过氧化氢酶活力的测定
过氧化氢酶的活性测定
过氧化氢酶的活性测定——高锰酸钾滴定法（滴定法、比色法）【原理】过氧化氢酶（CAT）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
R(Fe+2)+H2O2==R(Fe+3+OH－)R(Fe+3OH－)2+ H2O2==R(Fe+2)2+2H2O+O2据此，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量（反应过量）的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的H2O2 5 H2O2+2 KMnO4+4H2SO4-------- 5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4即可求出消耗的H2O2的量。
【仪器和用具】研钵；三角瓶50ml×4；酸式滴定管（10ml）；恒温水浴；容量瓶25ml×1。
【试剂】10% H2SO4；0.2mol/L磷酸缓冲液pH7.8；0.1mol/L高锰酸钾标准液：称取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，用0.1mol/L草酸溶液标定；0.1mol/L H2O2：市售30% H2O2大约等于17.6mol/L，取30% H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/ KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；0.1mol/L草酸：称取优级纯H2C2O4•2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1L。
【方法】1.酶液提取取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转入容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
2.取50ml三角瓶4个（两个测定两个对照），测定瓶中加入酶液2.5ml，对照瓶中加入高温灭活酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10% H2SO4 2.5ml。
过氧化氢酶活力的测定实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：实验35过氧化氢酶的活性测定植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使h2o2发生累积。
h2o2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。
过氧化氢酶可以清除h2o2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。
因此，植物组织中h2o2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。
本实验用分光光度法测定过氧化氢含量，利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。
一、过氧化氢含量的测定【原理】h2o2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被h２so4溶解后，在415nm波长下比色测定。
在一定范围内，其颜色深浅与h2o2浓度呈线性关系。
【仪器和用具】研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。
【试剂】100μmol/Lh2o2丙酮试剂：取30%分析纯h2o257μl，溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（w/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。
【方法】1.制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表40-1加入试剂。
待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml 刻度，415nm波长下比色。
2.样品提取和测定：(1)称取新鲜植物组织2~5g（视h2o2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。
(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。
沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。
(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。
