蛋白纯化系统Biologic-LP使用说明
蛋白质纯化仪的使用(1)资料
1.认识机器
样品泵
层析柱 切换阀
整合电导检测 pH 计
多波长检测器
进样环
混合池
A泵
B泵
A 泵溶液进口线
本机器常规流程图：
溶液由 A/B 泵进 入仪器
层析柱切换阀
B 泵溶液进口线 自动收集器
废
进样阀
多波长检测处
液 出
口
使用机器前所有端口请按如图所示连接，将“ A 泵溶液进口线”
“B 泵溶液进口线”放进超纯水中。按如图所示先不要连接柱子。
不特殊设置，默认 A 泵工作
双击“层析柱切换阀”模块如下图所示：
此步骤主要是洗泵工作， 请确保层析柱不在程序 中，点击“ Bypass”
点击 1-5 可设置连接 不同的层析柱端口
点击此处可让可更 改溶液的流动方向。
3
双击“样品泵”模块出现如下图所示：
选择“System Pump Wast”e 模式后，轻按仪器上“A 泵”的“Purge” 按钮，稍等片刻，即将进行 A 泵的洗泵工作，此时流速将会达到最 大 10 mL/min 。如果想洗 B 泵（凝胶过滤时不需要） ，轻按仪器上“ B 泵”的“ Purge”按钮即可。注意此时废液将从“样品泵”模块上的 “Waste 2”出口处留出，拿好废液缸。
首先单击这里
按如上过程设置好自己需要的流程后，即可开始程序： 点击上方第二行的“ Star Run”→“ OK”即可。
运行以后会出现如下图画面，等待机器运行：
9
程序运行以后，先不要急着休息， 点击下图左上角的“ Hold Step”， 此时连接柱子。
将“层析柱交换阀”上相互连接的两根线从中间拧开，接柱子。 注意： 1.注意柱身上标示的溶液流动方向（上端→下端） 。 2.旋开柱子顶端和下端的螺母，让纯化仪的出水端先连接柱子的 下端，让水从柱子的上端流出，待柱子上端有水滴停留时，将纯化仪 的出水端接到柱子的上端，此时再连接柱子的下端。目的：防止有气 泡进入柱子内。 3.如果用凝胶过滤柱时，除了要特别注意防止气泡进入，还要， 注意的摆放姿势一定要保持垂直，否则会影响纯化的效率。 4.顺便说一下，柱子使用完毕后，应在保持液体流动的情况下， 先拆卸柱子的下端，再拆卸柱子的上端，防止柱内保护液体的损失。 4℃保存。 柱子安装完毕后，在“ Hold Step”点击“ Resume”开始运行你 预先设置好的程序。 嗯，当然，咱们的机器也不是全自动的，开头和结尾还是需要动 身换一下相应的溶液的。 1.记好是 A 泵还是 B 泵进液。 2.换溶液时，
Biolog使用手册1
Biolog使用手册目录1 启动................ (4)1.1 系统需要................ . (4)1.2 安装软件和数据库 (4)1.3 软件配置................ (4)2 系统介绍................ .. (5)2.1 原理................ (5)2.2 鉴定程序................ . (5)2.3 使用简单的软件 (5)2.4软件背后的数学 (5)2.5 鉴定微生物和管理数据 (6)3 进入系统................ (7)3.1 限制性进入模式....................... (7)3.2 创建使用者列表 (7)3.3 使用记录................ . (7)3.4 改变进入模式 (7)4 准备样品................ (8)4.1 分离一个纯培养物 (8)4.2 革兰氏染色 (8)4.3 Wet Prep................ (8)4.4 定义好氧菌特征 (8)4.5 定义厌氧菌特征 (8)4.6 定义丝状真菌和酵母菌特征 (9)4.7 培养................ (9)4.8 准备接种物................ (9)4.9 革兰氏阳性产芽孢杆菌的处理 (9)4.10 丝状真菌的处理 (9)4.11 接种鉴定板................ (9)4.12 培养鉴定板................ .. (9)4.13 厌氧鉴定板的处理 (10)4.14 丝状真菌的准备 (10)4.15 GN，GP，AN的准备 (10)5 读结果................ (11)5.1 登录................ . (11)5.2 选择人工，读数仪或文件输入模式 (11)5.3 选择打印方法................ (11)5.4 人工读结果................ (11)5.5 用读数仪读结果 (11)5.6 从文件读结果 (11)5.7 设置一个工作表 (11)5.8 设置保存文件................ (11)5.9 使用工作表来读多个平板 (11)5.10 人工调整域值 (11)5.11 选择数据库................ (12)5.12 退出................ .. (12)6 结果解释................ (13)6.1 读结果................ . (13)6.2 评估鉴定结果的准确性 (13)6.3 解释不好的鉴定结果的可能原因.. (13)6.4 种的比较................ . (14)6.5 查找并评估种的信息 (14)6.6 使用真菌的宏观和微观图片 (15)6.7 查看更多的种................ (15)6.8 评估原始OD值 (15)7 数据管理和编辑数据库 (16)7.1 文件备份................ . (16)7.2 文件合并................ . (16)7.3 文件浏览和编辑 (16)7.4 自定义数据文件 (16)7.5 输入/输出ASCII数据 (17)7.6 输出为ACCESS (17)7.7 群落分析 (17)8 技术注解 (19)8.1 材料列表 (19)8.2 培养基和接种液准备 (19)8.3 特殊用途的微孔板 (22)9 经常问到的问题 (23)10 故障处理 (25)10.1 革兰氏染色 (25)10.2 培养微生物 (25)10.3准备接种物 (26)10.4接种微板 (26)10.5培养微板 (26)10.6 读数仪 (27)11 术语表 (28)12 附录 (30)附录1 微孔板的数据统计.附录2 样品准备的流程表附录3 真菌样品准备的流程表附录4 数据库表及特性附录5 结果打印输出的格式附录6 危险病原菌数据库附录7 产品注册表1 启动1.1 系统需要计算机（Windows95,98,2000或NT, 有光驱和软驱），显示器，鼠标，键盘，读数仪，浊度仪，菌落放大灯，八头电动加液器，系统软件。
