脑缺血动物模型的研究..

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慢性间歇性缺氧合并脑缺血再灌注动物模型的研究

慢性间歇性缺氧合并脑缺血再灌注动物模型的研究

t n b p xa v r d y,a d h s i UC e t y e i e e y a n t o e n
g o p 、ha o e ai n g o p 、 H o r u s m p r to r u CI c mbi n nig CI g o p we er ii gno ma . R u r a sn r 1 Them o lo r de f
我们 参 照 文 献 方 法 一 , 备 C H 制 I
S D大鼠模 型和 CR S I D大 鼠模型 , 将 Ct l t+CR组 大 鼠置 于 间歇性 缺 I 氧箱 中 , 使其 中每个循环 各种 气体 吹入时 间顺 序为 : 气 10秒 , 息 3 氮 2 静 O秒 , 氧气 6 0秒 , 空气 3 0秒。每一 间歇性 缺氧循 环 时 问为 4分 钟。每 } 8 0 J :0~1 :0时 实 60
李植 灿
洪志林
蔡 若 蔚
只 , 重 10— 0 g 体 8 2 0 。所 有大 鼠均进食标 准的普通 大 鼠饲 料块 , 饮用 清洁 水 , 饲养
于 福 建 医 科 大 学 动 物 实 验 中 心 , 温 控 制 室 在 2 1 , 应 1 后 开 始 实 验 。 随 机 54 ℃ 适 -
a d n url gc lde cts o ei H omb — n e oo ia f i c r n CI c i i
S rge e l ( D) 鼠 3 pau —D we S 大 在 缺 氧 箱 中行 血 氧 检 测 , 随 机 余 分成 4组 : 白 对 照 组 ( C n=6 , 手 空 U , )假
3 2 0 建 医科 大 学 附属 第 二 医 院 神 经 6 0 0福
内科

急性脑缺血实验动物模型制作

急性脑缺血实验动物模型制作
Wasn等 [ t o 6 1 建立 了光 化学 法 诱 导脑 皮层 梗 首次 塞 的动物 模 型 . 法是 在 尾静 脉 注射 光 敏材 料荧 光 该
常用 的有两 血 管 闭塞 法[ 四血管 闭 塞 法[ 两 2 1 和 3 1 . 血管 闭塞 法 通过 夹 闭双 侧颈 总 动脉 ,同时结合 降压
动 物 脑缺 血 模 型 的 经验 , 以和 同行 们 交 流, 时为 基 础 性研 究提 供 更 稳 定 的模 型 制 作 方 法 . 同 关键词 : 实验 动 物 脑缺血 模 型
中图 分 类 号 : 9 — Q 53
文 献标 识码 : A
文章 编 号 :64 07 (0 8 4 O 6 一 4 l7 — 8 42 0 ) 一 OO 0 0
脑血管病 、 癌症 、 心血管病为现今人类死 亡率
最 高 的三 大疾 病 . 中脑 血 管病 发 病最 快 , 死 致 其 致 残率最 高, 居 三大疾 病 之首 . 位 因此 , 拟 临床 疾 病 , 模 制作较 为可 靠 的脑缺 血 动物模 型 , 系统研 究 其发 对 病 机 理 , 理 、 理 学 改变 , 病 生 以及 药 物 疗效 、 治措 防 施 等 , 有重 要指导 意义 . 都具
第 2 卷第 4 4 期
20 0 8年 8月
山西大 同大学学报( 自然科学版)
Ju a o hniD tn nvri( a rl c ne o r l f ax a gU i st N t a Si c) n S o e y u e
V0 . 4 No4 1 . . 2
Au .0 8 g2 0
性脑 缺 血研 究 .
价抗脑缺血药物的疗效等有价值. 但该模型不能在
清醒 动物 上 复制 , 法研 究 血 管狭 窄后 行 为学 的变 无