过氧化氢酶活力的测定实验报告
一、实验目的1. 了解过氧化氢酶的作用和特性。
2. 掌握过氧化氢酶活力的测定原理和方法。
3. 通过实验，验证过氧化氢酶在催化过氧化氢分解过程中的活力。
二、实验原理过氧化氢酶（Catalase，简称CAT）是一种广泛存在于生物体内的酶，其主要功能是催化过氧化氢（H2O2）分解为水（H2O）和氧气（O2），从而降低过氧化氢对生物体的毒害作用。
过氧化氢酶活力的测定通常通过测量在一定时间内过氧化氢的分解量或氧气的生成量来进行。
本实验采用碘量法测定过氧化氢酶活力。
碘量法的基本原理是：在一定条件下，过氧化氢酶将过氧化氢分解，生成氧气，使溶液中的碘离子（I-）氧化成碘单质（I2）。
然后，用硫代硫酸钠滴定溶液中的碘单质，根据消耗的硫代硫酸钠的量计算出过氧化氢的分解量，从而推算出过氧化氢酶的活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜植物叶片（如青菜、萝卜叶等）、蒸馏水、碘液、硫代硫酸钠溶液、盐酸、氢氧化钠溶液、0.1 mol/L过氧化氢溶液等。
2. 实验仪器：分析天平、研钵、漏斗、容量瓶、移液管、滴定管、锥形瓶、水浴锅、计时器等。
四、实验步骤1. 酶液提取：- 称取0.5 g新鲜植物叶片，置于研钵中，加入2 mL pH 7.0磷酸缓冲液和少量石英砂，研磨成匀浆。
- 将匀浆转入25 mL容量瓶中，用磷酸缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容至刻度。
- 将容量瓶置于4℃冰箱中静置10 min，取上清液即为过氧化氢酶粗提液。
2. 测定过氧化氢酶活力：- 取4个锥形瓶，分别编号为1、2、3、4。
- 向1、2、3号锥形瓶中分别加入0.5 mL过氧化氢酶粗提液，向4号锥形瓶中加入0.5 mL蒸馏水。
- 向各锥形瓶中分别加入1 mL 0.1 mol/L过氧化氢溶液，立即开始计时。
- 当加入0.1 mL 1 mol/L盐酸时，停止计时，此时溶液中剩余的过氧化氢量即为酶促反应所分解的过氧化氢量。
- 向各锥形瓶中加入1 mL碘液，充分振荡，静置3 min。
过氧化氢酶活力检测方法
过氧化氢酶活力检测方法过氧化氢酶（catalase）是一种重要的酶类物质，它在生物体内起着催化无毒的氧化还原反应，将过氧化氢（H2O2）分解成水（H2O）和氧气（O2）。
由于其在维持细胞内氢离子浓度、氧化还原平衡和细胞抵抗氧化应激等方面的重要作用，因此过氧化氢酶活性的准确测定和分析显得非常必要。
在实验室中，常用的过氧化氢酶活力检测方法主要有光度法、气体检测法和电化学检测法。
首先是光度法，这是一种常用的测定过氧化氢酶活力的方法。
实验中，可以通过分光光度计测量酶样溶液中过氧化氢的浓度的变化来推测过氧化氢酶的活性。
具体的测定步骤一般为：首先，在酶样溶液中加入过氧化氢；然后，在适宜的温度下进行一段时间的潜伏期；然后，用过氧化氢检测试剂滴定到一定浓度时，观察溶液的颜色变化，并用分光光度计读取吸光度。
根据吸光度的变化可以计算出过氧化氢酶的活性。
第二种方法是气体检测法，这是一种基于检测氧气产生的方法。
实验中，可以将过氧化氢溶液加入酶样溶液中，然后用带有氧气传感器的电极测量氧气的产生速率和浓度。
根据氧气产生速率的变化可以推断过氧化氢酶的活性。
第三种方法是电化学检测法，这是一种基于电流变化的方法。
实验中，可以将过氧化氢溶液加入酶样溶液中，然后通过电极测量氧气的生成速率。
根据电流的变化可以计算出过氧化氢酶的活性。
除了以上的方法，还有其他一些比较新颖的方法用于测定过氧化氢酶活性。
例如，近年来，一些研究人员采用蛋白质组学和质谱分析等技术，通过检测酶样溶液中蛋白质的表达水平和酶活性的相关性，来推断过氧化氢酶的活性水平。
总结起来，测定过氧化氢酶活性的方法有光度法、气体检测法、电化学检测法等。
不同的方法有各自的优缺点，例如，光度法具有操作简单、成本低廉的特点，但可能受其他物质的干扰；气体检测法具有灵敏度高的特点，但需要专门的仪器和高昂的成本；电化学检测法具有快速、灵敏的特点，但需要较高的技术水平和仪器要求。
研究人员可以根据实际需求和条件选择合适的方法来测定过氧化氢酶的活性。
过氧化氢酶活力的测定实验报告doc
过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：过氧化氢酶活性测定实验29 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。
一、原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。
即可求出消耗的H2O2的量。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：小麦叶片（二）仪器设备：1. 研钵；2. 三角瓶；3. 酸式滴定管；4. 恒温水浴；5. 容量瓶。