【免费下载】蛋白纯化试剂盒说明书
变性剂 洗涤剂 其他添加剂
缓冲液
10 mmol/L 还原型谷胱甘肽
8 mol/L尿素 6 mol/L 盐酸胍
2% TritonX-100(非离子物质) 2% Tween 20（非离子物质） 2% NP-40 (非离子物质) 2% 胆酸盐 1% CHAPS（两性离子）
20% 乙醇 50% 甘油 100 mmol/L Na2SO4 1.5 mol/L NaCl 1 mmol/L EDTA 60 mmol/L柠檬酸盐 100 mmol/L 磷酸钠，pH 7.4
洗脱液 唑，pH 8.0
20 mmol/L Tris-HCl，8 mol/L 尿素，500 mmol/L NaCl，500 mmol/L 咪
注意：样品和缓冲液中适当浓度的咪唑对获得最大的纯化是必需的，而且产量因蛋白 而不尽相同。自然条件下，20-40 mmol/L 的咪唑的几盒缓冲液对许多蛋白已经足够。洗脱 液中500 mmol/L 咪唑绝大多数情况下完全可洗下目的蛋白。
含螯合剂，例如EDTA，EGTA，柠檬酸等
20%乙醇
4或30℃
5 mmol/L DTE(二硫赤藓糖醇) 5 mmol/L DTT(二硫苏糖醇)
20 mmol/L β-巯基乙醇 5 mmol/L TCEP(磷酸三氯乙酯)
对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料电试力卷保相护互装作置用调与试相技互术关，系电，力根通保据过护生管高产线中工敷资艺设料高技试中术卷资，配料不置试仅技卷可术要以是求解指，决机对吊组电顶在气层进设配行备置继进不电行规保空范护载高与中带资负料荷试下卷高问总中题体资，配料而置试且时卷可，调保需控障要试各在验类最；管大对路限设习度备题内进到来行位确调。保整在机使管组其路高在敷中正设资常过料工程试况中卷下，安与要全过加，度强并工看且作护尽下关可都于能可管地以路缩正高小常中故工资障作料高；试中对卷资于连料继接试电管卷保口破护处坏进理范行高围整中，核资或对料者定试对值卷某，弯些审扁异核度常与固高校定中对盒资图位料纸置试，.卷保编工护写况层复进防杂行腐设自跨备动接与处地装理线置，弯高尤曲中其半资要径料避标试免高卷错等调误，试高要方中求案资技，料术编试交写5、卷底重电保。要气护管设设装线备备置敷4高、调动设中电试作技资气高，术料课中并3中试、件资且包卷管中料拒含试路调试绝线验敷试卷动槽方设技作、案技术，管以术来架及避等系免多统不项启必方动要式方高，案中为；资解对料决整试高套卷中启突语动然文过停电程机气中。课高因件中此中资，管料电壁试力薄卷高、电中接气资口设料不备试严进卷等行保问调护题试装，工置合作调理并试利且技用进术管行，线过要敷关求设运电技行力术高保。中护线资装缆料置敷试做设卷到原技准则术确：指灵在导活分。。线对对盒于于处调差，试动当过保不程护同中装电高置压中高回资中路料资交试料叉卷试时技卷，术调应问试采题技用，术金作是属为指隔调发板试电进人机行员一隔，变开需压处要器理在组；事在同前发一掌生线握内槽图部内 纸故，资障强料时电、，回设需路备要须制进同造行时厂外切家部断出电习具源题高高电中中源资资，料料线试试缆卷卷敷试切设验除完报从毕告而，与采要相用进关高行技中检术资查资料和料试检，卷测并主处且要理了保。解护现装场置设。备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。
蛋白质纯化仪的使用 (1)
蛋 白 质 纯 化 仪 使 用 说 明1.认识机器本机器常规流程图：使用机器前所有端口请按如图所示连接，将“A 泵溶液进口线”“B 泵溶液进口线”放进超纯水中。
按如图所示先不要连接柱子。
建议一般使用A 泵进液，如需梯度洗脱时才用B 泵。
***除上样样品（14000 rpm/12000 rpm 离心30min ）外，所有在此机器上要用的溶液必须要经过0.22 μm 滤膜过滤。
***样品泵A 泵B 泵 多波长检测器 pH 计 混合池 层析柱 切换阀进样环 溶液由A/B 泵进入仪器 进样阀层析柱切换阀多波长检测处 自动收集器 废 液 出 口A 泵溶液进口线B 泵溶液进口线 整合电导检测2.开机打开计算机、蛋白质纯化仪（电源在右侧下角）、自动收集器（电源在后面右侧）。
此时蛋白质纯化仪上部分指示灯会亮，有黄色的、有蓝色的，开机较慢，请稍等，当蛋白质纯化仪上所有指示灯不亮时，才可进行操作。
3.启动电脑“ChromLab”软件双击电脑“ChromLab”应用程序，进入如下界面：4.洗泵单击“Manual Run”进入：我们主要看右下方这块（图中所示模块均可双击设置参数）：双击“样品泵”模块出现如图所示对话框：双击“层析柱切换阀”模块如下图所示：此步骤主要是洗泵工作，请确保层析柱不在程序中，点击“Bypass ” 点击此处可让可更改溶液的流动方向。
点击1-5可设置连接不同的层析柱端口 设置流速 设置压力，小于选择的柱子承受最大压力。
在下面“控制流速以防止超压”前面打对勾，以保护柱子。