脑缺血动物模型动物选择研究

脑缺血动物模型动物选择研究

中 图分类 号 : 2 4 2 R 8 .
文献标 识码 : B
文 章编号 :0 8 )0 ( 0 0 O —3 2 10 48 5 2 1 )92 7  ̄2
缺血 性 脑 血 管病 (C D) 占 全部 脑 血 管 病 的 8 % , 有 解 剖生 理 特 点 符 合 实 验 目的 ; 意人 与 实 验 动 物对 同一 刺 激 的 反 IV 约 0 具 注 发病率 、 致残率 、 病死率高的特点 , 已成 为严重危害人类健康的疾 应 差 异 , 用 具 有 明显 反 应 的动 物 ; 用 患有 类 似 人 类 疾 病 的 近 选 选 病之 一 。因此 模 拟 人 类 缺 血性 脑 血 管 病 发病 过 程 , 立 一 种 生 理 亲系或突变系动物 ; 建 结构功能简单 又能反映研究指标 ; 选用与实 指标控制严格 、 操作 简便 、 稳定可靠且重复性好 、 与人类脑缺血相 验设计 、 技术条件 、 实验方法等条件相适应的标准化动物 ; 在不影 似 理 想 脑 缺血 动 物 模 型对 于研 究 脑 缺 血 的病 理 生 理 变 化 、 病 机 响实 验 质 量 的前 提 下 选 用 易 获 得 、 经 济 、 易 饲养 管理 的动 物 。 发 最 最
制及防治措施至关重要。本文 就制备脑缺血模 型的常用动物进 3 常用 实 验 动 物 的 特征 行一综述。 3 1 啮齿类 目前大多 数实验 室选 择 啮齿类 动物作 为研究 对 . 1 脑 缺 血 动物 模 型 的 分 类 象 , 其 是 大 鼠 和沙 土 鼠 应 用 较 多 。 因其 具 有 以 下 优 点 : 鼠 脑 尤 大 根据 是 否 全 脑缺 血 分 为 全 脑 缺血 模 型 和 局 灶缺 血 模 型 。 血 管解 剖 接 近 人 类 ; 管 性 损 伤部 位 恒 定 , 血 实验 重 复 性 好 ; 于 常 便 全 脑 缺 血模 型制 备 方 法 主 要有 : 支 动 脉 阻 断 法 ; 血 管 闭 规 指标 监 测 , 施 低 温 固定 技 术 和组 织 生 化 分 析 ; 鼠品 种多 , 二 三 易 大 成 塞 法 ; 支 动脉 阻 断 法 ; 脏猝 停 法 ; 扎 臂 头 主 动 脉 总干 等 。此 本 低 , 够 为动 物 保 护 者 接受 ; 系 纯 和性 好 , 血 管 解 剖 和 生理 四 心 结 能 种 脑 外 沙土 鼠缺 乏后 交 通 动 脉 及 基 底 动 脉 环 ( ii环 ) 两 侧 大 脑 供 机 能相似 , wls l , 梗死部 位相对 容易控 制 , 实验重 复性好 ; 抗感 染能力 血 相 对 独 立 , 过 夹 闭双 侧 颈 总 动 脉 即可 造 成 效果 明显 的全 脑 缺 强 , 活 时 间长 , 于 脑 缺 血 后 急性 、 急性 和慢 性 相 关 病理 改 变 通 存 利 亚 过程的研究 ; 有关系列大 鼠的生理 、 药理和生化方 面的实验资料 局 灶性 脑 缺 血 模 型包 括 永 久 性 或 暂 时性 动 脉 闭 塞 , 要 制备 可 供 分 析 比较 ; 土 鼠缺 乏 后 交 通 动 脉 及基 底 动 脉 环 ( ii环 ) 主 沙 wls l , 方法有 : 栓 法; 囊 导管法 ; 线 球 内皮 素 一1灌 注 诱 导血 管 收 缩 法 ; 两侧大脑供血相对独立 , 闭塞一侧 或两侧颈总动脉即可复制效果 光化学诱导法 ; 栓塞法 ; 皮层压迫法 ; 开颅机 械闭塞法; 缺氧诱导 明显的同侧或双侧脑缺血模 型。C 7 L 6小 鼠和沙土鼠类似 , 5B / 亦 法; 促凝血酶法等 。另外 , 易卒 中型 自发性高血压模型大 鼠的育 缺 乏 后 交 通 支 , l o O s n等 通 过 暂 时 性 结 扎 双 侧 颈 总 动 脉 1 s 2 成 为脑 梗 塞 研 究 提供 了新 的模 型 材 料 , 其 卒 中性 质 不 可 控 制 , mi, 立 了 C 7 L 6小 鼠 稳 定 的 全 脑 缺 血 模 型 。 啮 齿 类 缺 点 但 n建 5B / 可 能为 局 灶 性 缺血 , 可 能是 局 灶 性 脑 出血 。 也 是: 鼠颅内外血管吻合网发达 , 在仅阻断颅 内血管而不相应处理 2 脑缺 血 模 型 的 动 物选 择 原 则 颅 外 血 管 时 , 皮 层 的 缺 血不 严 重 ; 些 临 床 不 常见 症 状 : 吸 困 脑 一 呼 选用与人体结构 、 功能 、 代谢及疾病特征相似的动物; 动物的 难 、 癫痫发 作、 意识障碍难 以恢 复等 , 啮齿类 中却十分常见 , 在 致

脑缺血的观察及脑缺血模型的评价方法的具体步骤及方法

脑缺血的观察及脑缺血模型的评价方法的具体步骤及方法

脑缺血的观察及脑缺血模型的评价方法的具体步骤及方法缺血性脑血管疾病是一个复杂的病理生理过程,评价脑缺血的指标各种各样,研究中选取何种指标评价脑缺血的程度及药物的疗效尤为重要,现将主要的参考观察指标综述如下。

1.神经症状及体征的评价脑损伤后出现相应的症状与体征,症状与体征的检测又可以反映脑损伤与恢复的程度。

常见的分级方法有:Bederson三级法、改良的Bederson、Zealonga 5分制评分法、Tatlisumak 6分制评分法等。

常用的Bederson按受损程度分级,正常(0级):①未见活动异常,大鼠被提尾悬空时两前肢向地面伸直。

②置动物于软塑料板上,轻握鼠尾,在鼠肩后施加侧向推力使鼠滑动约10cm,手感左右推动阻力相等;中度(1级):①大鼠被提尾悬空时,脑缺血对侧前肢呈屈曲、抬高、肩内收、肘关节伸直等。

②基本同0级;重度(2级):①同1级。

②检查方法同上,但缺血半球对侧的侧向推动阻力明显降低。

Zealonga的5分制评分标准为:0分,无神经损害的症状;1分,不能伸展对侧前爪;2分,向外侧转圈;3分,向对侧倾倒;4分,不能自发行走,意识丧失。

症状与体征的检测方法直接、简便,从整体上反映损伤程度,不需要特殊仪器,但人为心理因素比较多,只需随机测定,可靠程度低,可以用做初步筛选或辅助性指标。

2.定位记忆能力的评价记忆是复杂的生理过程,在多重记忆系统中不同记忆系统有着不同的功能定位、神经环路、递质系统和分子生物学机制。

鼠脑缺血后伴有不同程度记忆力与空间定位的障碍,检测的方法可采用:跳台实验、避暗实验、定向游泳实验、 Morris水迷宫实验等。

3.脑电图(EEC)EEC提供了一种非创伤性研究脑的电活动,可以反映阻断动脉的缺血区与非缺血区以及对侧相应部位的脑电变化,通过生物电的角度从整体上分析脑损害与脑电图的关系。

在大鼠冠状缝前相当于皮质感觉运动区(额顶区)部位和顶叶后部(顶枕区)的左右两侧对称地分别放置脑电极各一个,电极穿过颅骨接触硬脑膜,用牙科黏合剂固定,参考电极安置在鼻骨正中。