（三）试剂：1. 10%H2SO4；2. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；3. 0.1mol/L 高锰酸钾标准液称：取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1mol/L 草酸溶液标定；4. 0.1mol/L H2O2市售30%H2O2大约等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；5.0.1mol/L 草酸：称取优级纯H2C2O4.2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml。
三、实验步骤（一）酶液提取：取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
（二）取50ml三角瓶4个（两个测定，另两个为对照），测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5ml。
过氧化氢酶活性的测定
A 空 10 5 白
B 反 10 应
55 - 1
分 钟
5
51
医学课件ppt
3
5 VA(空白)
=
VB(反应
35
液)
=
8
五、实验结果与计算：
1、被分解的H2O2量（mg） = （空白滴定值-样品滴定值）×Na2S2O3摩尔浓度×17
2、CAT活性（mg.g-1.min-1）= 被分解的H2O2量（mg）×(总体积÷测定取液量) 样品重（g）×时间（min）
H2O2（余）+2KI+H2SO4----→I2+K2SO4+2H2O
I2 +2Na2S2O3 --→2NaI+Na2S4O6（连二硫酸钠）
用硫代硫酸钠分别滴定空白液(可求出总的H2O2量)和反应
液(可求出未分解的H2O2量)，再根据二者滴定值之差求出分
解的H2O2量。
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5
三、实验材料、仪器和试剂：
医学课件ppt
6
四、实验步骤：
1、酶液提取：
称取0.5g三叶草，加少量石英砂，CaCO3，2ml水，研成匀浆， 移入50ml容量瓶，冲洗研钵数次，定容，静置，过滤。
2、酶促反应：
（1）取锥形瓶2个，编号A，B，各加入10ml酶液，之后立即向A瓶 中加入1.8mol/L H2SO45ml，终止酶活性，作空白滴定。
医学课件ppt
9
六、思考题：
1、本实验中影响CAT活性测定的因素有哪些？
医学课件ppt
10
记录两次消耗Na2S2O3的体积医VA学(课空件白p)p，t VB(反应液)。
7
酶活性测定
管 号
酶 液
过氧化氢酶活性的测定
过氧化氢酶活性的测定过氧化氢酶（catalase）是一种重要的酶类，在多种生物体和植物中广泛存在。
其主要作用是将氧化还原反应中产生的过氧化氢（H2O2）转化成水（H2O）和氧气（O2）。
这个反应是非常重要的，因为H2O2是一种有害物质，会破坏细胞内的蛋白质、脂质和DNA等结构。
因此，过氧化氢酶不仅保护生物体内部结构的完整性，还保护它免受外部环境的伤害。
本文将介绍过氧化氢酶活性的测定方法。
实验材料：1. 1.5 mL离心管；2. 10% 过氧化氢溶液；3. 100 mM 磷酸缓冲液（pH 7.0）；4. 视网膜素（1 mg/mL）。
实验步骤：1. 将取自动物或植物的新鲜组织（例如肝脏、叶片、果实）切成小块，加入绞肉机中充分研磨，随后用冷水冲洗，挤出汁液，离心5分钟，去除颗粒，收集上清液作为酶提取物；2. 准备一组试管，分别加入0.1 mL酶提取物、0.5 mL100 mM磷酸缓冲液和0.4 mL 10% 过氧化氢溶液，并加入0.1 mL纯水作为对照试验管；3. 在试管中迅速混合，放在37℃恒温水浴中反应15分钟；4. 反应结束后，加入1 mL苯酚酐试剂，盖上盖子，轻轻颠倒，立即读取吸光度A405，并计算过氧化氢酶活性。
计算过氧化氢酶活性的公式为：过氧化氢酶活性（U/mg）= [（对照A405 - 试验A405）/ 对照A405] × 1000/ [反应体系总反应时间（分钟）÷ 酶提取体积（mL）] × 酶提取物的蛋白质浓度（mg/mL）其中，对照是不加入酶提取物的试验管，试验则是加入酶提取物的试验管。
以对照的A405为100%活性，试验管的活性则为相对活性。
过氧化氢酶的活性单位为U/mg，也可以表示为U/g或U/L。
本实验中，苯酚酐试剂可以与酶提取物中产生的H2O2发生氧化反应，形成深蓝色产物，进而测量吸光度，从而计算出过氧化氢酶的活性。
总之，本实验的目的是测定过氧化氢酶的活性，以此来了解生物体内的氧化还原反应是否正常，并研究它在细胞生物学中的作用。
过氧化氢酶活性测定实验报告
过氧化氢酶活性测定实验报告
《过氧化氢酶活性测定实验报告》
实验目的：
本实验旨在通过测定过氧化氢酶活性，探究该酶在生物体内的重要作用，并了解其在氧化还原反应中的作用机制。
实验方法：
1. 提取过氧化氢酶：将待测样品（如动植物组织、细胞等）在低温下破碎，利用离心等手段分离出过氧化氢酶。
2. 过氧化氢酶活性测定：将提取的过氧化氢酶与过氧化氢底物反应，通过监测底物消耗速率或产物生成速率来测定酶的活性。