不特殊设置，默认A 泵工作此处可控制机器的运行与停止。
双击“样品泵”模块出现如下图所示：选择“System Pump Waste”模式后，轻按仪器上“A泵”的“Purge”按钮，稍等片刻，即将进行A泵的洗泵工作，此时流速将会达到最大10 mL/min。
如果想洗B泵（凝胶过滤时不需要），轻按仪器上“B 泵”的“Purge”按钮即可。
英赛斯蛋白纯化系统安全操作及保养规程
英赛斯蛋白纯化系统安全操作及保养规程1. 简介英赛斯蛋白纯化系统是生物技术实验室中常用的一种设备，用于蛋白质的纯化和富集。
为了确保用户的操作安全和设备的良好运行，请严格按照以下操作规程进行操作和保养。
2. 安全操作规程1.在使用英赛斯蛋白纯化系统之前，必须仔细阅读设备的操作手册，并确保完全理解其中的操作步骤和安全注意事项。
2.操作人员应穿戴个人防护装备，包括实验室服装、手套、护目镜等，并按照实验室安全制度要求操作。
3.在操作之前，确保设备的电源已经关闭，连接线已经插好，并检查设备外壳和连接线是否完好无损。
4.操作人员应严格按照设备的使用说明进行操作，不得随意更改设备的设置和参数。
5.在操作过程中，避免用手直接接触设备的运动部件和尖锐物体，以免发生伤害。
6.操作过程中如遇到异常情况，如设备异常响声、烟雾、异味等，应立即停止操作，切断电源，并向实验室负责人报告，并按照实验室应急处理程序进行处理。
3. 设备保养规程1.设备的保养应定期进行，以确保设备的正常运行和延长设备的使用寿命。
2.在保养之前，必须切断设备的电源，并等待设备完全停止运行后进行保养操作。
3.首先，清洁设备的外壳和显示屏，可以使用软布擦拭，禁止使用含酸碱物质的清洁剂。
4.检查设备连接线是否完好无损，如有损坏应及时更换。
5.定期检查设备的运动部件和配件，如有磨损或损坏应及时更换，以免影响设备的正常运行。
6.设备需要进行液体处置时，必须按照实验室的废液处理规程进行处理，禁止随意倾倒废液。
4. 总结通过严格遵守英赛斯蛋白纯化系统的安全操作规程和定期进行设备的保养维护，可以确保用户的操作安全和设备的良好运行。
同时，操作人员还应定期参加相关的培训和学习，提高自己的实验操作技能和安全意识。
蛋白纯化系统操作规程
蛋白纯化系统操作规程一、注意事项：1.保持系统、馏分收集器内外清洁。
2.使用进口过滤器、过滤后的缓冲液，最后脱氧缓冲液。
3.为获得最佳的结果,在运行期间使用缓冲液,系统和柱处于环境温度。
4.上样之前，离心或过滤样品。
5.定期清洗和清洁整个仪器,包括馏分收集器。
6.防止交叉污染和细菌生长, 系统在每次运行后执行系统清洗(CIP)。
7.系统处于强洗涤液中不超过2小时。
8.系统停用之前，用20%乙醇填满系统，以避免滋生细菌。
9.设置UNICORN TM系统通知,提示定期维护时间。
例如,定期更换泵清洗液。
二、运行必需品：运行前1.泵清洗液：20%乙醇，混浊时或量少时及时更换。
2.检查所有管道, sure no tubing is nicked.3.确保所有缓冲液处于相同的温度系统以减少气泡的问题。
4.所有入口用缓冲液填满。
5.排气：从泵头内把气体抽出。
6.开始一个流动相，观察是否有泄漏。
7.调整ph电极。
8.执行系统预运行，使正确的缓冲液填满系统的整个流路。
9.启动一个流程检查信号从显示器看起来稳定,如果不现实，看7-1210.wipe off the fraction collector sensors(code reader & drop sync sensor) with a tissue and fillthe fraction collector with the tubes plates needed. 除去馏分收集器传感器(代码读者&下降同步传感器)组织和填补与管板所需馏分收集器。
11.wipe off the fraction collector sensors(code reader & drop sync sensor) with a tissue and fillthe fraction collector with the tubes plates needed.12.附上需要的柱子，并设置正确的柱压力。
蛋白纯化试剂盒说明书
蛋白纯化试剂盒介绍试剂盒有10个重力流柱，而该柱在自然条件下纯化可重新装填Ni-IDA Sefinose TM 6 Fast Flow 和结合缓冲液，洗脱液。
这10个柱子通过固定化金属亲和层析可用于纯化带组氨酸标签的蛋白。
Ni-IDA Sefinose 6 Fast Flow 有很高的蛋白结合能力，低镍离子（Ni2 +）的泄漏以及可与变性剂和广泛的添加剂相兼容。
澄清和非澄清的样品可使用该柱。
特殊的frits 在纯化过程可防止介质变干燥。
一次纯化平均需要30分钟。
在变性下纯化，请自备额外的结合缓冲液和洗脱液。
特征柱材料聚丙烯桶，聚乙烯筛板介质Ni-IDA Sefinose 6 Fast Flow平均粒径90 µm蛋白结合能力约6 mg组氨酸标签蛋白/1毫升树脂床体积 1 mL/柱使用时兼容性在各种通用缓冲液，洗涤剂和变性剂中稳定避免在缓冲液中含螯合剂，例如EDTA，EGTA，柠檬酸等pH稳定性，短期（2h）2-14储存20%乙醇保存温度4或30℃与NI-IDA树脂相兼容的试剂还原试剂5 mmol/L DTE(二硫赤藓糖醇)5 mmol/L DTT(二硫苏糖醇)20 mmol/L β-巯基乙醇5 mmol/L TCEP(磷酸三氯乙酯)10 mmol/L 还原型谷胱甘肽变性剂8 mol/L尿素6 mol/L 盐酸胍洗涤剂2% TritonX-100(非离子物质)2% Tween 20（非离子物质）2% NP-40 (非离子物质)2% 胆酸盐1% CHAPS（两性离子）其他添加剂20% 乙醇50% 甘油100 mmol/L Na2SO41.5 mol/L NaCl1 mmol/L EDTA60 mmol/L柠檬酸盐100 mmol/L 磷酸钠，pH 7.4 缓冲液100 mmol/L Tris-HCl pH 7.4100 mmol/L Tris pH 7.4100 mmol/L HEPES pH 7.4100 mmol/L MOPS pH 7.4100 mmol/L 醋酸钠pH 4注意：1.为了最佳的操作过程，按照上述纯化步骤进行预洗以除去任何削弱结合镍离子的物质。
