动物组织各种固定液及优缺点

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固定液和组织的比例依据

固定液和组织的比例依据
固定液和组织的比例是根据所需固定的组织的大小和类型来确定的。

一般而言，常用的固定液和组织的比例是10:1，即10部分的固定液与1部分的组织混合。

然而，不同的组织类型可能需要不同的比例。

以下是一些常用的组织固定液比例：
1. 大体组织：对于较大的器官或动物组织，通常使用10%缓冲福尔马林溶液（10% buffered formalin）固定。

这意味着将10部分的缓冲福尔马林溶液和1部分的组织混合。

2. 细胞和细胞簇：对于大部分细胞和细胞簇的固定，一般使用4%缓冲福尔马林溶液。

这意味着将4部分的缓冲福尔马林溶液和1部分的细胞或细胞簇混合。

3. 骨骼组织：对于骨骼组织的固定，常用的固定液是10%缓冲福尔马林溶液或中性缓冲福尔马林溶液。

需要较长的固定时间。

除了以上常用的固定液比例外，还有其他特殊组织和细胞类型可能需要不同的固定液比例。

此外，固定时间和固定温度也会影响固定效果，需要根据具体实验要求进行调整。

因此，最好根据实验需要和参考相关文献确定合适的固定液和组织比例。

(七)固定液和保存液

(七)固定液和保存液）固定液和保存液定液固定动植物整体或它的一部分组织和气管等，能保存组织内细胞的形态、结构及其组成，尽量使它近于生活状液一般有防腐和保存的作用，分为单纯固定液和混合固定液。

单纯固定液中最重要的有乙醇、福尔马林、醋酸、苦味、重铬酸钾、升汞等，前两种固定液是中学生物实验室常用的。

单纯固定液的优点是简便，缺点是有一定的局限性到理想的固定要求。

混合固定液有几种不同的药液按一定的比例混合而成，使各自的优缺点相互补充，成为较完美。

这种固定液的制备虽比较麻烦，但是效果比较好。

常用的混合固定液是醋酸-酒精混合液、福尔马林-醋酸-酒精液固定液等。

的保存液大致跟固定液相同，主要是福尔马林、酒精、甘油以及由这些药物按比例配制成的各种混合液。

有时按特需要，再保存液中增加某些药品（如原生标本的保存液）。

尔马林马林在固定组织标本时杀菌能力强，所以防腐性强，渗透力大，固定得快。

永福尔马林固定精细的解剖标本时，要酒精、石炭酸等混合使用。

液常用的浓度是5～10%（根据材料的大小、性质和数量而定）。

液常用的浓度是5～10%。

用福尔马林作保存液，效果好且价格低廉。

制福尔马林溶液（固定液或保存液）时，应将37～40%的甲醛作为整个溶质来配。

例如配制5%福尔马林是取市售37～溶液5毫升跟95毫升蒸馏水混合。

实际上甲醛含量只有1.9～2%，这样的配法已成为一般实验室常用的惯例。

事项：福尔马林业在长期贮存中会产生蚁酸，可适量的加入碳酸钙（）或碳酸镁（）等碱性物质进行中和。

福尔马林业作为保存液会慢慢挥发而致使浓度降低，并且福尔马林液再保存中往往形成多聚甲醛，使浸液变浊，影所以，根据一定保存期的情况，可适当增加福尔马林液的浓度或更换新液，以防标本变坏。

其中如有白色沉淀物，使它溶解。

市售的福尔马林液常带有酸性，能腐蚀石灰质，因此，最好不用福尔马林液浸制有石灰质外壳的动物。

精（乙醇）也是常用的固定液，它有强烈的杀菌作用，对组织材料的渗透力较大，固定的快。

动物组织标本制作技术

动物组织标本制作技术第一章：取材及固定一、动物致死法1、麻醉法第二章可将浸有乙醚或氯仿的棉球连同小动物一起密封于钟罩或有盖玻璃瓶内进行麻醉；也可用4%戊巴比妥作静脉注射，剂量按动物体重1ml/kg；或用20%氨基甲酸乙脂作腹腔注射，剂量一般按动物体重5ml/kg。