实验结果：
通过实验测定，我们得到了不同样品中过氧化氢酶的活性数据。
观察到在不同条件下，过氧化氢酶活性呈现出明显的差异，这表明过氧化氢酶的活性受到环境条件的影响。
实验结论：
通过本实验，我们深入了解了过氧化氢酶在生物体内的重要作用，以及其在氧化还原反应中的作用机制。
同时，我们也发现了过氧化氢酶活性受到环境条件的影响，这为进一步研究酶的调控机制提供了重要的参考。
总结：
过氧化氢酶活性测定实验为我们提供了深入了解生物体内氧化还原反应的重要手段，为进一步研究酶的功能和调控机制提供了重要的参考。
希望通过这一实验，能够加深我们对生物体内酶的认识，为生物医学领域的研究和应用提供更
多的可能性。
过氧化氢酶活性的测定
三、实验材料、仪器和试剂：
1、实验材料：梭梭 2、仪器： (1) 滴定管 (2)研钵 (3) 容量瓶 (4)移液管 (5)三角瓶(100ml) 3、试剂：
（1）0.05M H2O2 （3）1.8M H 2SO4 液 （5）10%（NH4)6Mo7O24 （7）CaCO3，石英砂
（2）0.2M Na2S2O3 （4 ）1.5%淀粉溶 （6）20% KI
保 温
1.8M 20% 钼酸 淀粉 H2SO4 KI溶 铵溶 溶液 (ml) 液(ml) 液(滴) (滴)
0.2M Na2S2O3 溶液的 滴定量
A 空 白
10
5
5 5 分 钟
-
1
3
5ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
VA(空白)
=
B 反 应
VB(反应
5 1 3 5
10
-
5
液)
=
五、实验结果与计算：
1、被分解的H2O2量（mg） = （空白滴定值-样品滴定值）×Na2S2O3摩尔浓度×17 2、CAT活性（mg.g-1.min-1）= 被分解的H2O2量（mg）×(总体积÷测定取液量) 样品重（g）×时间（min）
细胞稳定的内环境及细胞的正常生活，因此CAT是植物体内重要的酶促防
御系统之一，其活性高低与植物的抗逆性密切相关。
二、实验原理:
CAT活性大小以一定时间内分解的H2O2量来表示：
在一定条件下，CAT能把H2O2分解为H2O和O2。当CAT与H2O2反应一定 时间(t) 后，再用碘量法测定未分解的 H 2O 2，以钼酸铵作催化剂，H2 O2 与
总体 测定取 积 液量
50 50 50 50 50 50 50 10 10 10 10 10 10 10
过氧化氢酶的活性测定
过氧化氢酶的活性测定方法一：高锰酸钾滴定法1、实验目的：掌握高锰酸钾滴定法测定过氧化氢酶的活性的原理和方法。
2、实验内容：实验原理：过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
据此，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的H2O2。
即可求出消耗的H2O2的量。
试剂：10％H2SO4；0.2mol／L磷酸缓冲液pH7.8；0.02mol／L高锰酸钾标准液：称取KMnO4(AR)3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000mL，用0.1mol／L草酸溶液标定；0.1mol／L H2O2：市售30％H2O2大约等于17.6mol／L，取30％H2O2溶液5.68mL，稀释至1000mL，用标准0.02molKMnO4溶液(在酸性条件下)进行标定；0.1mol／L草酸：称取优级纯H2C2O2·2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1L。
操作步骤：3.1酶液提取：取高羊茅草叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲液少量，研磨成匀浆，转移至25mL 容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转入容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000r／min离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
3.2酶反应过程取50mL三角瓶4个(3个测定，1个对照)，测定瓶中加入酶液2.5mL，对照瓶中加入煮死酶液2.5mL，再加入2.5mL 0.1mol／L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10％H2SO4 2.5mL。
3.3标定用0.02mol／L KMnO4标准溶液滴定H2O2，至出现粉红色(在30s内不消失)为终点。
3.4结果计算酶活性用每克鲜重样品1Min内分解H2O2的毫克数表示：酶活(mg／g·min)＝（A-B）×V T×1.7FW×V1×t（3-2）式中:A:对照KMnO4滴定毫升数(mL)；B:酶反应后KMnO4滴定毫升数(mL)；V T:酶液总量(mL)；V1:反应所用酶液量(mL)；W:样品鲜重(g)；1.7:1mL 0.1mol／L的KMnO4相当于1.7mg H2O2。