蛋白纯化仪安全操作及保养规程
蛋白纯化仪安全操作及保养规程前言蛋白纯化仪是生化和分子生物学实验室中必不可少的设备之一。
准确、安全地操作和维护蛋白纯化仪对于提高实验效率和保障实验人员的身体健康非常重要。
本文旨在介绍蛋白纯化仪的安全操作和保养规程。
安全操作1. 设备安装在蛋白纯化仪安装前，需要选择一个耐重、耐腐蚀、耐高温的设备摆放区域，并确保设备周围药品和试剂放置整齐。
使用前请检查设备和设备周围配件是否齐全。
2. 装填样品（1）根据实验的需要先准备好要分离的样品。
（2）在使用蛋白纯化仪前，应先检查使用范围，如PH值、盐度、清洁程度等进行调试。
（3）在装填前，需确保仪器内部是干燥和清洁的，并需要对仪器和采样管进行预冻结。
（4）将样品缓冲液注入仪器，按设置好的菌液流速和流量进行分离。
3. 设备操作（1）在操作过程中，避免直接接触电极和传感器。
（2）在操作过程中，应确保培养条件和样品的干净，在使用前先洗手，并戴上手套。
（3）在操作过程中，不要自行拆卸或试图调整电机和传感器。
（4）在使用蛋白纯化仪时，需要保持专注，避免拥挤、喧哗等情况。
（5）在设备操作结束后，应清理样品缓冲液、水分和其他非必需物件。
4. 安全储存（1）将蛋白纯化仪放置在干燥、清洁、阴凉处，避免阳光直射，避免风雨侵扰。
（2）储存前，应将设备清理干净，检查电线和仪器外壳是否损坏。
（3）如需长期储存，应选择干燥剂，放在密封袋中存放。
保养规程1. 保养前准备（1）在维修和保养前，请务必断开电源，等待设备冷却。
（2）在检查仪器故障前，请避免使用强酸、强碱等腐蚀性溶液。
（3）在保养蛋白纯化仪前，请确保清洗采样器，以保证设备的卫生和稳定性。
在某些实验条件下，可使用特殊清洗剂进行清洗。
2. 保养方法（1）每次使用后，应清理仪器内和采样器上的残渍。
已销毁的细胞和不适当的样品会在放置一段时间后附着在样品杯或采样器上，导致蛋白纯化仪运行不稳定，应当及时进行清洗。
（2）维修时，请遵循蛋白纯化仪安全操作规程。
Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)使用说明
Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)使用说明货号：LS00160规格：100mL保存：-20℃保存，12个月。
产品说明：多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，如Triton、SDS、NP-40等，Western及IP细胞裂解液是采用一种非变性裂解方法来裂解细胞，并获得总蛋白的裂解液。
所获得的蛋白质可以用于PAGE电泳，Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等，主要由Tris-HCl、NaCl、低浓度Triton X-100，低浓度sodium pyrophosphate等组成，不含蛋白酶、磷酸酶抑制剂，并维持原有的蛋白间相互作用。
用Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)(Cell lysis buffer for Western and IP without inhibitors)得到的蛋白，可以用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。
由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不宜用Bradford法测定由Western及IP细胞裂解液获得样本的蛋白浓度。
操作步骤(仅供参考)：(一)贴壁培养细胞1、取Western及IP细胞裂解液室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加蛋白酶抑制剂。
2、去除贴壁细胞的培养液，用PBS、NS或无血清培养液清洗1次，低速离心，弃上清，留取沉淀。
3、按照6孔板每孔加入100～200µL裂解液的比例，加入Western及IP细胞裂解液。
移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。
通常裂解液作用于细胞1～5s内，细胞就会被裂解。
4、10000～12000g，离心3～5min(如果用冷冻离心机4℃离心效果更佳)，取上清。
5、进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)悬浮培养细胞1、取Western及IP细胞裂解液室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加蛋白酶抑制剂。
蛋白纯化系统
• 这些特性的区别使不同生物分子分子在层析的固定相和流动相的分配不 同而达到分离
原理与操作 层析技术
• Ion Exchange (IEX)－离子交换
–电荷 – 可用于 层析的任何步骤，根据纯度要求，包括粗纯捕获、中间纯化和 最后的精细纯化
• Size Exclusion (SEC)－分子筛（或凝胶过滤） –分子大小 – 用于中间纯化、脱盐和缓冲液交换、最后精细纯化
Fractions
