环境生物学实验 指导书
环境生物学实验指导-11环科
环境生物学实验指导专业：环境科学时间：二零零九年九月环境生物学实验指导一、课程简介环境生物学是环境科学专业开设的一门重要的专业必修课。
通过本课程的学习，了解生物与环境之间的相互作用及其关系，生物在环境监测、环境评价、环境修复中的作用以及环境污染物的生物降解与转化规律，生物技术在环境治理中的应用等有关基本知识。
系统地掌握环境生物学的基本理论、基本知识和基本技能。
二、课程实验目的和要求：1 、目的：通过实践操作，印证和巩固课堂教学中学到的环境生物学的理论知识，学会实地观察的技术，培养进行科学工作的能力，养成实事求是的工作作风和解决实际问题的能力。
2 、要求：要求学生能够正确使用实验室的基本仪器设备，掌握环境生物学实验的基本操作技术，并能够客观地对实验进行观察、描述、比较、分析和综合。
三、考试（考核）方式：以考核方式进行，要求学生独立完成每个实验并提交报告，并用百分制记分，然后求平均分= 总分/ 实验次数。
其实验成绩占课程总评成绩的30% 。
实验内容在课程考试中占30% 。
四：主要仪器：光学显微镜（含有关配件）50 台，超净工作台4台，高压蒸气灭菌锅2只，烘箱、恒温培养箱各3台，电炉10 只，酒精灯、载玻片、接种环（针）、培养皿、试管、移液管、锥形瓶等若干。
五、主要参考书目：[1] 孔繁翔，环境生物学，南京：南京大学出版社。
[2] 王家玲，环境微生物学实验，北京：高等教育出版社。
[3] 程树培，环境生物技术实验指南，南京：南京大学出版社。
实验一有毒物质对水生生物的影响或急性毒性实验（4学时）农药是一类特殊化学品。
农药引起的环境污染和对生物的影响日益突出。
在施用过程中,仅有1 %左右的农药作用于靶生物，其余的或残留于土壤,或通过间接途径进入水环境，从而影响土壤生物和水生生物。
水环境中的农药可通过食物链途径逐级浓缩，从而导致对水生态系统的危害，甚至可最终危害人类健康。
农药对水生生物的毒性是农药的生态风险评价和管理的重要参数。
环境生物学实验指导书
实验一一般光学显微镜的利用及其对微生物一样形态的观看一、实验目的1．了解一般光学显微镜的构造及其各部份的作用。
2．把握一般光学显微镜的正确利用和保护方式。
3．通太低倍镜、高倍镜观看藻类、酵母培育液和新鲜活性污泥中微生物的一样形态。
二、实验原理一般光学显微镜由机械部份和光学部份组成。
图1-1 双目生物显微镜1．机械部份：（1）镜筒：位于镜臂上端的空心圆筒，是光线的通道。
镜筒的上端可插入目镜，下面与转换器相连。
（2）转换器：位于镜筒下端，是一个能够旋转的圆盘。
有3~4个孔，用于安装不同放大倍数的物镜。
（3）载物台：载物台是放置标本的方块平台，中央有透光孔，载物台上面有玻片夹持器，侧面有移动手轮，可纵向和横向移动标本。
（4）调焦手轮：包括粗调手轮和微调手轮，可使载物台上下起落，调剂物镜和标本之间的距离。
2．光学部份：（1）目镜：放在镜筒上，配有10倍（10×）、16倍（16×）两种。
（2）物镜：装在转换器的孔上，有低倍镜（4、10）、高倍镜（40）和油镜（100），是N ）及所要求盖玻片显微镜中最要紧的部份。
各类镜头上都刻有放大倍数和数值孔径（A厚度等要紧参数。
物镜的性能由数值孔径决定，而且还依托于物镜的分辨率。
（3）聚光器：由聚光镜和孔径光阑组成。
聚光镜的作用是把光线聚集在标本上，增强照明度。
孔径光阑是用来调剂对照度的，使物镜和聚光器的数值孔径相符合。
当孔径光阑开启到物镜出瞳的70~80%时，就能够够取得足够对照度的良好图象。
若是开得太大，超过物镜的数值孔径，就会产生光斑；若是开得过小，那么分辨率下降，降低物像的清楚度。
（4）电光源：在显微镜的下部，提供观看标本时所用光源。
三、实验器材1．一般光学显微镜（双目生物显微镜）2．载玻片、盖玻片假设干3．玻璃棒、滴管4．滤纸、擦镜纸5．藻类、酵母培育液，新鲜活性污泥四、实验方式１．低倍镜的操作（１）第一把目镜放入镜筒上，将物镜（4、10、40、100）旋紧在转换器上。
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（3）向1、2、3、4、5号培养皿加入5ml的不同浓度醋酸 铅污染液（浸湿滤纸即可），6号培养皿加入等体积的蒸 馏水作为对照。作3次重复。
（4）在每只培养皿的滤纸上，均匀放置50粒水稻种子。
（5）将6只培养皿置于25℃、相对湿度75%、光照条件下 的恒温培养箱中培养；每天各实验组、对照组补充适量蒸 馏水，以保持滤纸的湿润。
（6）发芽势与发芽率的计算，分别与第3天和第7天测定 记录水稻种子发芽情况，将感染霉菌的种子要及时除去。
从1962年起,法国国立研究院的G·克雷曼博士进一 步对螺旋藻的成分、生态、培养方法、食用安全
性、保健功效进行了十余年的专题研究，并在 1973年于美国麻省理工学院召开的第二届国际微 生物蛋白质会议及1974年联合国粮农组织会议将 他的研究结果公开发表,从而受到全世界的关注。 螺旋藻被现代营养学家称之为“人类营养的微型 宝库”，被联合国粮食与农业组织（FAO）誉之 为“二十一世纪最理想和最完美的食品”
螺旋藻是生长在热带地区碱水湖中的一种原始微生物，属 于蓝藻门,颤藻科。它在那个星球上已生存了35亿多年，是 地球是最早出现的自养光合生物。1940年，法国药物学家 克莱（Creach）博士到非洲深险,来到中非乍得湖畔，发现 湖面上漂着一种绿色植物，当地土著佳尼姆人用最传统的 方式从湖面捞取它们，直截了当拌以辣椒及香料作酱食用， 或置于沙滩上晒成干品食用。这种绿色漂浮物确实是一种 螺旋形状的藻类--螺旋藻（Spirulina）。在地理位置上， 螺旋藻要紧分布在南北纬35度的亚洲、非洲和南北美洲的 碱性水体中，螺旋藻的品种很多，其中得到广泛重视和研 究的只有两种：钝顶螺旋藻（S.Platensis）、极大螺旋藻 （S.Maxim）。这两个种分别原产于中非的乍得湖和中美 洲的墨西哥，并已被国内外应用于工厂化生产。
环境微生物学实验指导
《环境微生物学及实验》实验指导书实验学时：32学时适用专业：环境科学专业第一部分实验目的《环境微生物学及实验》实验课是我院环境科学专业学生必修的一门重要的基础实验课，是学生进入我院实验室的第一门实验课。