过氧化氢酶活性测定
过氧化氢酶活性测定引言过氧化氢酶是一种广泛存在于生物体中的重要酶类。
它能够催化过氧化氢（H2O2）与还原物质反应，将H2O2分解成水和氧气。
过氧化氢酶在细胞中起着调节氧化应激及清除有害过氧化氢的作用。
因此，测定过氧化氢酶活性对于研究生物体的氧化应激反应以及评估细胞状态具有重要意义。
原理过氧化氢酶的活性可以通过测定其催化过氧化氢分解反应速率来确定。
本实验以庚酮过氧化物（DPI）为底物，通过酶反应将庚酮过氧化物氧化为二氧化碳和乙酰乙醛。
乙酰乙醛的生成量与过氧化氢酶的活性成正比。
实验中，首先准备一定浓度的庚酮过氧化物溶液，并将待测酶样品与庚酮过氧化物混合。
在特定条件下，观察反应体系中庚酮过氧化物的消耗程度。
通过测定庚酮过氧化物消耗量的变化，可以计算出过氧化氢酶的活性。
实验步骤1.准备实验所需试剂和仪器：庚酮过氧化物溶液、酶样品、缓冲溶液、试管、分光光度计等。
2.设置实验条件：温度、pH值等。
3.分别取适量的庚酮过氧化物溶液和酶样品，加入相应的缓冲溶液，混合均匀。
4.在一组对照实验中，将庚酮过氧化物溶液替换为缓冲溶液，以消除庚酮过氧化物自身的分解。
5.在指定的时间间隔内，从不同实验体系中取出一定量的反应液，用分光光度计测定庚酮过氧化物的吸光度。
6.计算不同时间点庚酮过氧化物消耗量的变化，并绘制庚酮过氧化物消耗曲线。
7.根据庚酮过氧化物的消耗速率计算过氧化氢酶的活性。
数据处理根据庚酮过氧化物的消耗曲线，可以确定反应速率。
通过比较对照组与实验组的反应速率，计算过氧化氢酶的活性。
过氧化氢酶的活性计算公式如下：活性（μmol/min/mg）= (△A/min * Vt) / (ε * d * Venz * t * Venz)其中，△A/min为每分钟庚酮过氧化物的吸光度变化量，Vt为总体系体积，ε为庚酮过氧化物的摩尔吸光系数，d为光程，Venz为酶样品的体积，t为反应时间。
结论通过测定过氧化氢酶的活性，可以评估生物体内的氧化应激程度以及细胞的状态。
过氧化氢酶活力的测定实验报告doc
过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：过氧化氢酶活性测定实验29 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。
一、原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。
即可求出消耗的H2O2的量。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：小麦叶片（二）仪器设备：1. 研钵；2. 三角瓶；3. 酸式滴定管；4. 恒温水浴；5. 容量瓶。
（三）试剂：1. 10%H2SO4；2. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；3. 0.1mol/L 高锰酸钾标准液称：取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1mol/L 草酸溶液标定；4. 0.1mol/L H2O2市售30%H2O2大约等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；5.0.1mol/L 草酸：称取优级纯H2C2O4.2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml。
三、实验步骤（一）酶液提取：取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
（二）取50ml三角瓶4个（两个测定，另两个为对照），测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5ml。
过氧化氢酶活力的测定实验报告
过氧化氢酶活力的测定实验报告实验目的，通过测定过氧化氢酶活力的实验，掌握酶活力的测定方法，了解酶活性受到什么因素的影响，为进一步研究酶的特性和应用提供理论基础。
实验原理，过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶，其活性可通过测定其催化分解过氧化氢的速率来间接反映。
该实验采用比色法，通过观察过氧化氢酶催化分解过氧化氢后生成的物质对底物的吸光度变化来测定过氧化氢酶的活力。
实验步骤：1. 预先配制好过氧化氢酶的不同浓度溶液。
2. 在试管中分别加入过氧化氢酶溶液、过氧化氢底物和磷酸盐缓冲液，混合均匀。
3. 将混合液放入分光光度计中，记录吸光度随时间的变化。
4. 根据吸光度变化曲线，计算出不同浓度过氧化氢酶的活力。
实验结果与分析：通过实验测定，得到了不同浓度过氧化氢酶的活力数据。
分析数据发现，过氧化氢酶活力随着浓度的增加呈现出一定的变化规律。
随着过氧化氢酶浓度的增加，其活力也随之增加，但当浓度达到一定范围后，活力增加速率逐渐减缓，最终趋于稳定。