Rack A Pos.: Tube 1 #:3 5 7 9 11 131517192123252729313336454749515355575961636567697173757779818385 1.25 1.00 70.0 % Buffer B 60.0 50.0 5.0 7.5
实验室研究
A、天然生物样品 B、重组基因工程药物 C、蛋白质组研究 差异蛋 白质 质谱 测序 克隆 表达 纯化 纯度均一的蛋白质
原理与操作 其他生物分子分离纯化
其他生物大分子：DNA，多糖 生物小分子：多肽和小肽，核苷酸，寡糖和单糖 ，多环和杂环
用途： 用于性质、活性等研究需要 用于治疗和诊断的药物 用于生物、化工或食品等轻工领域的生化试剂
–独特分离机理，包含离子交换和金属螯合等,可用于 层析的任何步骤，根据纯 度要求，包括粗纯捕获、中间纯化和最后的精细纯化
原理与操作
层析的5个操作步骤
•装柱并平衡 •上样 •平衡 •洗脱 •再生
上样
分离
装填有层析介 质的层析柱
分离组分流出
原理与操作 层 析图
第一峰, 外水体积, Vo, 不与柱中填料相互作用直接从柱中 流出。这是样品中的未结合物质 洗脱峰，有些可以很好的分离， 有些分得不是很好，有部分交叉
Biospin PCR 产物纯化试剂盒 说明书
吸光度测量结果问题吸光度测量的是未知样品与调零标准之间的相对吸光度，所以请用与洗脱液体相同的液体，对测量样品进行稀释和调零。
如何计算提取率1) 由于回收前样品中，往往含有非目的DNA片段、引物、dNTP等，所以不能用测样品回收前后吸光度的的方法计算回收率。
2) 可将回收前后DNA片段一起电泳，使用凝胶成像系统拍照后，用配套的软件进行电泳条带灰度对比。
3) 注意，电泳条件及拍摄条件将对灰度对比结果造成很大影响，请仔细操作，以减小误差。
DNA片段长度与提取率本试剂盒的对于50bp以下的DNA片段无提取能力，该设计是为了有效去除PCR反应中的引物。
核酸的检测分析及图例见英文说明书Biospin PCR Purification Kit Biospin PCR产物纯化试剂盒Cat# BSC03M1Low recovery1）The extraction buffer is acidic buffer，if the pH increases after gel excated, it will leads to inefficient DNA binding. Pleas add 0.1volume 3M sodiumacetate（pH5.0）.2）Incubate the Elution Buffer in 30～60℃，it will increase the yields.Absorbance problemA bsorbance is the difference from sample and criterion，please use the ElutionBuffer to adjust zero value and dilute the sample.How to calculate yield1) Because there are usually nonpurpose DNA, primer and dNTP beforesample purification, please do not use method of absorbance analysis tocalculate yield.2) User can electrophoreses DNA both before purification and afterpurification, and then take photo by imaging system, thus to comparebrightness of nucleic acid belt by using equipped software.3) Pay close attention to operation to reduce error, for electrophoresis andphoto condition will affect comparison resultThe size of DNA and yieldThis kit is available for DNA whose size is larger than 50bp, thus to removeprimer of PCR product efficiently.Analysis DNA⊕Absorbance anlysisGet some DNA，diluted in a advisable factor with elution buffer.Survey the OD260，OD280 and OD320.expressions：concentration（μg/ml）＝50×OD260×dilution facttarget： 2.0≥OD260-320/ OD280-320≥1.8Notice:1.0≥OD260≥0.1, the result of ratio is much reliable.Agarose Gel Analysis⊕0.8～1％ Agarose gelExample 1：According to the absorbance and agarose gel analysis，the impurity had been discarded.U: unpurified P: purified M: Marker Target DNA fragment→Primer→Example 2：Example3：Elution Volume versus DNA Yield试剂盒组成(100T)Binding Buffer 20mlWash Buffer 30mlElution Buffer 20mlSpin column 100说明书1份储存与运输试剂存于室温（15～25℃）。