《环境微生物学及实验》实验的目的是使学生掌握微生物学的基本实验方法和技术，正确的使用实验的仪器设备，在学生头脑中建立无菌概念和掌握无菌操作技能是最重要的内容，是学生进行后续课实验和研究的基础。
在目前的实验室条件和有限学时的情况下，得到微生物实验技术的基本操作和技能训炼，培养学生动手操作能力和创新能力。
通过微生物学实验课教学，加深理解和巩固课堂所学的知识，熟悉微生物学实验的基本操作技术，了解微生物实验的基础知识。
通过微生物学实验培养学生观察、思考、分析问题、解决问题的能力，养成实事求是、严肃认真的科学态度、创新精神、创新思维和创新能力。
我们在二十年微生物学实验教学经历的基础上，参考国内兄弟院校和国外有关教材，总结、综和各方面的经验，编写了本实验指导书，力求在各个实验里安排尽量多的微生物实验基本操作和微生物学知识点。
本实验指导书书主要内容包括：微生物个体和菌落形态观察、染色方法、培养基制备和灭菌、无菌操作、微生物检测和分离、生理生化反应、影响微生物生长的因素和污染物微生物降解实验，水中微生物分布调查等内容。
同时也注意和环境微生物学的联系与区别。
整个实验课中贯穿了显微镜使用——三种灭菌方法——无菌操作——环境工程微生物菌种分离筛选鉴定、选育——污染物分解和调查这一主线。
微生物学需掌握的基本操作在实验中得到训练，同时加深了学生对所学微生物学基本概念的理解。
实验设计贴近生活，可以大大提高同学们学习微生物学的兴趣。
实验内容与目录如下：实验一光学显微镜的使用及示教片的观察实验二微生物的染色技术及细菌的观察实验三原生动物、微型后生动物、藻类和活性污泥的观察实验四培养基的制备和灭菌实验五细菌淀粉酶和过氧化氢酶定性实验及其生化特征观察实验六纯种微生物的分离、转种和培养实验七有机污染物质的生物降解实验*实验八污染土壤和水体中细菌总数的测定**注：实验六、实验七、实验八选做其一。
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2．认真及时做好实验记录,对于当时不能得到结果而需要连续观察的 实验,则需记下每次观察的现象和结果,以便分析。
3．实验室内应保持整洁,勿高声谈话和随便走动,保持室内安静。
4．实验时小心仔细,全部操作应严格按操作规程进行,万一遇有盛菌试 管或瓶不慎打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时,应立即 报告指导教师,及时处理,切勿隐瞒。
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3． 放大率和有效放大率 由于经过物镜和目镜的两次放大，所以显微镜总的放大率应该是物镜放大率和目
镜放大率的乘积。显然，和放大镜相比，显微镜可以具有高得多的放大率，并且通过 调换不同放大率的物镜和目镜，能够方便地改变显微镜的放大率。放大率也是显微镜 的重要参数，但也不能盲目相信放大率越高越好。显微镜放大倍率的极限即有效放大 倍率。
5．实验过程中,切勿使酒精、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。如遇 火险,应先关掉火源,再用湿布或沙土掩盖灭火。必要时用灭火机。
6．使用显微镜或其他贵重仪器时,要求细心操作,特别爱护。对消耗材 料和药品等要力求节约,用毕后仍放回原处。
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7．每次实验完毕后,必须把所用仪器抹净放妥,将实验室收拾整齐,擦 净桌面,如有菌液污染桌面或其他地方时,可用 3%来苏尔液或 5%石炭 酸液覆盖其上半小时后擦去,如系芽孢杆菌,应适当延长消毒时间。凡 带菌之工具(如吸管、玻璃刮棒等)在洗涤前须浸泡在 3%来苏尔液中进 行消毒。 8．每次实验需进行培养的材料,应标明自己的组别及处理方法,放于教 师指定的地点进行培养。实验室中的菌种和物品等,未经教师许可,不 得携出室外。 9．每次实验的结果,应以实事求是的科学态度填入报告表格中,力求简 明准确,并连同思考题及时汇交教师批阅。 10．离实验室前应将手洗净,注意关闭门窗、灯、火、煤气等。
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试验一培养基的配制及灭菌【目的要求】1．了解培养基的概念、种类及用途2．了解培养基的配制原理及其常规配制程序3．学习和掌握细菌、放线菌、霉菌、酵母菌常用培养基的配制方法。
【基本原理】培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质，主要用于微生物的分离、培养、鉴定、菌种保藏等方面。
自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基种类很多。
不同培养基一般都应含有微生物生长繁殖所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等营养成分。
此外，为了满足微生物生长繁殖的要求，还必须控制培养基的pH值。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种用于培养细菌的培养基，属于半合成培养基。
高氏一号培养基是一种用于培养放线菌的合成培养基。
马丁氏培养基和豆芽汁葡萄糖培养基分别用于霉菌和酵母菌的分离培养。
【材料与用品】1．材料与试剂牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、可溶性淀粉、琼脂、黄豆芽、NaCl、KNO3、K2HPO4、MgSO4、FeSO4、KH2PO4、MgSO4•7H2O、NaOH溶液（1mol/L）。
【仪器与用品】天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、pH试纸、棉花、纱布、牛皮纸、线绳、报纸等。
