经典课件：动物细胞与组织培养技术

【学习课件】第一章动物细胞与组织培养

human sperm contacting a hamster egg.
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人上皮细胞培养7 d
▪尿路上皮细胞
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小鼠胚胎成纤维细胞
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体外培养的间充质干细胞
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黑色素细胞
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第二节动物细胞与组织培养基本概念
一分类:
►细胞株：细胞系经过克隆或其他方法而得的单一类型的细胞群体。
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二发展历史
▪ 动物细胞组织培养的奠基人是美国生物学家哈里森，1907年盖玻片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法。
▪ 1923年，法国学者卡勒尔（Carrel）设计了卡氏瓶培养法，扩大了组织生存空间。 1951年，厄尔（Earle）发明了体外培养动物细胞的人工合成培养基。
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▪
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6
血液凝块
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7
▪
免疫细胞
Ｔ细胞与Ｂ细胞巨噬细胞
白血球Ｔ细胞与Ｂ细胞源自巨噬细胞精选ppt课件
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纤灭癌细胞
树突细胞:
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嗜中性粒细胞吞噬志贺杆菌
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巨核细胞
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11
骨细胞
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12
成骨细胞
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13
破骨细胞(紫色)
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脑部细胞癌变
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▪ 由于营养过剩导致的细胞和由此导致死亡
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病死的肌细胞
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动物细胞工程PPT课件

课堂反馈练习
1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是 --------------------（ A ）
A．细胞系 C．原代细胞 B．细胞株 D．传代细胞
讨论
1、动物细胞培养的原理是什么？
2、从动物机体中要取出哪些相关组织？并解释原因。
3、组织分散成单个细胞的方法是什么？其理论依据是什么？
4、动物细胞体外培养需要满足哪些条件？
阅读课本观察图片，简述动物细胞培养的基本过程
2、过程
动物胚胎或幼龄动胰蛋白酶单个细胞细胞制成悬浮物的组织、器官剪碎液细胞系原细细胞株部分细胞“癌变”，代
如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？
随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖
细胞株细胞系遗传物质改变
细胞悬浮液
10代细胞
50代细胞
传代培养
无限传代
原代培养
多数组织细胞固定在表面生长和分裂。
思考讨论
1.动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因。
细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物则相反。所以，一般来说幼年动物的组织细胞比老年动物的组织细胞易于培养。同样，组织细胞的分化程度越低，则增殖能力越强，所以更容易培养。
问题： 1、培养基的类型
（1）天然培养基：营养价值高，成分复杂（2）合成培养基：成分明确，便于控制试验条件
2、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组织培养基有何独特之处？
主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基（动物体细胞大都生活在液体的环境） 2、成分中有动物血清等

动物细胞与组织培养技术

2、pH：最适为7.2～7.4

大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4,偏离这一范围对细胞培养将
产生有害的影响.但细胞耐酸性比耐碱性大一些,在偏酸环境中更利于细胞生长.但有一些细胞也喜欢偏碱环境中生长,如成纤维细胞最适合pH是7.4-7.6，每种细胞都有其最适pH值.

当PH低于6或高于7.6时的生长会受到影响，甚至死亡。
这种细胞的形态特点：胞体始终为球形。优点：生存空间大，培养效率高，利于大量生产，与培养基充分接触无需消化传代，易于收获细胞。缺点是不如贴附生长型观察方便，而且并非所有的培养细胞都能悬浮生长。 �� 贴壁细胞经悬浮适应后也可以长期悬浮培养
＊实际情况下，所培养的细胞并不一定呈现
某种典型的形态，能影响细胞形态的因素很多，细胞形态学特征仅是对培养物判断或识别的一种参考性指标，如果想明确某一培养物的确切类型，必须借助于更为特异的鉴定方法。
培养物中发现有自发的融合细胞。
1962年，冈田善雄又发现了已灭活的仙台病毒可
以诱发体内艾氏腹水瘤细胞和非恶性细胞融合。且融合细胞染色体丢失，恶性特征受到抑制。
四、动物细胞的体外培养一般条件
1、恒定的温度:37 ℃

维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。人体细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃，偏离这一温度范围，细胞的正常代谢会受到影响，甚至死亡。培养细胞对低温的耐受力较对高温强，温度上升不超过39℃时，细胞代谢与温度成正比；人体细胞在39-40℃1小时，即能受到一定损伤，但仍有可能恢复；在40-41℃1小时，细胞会普遍受到损伤，仅小半数有可能恢复； 41-42℃1小时，细胞受到严重损伤，大部分细胞死亡，个别细胞仍有恢复可能；当温度在43℃以上1小时，细胞全部死亡。低温下会使细胞代谢速率降低