全脑缺血再灌注动物模型建立方法

全脑缺血再灌注动物模型建立方法

全脑缺血再灌注动物模型建立方法引言全脑缺血再灌注是一种临床上常见的危重症,常见于心脏骤停、溺水等情况下,出现全脑缺血缺氧,随后通过复苏措施进行再灌注。

建立全脑缺血再灌注动物模型对于深入研究相关疾病的发病机制,评估治疗方法具有重要意义。

本文将介绍一种常用的全脑缺血再灌注动物模型的建立方法。

动物模型选择建立全脑缺血再灌注模型时,主要选择小鼠或大鼠作为实验动物。

一般情况下,小鼠更为常用,因其易于操作、成本较低,且其脑血管结构与人类相似,因此具有较高的可比性。

对于大鼠,其相对较大的体积能够更好地模拟人体情况,但操作相对较为复杂。

手术操作准备在进行全脑缺血再灌注动物模型的建立前,需要进行手术操作的准备工作。

首先需要进行动物的麻醉和固定,确保手术操作的安全性。

其次需要准备全脑缺血再灌注模型所需的仪器和设备,包括导管、监测仪器等。

在手术操作前,还需要对实验动物进行术前处理,包括禁食、定时给予抗生素等。

手术操作步骤1. 麻醉和固定:将实验动物置于麻醉箱内,使用合适的麻醉药物使其达到麻醉状态。

随后将其固定在手术台上,以确保手术操作的稳定性。

2. 手术部位暴露:在麻醉状态下,对实验动物进行皮肤消毒,随后进行手术部位的切开,暴露出颅骨表面。

3. 血管结扎:通过显微外科手术操作,对实验动物的颅骨表面的动脉和静脉进行结扎,以模拟全脑缺血的状态。

4. 缺血时间控制:根据实验设计的需要,控制全脑缺血的时间,一般为15至20分钟。

5. 再灌注:在全脑缺血一定时间后,通过解开血管结扎,使血液重新灌注至大脑。

6. 术后处理:对实验动物进行术后处理,包括给予液体、保暖、饲养等。

检测指标和评价方法建立全脑缺血再灌注模型后,需要对实验动物进行一系列的检测和评价,以评估其神经功能恢复情况。

常用的评价指标包括神经行为学评分、脑组织病理学检测、神经元凋亡检测、脑组织炎症因子检测等。

通过对这些指标的检测和评价,可以全面地评估全脑缺血再灌注模型的建立效果,为后续的实验研究提供可靠的依据。

缺血性脑卒中的动物模型完整版

缺血性脑卒中的动物模型完整版

缺血性脑卒中的动物模型HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】缺血性脑卒中研究中的动物模型想要进行一项基础研究,动物模型必不可少。

缺血性脑卒中研究如火如荼,动物模型也多种多样,有哪些常用的动物模型,以及它们各自的特点就成了研究人员在选择模型时十分关注的问题。

在缺血性卒中过程中,最终的梗死体积和神经功能预后受到多种因素的影响,例如缺血的持续时间、缺血的严重程度、侧枝循环、系统的血压以及梗死产生的原因和位置。

此外,年龄、性别和相对复杂的药物遗传背景也会对其产生影响。

因为卒中是如此复杂的一个疾病,因而动物模型也往往只能覆盖其中个别方面的特点。

虽然中风是一种复杂的疾病,但其存在一些共同的特点,这使得我们有机会用实验来模拟卒中的发生。

缺血性脑卒中的一个重要特点是进展,这也解释了缺血半暗带的存在。

当血流量降至基线值的15-20%以下时,只要几分钟就会产生不可逆的脑损伤核心,并且迅速相周围发展。

其周围的脑组织血流减少得相对较轻,所以此时神经功能缺失而组织结构却是完整的。

但如果脑血流不能恢复,那么这些所谓的半暗带组织就会被纳入梗死核心区。

最常用的一种模型是啮齿动物的线拴法大脑中动脉闭塞模型(MCA),方法是将普通的血管内缝线或特制的线拴放入大脑中动脉开口处,从而达到阻塞血管造成血流量减少的目的。

这种方法的优点是:不需要开颅的手术,并且通过拔出线拴的方法还可以达到在特定时间再通血管的目的,虽然瞬间的血管开通与人体一般的病理生理过程相去甚远,但与近来应用越来越广泛的机械取栓治疗的病理过程不谋而合。