一、肉膏蛋白胨培养基的配制1．培养基成分牛肉膏0. 3g蛋白陈1gNaCl 0.5g琼脂 1.5g水100mlpH 7.2~7.4 2．配制方法（1）称量及溶化：分别称取蛋白胨和NaCl的所需量，置于唐瓷缸中，加入所需水量的2／3左右的蒸馏水；用玻璃棒挑取牛肉膏置于另一小烧杯中，进行称量。
然后加入少量蒸馏水于小烧杯中，加热融化，倒入上述唐瓷缸中。
将唐瓷缸加热，用玻璃棒搅拌，使药品全部溶化。
（2）加琼脂：加入所需量的琼脂，加热融化。
（3）定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。
（4）调pH：待溶液冷至室温时，用1mol/l NaOH溶液调pH至7.2~7.4。
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实验报告要包括以下内容： 1．实验名称、学生姓名、学号、班号和实验日期； 2．实验目的和要求； 3．实验仪器、设备与材料； 4．实验原理；
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5．实验步骤； 6．实验原始记录； 7．实验数据计算结果； 8．实验结果分析，讨论实验指导书中提出的思考题，写出心得与体会。
二、实验内容
掌握细菌的革兰氏染色方法；掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养，以观 察菌种的个体，学会生物图的绘制。
三、实验仪器、设备及材料
显微镜、载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、石碳酸复红染液、草酸铵结晶紫染液、革氏 碘液、95%乙醇、蕃红染液、接种钩、酒精灯、已培养好的菌株。
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实验三 微生物的接种技术
一、实验目的
掌握从环境中分离培养微生物和对微生物进行扩大培养的方法，从而获得若干种微生物的纯培养 技能。
二、实验内容
以微生物的斜面接种技术为例，掌握微生物的各种接种技术中需要注意的问题。
三、实验仪器、设备及材料
无菌斜面培养基、已培养好的待接种微生物、酒精灯、接种钩、无菌操作台。
七、实验注意事项
必须严格掌握乙醇脱色程度，如果脱色过度，阳性菌被误染为阴性菌；若脱色不够时，阴性菌被误 染为阳性菌。
八、思考题
1、光学显微镜的操作方法？ 2、微生物的染色原理是什么？ 3、绘制细菌的形态图，并说明革兰氏染色的结果。 4、通过革兰氏染色，你认为它在微生物学中有何实践意义？
主要参考文献： 周群英 高廷耀编著，环境工程微生物学（第二版）中第三部分“环境工程微生物实验”，高等教育出版 社，北京，2000
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环境生物学实验
环境生物学实验指导目录1. 种子发芽毒性实验 (3)2 生物监测实验（蚕豆根尖微核法） (4)3．污染物对植物气孔影响的比较研究 (5)实验一种子发芽毒性实验一、目的1.掌握以小麦为代表，用发芽势和发芽率进行的毒性实验的具体方法以及毒物对小麦发芽势和发芽率的影响。
2.了解通过小麦种子发芽毒性实验，监测评价污染物的毒性。
二、原理种子在适宜的条件（水分、温度和氧气等）下，吸水萌发，发生一系列的生理、生化反应，在各种酶的催化作用下，污染物抑制了一些酶的活性，从而影响了发芽势和发芽率。
三、材料材料：发育正常的小麦种子药品：氯化汞仪器：培养皿、移液管、滤纸等四、步骤1.制备发芽床：在培养皿内放入滤纸做发芽床。
发芽床上加入10ml氯化汞试液。
然后将５０粒小麦种子整齐排列在发芽床上。
2.发芽势和发芽率的计算：分别于第３天和第７天记录小麦种子发芽情况，然后计算发芽势和发芽率。
五、结果与讨论1.结果2.思考题影响小麦发芽的主要因素是什么？实验二生物监测实验（蚕豆根尖微核法）一、目的了解并掌握蚕豆根尖微核法监测环境污染的方法二、原理在理化因素的作用下，细胞染色体DNA受到损伤，引起断裂等现象，形成微核。
微核率可反映外界环境因素损伤染色体的强度。
三、材料材料：蚕豆根尖药品：氯化汞仪器：显微镜、试管、计数器四、步骤1.浸泡的蚕豆种子放置在磁盘中培养后，取出，置在氯化汞试液中。
2.弃去实验液，切取根尖固定。
3.染色：在小玻璃瓶中染色1h4.制片：用铅笔轻轻敲打以便使细胞散开。
5.镜检：每片至少镜检20个视野，观察微核。
五、结果与讨论1.结果2.思考题产生微核的实质？实验三污染物对植物气孔影响的比较研究一、目的1.用显微镜观察，比较不同生态类型植物的气孔数目。
2.观察污染物对气孔形态变化的影响。
二、原理在不同的环境条件下，生长的植物类型是不同的，气孔数目不同，且随环境因子的变化而改变三、材料材料：小麦、大叶黄杨仪器：显微镜、计数器等四、步骤1.气孔数目测定用胶分别涂在叶片的上下表皮，然后显微镜观察，计数。
环境工程微生物实验指导书-图文
环境工程微生物实验指导书-图文实验一光学显微镜的操作及细菌形态观察1.1实验目的(1)掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养。
(2)观察几种典型细菌的形态与构造，学会绘制微生物图。
1.2实验器材显微镜、二甲苯、香柏油、载玻片、盖玻片、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、球衣菌、假单胞菌、固氮菌标本片。
1.3显微镜的结构及其操作方法1.3.1普通光学显微镜(LightMicrocope)1.3.1.1光学显微镜的结构和各部件作用观察、检验微生物通常用光学生物显微镜（见图1-1），显微镜分机械装置和光学系统两部分。
一机械装置(1)镜筒：镜筒长度一般是160cm。
它的上端装目镜，下端装物镜回转板。
回转板上一般有三个物镜。
(2)转换器：位于镜筒的下方，其上有3个孔，有的有4个孔或5个孔。
不同规格的物镜分别安装在各孔上。
(3)载物台：载物台是放置标本的平台，中央有一圆孔，使下面的光线可以通过。
两旁有弹簧夹，用以固定标本或载破片。
有的载物台上装有自动推物器。