2、空气栓塞法如家兔可用50ml注射器将空气由耳静脉推入，使动物很快死亡。

3、击头法如大、小鼠，可用重物击头后部或将其头后部猛撞桌沿，最好一击而死。

4、断头法青蛙、小鼠等小动物，可用剪刀剪去其头部，较大动物如兔子等，可用斧头迅速砍头致死。

5、股动脉放血法动物经吸入乙醚或氯仿稍麻醉后，立即切开股动脉放血。

注意：上述各法，应根据制片需要选用，如空气栓塞法不宜用作血管注射标本的制作；乙醚麻醉对丘脑下神经部分泌物染色标本不利；股动脉放血法有利于肠系膜铺片的制作。

二、取材注意事项1、材料新鲜最好是动物心脏还在跳动时取材，立即投入固定液内，脏器的上皮组织最易变质，应争取在死后半小时内处理完毕。

2、组织块力求小而薄组织块的厚度以不超过5毫米为宜，较理想的厚度为2毫米左右，主要目的是使固定液迅速而均匀的渗入组织块内部。

3、勿使组织块受挤压切取组织块时刀剪要锋利，不要来回挫动，夹取组织时切勿猛压，取材时组织块可稍大，以便固定后修块。

4、尽量保持组织的原有形态新鲜组织经固定后，或多或少产生收缩现象，为此可将组织展平，以尽可能维持原形。

5、要熟悉取材部位要能准确的按解剖部位取材，如胰腺，一般取胰岛较多的胰腺尾部；肺应取有细支气管及带有软骨片的小支气管部。

6、动物品种的选择如观察肥大细胞，以大、小鼠皮下组织及肠系膜、大网膜铺片为佳，欲观察运动终板，可用小鼠的肋间肌等。

7、选好组织块的切面熟悉一些器官组织成分安排，然后决定其切面的走向；如一长管状器官以横切面较好。

8、保持材料的清洁组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用生理盐水冲洗，然后再入固定液，但要注意防止组织损伤。

动物组织标本的固定

各种实验动物组织标本的固定、脱水、透明、浸蜡等问题的探讨病理科研工作的需要，不同种类实验动物的组织切片应用日益广泛。

和临床检验标本不同，组织标本多为柔软细小，含水分较多而纤维组织较少。

组织固定、脱水、透明、浸蜡方面的程序应有所不同以制备出高质量的动物病理组织切片。

如果不出现变异，最常见的问题是组织块变得很脆，易碎，切不成片，染片时易脱片。

国内外一些病理技术专著均无详细的数据可查（1~5）。

根据病理学科的发展趋向，有必要将其作为专题进行阐述，有利于实验病理工作的发展。

一固定10%的中性福马林最为常用，经济、简易。

组织块大小在1×1×0.15cm左右。

固定12~24小时。

固定时间过长，即使是多血脏器如肝、脾，也不会有福马林的色素产生，某些抗原性稳定的抗原物质如乙型肝炎表面抗原和核心抗原等，以10%中性福马林固定效果甚好，无需特殊处理即可获得良好的免疫染色。

Carnoy氏固定液对糖蛋白成分的抗原效果理想，此液适用于脱氧核糖核酸、核糖核酸的固定，只需要固定数小时，切勿超过24小时，否则将要溶去核糖核酸及脱氧核糖核酸，影响效果。