因此,虽然在模型的制作上存在一些问题,但仍是目前最广受认可的一种脑卒中动物模型。

另一种常用的方法是用各种方式直接地闭塞血管,分为永久地闭塞血管(如凝断)和暂时闭塞血管(如结扎),但大多都需要开颅的手术操作。

使用内皮素-1(一种强血管收缩剂)可以诱导短暂的局灶性脑缺血,其产生的病灶可以分布于脑组织任何位置,常常被用于制作腔隙性梗死的模型制作。

脑缺血动物模型检测指标研究进展

脑缺血动物模型检测指标研究进展
时珍国医国药 20 0 8年第 1 9卷第 1 期 1
LS IH NM DCN N A E I E IAR S A C 08 O .9N .1 IHZ E E IIEA DM T RAM DC EE R H20V L 1 O 1
脑 缺 血 动 物模 型检 测 指标 研 究进 展
周 霞 , 军 , 国钧 董振 国 万 黄 ,
(. 1西南 交通 大学生命 科学 与工程 学院 , 四川 成 都 603 ; 2 成都 中医药大学 , 10 1 . 四川 成都 607 ) 10 2
摘 要 :综述了脑缺血动物模型常用的检测指标研究概况, 为研究脑缺血机制及动物模型评价提供依据, 同时便于实验
研 究 时选 择使 用 。
关键词 : 脑缺血; 动物模型; 检测指标
Hale Waihona Puke 中 图分 类号 :2 55 R 8 .
文 献标识码 : B
文 章编号 :0 800 (0 8 1-820 10 -85 20 )120 -1
脑缺血是 以脑循环血流量减少为特征的 中枢神经 系统疾病 , 7 兴奋性氨基酸毒性及含量 具有发病率高 、 残率高和死亡 率高 的特 点 , 致 严重地 影响人类 的 氨基酸作 为重要 的神经递质 , 对正常大脑 的生理活动有调节 生 存 质 量 。选 用 准 确 的脑 缺 血 检 测 指 标 是 脑 缺 血 机 制 研 究 及 动 作用 。脑缺血 时, 神经元释放 的谷氨酸是引起神经元死亡的重要 Gu 具有损 伤效应外 , 甘氨 酸 ( l) 有协 同 Gy 也 物模型建立 的关键环节之一 。本文 就脑 缺血动物模 型常用 的检 原 因。除谷氨酸( l) 作用 , 释放增加能扩 大脑缺血损 害。 一 基丁酸 ( A A) 其 氨 G B 能 测指标作一总结 。 抑制兴奋性氨基酸释放或对抗 氨基酸毒性 。傅 建华 等” 采用结 1 血 小 板 聚 集 性 血液 内血小板 的高聚性是 脑缺血 的主要致病机制之 一。对 扎小 鼠双侧颈总动脉进行反复缺血再灌注 , 造成小 鼠血管性学习 采用花生 四烯酸诱导 的大 鼠急性 脑缺 血模型 研究 表明 , 型 记忆 障碍模型 , 模 测定小 鼠大脑皮 层和海马 区递质性 氨基酸含量的 组加入诱导剂 A P 终浓度 2t o L , D( m l ) 分别在 124h后测定 5 变化 。结果表 明, x / , , 与对照组相 比 , 模型组 海马区天 门冬 氨酸含量 a rn最大 聚 集 率 ( A T a%)和 1 n最 大 聚集 速 度 ( A V 降低 , i P gm x mi P g— 脑皮层的 一氨基丁酸的含量升高。 m x ) 较对 照 组 升 高 。 a% 均 8 血液流变学指标 2 脑 梗 塞部 分 百 分 比 血液粘稠度较高 、 血流 速度缓慢致血栓 形成 , 缺血性脑血 是 采用线栓法制作 大鼠局灶性脑缺血再灌 注模 型, 模拟人类缺 管疾病发病 的又一重要机制。殷 凤等 采用高 分子右旋糖酐制 血性脑血管病的状态 , 通过红四氮唑 ( T ) T C 染色的方法计算缺血 成大 鼠血瘀症模型 , 测定结果表 明, 模型组全血粘度 、 血浆粘度 、 面积。结果大 鼠造模后 2 h内出现程度不 同的神经损伤症状 , 4 与 血细胞 比容及红细胞 电泳时问均有所升高 。 对照组相 比, 缺血部分 占整个脑组织切片 面积的百分比有极显著 9 脑能荷 ( C) E 及磷酸肌酸( C ) P r 的含量 差 异 , 。 脑缺血后 , 能量衰竭 主要 表现 在高 能磷 酸化 合物 A P P r T , C 3 脑 含 水 量 的耗竭上 , 为检测缺 血早 期脑 组织 的 A P A P, MP及 P r T ,D A C 含 脑血管堵塞后 , 缺血 中心 区神经细胞很快 发生死亡 , 而缺血 量 , 可采用 H L P C仪观察 大脑 的能荷值 , 以下公 式计算 : C= 用 E 后再灌注可挽救濒死细胞。脑组织含水量 测定可观 察脑缺血损 ( 一 . P/ C f AP AP 。王秋华 等 阻断雄性 C 0 5C ) ( MJ +C D +C M) 伤后胶原组织 水肿 情况 , 般用 以下公 式 计算 : 水 量 ( 一 含 %)= 小 鼠双侧颈总动脉血流 , 复制低血压伴 急性脑缺 血模 型 , 现在 发 ( 重 一干 重 ) 湿 重 ×10 。 湿 / 0% 缺血 1 ,0 3 mn时模型组 E P r O 2 ,0 i C,E 含量均较假手术组 降低 。 4 线 粒 体 呼 吸 功 能 1 超 氧化 物歧 化 酶 ( O 及 丙二 醛 ( D 水 平 O S D) M A) 局灶性脑缺血引起脑损伤 的重要 原因之一 即脑能量代谢 功 脑缺血后生成 的大量氧 自由基攻击细胞膜和亚细胞膜, 引发 能障碍 , 因此 , 检测线粒体功能对 于评 价药物 的脑保护作用具 有 脂质过氧化反应 , 导致细 胞代谢及 功能 障碍 。张博生等 发现 重要意义。采用插线 法 制备 大 鼠脑 缺血再 灌注 模型后 , 出 脑缺血和再灌注后 鼠红细胞 、 取 脑组 织及线粒 体 中的 S D水 平降 O 缺血 区脑组织制备线粒体 , 进行呼吸功能测定 。结果表明模型组 低 ; 鼠血浆 、 而 脑组织和亚细胞器 中红细胞 内的 M A水平升高。 D 线粒体功能受 到明显损 伤 , 表现为 3态呼 吸速率 降低 , 呼吸 1 N 4态 1 O及 一 氧 化氮 合 酶 ( O ) 性 N S活 速率 提 高 。 脑缺血晚期 , 机体代谢生成大量 的 N 且 N S活性 升高 , O, O 可 5 脑 组织 结 构 诱导谷氨酸兴奋毒性 , 重缺血再 灌注损伤 。李 建生等… 究 加 研 脑缺血后 , 内神 经细胞代谢紊 乱 , 脑 以致神 经细胞损 伤。在 发现 N O含量 降低和 T F增高与老龄 大鼠脑缺血再灌 注脑 组织 N 形态学上表现为体积变小 , 细胞质 和细胞 核 固缩 , 胞浆和 血管周 损伤有关 ; 大黄提 高血清 N O含量 和脑 组织 N S活 性的作 用可 O 围空化 ; 另外还可因毛细血管通透性增加 , 导致血浆渗出 , 出现脑 能是 其拮抗脑组织损伤的机制之一 。 水肿 。可采用 光学显微镜 、 电子显微镜研究镜下 的组织细胞形态 1 A P酶 活 性 2 T 学改 变 。 能量 的衰竭首先是离子泵 的功能受 到影响 , a K N , 一A P T 6 脑 电 图 ] 酶主要存在于细胞膜上 , 对维 持细胞 的机能 、 代谢 和细胞内外 的 通过脑电图波幅的改变可判断脑 缺血症状 。在大 鼠冠状缝 离子平 衡 中起 重要作 用。脑缺 血时 , 能量 匮乏 , a K N , 一A P T 前相 当于皮层感觉运动 区( 额顶 区) 部位和顶叶后部 ( 顶枕 区) 的 酶不能正常运行 。而 A P依赖 的 c “ 一A P酶也在 A P减少 T a T T 左右两侧对称地分别 放置脑 电极各 一 , 连接 多道生 理记 录仪记 时活性降低 , 不能将 c “泵出胞外 , a 造成细胞 内 C “超载。刘志 a 录 , 以反映阻断侧大脑 中动脉供 血区和非供血 区 , 可 以及对侧相 龙等 采用沙土鼠双侧 颈总动脉夹 闭脑缺血再 灌注模 型, 于缺 应部位的脑 电变化。缺血 区脑 电图出现波幅降低 , 频率减慢 。 血再灌注后 4 h取脑组织测定 N , 一A P酶 、 a 一 T 8 a K T c A P酶 活性 , 果 发现 脑 缺 血再 灌 注后 脑 组 织 N , 一A P酶 和 结 a K T c “ 一A P酶 活性均降低。 a T 作者简介 : 周 霞(9 0) 女( 18 . , 汉族) 黑龙江勃利人 , , 现任 西南交通 大学 1 神经 肽 Y( P 与 神 经 降 压 素 ( T) 量 3 N Y) N 含 药学院助教 , 博士学位 , 从事中药教学与研 究工作. 主要 血小 板 合 成 释 放 的 N Y 可 引 起 血 管 收 缩 、 肌 抑 制 和 血 栓 P 心 通讯作者简介 : 万 军( 90 ) 男( 18 - , 汉族 ) 四川 自贡人 , , 现任 西 南交通 形成 , N 而 T在体 内可拮抗 N Y 的生物 学效应 , 于两者含量异 P 对 大学药学院助教, 士学位 , 博 主要从事 中药教学与研 究工作. 常在老年脑梗塞发病 中所起的作 用不容忽视 。杨风杰等 通过