(4)调节器：镜筒旁有两个螺旋，大的叫粗调节器，小的叫细调节器，用以升降镜筒，调节物镜与被观察物体之间的距离。
二光学光学系统（1）目镜：一般使用的显微镜具有2—3个目镜，其上刻有“5某”、“10某”、“15某”(或“16某”)等数字及符号，意即放大5倍、10倍、15倍(16倍)。
这三种透镜的焦距分别为50mm、25nn、16mm，线视场分别为20mm、14mm、10mm。
（2）物镜：物镜装在回转板上，可分为低倍物镜、高倍物镜和油镜三种。
相应的放大倍数是10某（5某）、40某（50某）、100某（90某），相应的工作距离是7.63mm、0.5mm、0.198mm，物镜上常标注数值孔径（N.A）。
使用低倍镜和高倍镜时，一般做活体观察，不进行染色。
在观察原生动物时，低倍镜主要用来观察全部原生动物的种类和观察它的活动状态，而高倍镜则可以看清楚微生物的结构特征。
《环境生物学实验》实验课程教学大纲课程概况必修课2.实验课程内容
《环境生物学实验》实验课程教学大纲课程概况必修课2．实验课程内容《环境生物学实验》实验课程教学大纲 1.课程概况课程代码 C07043 课程性质必修课课程名称环境生物学实验学时/ / 学分 30/1 英文名称 Environmental Biology E_periment考核方式考查先修课程环境生物学、环境生态学大纲执笔人洪桂云适用专业环境生态工程专业大纲审核人唐玉朝实验课程指导书自编课程简介：《环境生物学实验》是环境生态工程专业的必修课。
为了配合《环境生物学》课程的教学而设立的一门独立的环境生物学基础性实验。
本课程是培养学生基本技能、训练实践技能的一个重要教学环节，通过实验使学生对环境生态工程中的生物学原理有一个深入的认识，从而更深刻地理解和掌握专业基本理论和基本知识，并且为日后深入研究污水监测、修复技术提供一种实践技能。
课程目标(Course Objectives, CO) 对应的专业培养目标 (Learning Objectives, LO) 或实践能力标准 (Practical Abilbiy, PA) (CO1) 掌握环境生物学的基本知识 (PA1) 培养独立操作能力 (CO2) 掌握生物培养和生物分析^p 方法 (PA2) 培养思考研究能力 (CO3) 独立设计简单的实验 (PA3) 培养独立设计实验能力教学方式( Pedagogical Methods,PM) □ √PM1.讲授法教学10 学时33 □PM2.研讨式学习学时□PM3.案例教学学时□PM4.网络教学学时□PM5.角色扮演教学学时□ √PM6.体验学习 18 学时60 □PM7.服务学习学时□ √PM8.自主学习 2 学时 7 考核方式( Evaluation Methods,EM) □EM1.课堂测试□EM 2.期中考试□EM3.期末考试□EM4.作业撰写□ √EM5.实验分析^p 报告50 □EM6.期末报告□EM7.课堂演讲□EM8.论文撰述□ √EM9.出勤率 20□EM10.口试□EM11.设计报告□ √ EM12.实验操作 30 2．．实验课程内容课次实验项目名称实验教学主要内容学时课程目标教学方式评估方式实验类别 1 实验一.显微镜的使用及微生物形态观察了解普通光学显微镜的构造和各部分性能，掌握正确的使用方法和维护显微镜的注意事项。
《环境工程微生物》实验指导书
《环境工程微生物》实验指导书《环境工程微生物》实验指导书一、实验目的本实验指导书旨在让学生了解和掌握环境工程微生物实验的基本原理、实验方法、实验步骤和实验技巧，培养学生对环境工程微生物的观察、分析和解决问题的能力，提高学生的实践能力和综合素质。
二、实验原理环境工程微生物实验是环境工程学科中重要的实验课程之一，主要涉及微生物的生长、代谢、分离、鉴定等实验技术。
本实验指导书将涵盖以下内容：1.微生物的生长和繁殖：通过观察微生物的生长过程，掌握微生物的生长条件和繁殖规律。
2.微生物的分离与纯化：学习使用各种方法从环境中分离微生物，并进行纯化培养。
3.微生物的鉴定：学习使用形态学、生理学等方法对微生物进行鉴定。
4.微生物的代谢：通过测定微生物的代谢产物，了解微生物的代谢过程和代谢途径。
5.微生物的生长曲线：通过绘制生长曲线，掌握微生物的生长规律和生长动力学。
三、实验步骤与操作方法1.实验准备：进行实验前，需要准备好各种实验器材、试剂和培养基等。
2.样品采集：选择具有代表性的环境样品，如水样、土壤样、垃圾样等，进行采集。
3.样品处理：将采集的样品进行处理，以备后续实验使用。
4.微生物分离：采用适当的分离方法，将微生物从样品中分离出来。
5.微生物培养：将分离得到的微生物进行培养，观察其生长情况。
6.微生物鉴定：根据微生物的形态学和生理学特征，对分离得到的微生物进行鉴定。
7.数据分析：整理实验数据，进行统计分析，得出实验结论。
8.实验总结：对实验结果进行总结，分析实验中存在的问题和不足之处，提出改进措施。
四、注意事项1.实验过程中要保持实验室的清洁卫生，避免污染和交叉感染。
2.使用试剂和培养基时要严格按照规定进行配制和使用，确保实验结果的准确性和可靠性。
3.在进行实验操作时要注意安全问题，避免发生意外事故。
例如，在处理危险性化学品时要佩戴个人防护用品；在使用高压灭菌锅时要遵守操作规程，避免发生爆炸等事故。
4.实验结束后要及时清理实验场地和器材，保证实验室的整洁和卫生。
环境工程微生物实验指导书
环境工程微生物实验指导书《环境工程微生物》教研组编环境与资源学院环境工程实验教学中心二 00 四年三月实验一细菌革兰氏染色法一、目的要求1. 学习并初步掌握革兰氏染色技术；2. 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
二、基本原理革兰氏染色法是 1884年由丹麦病理学家 C.Gram创立的。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G ）和革兰氏阴性菌（G ）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。