这说明过氧化氢酶的活力受到其浓度的影响，但存在一定的饱和效应。
实验结论，通过本次实验，我们成功测定了过氧化氢酶的活力，并对其活力受浓度影响的规律进行了分析。
实验结果表明，过氧化氢酶的活力随着浓度的增加呈现出一定的变化规律，但存在饱和效应。
这对于我们进一步研究酶的特性和应用具有一定的指导意义。
实验意义，本次实验通过测定过氧化氢酶的活力，掌握了酶活力的测定方法，了解了酶活性受到浓度影响的规律。
这对于深入研究酶的特性和应用具有一定的理论意义和实践价值。
总结，通过本次实验，我们成功测定了过氧化氢酶的活力，并对其受浓度影响的规律进行了分析。
这为我们进一步研究酶的特性和应用提供了理论基础，也为我们掌握了酶活力的测定方法提供了实验经验。
希望通过今后的实验研究，能够更深入地了解酶的特性和应用，为科学研究和实践应用提供更多有益的信息。
过氧化氢酶活性的测定
三、试验材料、仪器和试剂：
1、试验材料：三叶草
2、仪器： (1) 滴定管 (2)研钵 (3) 容量瓶
(4)移液管 (5)三角瓶(100ml)
3、试剂：
（1）0.05M H2O2 （3）1.8M H2SO4 （5）10%（NH4)6Mo7O24 （7）CaCO3，石英砂
（2）0.2M Na2S2O3 （4）1.5%淀粉溶液
二、试验原理:
➢ CAT活性大小以一定时间内分解旳H2O2量来表达： 在一定条件下，CAT能把H2O2分解为H2O和O2。当CAT与
H2O2反应一定时间(t)后，再用碘量法测定未分解旳H2O2，以 钼酸铵作催化剂，H2O2与KI反应，放出游离碘，然后用硫代 硫酸钠滴定碘，反应式为：
H2O2（余）+2KI+H2SO4----→I2+K2SO4+2H2O I2 +2Na2S2O3 --→2NaI+Na2S4O6（连二硫酸钠） 用硫代硫酸钠分别滴定空白液(可求出总旳H2O2量)和反应 液(可求出未分解旳H2O2量)，再根据两者滴定值之差求出分 解旳H2O2量。
➢ 氢氧自由基（OH˙）是化学性质最活泼旳活性氧，能够直接 或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，而且有非 常高旳速度常数，破坏性极强，可使细胞膜遭受损害，加速 细胞旳衰老和解体。
➢ 过氧化氢酶(catalase；CAT)能够清除H2O2、分解氢氧自由 基，保护机体细胞稳定旳内环境及细胞旳正常生活，所以 CAT是植物体内主要旳酶促防御系统之一，其活性高下与植 物旳抗逆性亲密有关。
（6）20% KI
四、试验环节：
1、酶液提取：
称取0.5g三叶草，加少许石英砂，CaCO3，2ml水，研成匀浆， 移入50ml容量瓶，冲洗研钵多次，定容，静置，过滤。
过氧化氢酶活力的测定碘量法
过氧化氢酶活力的测定碘量法过氧化氢酶（catalase）是一种重要的酶类，它能催化过氧化氢（H2O2）分解为水和氧气。
过氧化氢酶活力的测定是研究酶活性和酶功能的常用方法之一，其中碘量法是一种常见且简便的测定方法。
碘量法是通过测定过氧化氢酶活性对碘化钾溶液消耗的碘量来间接反映酶活力。
具体步骤如下：1. 实验前的准备准备好所需的试剂和仪器设备。
试剂包括：过氧化氢溶液、碘化钾溶液、淀粉溶液、酶提取液等。
仪器设备包括：移液管、比色皿、分光光度计等。
2. 样品制备将待测的样品加入适量的提取液中，研磨均匀，通过离心等手段将细胞碎片去除，得到酶提取液。
酶提取液中的过氧化氢酶即可用于后续的测定。
3. 碘化钾溶液的制备将一定浓度的碘化钾溶液配制好，一般浓度为0.1mol/L。
注意，碘化钾溶液需新鲜配制并保存在暗处，以免被光照射而分解。
4. 实验操作取一定体积的酶提取液，加入适量的过氧化氢溶液中，使其反应一段时间。
然后，加入适量的碘化钾溶液，停止反应。
接着，加入适量的淀粉溶液，使反应体系中出现蓝色。
5. 测定与计算将混合溶液转移至比色皿中，利用分光光度计测定其吸光度。
根据吸光度与碘量的比例关系，可以计算出碘化钾溶液中消耗的碘量。
而碘量与过氧化氢酶活性之间存在一定的定量关系，从而可以间接反映出过氧化氢酶的活力。
通过以上实验步骤，我们可以测定出过氧化氢酶活性的结果。
需要注意的是，在测定过程中要严格控制实验条件，如温度、pH值等，以保证实验结果的准确性和可靠性。
除了碘量法，还有其他方法可以测定过氧化氢酶活力，如比色法、荧光法等。
每种方法都有其适用的场景和优缺点，研究人员可以根据实际需要选择合适的方法进行测定。
碘量法是一种常用且简便的测定过氧化氢酶活力的方法。
通过测定碘化钾溶液中消耗的碘量，可以间接反映出过氧化氢酶的活力。
这一方法在生物化学和医学领域有着广泛的应用，对于研究酶的功能和活性具有重要意义。
过氧化氢酶活力的测定
过氧化氢酶活力的测定（张一顺 p138）一、实验原理植物体内的黄素氧化酶类代谢物常含有过氧化氢。
植物在逆境下或衰老时，体内活性氧代谢加强，也会是过氧化氢发生积累。
过氧化氢的积累不但可导致破坏性的氧化作用，也会直接或间接的氧化细胞内的核酸、蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭到损坏，从而加速细胞的衰老和解体。