全脑缺血再灌注动物模型建立方法

全脑缺血再灌注动物模型建立方法

全脑缺血再灌注动物模型建立方法一、引言脑缺血再灌注模型是研究脑缺血再灌注损伤的重要手段,对于深入理解缺血性脑损伤的病理生理机制,探索新的治疗方法具有重要意义。

本文将详细介绍全脑缺血再灌注动物模型的建立方法。

二、准备工作1. 实验动物:选择健康成年小鼠、大鼠或兔,确保其无疾病、无遗传性疾病。

2. 设备:准备好手术器械、显微镜、止血钳、无创血压计、冰冻浴盆、恒温湿毛巾等。

3. 药物:准备适量麻醉剂、抗生素、输液用品等。

三、全脑缺血模型的建立1. 麻醉:使用麻醉剂对实验动物进行全身麻醉。

2. 暴露手术部位:对实验动物进行全身消毒,打开腹腔,暴露手术部位。

3. 制作全脑缺血:使用特制的夹子将实验动物的脑血管夹闭,制造全脑缺血。

具体夹闭部位和时间需要根据实验需求进行调整。

四、再灌注过程的控制1. 解除血管夹闭:缺血时间结束后,缓慢解除血管夹闭,恢复血流。

2. 观察再灌注情况:在再灌注过程中,密切观察实验动物的神态、行为变化,以及脑部颜色、肿胀等情况。

五、模型评估与结果记录1. 评估再灌注效果:再灌注过程结束后,评估实验动物的全脑缺血再灌注效果,记录相关数据。

2. 观察病理变化:对实验动物的大脑组织进行病理学检查,观察缺血再灌注损伤后的病理变化。

3. 结果记录与分析:将观察到的结果进行记录,并对结果进行分析,为后续研究提供基础数据。

六、注意事项1. 麻醉剂的使用要适量,避免对实验动物造成过大的伤害。

2. 手术过程中要保持无菌操作,避免感染。

3. 制作缺血模型时,要确保夹闭的血管部位准确,时间适当,避免影响实验结果。

4. 再灌注过程要缓慢,确保血流的恢复不会对实验动物造成过大的刺激。

5. 病理学检查要取样准确,切片处理要规范,确保检查结果的准确性。

七、总结本文详细介绍了全脑缺血再灌注动物模型的建立方法,包括准备工作、缺血模型的建立、再灌注过程的控制和结果记录等。

该模型可用于研究脑缺血再灌注损伤的病理生理机制和探索新的治疗方法。

建立全脑缺血再灌注动物模型的实验研究进展

建立全脑缺血再灌注动物模型的实验研究进展
颈动脉负压分流法。国内文献报道用四血管阻断法比较
总动脉, 套线备用。 同时枕部切口( 颈部前倾 3。利于手术部 0, 位的暴露)借助手术显微镜分离暴露第一颈椎横突翼并找 ,
多 , 国外四血管阻断法、 二血管阻断加低血压法均有应用
・6 8 ・ 8
P o e d n fCl ia e ii e, e . 0 1 Wo 0 No 9 r c e i g o i c lM d cn S p 2 1 , l2 . n
缺血性脑损伤的机制进行了大量的研究, 脑是一个血流量
大、 代谢旺盛的器官, 其功能几乎全靠葡萄糖的氧化代谢。 心
脏骤停后引起的脑损害的病理生理主要是缺血缺氧性脑损 伤以及自主循环恢复后的大脑缺血再灌注损伤, 其中涉及兴 奋性氨基酸的神经毒性、 钙离子稳态失调、 神经元凋亡等机
制_ 。所以心肺复苏的最终目的是脑复苏。 4 ]

左右横突孔( 椎动脉在人脑前从此孔下通过)将灼热的电烙 ,
铁尖头( 直径 0 5 m) . a r 直接插入翼突孔, 深度以 2 m为 ~3 m
血流。经 H E染色后在光镜下观察海马组织及顶叶皮质, 正
常大鼠神经元细胞排列规则 , 胞质丰富, 核呈圆形, 核仁清
楚; 实验大鼠病理改变明显, 可见大量神经元坏死变性 , 排列
产生和钙超载导致了缺血再灌注损伤。 所以近年来围绕心肺 脑复苏的保护机制及其方法成为专家学者们研究的热门, 而 建立有效、 稳定的全脑缺血再灌注模型是实验研究的基础。
夹, 去除双侧颈总动脉的夹闭, 回输血液, 此为再灌注期。
14 u i l 四血管法及改良的四血管法建立大鼠全脑缺 . P ln l s ei 针对建立全脑缺血再灌注模型的实验方法有多种, 包 血再灌注模型 括: 二血管阻断加低血压法、 四血管阻断法、 三血管阻断法、 四血管阻断法[ ] 8 主要是在颈前正中切口, 分离双侧颈

沙鼠脑缺血模型特点及应用的研究进展

沙鼠脑缺血模型特点及应用的研究进展

【 摘要 】 脑 缺 血 因其 高 的 发 病 率 而 成 为 近 年 来 研 究 的 热 点 。用 于 研 究 脑 缺 血 的 动 物 模 型 较 多 , 其 中 沙 鼠 因 大脑 基 底 动 脉 环 先 天 性 发 育 不 完 全 而成 为 脑 缺 血 研 究 的 较 理 想 模 型 。沙 鼠 脑 缺 血 模 型 在 研 究 单 侧 脑 缺 血 和 全 脑 缺血方 面都具有独特的优势 , 在 研 究 脑 缺 血 后 脑 区的 病 理 变 化 、 再 灌 注 损 伤 机 制 及 开 发 脑 保 护 药 方 面 都 得 到 十 分
B e i j i n g 1 0 0 1 9 3,C h i n a ;2 . He b e i No r t h U n i v e r s i t y ,He b e i Z h a n g j i a k o u 0 7 5 0 0 0)
【 A b s t r a c t 】 C e r e b r a l i s c h e mi a h a s b e c o me a r e s e a r c h f o c u s i n r e c e n t y e a r s .A m o n g v a r i o u s a n i ma l mo d e l s ,g e r b i l
p o s t — i s c h e mi a p a t h o l o g y,t h e me c h a n i s m o f r e p e r f u s i o n i n j u r y ,a n d t h e i n n o v a t i o n o f a n t i - c e r e b r a l i s c h e mi a n e w d r u g s .T h e