二脱水标本固定水洗后，组织内仍含有大量水分，这些水分除尽才有利于透明、浸蜡。

常用实验动物组织脱水的是酒精。

采用逐级提高酒精浓度以除去组织内的水分，脱水一般在室温下进行。

为了减少组织收缩，采用50%酒精或70%酒精开始→80%酒精→95%酒精Ⅰ→95%酒精Ⅱ→100%酒精Ⅰ→100%酒精Ⅱ。

所用的酒精的浓度尽量精确。

组织块在95%的酒精Ⅰ中逗留2~4小时。

我们常把组织在95%酒精Ⅱ中过夜，但在100%酒精Ⅰ及Ⅱ总时间不超过4小时。

这样处理组织都能将水分脱净，且不会出现硬化现象。

如脱水不尽即转入二甲苯，则影响二甲苯的浸入，蜡液则更不能渗入组织。

这样做出来的组织蜡块，切片时极难切出，即使勉强切出，不仅切片质量很差，而且易在染片时脱片。

此类组织蜡块因其中还有一定量的水分，石蜡切片后，蜡块的切面一经与空气接触，即干燥而呈凹形。

固定液总结

固定液总结什么是固定液？固定液是一种化学试剂，主要用于固定组织或细胞以保持其形态和结构。

固定液可以阻止生物材料的腐败和变性，防止其在处理和染色过程中失去结构和功能。

固定液在组织学、细胞学和病理学等领域中广泛应用，有助于观察和研究生物组织和细胞的形态、结构和功能。

常见的固定液福尔马林（Formalin）福尔马林是一种常见的固定液，广泛用于组织学研究和病理学诊断中。

它是一种含有37%甲醛的溶液，能够固定组织并保持其形态和结构。

福尔马林固定的组织可用于组织切片制备、免疫组化染色等进一步的实验。

福尔马林固定组织的优点是固定效果好、保存时间长，能够保存大部分的组织结构和抗原表达情况。

然而，福尔马林固定液会对细胞核和某些蛋白质产生交联作用，可能导致染色效果差，同时还有潜在的致癌风险，因此在使用福尔马林固定液时需要注意安全操作和废液处理。

乙醛（Glutaraldehyde）乙醛是一种常用的电子显微镜固定液，主要用于固定细胞和亚细胞结构以进行电子显微镜观察。

与福尔马林不同，乙醛固定液能够更好地保持细胞和细胞器的形态和结构，有利于观察细胞内部的细节。

乙醛固定液的使用需要注意浓度和固定时间的控制，过高的浓度和过长的固定时间可能会导致组织和细胞的变性和损伤。

此外，乙醛固定液对某些酶和蛋白质具有灭活作用，因此在使用乙醛固定液时需要根据实验需要选择合适的条件。

缓冲盐水（Buffered Saline）缓冲盐水是一种用于固定组织和细胞的温和固定液。

它通常由含有适当浓度的盐水和缓冲剂混合而成，能够保持组织和细胞的形态和结构，并且对某些抗原和酶具有较好的保存效果。

缓冲盐水固定液的优点是温和、安全、易于制备和使用，适用于一些对固定条件要求较宽松的实验。

然而，由于其固定效果不如福尔马林和乙醛固定液，保存时间较短，因此在实验设计时需要根据实验目的和需求来选择合适的固定液。

固定液的使用注意事项使用固定液需要注意以下几个方面：1.安全操作：固定液常常含有有害化学物质，使用时需要佩戴防护手套、口罩等个人防护装备，避免直接接触和吸入液体或气体，注意实验室通风。

固定液

步骤：
1．经过固定的组织可保持在10%福尔马林或70%乙醇中。
2．染色前脱掉组织中的苦味酸①自来水冲洗②50%乙醇③或70%乙醇饱和碳酸锂
乙醇BOUIN’S液（DUBOSCQ-BRAZIL FLUID）
用途：用于固定肾活检，组织学制备固定液。
试剂：
乙醇Bouin’s贮存液:
80%乙醇750.0ml
甲醛300.0ml
步骤：
1．活检标本要立即放入Hollande’s固定剂中，标本容器上注明时间。
2．标本完成固定后保持在70%乙醇中。
3．不能让Hollande’s液固定的标本与磷酸缓冲福尔马林接触，否则会出现蓝色沉淀。
ORTH’S液
用途：用于证实肾上腺胞浆中嗜络微粒，这种证明可能对嗜络细胞瘤的诊断很重要。不是一种好的多用途的固定剂。
苦味酸5.0g
充分混合，液体稳定性2年，标明配制日期。
工作液：
贮存液70.0ml14.0ml
醋酸5.0ml10.0ml
使用前加醋酸。
固定时间：1～4小时。
步骤：
1．把新鲜组织标本放进乙醇Bouin’s工作液中。
2．充分固定后把组织移到70%的乙醇中。
HOLLANDE’S固定液
用途：作为胃肠和前列腺活检基本固定剂，这种固定剂让H.E染色更清晰，它“软化”组织避免切片脆裂。苦味酸会溶解掉红细胞。
ZENKER’S液
用途：Zenker’s液是一种核固定剂。该液是细胞学及病理学常用的固定剂，对细胞核固定最好，最适合于造血和网状内皮组织的固定。也常作为三色染色的组织固定剂，在三色染色中还作为媒染剂使用。但对于含血量较多的组织标本尽量不要选Zenker’s液固定。
试剂：
Zenker’s贮备液：

一些固定液及方法介绍

一些固定液及方法介绍前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。

在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。

1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）试剂：多聚甲醛40g0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1N NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。

该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。

另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。

2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠试剂：A液：多聚甲醛40g蒸馏水400mlB液：Na2HPO4•2H2O16.88g蒸馏水300mlC液：NaOH 3.86g蒸馏水200m配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。

注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。

B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1N NaOH或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。

