃掉。

第六只试管作为0号标准品。

稀释后各管浓度分别是:8.0mIU/L,4.0mIU/L,2.0mIU/L,1.0mIU/L,0.5mIU/L,0mIU/L。

注:为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。

3.加样:依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入
50ul的蒸馏水;其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗Insulin抗体10ul。

加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

4.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此
重复5次,拍干。

6.加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液(空白对照孔除外)。

7.温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。

8.洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置15-30s,充分清洗酶标板5次,用吸水纸彻底
拍干。

9.显色:各孔加入显色剂A液50ul后,再加入显色剂B液50ul。

10.终止:25-37℃下避光反应10-15分钟,加入50ul终止液。

11.读板:在450nm波长读取各孔的OD值。

注:读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹,读板时间控制在终止反应后的30分钟内,以免影响准确性。

数据计算:
1.绘制标准曲线:各标准品OD值减去底色即减去空白孔OD
值,以6个标准品的OD值为纵坐标y,以标准品的浓度为
横坐标x,绘制曲线图,如图示,并计算出回归方程y=ax+b。

2.将待测样品的OD值代入方程式,计算各组样品浓度,再
乘以稀释倍数,即为样品的实际Insulin浓度。

3.敏感度:0.01mIU/L
注意事项:
1.实验操作中必须使用一次性吸头,避免交叉污染。

2.加样:加样时,要控制加样速度,避免第一孔与最后一孔间的时间间隔过大,否则将会
导致不同的预孵育时间,从而影响实验的准确性以及重复性。

3.孵育:严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。

4.反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化,如果颜色较深,请提前加
入终止液终止反应。

5.建议实验前预测样品含量,如样品浓度过高,应对样品进行稀释,计算结果时乘以相应
的稀释倍数。

6.建议使用本试剂盒时先做预实验(即先做标准曲线,试用几个标本),如果对本试剂盒
有任何疑问,可和所购经销商联系,如果因运输过程导致试剂盒失效,可要求调换,但概不承担产品本身以外的任何损失。

安全性:
1.避免人体直接接触显色剂A、B和终止液。

一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。

2.实验中不要进食、抽烟或使用化妆品。

3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

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