该染色法所以能将细菌分为 G 菌和 G - 菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
G -菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。
G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。
革兰氏染色反应是细菌重要的鉴别特征，为保证染色结果的正确性，采用规范的染色方法是十分必要的。
本实验将介绍被普遍采用的Hucker 氏改良的革兰氏辩色法。
三、实验材料1．菌种：培养12-16h的枯草杆菌（Bacillus subtilis），培养 24小时的大肠杆菌（Escherichia coli）。
2．染色液和试剂：结晶紫染液、卢哥氏碘液、95％乙醇、石炭酸复红液、番红染液等。
3．其他器材：显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、接种环、载玻片、吸水纸、试管、小滴管、酒精灯、废液缸、洗瓶。
四、实验方法与步骤（一）制片取菌液按常规技术进行涂菌、干燥、固定。
（二）染色1．初染：在制片上滴加适量（以盖满细菌涂面）结晶紫染液，染 l min后，用水洗去染料。
2．媒染：滴加卢哥氏碘液 l min 后,水洗。
3．脱色：将玻片倾斜，在白色背景衬托下，用滴管滴加95％乙醇脱色，摇动玻片直至流出的乙醇无紫色时（根据涂片之厚薄需时 30s-60s），立即水洗。
环境微生物实验指导书(2012学年)-叶劲松
《环境微生物学》实验指导书叶劲松编合肥学院生物与环境工程系2010年8月目录实验室规则 (3)实验一空玻璃器皿的洗涤、包装和灭菌，无菌水的制备 (5)实验二培养基的制备和灭菌 (10)实验三微生物计数、分离培养 (13)实验四光学显微镜使用、微生物形态观察和染色技术 (21)实验五环境表面卫生学指标的测定和特定功能微生物的筛选 (25)实验室规则1)实验室是办学的基本条件之一，是师生进行科学实验、开展教研科技活动，培养实验能力的重要场所。
进入实验室要自觉遵守纪律不得喧哗吵闹，保持肃静，有秩序地入座。
2)实验前必须认真预习，熟悉本次实验的目的、原理、操作步骤，懂得每一操作步骤的意义和了解所用仪器的使用方法，否则不能开始实验。
3)实验过程中要听从教师的指导，严肃认真地按操作规程进行实验，并把实验结果和数据及时、如实记录在实验记录本上，文字要简练、准确。
完成实验后经教师检查同意，方可离开实验室。
4)实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐。
公用试剂用完后，应立即盖严放回原处。
勿使试剂、药品（尤其是NaOH）洒落在天平、实验台面和地上。
毛刷用后必须立即挂好，各种器皿不得丢弃在水池内。
实验完毕，仪器洗净放好，将实验台面抹拭干净，才能离开实验室。
5)配制试剂和用无离子水要注意节省，按实验实际使用量配制，多余的重要试剂和各种有机试剂要按教师要求进行回收，不得丢弃。
6)配制的试剂和实验过程中的样品，尤其是保存在冰箱和冷室中的样品，必须贴上标签、写上品名、浓度、姓名和日期等，放在冰箱中的易挥发溶液和酸性溶液，必须严密封口。
7)配制和使用洗液必须极为小心，强酸强碱必须倒入废液缶或冲稀后排放。
电泳后的凝胶和各种废物不得倒入水池，只能倒入废物桶。
8)使用贵重精密仪器应严格遵守操作规程。
使用分光光度计时不得将溶液洒在仪器内外和地面上。
仪器发生故障应立即报告教师，未经许可不得自己随意检修。
9)实验室内严禁吸烟、饮水和进食，严禁用嘴吸移液管和虹吸管。
环境生物学实验教案.doc
实验一污染物对生物在生物化学和分子水平上的影响——空气中SO2对植物叶片叶绿素含量及叶绿素a、b含量比例的影响[实验目的]（1）掌握植物叶绿素含量的测定方法（2）了解SO2对植物叶绿素含量的影响[实验原理]（1）用丙酮提取叶绿素（2）叶绿素a、b的最大吸收峰分别位于663nm和645nm，根据Lambert-Beer定律，可得：C a（mg/L）= 12.7D663 － 2.69D645C b（mg/L）= 22.9D645 － 4.68D663式中：C a、C a为叶绿素a、b的浓度。
将C a与C b相加即得叶绿素总量C T：C T（mg/L）= C a + C b = 20.21A645 + 8.02A663按下列公式计算叶绿素在叶片中的含量，并计算叶绿素a、b的比例。
mg/g⨯⨯叶绿素浓度提取液最终体积稀释倍数叶绿素含量（）=叶片鲜重克数[实验器材]（1）仪器设备：分光光度计；电子天平；研钵；剪刀；50mL棕色容量瓶；小漏斗；玻璃棒；定量滤纸；吸水纸；滴管；2mL移液管；50mL烧杯。
（2）试剂：丙酮，80%丙酮，石英砂，碳酸钙粉。
（3）实验材料：经SO2熏气和未经熏气的植物样品[实验步骤]（1）分别剪取两种处理植物的叶样，洗净，擦干，除去中脉，称取0.5g，剪碎。
（2）将剪碎的叶样置于研钵中，加少许石英砂和碳酸钙，再加少许丙酮，磨成匀浆。
再加15 mL左右丙酮，搅拌，静置3min。
（3）将提取液过滤至50mL棕色容量瓶中，多次洗涤研钵、研棒。
（4）用滴管吸取丙酮，将滤纸上的叶绿素全部洗入容量瓶。
用丙酮定容至50mL，摇匀。
（5）分别取2mL叶绿素提取液和2mL80%丙酮于50mL烧杯，混匀，成比色液。
（6）比色液用1cm的比色杯，以80%丙酮为空白对照，测定波长在645nm 和663nm处吸光度。
[实验结果]根据实验数据，比较污染植物和对照植物的叶绿素总量及叶绿素a、b比值有何差异，并加以讨论。
基础科学环境微生物实验指导书叶劲松
《环境微生物学》实验指导书叶劲松编合肥学院生物与环境工程系2010年8月目录实验室规则1实验一空玻璃器皿的洗涤、包装和灭菌，无菌水的制备2实验二培养基的制备和灭菌6实验三微生物计数、分离培养9实验四光学显微镜使用、微生物形态观察和染色技术16实验五环境表面卫生学指标的测定和特定功能微生物的筛选20实验室规则1)实验室是办学的基本条件之一，是师生进行科学实验、开展教研科技活动，培养实验能力的重要场所。
进入实验室要自觉遵守纪律不得喧哗吵闹，保持肃静，有秩序地入座。