该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。

该固定剂较温和，适于组织的长期保存。

组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。

3．Bouin's液及改良Bouin's液试剂：饱和苦味酸40%甲醛250ml冰醋酸50ml配制方法：先将饱苦味酸过滤，加入甲醛（有沉淀者禁用），最后加入冰醋酸，混合后存于4℃冰箱中备用。

常用固定液的性质、用途

常用固定液的性质、用途和配置1．单一固定液的性质和用途（1）乙醇（C2H5OH）（ethylalcohol）：又名酒精，可沉淀白蛋白、球蛋白、核蛋白，后者易溶于水，所以经酒精固定的标本对细胞核染色不良。

酒精可溶解脂肪、类脂体，所以不能用酒精固定脂肪。

酒精可沉淀肝糖，但仍可溶解于水，因此肝糖经酒精固定后不能在低于70％酒精中保存。

单独固定使用酒精的浓度应为95—100％。

无水酒精渗透力较差，并且能使组织收缩，在与醋酸、氯仿混合使用时，可增强它们的穿透力。

酒精除固定作用外，还具有硬化和脱水的作用，固定后的组织可保存于70％酒精中，所以酒精在制片过程中用途很大。

无水乙醇容易挥发，又容易吸收空气中的水分，所以瓶盖必须塞紧，为了吸去其中水分，最好在无水乙醇瓶内放入少量无水硫酸铜粉末。

酒精是一种还原剂，不能与重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合使用。

（2）甲醛（HCHO）（formeldehyde）：是一种气体，溶于水成为甲醛水溶液或称福尔马林，一般使用浓度为10％福尔马林（formalin）液，其配法是取市售的甲醛液10ml 与90ml 蒸馏水混合即可，实际上其含量只有4％甲醛。

这样的配法已成为一般实验室常用的惯例。

甲醛不能沉淀白蛋白及核蛋白，但能与蛋白质化合。

它是一种应用广泛，使用简单的固定液，具有穿透力强、固定均匀、组织收缩小、硬度适当，适用于一般器官组织的固定及保存。

尤其对脂肪、神经组织固定效果较好。

更适于病理组织的制片及大体积标本的保存，一般组织需固定24 小时以上，固定后的组织可移入50％酒精中逐步脱水。

甲醛是一种强还原剂，不能与铬酸、重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合，因极易被氧化为甲酸。

在配混合固定液时，如海利氏液等需临用前再加入，24 小时后失效。

甲醛由于长期贮存，特别是低温气候，容易产生多聚甲醛，即溶液中的白色沉淀，在高温下又成为甲醛。

不纯的甲醛易产生甲酸，使溶液变为酸性，影响核的染色。

所以在备用的福尔马林中加入小量的醋酸钙、碳酸镁或大理石作为中和剂。

组织固定原理

动物组织的固定原理及固定液在组织病理学中，不管是组织切片乃至电镜还是大体标本的保存，都必须进行及时的适当的和有效的固定。

组织只有经过固定，才能完成随后的一系列的制作，直至切片的最后完成。

（一）、固定的作用组织经一系列的处理后，就必须进行固定，当然有的组织是先固定，再进行处理，然后再固定。

固定的作用，从组织学的角度其简单的定义是，保持细胞、组织的固有形态和结构，使之尽量保持细胞、组织的固有形态和结构，而从免疫组化技术的角度，固定的作用不仅是使细胞内蛋白质凝固，尽量减少或终止外源性酶和内源性酶的反应；防止细胞的自溶，以免使抗原扩散至组织间质；以保持组织的固有形态和结构；更重要的是保持组织或细胞的抗原性，不但要使抗原不导致失活，而且不使抗原发生弥散的现象，才能在免疫组化染色时，不产生过深的背景，影响对阳性物的判断。

（二）固定的目的1、能防止细菌的腐蚀和组织的自溶。

细菌无处不存在，它们随时都可污染腐蚀未经处理的组织。

固定液可以固定任何蛋白质，凡有生命的东西，都由蛋白质组成，蛋白质被固定，生命就停止，细菌也就失去了活力。

另者，在日常生活中，人们常可碰到这样的问题，一块肉不经处理放了几天后就会变质，这是为什么呢？除了细菌参与外，其本身也是很重要的。

因为组织离体后，供应这此组织的血液随之消失，细胞缺氧，细胞内溶酶体膜的结构受到破坏，破坏后释放出溶酶体酶，日常生活中常碰到的肉变质，就是细菌污染加组织自溶的结果。