脑缺血模型的制作

脑缺血模型的制作

脑缺血模型的制作:1.动物模型制作原理制作脑缺血动物模型的方法很多,但常用方法主要有结扎法和栓塞法两种,结扎法是运用外科手段结扎脑的供血动脉,中止脑的血氧供应,它可以进一步分为颅内结扎和颅外结扎。

颅外结扎主要是用于制作全脑缺血模型,可进一步分为①4血管结扎,即结扎颈总动脉/颈内动脉和椎动脉;②2血管结扎,即结扎两侧颈总/颈内动脉,同时抽取动物一定量的血液,使血压降低到50mmHg以下,达到造成全脑缺血的目的。

这种方法因为需要监视和控制血压,实验条件要求严格,且因椎动脉未予结扎,往往造成的脑缺血是不完全的。

另一种两血管结扎法是用沙土鼠(Gerbil)进行,利用沙土鼠脑底Willis动脉环发育不全后交通动脉缺如的特点,结扎两侧的颈总或颈内动脉造成前脑缺血。

2. 实验动物实验动物的选择对脑缺血模型是非常重要的,理论上兔、猫、狗和灵长类都可被用来制作脑缺血模型,但更多的人倾向于选择使用鼠作实验。

这主要是基于如下认识:因为鼠是小动物,价格便宜,躯体小,消耗药品试剂较少;鼠的脑血管解剖和生理与高级动物无明显差异;一些在体的实验操作更容易进行,甚至在伦理学上更容易接受等等。

3. 仪器和设备制作脑缺血动物模型的仪器设备分为二类:一类是为动物手术服务,包括一套手术器械,手术显微镜,颅钻,脑立体定位仪,温度控制装置(控温仪、红外线灯和加热垫),呼吸机;另一类是用于监测和分析的仪器,包括脑电记录装置,血压记录装置,多谱勒血流记录仪,血气血糖分析仪。

4. 四血管结扎脑缺血模型的制作这是一个广泛应用的脑缺血模型。

最常用的为Pulsinelli的改良方法。

该模型选用Wistar大鼠,可以在清醒和自由运动状态下制作严重的脑缺血和恒定的病理学改变。

该模型分二个阶段制作,第一阶段:将动物麻醉,按置在脑立体定位仪上,调节耳杆和门齿高度使鼠头前倾约30度,同时用橡皮栓住鼠尾给以轻度的牵拉力,使颈椎伸直,翼孔呈水平位,便于观察。

枕骨下第一颈椎水平正中切口,仔细分离两侧第一颈椎横突,暴露第一颈椎横突上的翼孔,翼孔下有两则椎动脉通过,用小的单极或双极电凝器插入翼孔烧灼闭塞双侧椎动脉。

脑缺血动物模型及进展

脑缺血动物模型及进展

脑缺血动物模型及进展【摘要】建立一种符合临床脑缺血发病规律的动物模型是研究局灶性脑缺血发生机制及防治措施的基本条件。

近年来随着实验动物科学的不断发展,该领域的研究已取得了长足的进步。

现就局灶性脑缺血模型的制备及其研究进展作一综述。

【关键词】脑缺血;动物模型;进展脑缺血是以脑循环血流量减少为特征的中枢神经系统疾病,具有发病率高、致残率高和死亡率高的特点,严重地影响人类的生存质量。

据统计,我国脑血管疾病的自然人口发病率为每年 114-187人/10万,患病率为 253-620人/10万,病死率为每年 79-89人/10万。

60岁以上老年人脑血管疾病的平均发病率和病死率更高,分别为 1325.7人/10万和 886.1人/10万。

脑卒中 93%发生在 50岁及以上人群,75%以上为老年人。

目前我国脑血管疾病占人群死亡病因的第二位。

因此,模拟人类缺血性脑血管病的发病过程,建立重复性好、观测指标易于控制的脑缺血动物模型一直是人们普遍关注的课题。

经过研究者的不断努力,实验模型制备技术日臻完善,这为进一步系统研究脑缺血的病理生理、发病机制和防治措施等提供了坚实的基础。

现就局灶性脑缺血模型的制备及其研究进展综述如下。

1 动物模型在脑缺血研究中的价值和意义动物模型是医学研究中的一个重要手段,尤其对于缺血性脑血管病,能即刻制造或模拟血流下降或阻断,只有利用动物模型才能进行,具有方便、快捷、条件可控、脑缺血程度一致等优点。

但一般情况下,活体动物模型的制作多采用健康动物,缺乏人脑缺血前就存在的各种复杂的危险因素和病理生理学过程。

尽管如此,脑缺血动物模型在以下几个方面还是为研究提供了无法替代的价值:(1)不同脑缺血状态下的病理学改变;(2)缺血半暗带的研究;(3)再灌注损伤;(4)缺血本身导致的病理生理学变化;(5)干预治疗对缺血性损害的保护作用;(6)缺血性损害的部分机制。

2 脑缺血动物模型动物的选择2.1 脑缺血模型的动物选择的原则制备脑缺血动物模型一般需遵循一下原则:(1)选用与人体结构、功能、代谢及疾病特征相似的动物;(2)动物的解剖生理特点符合实验目的;(3)注意人与实验动物对同一刺激的反应差异,选用具有明显反应的动物;(4)选用患有类似人类疾病的近亲系或突变系动物;结构功能简单又能反映研究指标;(5)选用与实验设计、技术条件、实验方法等条件相适应的标准化动物;(6)在不影响实验质量的前提下选用易获得、最经济、最易饲养管理的动物。