2)实验前必须认真预习，熟悉本次实验的目的、原理、操作步骤，懂得每一操作步骤的意义和了解所用仪器的使用方法，否则不能开始实验。
3)实验过程中要听从教师的指导，严肃认真地按操作规程进行实验，并把实验结果和数据及时、如实记录在实验记录本上，文字要简练、准确。
完成实验后经教师检查同意，方可离开实验室。
4)实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐。
公用试剂用完后，应立即盖严放回原处。
勿使试剂、药品（尤其是NaOH）洒落在天平、实验台面和地上。
毛刷用后必须立即挂好，各种器皿不得丢弃在水池内。
实验完毕，仪器洗净放好，将实验台面抹拭干净，才能离开实验室。
5)配制试剂和用无离子水要注意节省，按实验实际使用量配制，多余的重要试剂和各种有机试剂要按教师要求进行回收，不得丢弃。
6)配制的试剂和实验过程中的样品，尤其是保存在冰箱和冷室中的样品，必须贴上标签、写上品名、浓度、姓名和日期等，放在冰箱中的易挥发溶液和酸性溶液，必须严密封口。
7)配制和使用洗液必须极为小心，强酸强碱必须倒入废液缶或冲稀后排放。
电泳后的凝胶和各种废物不得倒入水池，只能倒入废物桶。
8)使用贵重精密仪器应严格遵守操作规程。
使用分光光度计时不得将溶液洒在仪器内外和地面上。
仪器发生故障应立即报告教师，未经许可不得自己随意检修。
9)实验室内严禁吸烟、饮水和进食，严禁用嘴吸移液管和虹吸管。
易燃液体不得接近明火和电炉，凡产生烟雾、有害气体和不良气味的实验，均应在通风条件下进行。
环境工程微生物学实验指导
实验一 光学显微镜的操作及细菌、放线菌和蓝细菌个体形态的观察Ⅰ、显微镜的使用一、实验原理微生物学研究用的显微镜通常有低倍物镜(16mm ，10⨯)高倍物镜(4mm ，40-45⨯)和油镜(1.8mm ，95-100⨯)三种。
油镜常标有黑圈或红圈，它是三者中放大倍数最大的。
使用油镜时，油镜与其他物镜的不同是载玻片与接物镜之间，不是隔一层空气，而是隔一层油质，称为油浸系。
这种油常选用香柏油，因香柏油的折射率n ＝1.52，与玻璃基本相同。
当光线通过载玻片后， 可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射。
如果玻片与物镜之间的介质为空气，则称为干燥系；当光线通过玻片后，受到折射发生散射现象，进入物镜的光线显然减少，这样视野的照明度就减低了(图Ⅰ-1)。
利用油镜不但能增加照明度；更主要的是能增加数值口径。
因为显微镜的放大效能由其数值孔径决定的。
所谓数值孔径，即光线投射到物镜上的最大角度(称镜口角)的一半正弦，乘上玻片与物镜间介质折射率所得的乘积，可用下列公式表示：2sin α⋅=⋅n A N式中 数值孔径=⋅A N介质折射率=n最大入射角，即镜口角=α数值孔径的大小又是衡量一台显微镜分辨力强弱的依据；分辨力是指显微镜能辨别物体两点间最小距离的能力。
A N ⋅=2λ能辨别两点间最小距离式中 λ=光波波长由上述可知若n 值和α角越大则N ·A 越大或光波波长越短，则显微镜的分辨力越大(图Ⅰ-2)。
一些物质的折射率：水 1.33 玻璃 1.52 空气 1.0 香柏油 1.515。
二、实验器材1、仪器显微镜；2、材料巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)标本片，香柏油，二甲苯，擦镜纸。
三、操作步骤1、取镜显微镜是光学精密仪器，使用时应特别小心。
从镜箱中取出时，一手握镜臂，一手托镜座，放在实验台上。
在使用时要特别小心。
使用前首先要熟悉显微镜的结构和性能，检查各部零件是否完全合用，镜身有无尘土，镜头是否清洁。
环境生物学实验
鱼类急性毒理实验
一、实验目的
通过本实验，熟悉和掌握鱼类急性毒性 通过本实验， 试验的设计、条件、操作步骤， 试验的设计、条件、操作步骤，以及试验结 果的计算、分析和报告等全过程。 果的计算、分析和报告等全过程
4.挑选籽粒饱满、大小一致的小白菜种子， 4.挑选籽粒饱满、大小一致的小白菜种子，在每只培 挑选籽粒饱满 养皿的滤纸上，均匀放置50粒小白菜种子。 50粒小白菜种子 养皿的滤纸上，均匀放置50粒小白菜种子。 5.将 只培养皿置于25℃、相对湿度75% 75%、 5.将5只培养皿置于25℃、相对湿度75%、光照条件下 25℃ 的恒温培养箱中培养；每天各实验组、 的恒温培养箱中培养；每天各实验组、对照组补充 5ml蒸馏水 以保持滤纸的湿润。 蒸馏水， 5ml蒸馏水，以保持滤纸的湿润。 6.发芽势与发芽率的计算，在第3天（对照组发芽良好 6.发芽势与发芽率的计算，在第3 发芽势与发芽率的计算 测定记录小白菜种子发芽情况。 时）测定记录小白菜种子发芽情况。
五、注意事项： 注意事项：
1.种子发芽后应具备的特征： 1.种子发芽后应具备的特征：幼芽长度不短 种子发芽后应具备的特征 于种子长度的1/2 为具有发芽能力的种子， 1/2， 于种子长度的1/2，为具有发芽能力的种子， 以此标准进行观察，计数。 以此标准进行观察，计数。 2.发芽势与发芽率的计算，于第3天测定记录 2.发芽势与发芽率的计算，于第3 发芽势与发芽率的计算 小白菜种子发芽的情况， 小白菜种子发芽的情况，将感染霉菌的种 子要及时除去。 子要及时除去。
二、仪器以及材料
电导仪，分光光度仪，冰箱， 电导仪，分光光度仪，冰箱，恒温培 养箱，移液管，试管，烧杯，电热板， 养箱，移液管，试管，烧杯，电热板，叶 片，蒽酮试剂，葡萄糖 蒽酮试剂，
环境微生物实验指导内容生命科学学院本科基础实验教学中心
环境微生物实验指导内容生命科学学院本科基础实验教学中心实验一显微镜的基本构造、使用与保养一、目的要求1.熟悉普通光学显微镜的构造及各部分的功能。
2.学习并掌握油镜的原理与使用方法。
二、显微镜的基本构造显微镜是由机械装置与光学系统两大部分构成。
1．机械装置镜座(base)与镜臂(arm)镜座位于显微镜底部,呈马蹄形，它支持全镜。
镜臂有固定式与活动式两种，活动式的镜臂可改变角度。
镜臂支持镜筒。
镜筒(body tube)是由金属制成的圆筒，上接目镜，下接转换器。