2、保存细胞固有的物质，能凝固或沉淀细胞内或组织液，糖元等，使细胞或组织基本上保持与生活时的物质一样。

细胞的固有物质，即细胞核、内质网、线粒体、高尔基器、溶酶体、过氧体，细胞骨架，组织液，抗原、糖元等。

这些物质，如果不将其及时固定，是很容易丧失的，尤其是溶酶体，很容易受到破坏，因此应特别小心。

3、使组织硬化，便于切块。

刚离体的组织，除了胃组织以外，都是柔软的组织，尤其是胃肠道的组织，如果在没有固定时就取材，效果就很差，不是取材不规整，就是厚薄不均，粘膜和肌层很容易分开，因此，要取得规整标致的材料，就必须将组织彻底固定，再行取材。

carnoy固定液的作用原理

carnoy固定液的作用原理Carnoy固定液是一种常用于生物学和组织学实验中的固定剂。

它的作用原理是通过改变细胞和组织的结构，使其保持原始形态和结构，防止其在实验过程中的变形和腐败。

下面将详细介绍Carnoy固定液的作用原理及其在实验中的应用。

Carnoy固定液由乙酸、甲酸和乙醇组成，其具有较强的固定作用。

乙酸和甲酸能够使细胞和组织中的蛋白质发生交联反应，形成稳定的蛋白质网状结构，从而固定细胞和组织的形态。

乙醇则能够使细胞和组织中的脂质发生沉淀，进一步增强固定效果。

在实验中，Carnoy固定液通常用于固定细胞和组织样品，以便进行后续的染色、显微观察和分析。

固定液的选择对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。

Carnoy固定液具有以下几个优点，使其成为常用的固定剂之一：1. 优异的固定效果：Carnoy固定液能够迅速穿透细胞和组织，将其内部的结构进行有效地固定，保持其原始形态和结构。