过氧化氢酶是清除过氧化氢的重要保护酶，是植物中重要的酶促防御系统之一，能将过氧化氢分解为O2和H2O2,使植物有机体免受H2O2的毒害作用。
其活力与植物的抗逆性密切相关。
过氧化氢酶活力的测定原理：H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解H2O2，是反应溶液吸光度随反应时间而降低，根据测定吸光度的变化速度即可测出CA T活力。
二、材料、仪器设备及试剂新鲜的子叶或茎段、研钵2个、冰浴槽两个、研锤2个、1ml注射器2个、石英砂1瓶、药勺1把、吸水纸若干、试剂瓶1个、冰块若干、大瓷缸1个、移液枪若干把、风光光度计一台、蒸馏水两瓶、干燥的试管若干个、试管架、离心机一台、离心管若干个、记号笔1个、标签纸若干、水笔1个、水浴箱1台。
Ph=7.8 0.2mol/L的磷酸缓冲液；0.1mol/L H2O2溶液：取30%的H2O2溶液5.65ml，用蒸馏水稀释至1000ml。
Ph=7.8 0.2mol/l配置：A液：91.5ml B液：8.5ml 混合后即可，总体积100ml三、试验方法与步骤1、粗酶液的提取准备工作：离心管14个，分别标号0~6和0Y~6Y（标有Y的装子叶研磨液,带0的表示实验组），冰浴槽2个，从冰箱中刚拿出的研钵2个（带研锤）放在冰浴槽中。
取1个棕色试剂瓶放入高瓷缸中，再向里面放一冰袋（目的磷酸缓冲液保持在较低温度下），从并行中拿出磷酸缓冲液倒入棕色试剂瓶中适量。
再拿出准备好的2个1ml注射器备用，取出石英砂和药勺（去石英砂用，用最小的那个）。
取出准备好的吸水纸若干放在适当位置（用于擦拭研钵中的水珠），干毛巾一个（在向离心管中到液体前用于擦拭研钵底部的水珠）。
过氧化氢酶活力测定CAT
过氧化氢酶活力测定CAT过氧化氢酶活力测定碘量法目的意义过氧化氢酶(Catalase，CAT)普遍存在于植物所有组织中，其活性与植物的代谢强度、抗衰老、抗寒、抗病能力有一定关系，在生产实践中常进行测定。
学习几种测定 CAT活性的方法，理解其测定原理。
一、实验原理过氧化氢酶能把过氧化氢分解为水和氧，其活性大小，可以一定时间内分解的过氧化氢量或生成氧气的量来表示。
H0的测定常采用氧化还原滴定法，碘量法是其经典方法。
其原22理是在有催化剂钼酸铵存在时，过氧化氢与碘化钾反应，放出游离碘，再用硫代硫酸钠滴定碘，以淀粉指示剂指示滴定终点。
根据空白和测定二者滴定值之差，即可算出酶分解的过氧化氢量。
其反应为:HO十2KI十HS0 ?I十KS0十2H0 22242242I+2NaSO?2NaI+NaS0 222346二、材料、设备与试剂1(植物材料小麦或其他植物新鲜叶片。
2(主要设备天平、研钵、100ml容量瓶、50ml酸滴定管、移液管(1、5、10ml)、100ml三角瓶。
3(试剂(1)碳酸钙粉末(2)1.8mol/L的硫酸取1000ml烧杯1只，加入约500ml蒸馏水，边搅拌边加入100ml浓硫酸，冷却后用量瓶定容到1000ml。
(3)10,的钼酸铵溶液:称取钼酸10g，溶于蒸馏水中使成100ml。
(4)1,淀粉溶液:取1g可溶性淀粉于小烧杯中加约20ml水调匀，慢慢倾入约80m1沸水中，在搅拌下加热至重新沸腾冷却后贮于滴瓶中(可加少量HgCl防腐)。
2(5)0.05mol/L硫代硫酸钠称取NaSO?5HO 25g，溶于新沸腾并冷却过的蒸馏水中，2232加入约0.1gNaCO，，并稀释至1升，保存于棕色试剂瓶中，放置暗处。
一天后进行标定。
23标定方法:精确称取分析纯KCr0约0(15g于500ml三角瓶中，加30ml蒸馏水溶解， 227加入2gKI和5ml 6mol/L盐酸，在暗处放置5min，然后用水稀释至200ml，用0.05mol/L 硫代硫酸钠溶液滴定，当溶液由棕红色变为浅黄色时，加入1ml淀粉溶液，继续滴至溶液由蓝色变为亮绿色(Cr离子的颜色)为止。
过氧化氢酶活性测定(高锰酸钾滴定法)
过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）一、原理过氧化氢广泛存在于生物体和土壤中，是由生物呼吸过程和有机物的生物化学氧化反应的结果产生的，这些过氧化氢对生物和土壤具有毒害作用。
与此同时，在生物体和土壤中存有过氧化氢酶，能促进过氧化氢分解为水和氧的反应（H2O2→H2O+O2），从而降低了过氧化氢的毒害作用。
土壤中过氧化氢酶的测定便是根据土壤（含有过氧化氢酶）和过氧化氢作用析出的氧气体积或过氧化氢的消耗量，测定过氧化氢的分解速度，以此代表过氧化氢酶的活性。
测定过氧化氢酶的具体方法比较多，如气量法：根据析出的氧气体积来计算过氧化氢酶的活性；比色法：根据过氧化氢与硫酸铜产生黄色或橙黄色络合物的量来表征过氧化氢酶的活性；滴定法：用高锰酸钾溶液滴定过氧化氢分解反应剩余过氧化氢的量，表示出过氧化氢酶的活性。
本实验重点采用高锰酸钾滴定法。