镜筒有单筒与双筒两种，单筒又可分为直立式与后倾式两种。
而双筒则都是倾斜式的，倾斜式镜筒倾斜45°。
双筒中的一个目镜有屈光度调节装置，以备在两眼视力不一致的情况下调节使用。
转换器(nosepiece)为两个金属碟所合成的一个转盘，其上装3—4个物镜,可使每个物镜通过镜筒与目镜构成一个放大系统。
载物台(stage)又称镜台，为方形或者圆形的盘，用以载放被检物体，中心有一个通光孔。
在载物台上有的装有两个金属压夹称标本夹，用以固定标本；有的装有标本推动器，将标本固定后，能向前后左右推动。
有的推动器上还有刻度，能确定标本的位置，便于找到变换的视野。
调焦装置是调节物镜与标本间距离的机件，有粗动螺旋（coarse adjustment）即粗调节器与微动螺旋（fine adjustment）即细调节器，利用它们使镜筒或者镜台上下移动，当物体在物镜与目镜焦点上时，则得到清晰的图像。
2．光学系统物镜（objective）物镜安装在镜筒下端的转换器上，因接近被观察的物体，故又称接物镜。
其作用是将物体作第一次放大，是决定成像质量与分辨能力的重要部件。
物镜上通常标有数值孔径、放大倍数、镜筒长度、焦距等要紧参数。
如：NA 0.30；10×；160/0.17；16㎜。
其中“NA 0.30”表示数值孔径（numerical aperture,简写为NA），“10×”表示放大倍数，“160/0.17”分别表示镜筒长度与所需盖玻片厚度（㎜），“16㎜”表示焦距。
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实验1 种群生态环境调查与空间分布格局调查分析（3学时）一、实验目的和要求：通过对植物立地条件观察，进一步了解植物。
植物群落与环境条件的相互关系；通过对种群内物种分布方差计算确定物种的空间分布类型，掌握种群空间分布判断方法。
实验内容、原理和步骤：（一）种群生态环境调查1.光、水、土、热等环境因子的生态效应观察（l）生态序列法选择其一种或数种环境因子逐渐变化的地段作观察。
l）诃流湖泊沿岸地带：这里是由岸边到陆上高地地下水位逐渐降低，导致上壤及其理化性质渐变的地带。
注意观察植物由沉水植物、浮水植物、挺水植物、湿生植物、中生植物逐渐变化的生态类型。
2）海滨或内陆封闭湖盆地区；注意观察土壤含盐量的逐渐变化和地下水位的影响。
盐生植物、湿生植物、中生植物等生态类型的相应变化。
3）各种沙丘与丘间洼地地带：沙丘迎风坡和背风坡、中间平坦低洼地带注意观察土地。
水热条件、化学性质的显著差异，导致植物种类和生态习性的差异。
注意观察比较各生适应应类型的特征差异。
4）较高的山地：自下而上水热条件、土层厚度、土壤质地、土壤水分。
粗骨性程度生境条件的明显变化，导致植物群落、植物优势种的相应变化、注镜观察比较其特征差异。
5）不同坡向的坡地（阴坡与阳坡）：其光照和水热条件的差异会引起其他生态条件的变化。
可选择一个坡地或山丘。
绕行一周，注意观察其生境条件和植物种类或生长状态随之相应变化的状况。
6）在森林或防护林分布茂密的地方；用野外风速表、照度计测定林地内外各处的风速、光照强度的变化，同时进行各处植物种类更替情况和生长状况变化的观察比较.（2）样线法沿生态序列中环境变化显著的方向拉开30－50m 的皮尺或测绳（样线），详细记录绳尺所通过植物的名称及植株生长的高度；以及生境的特点。
样线长度视环境的变化、种类、密度等具体情况而定，但不宜过长，以能表现出生态学到更替即可。
（3）频度法1）选择观察地点和主要环境因子（土壤pH值、盐度、水分、光照等）。
2）选定若干待测的灌木。
草本植物，尽量熟识这些植物的种类，或剪取标本，回室内鉴定。
3）测量小样方．大型灌木、草本植物可取1平方米样方。
小型草本植物可取1/10的样方。
沿环境梯度变化方向。
每隔一定的距离（10m 或30m 。
视生境复杂情况而定）设置10－20个样方或样圆，参照表7.8格式，分别登记所遇到的待测植物。
计算这些植物出现的频度。
某种植物出现的样方占该测点样方总数的百分数就是该植物的出现频度。
各类型植物出现频度在环境因子中的变化。
可绘制曲线表示图7.7），横坐标为生境变化（以距离为基础土壤pH值的变化）．纵坐标为植物出现的频度。
（五）作业与思考（1）以生长在水边的乔木、水杉、落羽杉等种群为例，说明它们与环境条件的关系以及适应特征.（2）简述某一环境因子（土壤PH 值、盐度、水分或光照等）的变化。
（二） 种群空间分布格局调查与判断1． 室外调查：准备3－5个学生一组，选择合适的样地，设计好野外调查记录表，并且带齐调查物品。
2． 确定样地面积20m ×20m 或者10m ×10m 样地。
3． 划分小样方4m ×4m 或者5m ×5m 。
4． 计数并且统计到表格中。
5． 数据处理 原理：均匀分布：S 2／m=0(S 2样方个体数的方差，m 为样方个体的平均数 )—原因：种群内个体间的竞争。
随机分布：S 2／m=1--原因：资源分布均匀，种群内个体间没有彼此吸引或排斥。
聚集分布：S 2／m>1--原因：资源分布不均匀；种子植物以母株为扩散中心；动物的社会行为使其结群。
样方中个体平均数与方差的计算方法：为样本总数个体样方的出现频率；为含；为样方中的某种个体数n x f x n nfx fx snfx m ms1/)()(/2222--==∑∑∑生物个体可能呈随机、均匀和聚集分布等格局；在大尺度上，种群的个体则是聚积分布的。
6．得出种群空间分布格局类型。
三、仪器、设备和材料皮尺，铅笔，野外记录表格，计算器 附表一： 种群空间格局样方表 样方号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 个体数 样方号 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 个体数实验2：生物群落结构和物种多样性分析（3学时）一、实验目的：巩固已经学习的植物类别，掌握群落物种多样性指数的测定方法。
二、实验原理：在样方调查的基础上，利用Simpson多样性指数、Shannon--Wiener多样性指数测定群落的物种多样性指数。