永联蛋白纯化仪操作流程
永联蛋白纯化仪操作流程1.开机打开仪器的主电源，打开电脑电源。
待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。
双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
2.准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。
3.清洗及管道准备首先将A1管道放入缓冲液或平衡液，binding buffer中，将B1管道放入高盐溶液中或elution buffer，在system control窗口点击工具栏内的manual，选择 pump→pump wash basic，选中A1,B1管道为ON，execute。
泵清洗将自动结束。
4. 安装层析柱在manual里选择pump→flow rate，输入流速1ml/ml，insert；选择Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力），insert，execute。
InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。
5.开始纯化a）等待柱子平衡好了（观察电导COND，pH的数值和变化趋势）就准备上样了。
此时将紫外调零，选择Alarm&mon→autozero，exectue。
b）用样品环上：将样品吸进注射器，推掉气泡，从injectionValve 的3号位推入（进样量不得低于样品环的体积的2倍）推好后不要取下注射器。
在manual里选择flowpath→injectionValve→inject，execute。
c）用泵上样：点击pause，将A1放入样品中，点击countine，待样品上完后，再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。
选择 b,c中一种方式d)洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。
蛋白纯化系统操作方法包括
蛋白纯化系统操作方法包括蛋白纯化是一项重要的实验操作，用于从混合物中分离出目标蛋白质，并提高其纯度。
以下是蛋白纯化系统的一般操作方法：1.蛋白样品的制备首先，需要制备蛋白样品。
可以通过细菌、真菌、动植物细胞等产生蛋白质，然后对细胞进行破碎，释放蛋白质。
也可以通过纯化蛋白原来进行结晶或者分子克隆等方法得到蛋白。
2.样品预处理样品中常含有大量的杂质，例如细胞碎片、DNA、RNA、其他蛋白质等，需要进行预处理。
常用的方法有：加入酶切剂去除核酸，加入盐溶液去除非蛋白质杂质，或者用超速离心去除大颗粒的杂质。
3.蛋白的分离蛋白质需要与其他非目标蛋白质和杂质分离。
常用的方法有：（1）离心分离：通过不同蛋白质的分子量和密度差异，通过离心收集目标蛋白。
（2）层析分离：利用树脂的亲和性、离子交换、分子筛等性质，与目标蛋白质发生特异性的结合和解离。
（3）电泳分离：利用蛋白质在电场中的迁移速度差异，根据分子量分离蛋白质。
4.组分检测与分析分离后的蛋白样品需要通过一系列的检测与分析来确定蛋白的纯度和活性。
常用的方法有：（1）SDS-PAGE凝胶电泳：用于蛋白质的分子量测定。
（2）Western blotting：用于鉴定目标蛋白。
（3）质谱检测：通过质谱仪对蛋白质进行分析，确定其氨基酸序列。
5.纯化与储存一旦蛋白质纯化成功，可以进行存储。
常见的方法有：（1）冷冻储存：将蛋白质溶液迅速冷冻，并储存在低温下，常用-80冷冻柜。
（2）较长时间的存储，通常需要添加缓冲剂、保护剂等。
（3）储存前需要确定蛋白质的浓度、PH值，并在储存过程中定时检测孵育蛋白质的稳定性。
蛋白质纯化系统操作的过程中需要注意以下几个关键点：1. 对样品要进行充分的准备工作，例如对细胞进行充分破裂，或者通过克隆技术得到纯化的蛋白质。
2. 选择合适的分离方法，要结合目标蛋白质的特性和实验需求来选择合适的方法。
3. 在整个纯化过程中，要保持样品的稳定和活性。
需要根据生物学特性，加入适当的保护剂和缓冲剂来维护蛋白质的稳定。
LP 层析系统简明使用教程
BioLogic LP层析系统简明使用教程BioLogic LP 层析系统一、 仪器名称：BioLogic LP 层析系统 二、 规格型号：BioLogic LP 三、 生产厂家：Bio-Rad Laboratories, Inc 四、 产品简介 随着生命科学研究进入后基因组时代，以蛋白质为主要对象的研究成为各实验室研究的主 题，其中，对单个蛋白质的分离纯化是蛋白质研究的基础工作，也是非常重要的工作。
对纯度均 一蛋白质的研究是揭示生命规律的重要手段，也是新药研发的必要途径，因为只有获得一定量的 蛋白质纯品，才能满足结构和功能的分析、物理化学参数测定、生物活性、毒理和药理实验等等， 乃至大量制备用于诊断和治疗。
蛋白质分离纯化的重要问题是如何在纯化过程中保持温和的条件，从而保证在此过程中蛋白 质的结构和活性不受影响。
层析技术（Chromatography）为蛋白质纯化提供了这样的条件，大都 在室温或低温下操作，所用的流动相可以是与生理液相似的具有一定 pH 值、离子强度的缓冲水 溶液，所用的填料表面修饰各种基团，可与蛋白质分子温和接触，从而保持了蛋白质分子的原有 构象和生物活性。
层析系统以及各种分离纯化所需的填料和层析柱是保证该纯化过程的稳定性、 重现性和自动化进行所必需的设备。
五、 技术原理 将一种混合物分成单个组份是一个熵减的过程，故外界必须要给此过程提供能量。
如下图所 示，完整的层析系统主要包含泵、各种阀门、层析柱、各种在位检测器和收集器。