动物细胞工程—动物细胞与组织培养课件教学课件

细胞采集与分离
选择适宜的供体，采用适当的分离方法，获得具有良好增殖和分化能力的细胞。
细胞培养
在适宜的条件下，进行细胞传代培养，保持细胞的正常生长和分化。
生物材料制备与加工
选择合适的生物材料作为细胞外基质，进行制备和加工，为细胞提供适宜的生长环境。
生物反应器设计与优化
根据细胞生长和分化的需要，设计并优化生物反应器，提供适宜的微环境。
细胞培养皿、离心管等实验器材。
实验环境
02
确保实验室内无菌、无尘、恒温、恒湿，准备好消毒设施和防
护用具。
实验计划
03
制定详细的实验计划，包括实验目的、操作流程、时间安排等
，以确保实验的顺利进行。
实验操作步骤与规范
细胞原代培养
从动物组织中分离细胞，并进行原代培养。
细胞染色与观察
对细胞进行染色，以便观察细胞的形态和结构。
农业领域
环境保护领域
动物细胞工程可以用于培育优良的农业动物品种，提高农业生产效率和经济效益。
动物细胞工程可以用于研究和开发具有净化环境、降解污染物等功能的细胞系或细胞产物，为环境保护提供新的解决方案。
02
动物细胞培养技术
动物细胞培养的基本原理
1 2
细胞增殖
动物细胞具有增殖能力，通过分裂产生新的细胞，以维持生物体的生长、修复和替换损伤细胞。
组织构建与移植
将培养好的细胞、生物材料和生长因子等组合在一起，构建成具有特定形态和功能的组织，并移植到体内以实现组织的修复和再生。
动物组织工程的注意事项的实施需要严格遵守相关的伦理法规和质量控制标准；在操作过程中要注意避免交叉感染和污染；对于细胞的来源和供体的选择要符合相关规定，确保细胞的适宜性和安全性。

动物细胞工程动物细胞与组织培养课件

动物细胞工程动物细胞与组织培养课件汇报人：2024-01-10•动物细胞工程概述•动物细胞培养技术•动物细胞与组织的体外培养目录•动物细胞工程的应用案例•展望与挑战01动物细胞工程概述定义与特点定义动物细胞工程是以动物细胞为研究对象，通过细胞培养、细胞融合、基因转移等技术手段，实现动物细胞和组织的体外培养、繁殖和生产，以及动物疾病治疗和生物医学研究的技术。