脑缺血动物模型具体步骤及详细方法

脑缺血动物模型具体步骤及详细方法

脑缺血动物模型具体步骤及详细方法原型物种人来源脑缺血再灌注(MCAO线栓法)模式动物品系Balb/c 小鼠,SPF级,雄性,健康,体重25g~30g实验分组随机分组:对照组,模型组,阳性药物组和药物组,每组15只实验周期24 hours, 3 days or 7 days建模方法1. 3%戊巴比妥钠麻醉小鼠,颈部备皮,消毒,插入肛温探头,保持体温在37±0.5℃。

2. 颈部正中切口,暴露右侧颈总动脉,颈内动脉和颈外动脉。

使用7-0丝线在距离颈总动脉分叉2mm处结扎颈外动脉远心端,在颈外动脉穿入另一根7-0丝线,在靠近颈总动脉分叉处打一个活结。

3. 使用动脉夹夹闭颈总动脉。

在距离颈总动脉分叉处1.5mm处的颈外动脉上剪一个小口,将一根头端处理过的0.18mm直径的尼龙线从小口中插入,进入颈内动脉,并向内插入大脑中动脉,尼龙线的插入深度距离颈总动脉分叉处约9±1mm。

4. 缺血后60min拔掉线栓,用7-0丝线结扎外动脉近心端,用5-0丝线缝合颈部伤口,活力碘消毒伤口,将小鼠放在加热垫上,待清醒后放入恒温抚养箱饲养。

5. 术后24h,对小鼠进行神经功能评分,然后麻醉小鼠,取大脑进行TTC染色和病理染色。

应用疾病模型1.神经功能缺失体征评分参考Longa及Bederson的5分制法在动物麻醉清醒后24h进行评分,分值越高,说明动物行为障碍越严重。

0分:无神经损伤症状1分:不能完全伸展对侧前爪2分:向对侧转圈3分:向对侧倾倒4分:不能自发行走,意识丧失2.TTC染色麻醉小鼠后,取小鼠脑组织,放入-20℃冰箱冷冻30min。

用PBS配置1% TTC(W/V),37℃水浴至TTC溶解,将冻好的脑组织切片,置于10ml TTC 溶液中,37℃恒温孵育10min。

不时翻动脑片,使组织均匀染色。

正常脑组织染色后呈鲜红色,而梗死区呈苍白色。

取脑后用4%多聚甲醛溶液固定,蔗糖溶液脱水后,经OCT包埋做冰冻切片,切片10um,做尼氏染色,可做梗死面积的评价。

脑缺血及脑缺血再灌注损伤动物模型制备方法及评价

脑缺血及脑缺血再灌注损伤动物模型制备方法及评价
第1 卷第 3 期
21 年 6 01 月
神 经药理学报
A caN e r p r a olg c t u o ham c o i a
V_I1N O 3 0. . Jn. u e 201 1
脑 缺 血 及 脑பைடு நூலகம்缺 血 再 灌 注 损 伤 动物 模 型 制 备 方 法 及 评 价
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W A NG u. Sh ZHAN G Li
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Th mp o e mo i to t emo e f ee r l s h mi e e f so s r d c di ie ei r v dHi r meh d(h d l r b a c e arp ru inwa o u e m c o c i p n b mp r rl b tu t gb ltr l o yt e o ai o sr ci i ea mmo ao i re is a ds m ek yse sweeep cal y n a c nc r t atre ) n o e tp r s e il d y

脑血管病动物模型的具体方法及步骤

脑血管病动物模型的具体方法及步骤

脑血管病动物模型的具体方法及步骤1自发性脑梗死模型高血压动物可形成自发性脑梗死。

常用的有原发性高血压和继发性高血压两大类。

前者以日本种的自发性高血压大鼠(SHR)及其易卒中亚型(SHRsp)为常用,后者为各种肾性高血压动物。

这种脑梗死与人类的脑梗死发病情况为接近,是目前较为理想的动物模型之一,国内主要的实验动物研究机构都有供应。

2沙鼠大脑中动脉缺血模型【操作步骤】成年沙鼠,10%水合氯醛(4ml/kg)腹腔麻醉,沿腹部中线于颈部切开。

剥离出一侧颈动脉,用银制钳夹夹闭。

考虑实验需要可实行长期夹闭或可再灌注。

【结果分析】由于沙鼠后交通动脉缺失,Willis环前后不连续,故经颈部夹闭一侧总动脉可以方便地造成同侧半球缺血,可依据沙鼠表现的体征,结合眼底观察镜观察眼底缺血情况判别。

3急性大鼠大脑中动脉阻塞全脑缺血模型【操作步骤】成年SD或Wistar大鼠,10%水合氯醛(4ml/kg 体重)麻醉。

右侧卧位,在左眼外缘到左外耳道连线的中点,垂直于连线切开皮肤约2cm,沿颧弓和下颌骨,用文氏钳将手术面撑大,暴露鳞状骨的大部分,用牙科钻在颧骨前联合前内2cm处钻孔开颅。

在手术显微镜下切开硬脑膜,暴露出大脑中动脉,分离出中动脉周围的软脑膜和蛛网膜,使中动脉游离。

用双电极(电压12V)电灼损毁Willis环起始部至嗅沟段的大脑中动脉,使之阻塞。

为防止电极的电流对脑组织造成电损伤,在操作过程中不断向中动脉周围滴加生理盐水,并尽量缩短操作时间。

创面覆盖一小块明胶后,缝合肌肉和皮肤。

【结果分析】大脑中动脉从Willis环发出后向外跨过嗅束蜿蜒走行于大脑的外侧面,供应大部分的大脑半球,大脑中动脉在Willis环起始到嗅沟区发出许多的分支,供应豆壳复合体,所以电灼此段大脑中动脉的主干血流,复制中风模型的成功率较高。