其主要过程是：由蠕动泵推动溶液；各种阀门控制溶液流向，或者进样，或者洗脱层析柱； 样品经过层析柱并洗脱后，以样品各组分在流动相和固定相（层析介质）中的分配系数不同而 保留不同，从而分开；不同组分经过各种在位检测器，如紫外检测器、电导检测器、pH 检测器 等确定各组分的位置和浓度；最后各组分由收集器自动收集。
其中，泵是层析系统的心脏，用以推动溶液流动，LP 的泵是双通道蠕动泵，可提供精确稳 定，双向变速可调的液流，可配不同直径蠕动管，流速范围为 0.01-40mL/min。
Lp(a)纯化protocol
Lipoprotein(a) 纯化步骤1.在血浆中加入0.01%NaN3(叠氮化钠)，0.01% Na2EDTA，and 1 mMbenzamidine（苯甲脒），将密度调节至1.21g/mL；2.超速离心得到total lipoproteins；3.total lipoproteins 用磷酸盐缓冲液透析；（磷酸盐缓冲液配方：0.1M磷酸钠+0.01%NaN3+0.01% Na2EDTA+1 mM苯甲脒，调节PH=7.4）4.透析完后，加入到赖氨酸琼脂糖凝胶柱中，进行电泳；（柱子用磷酸缓冲液冲洗，未结合的部分含有LDL，结合在柱子上的大多为Lp(a)）5.结合在柱子上的Lp(a)用加有100mM ACA的磷酸盐缓冲液洗脱；6.在洗脱下来的溶液中加入7.5%CsCl，用Beckman离心机离心（60Ti rotor 25mL管子）50000rpm，15℃，27h；7.被纯化的Lp(a)用PBS透析一下；（PBS配方：0.1M NaCl+0.01M磷酸二氢钠+0.01%NaN3+0.01%Na2EDTA+1 mM苯甲脒，调节PH=7.4）8.未结合在柱子上的成分，用组氨酸缓冲液透析一下；（组氨酸缓冲液配方：0.2 M NaCl+0.025 M 组氨酸+0.01% Na2EDTA，调节pH= 6.0）9.得到的透析产物加到一个包含PBE94的柱子中，用组氨酸缓冲液洗脱，未结合在柱子上的成分中含有LDL，用PBS透析、收集。
10．得到的透析蛋白用超滤器浓缩，然后用NaBr调节密度至1.35g/Ml;11．取其中5mL溶液至25mL装有0-25%梯度NaBr的离心管中，超离90min, 15℃，50000rpm；12．PBS透析超离后的产物；13.Lp(a)加入到终浓度为100mM ACA和2mM二硫赤癣糖醇（dithioerythritol）中，室温孵育1小时；14.用PBS透析以上反应混合物1h；15.用NaBr调节密度至1.32g/mL；16.取5mL加入到装有10%-25%NaBr梯度溶液的离心管中，然后离心90min，50000rpm，15℃；17.然后用PBS透析，用vivaspin集中器浓缩。
蛋白质纯化系统安全操作及保养规程
蛋白质纯化系统安全操作及保养规程前言蛋白质纯化系统是进行蛋白质纯化的重要设备，但在操作和保养过程中，存在一定的安全风险。
本文档将对蛋白质纯化系统的安全操作和保养规程进行详细说明，以确保设备的正常运行和使用人员的安全。
安全操作操作前准备在进行蛋白质纯化系统操作之前，需要进行以下准备工作：1.确认所有操作人员都接受了相关培训和指导，并具备相关操作使用证书；2.确认蛋白质纯化系统的电源线、水源线、气源线等均已连接稳定；3.确认系统中的试剂、材料均在规定的温度、湿度下存放，并未过期。
系统启动与关闭启动1.操作人员应按照系统启动顺序操作开关，并确认系统各部件正常运行；2.在启动各部件之前，需要确认仪器安全状态（如是否有漏电等异常），如果出现异常情况，需要及时联系设备维修人员进行处理；3.启动时应注意系统各部件的转动方向是否与指示方向一致。
关闭1.操作人员应先关闭各个离子交换柱后再关闭系统的其他部件；2.关闭系统时需依次关闭各部件的电源开关，并保证系统内的压力已经全部松开；3.系统关闭后，操作人员应对设备进行清洁和消毒。
系统使用洗涤清洁1.操作人员应在进行洗涤清洁操作前，确认离子交换柱中是否存在蛋白质残留物，如有，则应先使用吸附剂进行洗涤；2.可根据需要对系统进行适当清洗操作，但需注意不可用酸性或碱性试剂进行清洗；3.当使用含有氧化还原试剂时，需注意使用前先检查氧化还原剂是否对设备造成损坏。
电路操作1.设备中的电路部件应严格按照要求接线，不能改变线路的原有状态；2.操作人员应定期检查电路部件的运行状态，如果发现有线路异常，应及时关闭电源，并排除故障；3.在拆卸上机部件时，应首先切断电源，并等待设备内部电压完全释放后再进行操作。
水路操作1.操作人员应及时更换水质过滤器，保证设备用水的纯度；2.在更换实验过程中，需注意不能将高温水直接浇到冷却系统上，否则会对设备产生不良影响。
保养规程定期检查1.设备在运行过程中，需定期检查各部件的运行状态，如是否存在异常；2.操作人员应定期检查柱、管道是否存在老化、脱落等情况，如有则需要及时更换；3.在设备的长时间停用后，应进行若干次空气透气试验，排出内部积存的湿气。
蛋白质纯化层析设备操作流程
蛋白质纯化层析设备操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!蛋白质纯化层析设备操作流程一、准备工作阶段。
在使用蛋白质纯化层析设备之前，要做好充分的准备。
蛋白纯化系统Biologic-LP使用说明
蛋白纯化系统Biologic-LP使用说明Biologic-LP是蛋白质层析纯化系统, 其原理是利用不同蛋白分子所具有的特性（如等电点、分子量及亲水或疏水性）与层析柱中的介质产生的吸附作用后，再用相应的洗脱液来对吸附在层析柱上的蛋白进行洗脱。
根据目标蛋白及不同层析柱介质的特性，设计相应的洗脱程序可以使目标蛋白与其他杂蛋白先后从层析柱上洗脱下来。
通过观察紫外光的吸收峰，可分别收集不同时段洗脱下来的蛋白液。
蛋白混合物通过这样的程序可被分离至单个蛋白。