相比其他固定液，Carnoy固定液具有更高的固定效率和更好的保留细胞和组织结构的能力。

2. 快速固定速度：Carnoy固定液具有较快的固定速度，通常只需数分钟至十几分钟即可完成固定。

这对于需要迅速进行实验的研究人员来说非常重要，能够节省宝贵的时间。

3. 适用于多种实验：Carnoy固定液适用于多种细胞和组织的固定，包括动物组织、植物组织和微生物等。

无论是常规染色、免疫组化、原位杂交还是电镜等实验方法，Carnoy固定液都能够提供良好的固定效果。

4. 保存时间长：Carnoy固定液固定的细胞和组织样品可以保存较长时间，不易发生变形和腐败。

这对于需要进行长期保存或远程运输的样品非常重要，能够保证实验结果的可靠性。

尽管Carnoy固定液具有许多优点，但在实际应用中也存在一些注意事项。

首先，Carnoy固定液具有较强的毒性，使用时需要注意安全。

其次，不同类型的细胞和组织对Carnoy固定液的适应性不同，需要根据实验的需要选择合适的固定液。

组织固定液的类型

组织固定液的类型
组织固定液的类型有很多，主要包括以下几种：
1.福尔马林固定液：福尔马林是一种广泛使用的固定剂，可以固定细胞和组织的结构，同时起到杀菌的作用。

2.酒精固定液：酒精固定液是一种常用的组织固定液。

酒精具有良好的杀菌作用，可以使组织保持良好的形态结构。

3.缓冲福尔马林固定液：缓冲福尔马林固定液是在福尔马林固定液中添加缓冲剂，使其pH值接近细胞内液，更适合某些特定的实验和研究。

4.寡聚肽固定液：寡聚肽固定液是一种对蛋白质固定效果较好的固定液，可以保持细胞和组织的蛋白质结构。

5.甲醛固定液：甲醛是一种常用的固定剂，可以使细胞和组织固定并保持其形态结构。

它有很好的杀菌作用，并且可以使细胞和组织保持较好的染色性能。

以上是几种常见的组织固定液类型，不同类型的固定液具有不同的特点和适用范围，根据不同的实验目的和要求选择合适的固定液非常重要。

固定液的分类和选择原则

固定液的分类和选择原则以固定液的分类和选择原则为标题，我们来探讨一下固定液的相关知识。

一、固定液的分类固定液是一种用于固定生物组织或细胞的溶液，根据不同的固定目的和化学成分，可以将固定液分为以下几类：1. 醇类固定液：如乙醇、甲醇等。

这类固定液常用于快速固定和保存细胞和组织的形态结构，同时具有很好的保护作用，适用于常规组织学检查。

2. 酸类固定液：如酸性酒精、酸性硫酸铜等。

这类固定液主要用于固定某些特定的细胞或组织结构，例如染色体或胶原纤维等。

酸类固定液对脂质物质的固定效果较差，因此不适用于脂质含量较高的样本。

3. 中性缓冲液：如PBS（磷酸盐缓冲液）、Hank's液等。

这类固定液主要用于固定细胞和组织的生物学活性，能够较好地保持细胞和组织的形态和功能，适用于免疫组化和分子生物学实验。

4. 有机溶剂固定液：如乙酸、乙酸乙酯等。

这类固定液在固定过程中对细胞和组织的脂质物质和溶胀性物质具有较好的固定效果，适用于脂质或溶胀性物质含量较高的样本。

二、固定液的选择原则在选择固定液时，我们需要考虑以下几个原则：1. 根据固定目的选择：不同的实验目的需要选择不同的固定液。

例如，要观察细胞形态结构，可以选择醇类固定液；要进行免疫组化实验，可以选择中性缓冲液。

2. 根据样本性质选择：不同的样本性质对固定液的选择有所差异。

例如，脂质含量较高的样本适合选择有机溶剂固定液；而含有胶原纤维的样本可以选择酸类固定液。

3. 考虑固定液的渗透性：固定液的渗透性对于固定效果至关重要。

一般来说，较强的渗透性可以提高固定效果，但同时也可能对细胞或组织的形态和功能产生一定影响。

因此，需要根据具体实验要求选择合适的固定液。

4. 考虑固定液的毒性和安全性：固定液中可能含有一些有毒物质，因此在选择固定液时，需要考虑其对实验人员和环境的安全性。

同时，在实验过程中也要注意安全操作，避免接触到固定液。

总结：固定液的分类和选择原则是进行组织学和细胞学研究中非常重要的一环。

各种实验动物组织标本的固定

各种实验动物组织标本的固定、脱水、透明、浸蜡等问题的探讨病理科研工作的需要，不同种类实验动物的组织切片应用日益广泛。

和临床检验标本不同，组织标本多为柔软细小，含水分较多而纤维组织较少。

组织固定、脱水、透明、浸蜡方面的程序应有所不同以制备出高质量的动物病理组织切片。

如果不出现变异，最常见的问题是组织块变得很脆，易碎，切不成片，染片时易脱片。

国内外一些病理技术专著均无详细的数据可查（1~5）。

根据病理学科的发展趋向，有必要将其作为专题进行阐述，有利于实验病理工作的发展。

一固定10%的中性福马林最为常用，经济、简易。

组织块大小在1×1×0.15cm左右。

固定12~24小时。

二脱水标本固定水洗后，组织内仍含有大量水分，这些水分除尽才有利于透明、浸蜡。

常用实验动物组织脱水的是酒精。

采用逐级提高酒精浓度以除去组织内的水分，脱水一般在室温下进行。

为了减少组织收缩，采用50%酒精或70%酒精开始→80%酒精→95%酒精Ⅰ→95%酒精Ⅱ→100%酒精Ⅰ→100%酒精Ⅱ。

所用的酒精的浓度尽量精确。

组织块在95%的酒精Ⅰ中逗留2~4小时。

我们常把组织在95%酒精Ⅱ中过夜，但在100%酒精Ⅰ及Ⅱ总时间不超过4小时。

这样处理组织都能将水分脱净，且不会出现硬化现象。

如脱水不尽即转入二甲苯，则影响二甲苯的浸入，蜡液则更不能渗入组织。

这样做出来的组织蜡块，切片时极难切出，即使勉强切出，不仅切片质量很差，而且易在染片时脱片。

此类组织蜡块因其中还有一定量的水分，石蜡切片后，蜡块的切面一经与空气接触，即干燥而呈凹形。

卡诺氏液

北京雷根生物技术有限公司
卡诺氏液
简介：
卡诺氏液、Carn oy 固定液(Carnoy's Fluid)又称卡诺氏固定液，主要由乙醇、乙酸等混合而成。

适用于一般动植物组织和细胞的固定，常用于动植物压片及石蜡切片等，有极快的渗透力，固定最多不超24h 。

其特点是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。

推荐用于RNA 和DNA 染色的组织固定，亦可用于糖原染色的组织固定，能够使糖原呈细微颗粒状。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、一般小块组织固定30～40min 。