用本实验手术方法复制的大鼠中风模型的成功率较高,死亡率低,较为理想,有面积不等的梗死区出现,行为障碍约占90%。

脑缺血动物模型的制备及其应用的进展

脑缺血动物模型的制备及其应用的进展

[8 李浩 , 芳 , 2] 刘 崔玲 , . 等 降压 胶囊对 老年单纯 收缩期 高血 压血清 一氧化氮 合酶活性 、 丙二醛水平 及血浆 神经肽Y、 同型半胱氨酸浓度的影 n[] 中国中西医 l J.  ̄
结 合 杂 志 , 0 3 2 (2 : 9 -9 1 2 0 , 3 1 )8 8 0 .
[4 程敬 君 , 2] 匡培 跟 , 吴卫平 , . 等 脑缺血再 灌注时 鼠脑 纹 状体 区细胞 外 液半 胱氨 酸含量 变化 及丹 参 的影 响[]中华神经科杂 志 ,9 7 3 ()2 2 3 . J. l9 , 04 :3 -2 5 [5 张继 东 , 2] 张维东 , 崔红 燕 , . 等 高半胱氨 酸对血管 内 皮细胞 的损 伤作用及 中药抗 损伤的实验研 究[]山 J. 东医科大学学报 , 0 l 3 ()5 2 l . 2 0 ,96 : l-5 6 [6 郝媛媛 , 德 山, 淑丽 . 2] 刘 王 大蒜素对高 半胱氨酸所致 内皮细 胞损伤的保 护作用[ ] 山东医科大 学学报 , J. 2 0 ,57:4 - 4 . 0 7 4 ()7 3 7 5 [7 张春颖 , 贵友 , 巍 , . 2] 杜 王 等 天麻钩藤 方对 自由活动
tmi t v ni nfr t k rv n o VI Prn o a ni e e t r e e e t n( S )a d m— nr o oso p i ie o t l d t a [】 A A,0 42 5 55 5 zd c nr l r lJ. M 2 0 ,9 :6 —7 . oe i J 1
[9 蔡 晶 , 2] 杜建 , 黄俊 山 , . 等 康欣 胶囊对血 管性痴呆 患 者血浆 同型半胱 氨酸及 p 一淀 粉样蛋 白的影n [] lJ .  ̄ 中国 中西医结合杂志 , 0 3 2 ()6 4 6 7 2 0 ,39 : 6 - 6 . [0 杜 建 , 3] 沈双宏 . 血管性痴呆肾 虚血瘀型 与内皮素 、 一 氧 化 氮 、 型 半 胱 氨 酸 、 二 醇 及 睾 酮 的 相 关 性 研 同 雌 究[ . J 中国中医基础医学 杂志 ,0 4 1 ( )3 -3 . ] 2 0 ,0 4 :2 3 [1 段 慧杰 , 3] 武蕾 , 薛长玲 , . 脾活血 汤治疗 高同型 等 健 半 胱氨酸血 症疗效 观察[ ] 中华实 用中西医 杂志 , J. 2 0 ,(7 :7 6 0 4 4 1)2 1 .

猴脑缺血模型的研究进展

猴脑缺血模型的研究进展

来 . 改进 仍 然是 目前最 直 接 、 r率 最 低 、 灌 注 经 北 . 再 时间可 以控 制 的局灶 性脑 缺血模 型 313 血 管 外气囊 充气 阻断 血流 法 .. 为 了减 少血 管 夹 法 的损 伤 . 人使 用 气震 压迫 有 MC A以形 成 闭塞 。将 特 制 的气 囊 (aonc f) blo uf置于 l 狒狒 MC A主 十 . 充气 后 阻断 有侧 MC h 然 后 再 A3 . 灌注 1h 观察 微血管 的变化 ,
维普资讯
l7・ 2

综述 ・
猴 脑 缺 血模 型 的研 究 进 展
高焕 民
摘要
程 介 士
文 章论 述 r 的全 脑缺血 、 猴 半球缺 血和局灶性缺血的制作 . 着重 分析 了各种大脑中动脉 闭
塞模型 , 对闭塞 再灌 注模型存在 的问题进行 了较为详细 的总结 : 关键词 大脑巾动脉 ; 闭塞再灌 注 : 缺血 ; 脑 猴
围区和外周 带
12 弥散性 不完 全性脑 缺血 .
3 12 血管夹 闭法 ..
大面积心肌梗死 、 心室颤动等可 以导致全身血 压降低 , 从而诱发脑缺血 , 这种情况在 人类相对多 见, 然而 压迫 向脑 部 供 血 的 大血 管 并 不 能制 作 理 想
的模型模 拟这 种 情况
作 者 单 位 :0 0 2 海 , 2 0 3 复旦 太 学 神 经 生 物 学 教 研 室 医学 神 经 生 物学 国家 重 点 宴 噎 审
通 。经 眶入路法 目前 已经 有较 多 的改 进 , 优点很 多 , 但需 要精 细 的 眼眶 内操 作 , 容易 损 伤 MC A管 壁 上 的神经 襻导致脑 脊 液漏 。对血 管 的操 作 可能 引起血 管 痉挛 从而难 以再 通 , 不能预 见梗死 灶 的大小 , 不能

非人灵长类局部脑缺血动物模型研究现状

非人灵长类局部脑缺血动物模型研究现状
钳 夹 MC 这 种 模 型 实 际 上 也 是 MC A, A M1段 的 闭
塞。
动 脉闭塞 法 ( A 不 适合许 多统 计学 分 析 以评估 MC O) 损伤 及治 疗 的作用 。另外 因有侧 支 循 环 受 累 , 组 脑 织 缺血 程度不 一 , 为 中心 区 、 围区和外 周带 。此 分 周
望 非 人 灵 长 类 动 物 模 型 的 应 用 前 景 , 其 是 利 用 低 等 灵 长 类 动 物 树 购 研 究 缺 血 性 中 风 的优 势 。 尤
【 关键词 】 局部脑缺血 ; 物模 型 ; 动 非人灵长类动物
【 中图分类号 】Q 5— 3 9 3 【 文献标识码 】A 【 文章编号 】10 -87 2 1 )306 — 0 54 4 (0 1 0 —2 30 6
1 1 1 血 管夹 闭法 : . . 目前最 常用 的是直 视下 用微 血 管 夹夹 闭 MC A。最 早 制 备 松 鼠 猴 ( ami c r , S i r si e i ua
机理存 在一 定差 异 , 而且 气 囊 对 血 管周 围组织 存 在
较大 影 响 , 现在很 少使 用 。 1 1 3 线 圈阻断 法 : 国 明等 采 用 Ge e .. 栾 rw l 眶 l经
经 眶人路法 是 指通过 打 开或切 除 眼眶周 围组 织 结构 , 进而 打开 颅骨 和硬 脑膜 , 进而 暴露 大脑 中动脉 的方法 , 于经 眶入 路可 以采用 血 管夹 闭法 、 基 血管外
或 神经 学 变化评 价 治疗效 果 。
大脑 中动 脉 ( idecrba a ey MC 是 人 m d l eerl r r , A) t
m o l n no . m a r m a e des i n. hu n p i ts
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