根据统计表统计各群落动物的组成类群数和个体数，再根据Shannon--Wiener指数D sw （香农多样性）指数公式：均匀性指数和优势性指数等公式进行计算。
或中H为多样性指数,N为样方的总体个数，S为种数，n i为第i个种的个体数）三、实验内容、方法和步骤：1．根据群落的基本特征，确定调查时样方面积的大小，一般对于草本植物采用1×1m2的样方，灌木采用2×2m2的样方，乔木采用10×10 m2或20×20 m2的样方。
2．对群落中植物的株数进行统计，并记录在表格中。
3．利用两个多样性指数的计算公式，测定群落的物种多样性指数。
4．比较不同群落生物多样性指数大小并且分析原因。
四、结论：1．调查地区的自然概况对生物群落组成与数量影响、不同生态类型土壤动物群落组成、数量、多样性指数、优势性指数、均匀性指数等比较分析。
2．不同生态类型生物群落各项指数与生态环境的相关分析通过对不同群落物种多样性指数的比较，分析造成物种多样性差异的原因、结论。
附表1：物种多样性调查表：物种名称群落1 群落2 群落3 群落41 马尾松2 4 22 樟树 2 43 杨树4 2 2 14 洋玉兰 1 4 1 3群落个体数总和 群落种类数总和附表2：群落指数值计算 物种名称 群落1 1 P1 ln P1 P1 ×ln P1 H 1=2 P2 ln P2 P2 ×ln P23 P3 ln P3 P3 ×ln P3 4P4 ln P4 P4 ×ln P4 5P5 ln P5P5 ×ln P5群落个体数总和 N 群落种类数总和 S 多样性指数H 均匀性指数E 优势度指数C附表3：群落多样性各指数值比较：群落样地 0102030405060708多样性(H) 均匀性(E) 优势性(C)结论：不同群落H 和E 大小变化一致，与C 相反变化。
实验3：重金属污染物在植物体内含量测定、富集与分析方法（4学时）一、教学目的：了解环境污染物在植物内的含量与富集规律，掌握重金属污染物在植物体内含量测定方法与土壤-植物系统元素富集系数的计算。
二、仪器、试剂与材料微波消化炉（或电炉），超速冷冻离心机，电子天平，电热恒温水浴锅，精密pH计，聚四氟乙烯烧杯(50或100ml)，及其他常规仪器，原子吸收光谱仪。
优级纯强酸(HCl，HNO3，HF ，HClO4)，测试金属离子标准液(Pb、Cu、As、Cr、Cd、Zn)，其它常规试剂。
污染样地的土样与植物样。
三、步骤1.采样在重金属污染样地采集植物样或土样，以及附近无污染区域采集植物样或土样以作对比。
2样品予处理样品带回室内分别进行予处理，土样先在恒温箱中40℃条件下烘干(7-10天)，然后在玛瑙研磨中磨碎，全部通过200目尼龙筛，放入磨口瓶中盖好备用；植物样先用自来水洗去表面泥土及灰尘，再用二次水冲洗数次，然后在恒温箱中40℃条件下烘干(7-10天)，按整株、根、茎、叶分别剪碎，放入干燥器中备用。
3.土样、植物样消化(湿化法、微波法)土样称取0.2000克，放入微波消化罐内，再加入8mlHNO3和6ml的HF酸(都为优级纯)，在电子控温加热炉上予热后，放入微波消化炉，启动消化炉使气压缓慢升至7-8个大气压、气温升至170℃，停止消化炉加热，然后冷却1小时后，取出消化罐并打开(在通风橱内)，加入数滴H2O2让其充分反应至消化液变澄清，转入25ml容量瓶，用去离子水清洗消化罐壁，清洗液也转入容量瓶并且定容至25ml(加几滴稀硝酸酸化)待测。
称取植物样0.2000克，加入10ml HNO3(为优级纯)和5ml去离子水，在电子控温加热炉上予热后，放入微波消化炉，启动消化炉使气压缓慢升至10个大气压、气温升至170℃，停止消化炉加热，然后冷却1小时后，在通风橱内取出消化罐并打开，(视具体情况加入数滴H2O2让其充分反应至消化液变澄清)，转入25ml容量瓶，用去离子水清洗消化罐壁，清洗液也转入容量瓶并且定容至25ml(加几滴稀硝酸酸化)待测。
土样和底泥样分别称取0.2000克，放入聚四氟乙烯烧杯(100ml)内，再加入6mlHNO3和15ml的HF酸(都为优级纯)，在通风橱内的电热板加热(垫石棉网，温度不超过150℃)，待加热快要干时，停止加热使其冷却后，加3-5mlHClO4，再加热蒸发至冒白烟，停止加热使冷却(若有沉淀和残渣加适量的酸继续消化，直到无沉淀)停止消化炉加热，然后分别加入少许二次水清洗聚四氟乙烯烧杯2-3次，清洗液也分别转入容量瓶并且定容至25ml(加几滴稀硝酸酸化)待测。
通过两种消化方法测定结果比较表明：微波法具有耗原料少，污染小；元素不易挥发，对结果产生的误差较小；酸和水都是极性分子，易吸收微波能转化为热能，在高温、高压下加速物质的分解；方便快捷。
但湿化法对土样消化效果较好。
4.原子吸收法测重金属含量测定前配制不同浓度的标准溶液或者购买标准液加以稀释，然后加以测定。
5．植物样不同部位重金属含量称取备用干燥的植物样：整株、根、茎和叶分别进行微波消化，取消化液经ICP-AES 仪分别测定其重金属元素含量。
6．植物富集指数分析C i = C p/ C s式中C i植物富集指数，C p为植物中重金属含量，C s为土壤中重金属含量。
此指数可反映重金属元素富集程度和迁移能力大小。
TAS-990火焰型原子吸收操作步骤如下：一、开机顺序：①打开抽风设备；②打开稳压电源；③打开计算机电源，进入Windows 桌面系统；④打开TAS-990火焰型原子吸收主机电源；⑤双击TAS-990程序图标“AAwin”，选择操作。
二、测量操作步骤：1.选择元素灯及测量参数：①选择“工作灯（W）”和“预热灯（R②设置元素测量参数，可以直接单击③进入“设置波长”步骤，单击寻峰，等待仪器寻找工作灯最大能量谱线的波长。
寻峰完成后，单击，回到寻峰画面后再单击。
④单击2.设置测量样品和标准样品：①②③单击；进入辅助参数选项，可以直接单击；单击，结束样品设置。
3.点火步骤：①选择“燃烧器参数”输入燃气流量为1500以上；②检查废液管内是否有水；③打开空压机，观察空压机压力是否达到0.2MP；④打开乙炔，调节分表压力为0.05MP；用发泡剂检查各个连接处是否漏气；⑤单击点火按键，观察火焰是否点燃；如果第一次没有点燃，请等5-10秒再重新点火。