2、稍大块组织2～4h 。

3、如果组织块大，可适当延长固定时间，但不宜超过24h 。

注意事项：
1、 Carnoy 固定液对人体有一定的损害，请小心操作。

不宜用于固定脂类染色的组织。

2、组织取材的厚度不同，固定时间也不同。

3、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。

4、取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

编号名称 DF0019 DF0019 Storage Carnoy Fluid 100ml 500ml RT 避光
使用说明书 1份。

大体标本常用的固定液

大体标本常用的固定液
固定液是生物组织或细胞学研究中不可或缺的一部分，它可以帮助保存和稳定组织和细胞，使它们能够在后续的样品处理和分析中保持完整。

一般来说，固定液包括多种化学成分，不同的固定液适用于不同的组织和细胞类型。

以下是最常用的固定液：
1. 10% 福尔马林（Formaldehyde）
福尔马林是最常用的固定液之一，它可以作为一种信标分子，标记细胞蛋白。

福尔马林具有良好的渗透性，能够迅速渗透到组织中，提供良好的固定效果。

2. 十二烷基硫酸钠-10%EDTA浸液（SDS-EDTA Buffer）
SDS-EDTA浸液是常用的细胞质微管结构和线粒体固定液。

该固定液是一种离子池化学固定液，能够特异性地固定蛋白质，适用于研究细胞骨架和线粒体。

3. Bouin液
Bouin液是一种精细的组织学固定液，不过使用比较少。

该固定液包括福尔马林、酯化醛和乙酸，可以用于特异性地固定肝脏和其他含脂肪的组织。

4. Carnoy液
Carnoy液是一种比较强的组织学固定液，由95%的乙醇、氯仿和冰醋酸组成。

该固定液可以用于稳定核质和细胞膜，适用于肝脏和小肠等组织。

5. 4%多聚甲醛（Paraformaldehyde）
4%多聚甲醛是一种可以在室温下固定细胞和组织的固定液，可以优先固定蛋白质和核酸。

多聚甲醛很便宜，但其固定效果不及福尔马林。

需要注意的是，不同的固定液会对研究结果产生不同的影响。

因此，选择固定液前需考虑组织或细胞类型、后续的实验目的和预期结果等因素，才能选择最合适的固定液。

同时，固定液使用时需要注意安全，防止吸入和接触固定液。

动物组织各种固定液及优缺点

重铬酸钾 25G 升汞 50G 蒸馏水 1000ml 冰醋酸 50ml
50ml的冰醋酸，即可使用。应用该固定液固定的组织，一般不要超过24h，取出组织，流水冲冼12小时以上，然后保存于75%80%的酒精中，在切片染色前，必须用碘除去汞盐的沉
着。应用该固定液的组织，细胞核及细胞浆染色十分
清晰，特别是要显示骨骼肌的横纹时，应用本液可获
，还有Bouin氏液和Carnoy氏液等。
重铬酸钾: 它的优点是：1、
能固定脂肪及类脂物。2、
为髓鞘及嗜铬细胞优良的媒染剂。3、
可配成多种的混合固定液足之处有：1、
不能沉淀蛋白质，它必须和醋酸配成混合固定液，方能发挥作用，产生铬酸，沉淀蛋白质。2、
具有毒性及产生高温。在配制液体时，如清洗剂，当加入硫酸时，可产生很高的温度，并挥发出刺鼻的气体，应特
可与其它试剂配成多种的混合固定液，加快固定，它的缺点是：1、
可溶解脂类物质，凡要证明组织是否含有脂类和类脂物时，切不能用含有酒精的固定液去固定组织，也不能用石蜡
切片。2、
对组织收缩较大，不宜作单纯固定液。3、
渗透力不强。当用酒精固定组织时，组织表面很快就被固定，并形成了一层蛋白膜，这层膜可阻挡固定液向里渗透
4 Bouin氏固定液
苦味酸饱和水溶液 75ml 甲醛 2 ml 冰醋酸 5 ml
该固定液是当今流行的固定液,因它对组织固定较好, 损伤较少,因对其后的各方面研究都较好,尤其是对免疫组化的染色。
这是一种最简单的固定液，适合于边远地区携带的固定液，但由于它的单一性，因此，只要有条件的单位都不要求使用这种固定液。先将Nacl溶于水，再加入甲醛。这也是一种较为简单的固定液，但由于加入Nacl，它是一种重金属盐物质，加入了它可促进和改善染色，增加染色的强度该固定液中的冰醋酸，对胶原纤维等组织有膨胀作用。而甲醛对组织有收缩作用。两种试剂的混合使用，用以抵消彼此间的副作用。使组织固定达到优良的固定水平

