流动相添加剂的作用
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流动相辅助剂 的作用
Leo.xu
三乙胺
• 流动相中加入三乙胺，能显著的改善峰形 ，消除拖尾，其作用是屏蔽硅羟基。三乙 胺的pKa为11.09，在pH<11.09－2＝9.09的 条件下是以离子状态N＋H(CH2CH3)3的形 式存在的，因此pH在2.5~8.64 硅羟基呈Si －O－离子态的情况下，N＋H(CH2CH3)3 容易与Si－O－形成相对较强的静电吸引力 。
四氢呋喃
• 往流动相中加入少量的四氢呋喃有时可以 改善峰形、增大分离度，很多色谱工作者 都知道和使用，但其机理似乎少人提及。 通常所加入的量在5％以内即可，需要的时 候可以加入更大的量。
三氟乙酸TFA
• 流动相中的三氟乙酸通过与疏水键合 相和残留的极性表面以多种模式相互 作用，来改善峰形、克服峰展宽和拖 尾问Байду номын сангаас。
四烷基季铵盐
• 四烷基季铵盐（如四丁基硫酸氢铵、四丁 基溴化铵、四丁基氢氧化铵等）在水中电 离后，也形成了类似N＋H(CH2CH3)3的结 构N＋(CH2CH2CH2CH3)4 ，这种结构也 能有效的与Si－O－产生较强的静电作用 ，阻止氨基与硅羟基的接触，改善峰形。 而且它还有一个不同于三乙胺的显著特点 是，它在低波长范围的吸收比三乙胺弱。
烷基磺酸盐离子对试剂
• 流动相中加入辛烷磺酸钠等烷基磺酸 盐离子对试剂也能很好的改善峰形， 其作用机理与三乙胺和四丁基硫酸氢 铵颇为不同，是通过与样品分子的作 用来阻止样品分子与硅羟基的作用来 改善峰形。
缓冲盐
• 增加缓冲盐浓度可以增大流动相中的 离子强度，减少因静电的作用（有可 能存在于样品分子之间、也有可能存 在于样品分子与填料表面之间）引起 的前延。
加入三乙胺的注意事项
• 加入三乙胺改善峰形的时候，有两点需要注意： • 1）三乙胺的碱性很强，加入三乙胺后流动相的pH可能 超出色谱柱的使用范围，对色谱柱造成损伤。pH的改 变也会导致出峰时间的显著变化，可能引起的其它问题 ，建议流动相中加入三乙胺后回调至未加入前的pH值 。通常即使pH回调过后，由于三乙胺成为了固定相的 一部分，保留时间也有较大变化； • 2）三乙胺在210nm处有比较强的吸收，如果液相方法 中检测波长在210nm以下测定时需要谨慎使用。
Leo.xu
三乙胺
• 流动相中加入三乙胺，能显著的改善峰形 ，消除拖尾，其作用是屏蔽硅羟基。三乙 胺的pKa为11.09，在pH<11.09－2＝9.09的 条件下是以离子状态N＋H(CH2CH3)3的形 式存在的，因此pH在2.5~8.64 硅羟基呈Si －O－离子态的情况下，N＋H(CH2CH3)3 容易与Si－O－形成相对较强的静电吸引力 。
四氢呋喃
• 往流动相中加入少量的四氢呋喃有时可以 改善峰形、增大分离度，很多色谱工作者 都知道和使用，但其机理似乎少人提及。 通常所加入的量在5％以内即可，需要的时 候可以加入更大的量。
三氟乙酸TFA
• 流动相中的三氟乙酸通过与疏水键合 相和残留的极性表面以多种模式相互 作用，来改善峰形、克服峰展宽和拖 尾问Байду номын сангаас。
四烷基季铵盐
• 四烷基季铵盐（如四丁基硫酸氢铵、四丁 基溴化铵、四丁基氢氧化铵等）在水中电 离后，也形成了类似N＋H(CH2CH3)3的结 构N＋(CH2CH2CH2CH3)4 ，这种结构也 能有效的与Si－O－产生较强的静电作用 ，阻止氨基与硅羟基的接触，改善峰形。 而且它还有一个不同于三乙胺的显著特点 是，它在低波长范围的吸收比三乙胺弱。
烷基磺酸盐离子对试剂
• 流动相中加入辛烷磺酸钠等烷基磺酸 盐离子对试剂也能很好的改善峰形， 其作用机理与三乙胺和四丁基硫酸氢 铵颇为不同，是通过与样品分子的作 用来阻止样品分子与硅羟基的作用来 改善峰形。
缓冲盐
• 增加缓冲盐浓度可以增大流动相中的 离子强度，减少因静电的作用（有可 能存在于样品分子之间、也有可能存 在于样品分子与填料表面之间）引起 的前延。
加入三乙胺的注意事项
• 加入三乙胺改善峰形的时候，有两点需要注意： • 1）三乙胺的碱性很强，加入三乙胺后流动相的pH可能 超出色谱柱的使用范围，对色谱柱造成损伤。pH的改 变也会导致出峰时间的显著变化，可能引起的其它问题 ，建议流动相中加入三乙胺后回调至未加入前的pH值 。通常即使pH回调过后，由于三乙胺成为了固定相的 一部分，保留时间也有较大变化； • 2）三乙胺在210nm处有比较强的吸收，如果液相方法 中检测波长在210nm以下测定时需要谨慎使用。