特点动物细胞工程具有高度的技术性、复杂性和应用性，涉及多个学科领域，如生物学、医学、生物工程等。

它能够实现动物细胞的体外大规模培养，生产出大量的生物制品，如疫苗、单克隆抗体等，为人类疾病预防和治疗提供重要的技术支持。

利用动物细胞大规模培养技术，生产出大量的疫苗、单克隆抗体等生物制品，用于疾病的预防和治疗。

生物制品生产通过动物细胞培养和基因工程技术，实现新药的筛选和开发，提高药物研发的效率和成功率。

药物筛选与开发利用动物细胞工程技术，体外培养出人体组织和器官，用于移植和修复人体损伤的组织和器官。

组织工程通过动物细胞培养和基因工程技术，建立各种疾病模型，用于疾病的发病机制研究和药物筛选。

疾病模型建立动物细胞工程的应用德国科学家Rudolf Virchow首次提出“细胞来源于细胞”的著名论断，为动物细胞工程的发展奠定了基础。

1907年美国科学家Graham和Milstein首次成功实现了哺乳动物细胞的体外培养，开启了动物细胞工程的新篇章。

1958年美国科学家Kohler和Milstein首次成功制备出了单克隆抗体，为动物细胞工程在生物制品生产领域的应用奠定了基础。

1975年随着基因工程技术的发展和应用，动物细胞工程进入了一个新的发展阶段，实现了基因转移和基因编辑等先进技术的应用。

1990年代动物细胞工程的发展历程02动物细胞培养技术细胞生存和增殖条件动物细胞培养需要提供适宜的温度、湿度、pH值、营养物质等条件，以维持细胞的生存和增殖。

细胞贴壁与生长动物细胞在培养过程中需要贴附在培养器皿的表面才能生长，因此需要选择适当的细胞培养器皿和贴壁介质。

第十一章动物细胞与组织培养的基础PPT课件

原代培养(primary culture)
将机体取出的细胞或组织进行实效（立即）培养的过程，又称初培养。初培养的细胞大约增殖10代左右，这样的细胞称为原代细胞。
传代培养(passage culture)
指从原代培养的细胞继续转接培养，又称继代培养。
二、发展历史
开始：1907，Harrison用蝌蚪的髓管放于一滴淋巴液内，培养出神经元
培养板，冻存管
超净工作台
纯化水装置
天平真空泵
培养器皿
金属器材
辅助器材
• 加样器 • 支架 • 离心管 • 冷冻管
滤器
CO2培养箱
CO2培养箱设定的条件为37 ℃ ，5％ CO2 。使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题：
①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证通气。
培养细胞一代生长过程
–1）游离期 –2）指数生长
期 –3）稳定期 –4）衰退期
5、原代培养与传代培养技术
•贴壁细胞原代培养：从新鲜供体取得组织细胞后在体外进行首次培养，一般持续1－4周。将分离所得的细胞沉淀，按实验要求，用培养液配制成需要浓度的细胞悬液，接种培养瓶内，水平放置， 37度，进行培养，1—2天换液一次，大部可见细胞贴壁生长。
三、动物细胞的体外培养生长特性
• 根据形态特征分类
• 贴壁型
• 上皮细胞型、 • 成纤维细胞型、 • 游走细胞型、 • 多形细胞形。
• 悬浮型
• 悬浮在溶液中
细胞贴壁过程
接触抑制
定义：细胞从接种到长满底物表面后，由于细胞繁殖数量增多相互接触后，不再增加。
四、动物细胞、组织培养的基本技术
酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。

动物细胞与组织培养

动物细胞培养不能最终培养成动物体
传代培养
动物细胞生长特性：
细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，
称为细胞贴壁。要求：
培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。细胞的接触抑制：
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
细胞贴壁过程
3.有关概念:
注意： ①概念理解：原代培养、传代培养、细胞株、细胞系 ②胰蛋白酶处理的原因、目的和注意事项 ③动物细胞培养和植物组织培养的区别
思考与探究：
如何用细胞培养技术，为烧伤病人植皮？
取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植
课堂反馈练习
1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是 --------------------（A ）
多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的知识，认为体外培养细胞应该模拟内环境的哪些内容呢？
动物细胞培养条件：
1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）
2、必须的营养物质（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、核酸、嘌呤、嘧啶、激素、生长因子、动物血清等。）
3、适宜的温度 36.5+（-）0.5度
包权
人书友圈7.三端同步
动物细胞培养
1、概念（人教版）动物细胞培养就是从动物机体中取出
相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。
讨论
1、动物细胞培养的原理是什么？
2、从动物机体中要取出哪些相关组织？并解释原因。
3、组织分散成单个细胞的方法是什么？其理论依据是什么？
D．培养至50代后继续传代的细胞是细胞株

《动物细胞组织培养》课件

低温保存
将细胞置于-196℃的液氮中长时间保存。
细胞复苏
从液氮中取出细胞，快速解冻后用培养基培养细胞，使细胞重新生长繁殖。
04
动物细胞组织培养的实验操作
实验准备
培养基制备
准备适宜的动物细胞生长的培养基，确保培养基的营养成分、pH值和
渗透压适宜。
细胞来源
确保细胞来源可靠，并经过必要的消毒和检测
异质性的原因
培养细胞异质性主要与细胞在生长和分化过程中受到的微环境因素、基因突变等因素有关。
解决异质性的措施
采用标准化操作流程、优化培养条件、选用同质化细胞系等方法，降低培养细胞的异质性。
动物细胞组织培养的前景展望
动物细胞组织培养在科学研究、生物工程、医学等领域具有广泛的应用前景。
随着技术的不断进步和应用领域的拓展，动物细胞组织培养将迎来更多的发展机遇和挑战。
细胞鉴定
通过形态学观察、免疫荧光等技术对细胞进行鉴定，确保细胞的种类和来源。注意事项：选择适当的鉴定方法，确保准确性。
细胞观察与记录
定期观察细胞的生长状态、形态变化等，并记录数据。注意事项：保持观察的连续性和准确性。
实验结果分析
细胞生长曲线绘制
根据观察数据绘制细胞生长曲线，分析细胞的生长特性和规
律。
细胞形态学分析
观察细胞的形态变化，分析细胞的分化、凋亡等情况。
基因表达分析
通过PCR、Western blot等技术分析细胞中特定基因的表达情况。
细胞功能检测
根据实验目的，对细胞进行特定的功能检测，如药物筛选、
毒性测试等。
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动物细胞组织培养的挑战与前景
培养细胞的污染问题
污染来源