环境生物学实验指导-11环科

环境生物学实验指导

专业：环境科学

时间：二零零九年九月

环境生物学实验指导

一、课程简介

环境生物学是环境科学专业开设的一门重要的专业必修课。通过本课程的学习，了解生物与环境之间的相互作用及其关系，生物在环境监测、环境评价、环境修复中的作用以及环境污染物的生物降解与转化规律，生物技术在环境治理中的应用等有关基本知识。系统地掌握环境生物学的基本理论、基本知识和基本技能。

二、课程实验目的和要求：

1 、目的：通过实践操作，印证和巩固课堂教学中学到的环境生物学的理论知识，学会实地观察的技术，培养进行科学工作的能力，养成实事求是的工作作风和解决实际问题的能力。

2 、要求：要求学生能够正确使用实验室的基本仪器设备，掌握环境生物学实验的基本操作技术，并能够客观地对实验进行观察、描述、比较、分析和综合。

三、考试（考核）方式：

以考核方式进行，要求学生独立完成每个实验并提交报告，并用百分制记分，然后求平均分 = 总分 / 实验次数。其实验成绩占课程总评成绩的 30% 。实验内容在课程考试中占 30% 。

四：主要仪器：

光学显微镜（含有关配件）50 台，超净工作台4台，高压蒸气灭菌锅2只，烘箱、恒温培养箱各3台，电炉 10 只，酒精灯、载玻片、接种环（针）、培养皿、试管、移液管、锥形瓶等若干。

五、主要参考书目：

[1] 孔繁翔，环境生物学，南京：南京大学出版社。

[2] 王家玲，环境微生物学实验，北京：高等教育出版社。

[3] 程树培，环境生物技术实验指南，南京：南京大学出版社。

实验一有毒物质对水生生物的影响或急性毒性实验（4学时）

农药是一类特殊化学品。农药引起的环境污染和对生物的影响日益突出。在施用过程中,仅有1 %左右的农药作用于靶生物，其余的或残留于土壤,或通过间接途径进入水环境，从而影响土壤生物和水生生物。水环境中的农药可通过食物链途径逐级浓缩，从而导致对水生态系统的危害，甚至可最终危害人类健康。农药对水生生物的毒性是农药的生态风险评价和管理的重要参数。

一、实验目的和内容

百草枯、草甘膦、敌杀死和乐果是目前我国广泛施用的除草剂和高效杀虫剂。本实验采用急性毒性实验来研究农药对水生生物的影响。

二、实验材料

实验动物：体长约5~8cm的鲫鱼；

实验药品：草甘膦

实验仪器：塑料桶（容量约﹥10L）；容量瓶（100ml）；移液管；烧杯（250ml）；

三、实验方法步骤

(一)急性毒性试验的一般程序

1．急性试验剂量分组

(1)先查阅文献，找出与受试化学物结构与理化性质近似的化合物的毒性资料，并以其相同生物种类和相同染毒途径得出LD50(LC50)值作为受试物的预期毒性中值。

(2)以此LD50(LC50)为待测化合物的中间剂量组，再上下以3倍之差的剂量各推1～2个剂量组做预试验，求出生物全活、全死剂量。

(3)在预试验的全活全死剂量之间设5～6个剂量组，一般的各组间距按1.2～1.5等比级数设计。

2．选用适宜的染毒方式染毒，观察两周内的死亡情况。

3．症状观察：LD50值并不能充分说明受试化合物的急性毒性，因此应详细观察实验动物接触不同剂量外源化合物后的中毒症状、发生和发展过程及规律，死亡前症状特点、死亡时间等。一般常见的中毒症状有兴奋现象、抑制现象。

4．剖检死亡和濒死动物及部分存活动物，做大体病理解剖检查。

5．计算LD50(LC50)，及其标准法。通常采用寇氏法和几率单位法。

6．根据所得结果，按相关急性毒性分级标准，评定其毒性大小，如急性毒性作用带愈小，则引起死亡的危险性就愈大，反之，则愈小；LD50值愈小，毒性愈大。

(二)本实验方法步骤

1、农药的配制：母液稀释法（二次稀释法）

即先用少量的水把农药稀释，配成母液，再用大量的水把母液稀释成所需浓度。这样配出的药液高效又稳定！

2、剂量分组

按水生生物急性毒性试验标准方法进行。每种农药设6～7 个试验浓度组,并同时设一对照组。每组

5-6条鱼。

3、实验条件

实验用鱼体长约5-8cm，选择行动活泼、体色光泽完整的健康鱼；实验容器采用塑料桶，盛水量以每尾鱼1-2L水为宜，水的pH值为6.7-8.5，水温为室温；水中的溶解氧不应低于

4mg/L，用放置3天以上的自来水；试验期间的光暗比为12∶12，温度23 ±1 ℃。

4、LD50计算方法：直线内插法

四、实验报告

1、实验目的

2、实验方法步骤

3、实验结果（观察结果并计算LD50）并分析试验结果

实验二不同类型水体中细菌总数的检测及水质量评价（4学时）

水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。因此，它是评价水质污染程度的重要指标之一。

本试验采用标准平皿法对水样中细菌作计数，这是测定水中好氧和兼性厌氧异养细菌密度的方法。由于细菌在水体中能以单独个体、成对、链状、成簇或成团的形式存在，此外没有单独的一种培养基或其一环境条件能满足—个水样中所有细菌的生理要求，所以由此法所得的菌落数实际上要低于被测水样中真正存在的活细菌的数目。细菌总数是指1mL水样在营养琼脂培养基中，37℃24h培养后所生长的菌落数。一般规定，1mL自来水的总菌数不得超过100个。

水污染的细菌学指标：

①饮用水卫生标准细菌总数<100个/mL 大肠菌群<3个/L

一、目的和内容

了解并掌握水中细菌总数的测定方法。

二、材料和器皿

(—)固体培养基：肉膏蛋白胨琼脂培养基（培养细菌）

牛肉膏3g；蛋白胨5g；氯化钠10g；琼脂15～20g； pH 7.0～7.2；水1000ml

硫代硫酸钠

(二)无菌采样瓶，灭菌移液管，灭菌培养皿，盛有4.5mL灭菌蒸馏水的试管，高压灭菌锅，废旧报纸，放大镜。