通常分布在混合物中的目标蛋白需要通过组合而不是单一的层析路线来进行分离操作。
常规的分离路线如通过疏水层析—离子交换—疏水层析的技术路线来有效分离目标蛋白。
本层析系统使用主要分为三个部分。
首先在使用前确认分离的技术路线和使用的层析柱。
其次根据层析柱使用的要求配制相关试剂和确定层析过程的参数。
最后通过层析操作分离纯化目标蛋白，并清洗层析柱和管道以确保仪器能长期有效使用。
一设计蛋白的纯化路线及选择不同的层析柱及层析方法根据目标蛋白的特性及来源，设计纯化的路线并确定每一步操作所需要的层析柱及层析方法。
根据不同层析方法的要求，准备蛋白样品及洗脱液及洗脱方式（如线形洗脱或梯度洗脱）。
而后确认层析操作中的主要参数。
二层析系统的操作以下是对所有层析操作中共同的步骤进行的描述。
特别注意的是不同的分离方式如离子交换和疏水层析它们的原理和参数设置完全不同。
这里仅就相同的操作进行描述，具体的参数设置见使用说明书并咨询负责本仪器的老师，切不可擅自操作，以免破坏仪器。
1、确定目标蛋白层析柱的选择，不同的分离方式选择不同的层析柱。
2、样品制备。
根据层析柱介质对蛋白样品的要求，制备样品和洗脱液。
所有用于层析的溶液及样品均要通过0.45μm膜过滤，以免堵塞层析柱。
3、打开层析仪电源，按照显示屏的提示，分别设置好A液、B液、流速、时间等相关参数，并将接样管插入接样仪。
4、打开电脑及Biologic-LP Data View软件，观察层析过程是否正常或是否需要调整，做好接样前的准备。
Bio-Plex悬液芯片系统简明使用教程(2008修订版)
Bio-Plex 悬液芯片系统将先进的软件包、系统检验工具、微球耦联试剂和即用型细胞因子与磷 酸化蛋白测试试剂整合在一起，使硬件、软件和检测试剂形成一个功能强大的芯片技术平台，大大
提高了结果的精确性和可重复性，使用更加简便高效。该系统为蛋白与核酸研究人员提供了灵活的
复合测试方案，可在单个样品中同时分析多达 100 个生物分子。利用 100 种不同颜色微球（xMAP 技术）标记生物分子配体，每个微球可耦联一个对应不同靶分子的特异反应物。反应物可以是酶底
加入黄色闪烁所提示的试剂，然后将 MCV 板推入仪器，按 OK 开始进行仪器校正。 注意：Calibrate kit 中的试剂 CAL1 和 CAL2 在加入前必须从 2-8℃恢复到室温，并进行漩涡混合 30 秒以上才能使用，每孔加入 5 滴，DI 水加入 3.5mL。
5、创建和运行方法 Protocol setting 和 Run protocol： 点击工具栏的 New 按钮，屏幕即打开方法编辑 Protocol 窗口，如下图所示：
[1] Hulse R E, Kunkler PE, Fedynyshyn J P, et al. Optimization of multiplexed bead-based cytokine
immunoassays for rat serum and brain tissue. J Neurosci Method, 2004, 136: 87-98.
六、结构组成
七、仪器操作规程
1、MCV 板介绍：MCV 板是用于维护（maintenance）、校正（calibration）和校验（Validation）
的操作板，大小与一般 96 孔板相同，如下图所示：
用于 Validation
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
蛋白纯化系统Biologic-LP使用说明
Biologic-LP是蛋白质层析纯化系统, 其原理是利用不同蛋白分子所具有的特性（如等电点、分子量及亲水或疏水性）与层析柱中的介质产生的吸附作用后，再用相应的洗脱液来对吸附在层析柱上的蛋白进行洗脱。
根据目标蛋白及不同层析柱介质的特性，设计相应的洗脱程序可以使目标蛋白与其他杂蛋白先后从层析柱上洗脱下来。
通过观察紫外光的吸收峰，可分别收集不同时段洗脱下来的蛋白液。
蛋白混合物通过这样的程序可被分离至单个蛋白。
通常分布在混合物中的目标蛋白需要通过组合而不是单一的层析路线来进行分离操作。
常规的分离路线如通过疏水层析—离子交换—疏水层析的技术路线来有效分离目标蛋白。
本层析系统使用主要分为三个部分。
首先在使用前确认分离的技术路线和使用的层析柱。
其次根据层析柱使用的要求配制相关试剂和确定层析过程的参数。
最后通过层析操作分离纯化目标蛋白，并清洗层析柱和管道以确保仪器能长期有效使用。
一设计蛋白的纯化路线及选择不同的层析柱及层析方法根据目标蛋白的特性及来源，设计纯化的路线并确定每一步操作所需要的层析柱及层析方法。
根据不同层析方法的要求，准备蛋白样品及洗脱液及洗脱方式（如线形洗脱或梯度洗脱）。
而后确认层析操作中的主要参数。
二层析系统的操作
以下是对所有层析操作中共同的步骤进行的描述。
特别注意的是不同的分离方式如离子交换和疏水层析它们的原理和参数设置完全不同。
这里仅就相同的操作进行描述，具体的参数设置见使用说明书并咨询负责本仪器的老师，切不可擅自操作，以免破坏仪器。
1、确定目标蛋白层析柱的选择，不同的分离方式选择不同的层析柱。
2、样品制备。
根据层析柱介质对蛋白样品的要求，制备样品和洗脱
液。
所有用于层析的溶液及样品均要通过0.45μm膜过滤，以免堵塞层析柱。
3、打开层析仪电源，按照显示屏的提示，分别设置好A液、B液、
流速、时间等相关参数，并将接样管插入接样仪。
4、打开电脑及Biologic-LP Data View软件，观察层析过程是否正常
或是否需要调整，做好接样前的准备。
三、层析系统的维护
操作结束后，按仪器使用说明，清洗层析柱及管道，将层析柱保存好，备用。
特别注意不同的层析柱要求的清洗方式不同，对管道的清洗也不同，层析柱的保存方式也不同。
清洗和保存时一定要按照使用说明书的要求进行操作，不能出现错误以免对层析系统造成破坏。