固定液的种类和功能

固定液的种类和功能1．单纯固定液(1)4％中性福尔马林固定液：最常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。

一般无特殊要求的病理标本均适用。

尤其值得注意的是，中性福尔马林是以pH7.2～7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％福尔马林固定液。

此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不超过一个月。

福尔马林(40%)100ml无水磷酸氢二钠6.5g磷酸二氢钠4.0g蒸馏水900ml(2)乙醇固定液：使用时以80％～95％的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性福尔马林，故常用于有核酸操作的实验或检查，如果用于证明尿酸结晶和保存糖原，可用100%乙醇固定组织。

(3)4％的多聚福尔马林：主要用于培养细胞的固定。

2．混合固定液(1)乙醇一福尔马林(乙醇－福尔马林，AF)固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。

该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95％乙醇脱水。

福尔马林(40％)100ml95％乙醇900ml(2)B5(醋酸钠一升汞一福尔马林)固定液：多用于固定淋巴组织。

染色前应进行脱汞沉淀处理。

无水醋酸钠1.25g升汞6.0g蒸馏水90ml使用前加入福尔马林10ml(3)Bouin固定液：特别适用于睾丸活检组织的固定。

Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。

需现配现用。

饱和苦味酸水溶液(约1.22%)75ml福尔马林25ml冰醋酸5ml(4)Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，特别适合于固定外膜致密的组织，亦适用于糖原及尼氏小体的固定。

无水乙醇60ml氯仿30ml冰醋酸10ml(5)Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清晰，但成本较昂贵且需特殊处理汞。

该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效。

升汞5.0g重铬酸钾2.5g硫酸钠1.0g蒸馏水(加至)100ml。

卡诺氏液固定液及其作用

卡诺⽒液固定液及其作⽤疑难问题：减数分裂的观察⼀般要⽤卡诺⽒液固定，那么有丝分裂的观察到底⽤不⽤卡诺⽒液固定？卡诺⽒液固定有利于染⾊和观察，但由于有丝分裂观察实验已经⽤了解离液，有酒精成分（浙科版只⽤盐酸作解离液），也起到固定的作⽤，所以，⼀般情况下，有丝分裂省去了卡诺⽒液固定。

⼀、卡诺⽒液固定和解离液1、卡诺⽒液固定卡诺⽒固定液适⽤于⼀般植物组织和细胞的固定，常⽤于根尖，花药压⽚及⼦房⽯蜡切⽚等。

有极快的渗透⼒，根尖材料固定15—20min即可，花药则需1h左右，此液固定最多不超过24h，固定后⽤95%酒精冲洗⾄不含冰醋酸为⽌；如果材料不马上⽤，需转⼊70%酒精中保存。

固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染⾊体结构的完整性，还要能够增强染⾊体的嗜碱性，达到优良染⾊效果。

2、解离液常⽤于根尖等细胞的涂⽚，它能使细胞壁中层（果胶质）溶解，⽽使细胞分开。

配⽅酒精（体积分数95%) 1份，浓盐酸（质量分数15%) 1 份，⼆者混合即成（浙科版教材只⽤10%盐酸）。

盐酸⽔解时间对染⾊效果影响很⼤，⽔解时间短，易着⾊但较难压⽚；⽔解时间长，染⾊慢⽽⾊淡；超过20min或⽔解温度过⾼，往往染⾊极淡，或染不上⾊。

各种材料最合适的时间有差别，⼀般来说，⼤染⾊体材料⽔解时间可较长，⼩染⾊体材料宜短。

解离就是⽤要药液使组织的细胞相互分离开来，便于最后制⽚时能被压成⼀薄层进⾏显微观察。

解离液中酒精的作⽤是迅速杀死细胞，固定细胞的分裂相；⽽盐酸能溶解果胶，从⽽使洋葱细胞的细胞壁软化，并使细胞间的中胶层物质溶解，从⽽达到分离细胞的⽬的。

另外解离时间不宜过短，否则根尖未充分解离，压⽚时细胞分不开；但⼜不能太长，否则使根尖过分酥软，⽆法进⾏漂洗和染⾊，且染⾊体成分被破坏。

这⼀步是实验成功与否的关键。

漂洗的⽬的是去除根中多余的解离液，特别是盐酸，防⽌解离过度，破坏染⾊体结构。

但观察动物细胞有丝分裂中，不能⽤盐酸和酒精来“解离”动物组织。