二、试剂（1）2mol/L H2SO4溶液:量取5.43ml的浓硫酸稀释至500ml，置于冰箱贮存;（2）0.02mol/L高锰酸钾溶液：称取1.7g高锰酸钾，加入400mL 水中，缓缓煮沸15min，冷却后定容至500mL，避光保存，用时用0.1mol/L草酸溶液标定；（3） 0.1mol/L草酸溶液：称取优级纯H2C2O4▪2H2O 3.334g,用蒸馏水溶解后，定容至250ml；（4）3%的H2O2水溶液：取30% H2O2溶液25ml，定容至250ml，置于冰箱贮存，用时用0.1mol/L KMnO4溶液标定。
三、操作步骤（1）分别取2~5g土壤样品于具塞三角瓶中（用不加土样的作空白对照），加入0.5mL甲苯，摇匀，于4℃冰箱中放置30min。
（2）取出，立刻加入25mL冰箱贮存的3% H2O2水溶液，充分混匀后，再置于冰箱中放置1h。
（3）取出，迅速加入冰箱贮存的2mol/L H2SO4溶液25mL，摇匀，过滤。
（4）取1mL滤液于三角瓶，加入5mL蒸馏水和5mL 2mol/L H2SO4溶液，用0.02mol/L高锰酸钾溶液滴定。
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实验三过氧化氢酶活性得测定
一、实验目得:
了解过氧化氢酶得作用,掌握碘量法测定过氧化氢酶活性得原理与方法;
二、实验原理:
过氧化氢酶就是一类色素蛋白,含有铁,它能催化过氧化氢分解为水与分子氧,在此过程中起传递电子得作用,过氧化氢既就是氧化剂又就是还原剂。
R(Fe＋2)2＋H2O2---R(Fe+3OH)2
R(Fe+3OH)2+ H2O2 ----R(Fe＋2)2+2H2O+O2
并合上式:H2O2 ----2H2O+O2
据此,可根据消耗H2O2得消耗量或O2得生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量得过氧化氢溶液,经酶促反应后,加入过量得KI溶液生成得I2用标准得Na2S2O3滴定,根据N a2SO3消耗得体积计算H2O2得消耗量。
三、实验材料、仪器与试剂:
1、实验材料:小白菜
2、仪器:恒温水浴锅、研钵、容量瓶、刻度吸管、100mL三角瓶
3、试剂:
(1)0、05mol/L H2O2 (2)2mol/LH2SO4
(3)0、1mol/L Na2S2O3
(4)1%淀粉溶液(5)10%(NH4)6Mo7O24
(6)pH7、8得磷酸缓冲液(7)20% KI
(8)CaCO3
四、实验步骤:
(1)酶液提取:
称取2.5g白菜叶,加少量CaCO3,2mLpH7、8得缓冲液少量,研成匀浆,移入100ml 容量瓶,用上述缓冲液冲洗研钵数次转入容量瓶中定容,静置10分钟,过滤。
取滤液10mL于另一100mL得容量瓶中稀释定容待测(根据酶活高低而定)。
(2)酶促反应:
取锥形瓶4个,编好号各加入10ml酶液之后,立即向两个瓶中加入2mol/L H2SO45mL,终止酶活性,作空白对照。
向另外两瓶各加H2O25mL,摇匀,在加入H2O2得那一刻起,记录时间,5分钟后迅速向实验瓶中加入2mol/LH2SO45mL,终止酶活性。
向三角瓶中加1mL 20% KI与3滴(NH4)6Mo7O24,摇匀后迅速用标准Na2S2O3溶液进行滴定至淡黄色,加入1mL1%淀粉指试剂,蓝色恰好消失,记录消耗得Na2S2O3得体积V0,V;
五、结果记录与数据处理:
被分解得H2O2量(mg)=(空白滴定值-样品滴定值)×Na2S2O3摩尔浓度×17
过氧化氢酶活性(mg、g-1、min-1)=
六、结果分析与问题讨论:
实验十还原型V C含量测定
一、实验目得
学会从生物样品中提取维生素C方法,了解蔬菜中维生素C得含量。
学会测定维生素C含量得原理与方法,进一步掌握滴定法得基本操作技术、二、实验原理
Vc由于其结构中具有烯二醇得结构,所以它就是一种强还原剂,易被弱氧化剂氧化脱氢而成氧化型抗坏血酸。
Vc在酸性溶液中比中性溶液及碱性溶液中稳定,但易被热、光及某些金属离子破坏。
本实验就是用碘液作氧化剂,淀粉为指示剂,当Vc全部被氧化后,过量一滴碘液与淀粉指示剂反应生成淡兰色络合物,即为终点。
三、实验材料、试剂及仪器
材料:西红柿。
试剂:
2％草酸溶液:称取20g草酸溶于蒸馏水中,溶解后稀释到1000mL,混匀;
1％可溶性淀粉溶液:称取1g可溶性淀粉用少量蒸馏水调成匀浆,倾入80 mL得沸水中继续煮沸至透明,冷却后稀释至100 mL;
0.1mol/L碘液(随用随配):称取6.5克碘与20克碘化钾于研钵中,加少量得蒸馏水研磨至完全溶解后稀释至500毫升混匀。
贮存于棕色试剂瓶中;
1％草酸溶液:称取10g草酸溶于蒸馏水中,溶解后稀释到1000mL,混匀;
0、1mg/mLVc标准溶液:准确称取抗坏血酸10mg,溶于1％草酸溶液中稀释至100mL 贮存于棕色试剂瓶中冷藏(现用现配)。
仪器:万分之一电子天平;棕色酸式滴定管;三角瓶等。
四、实验操作步骤:
1、碘液得标定:吸取0、1mg/mLVc标准溶液10mL于100mL得锥形瓶中,加5滴可溶性淀粉,摇匀后用稀碘液滴定至浅蓝色,且30秒内不退色,即为终点。
滴二个平
行样。
2、样品得提取:准确称取10g左右得样品1份,
用少许2%草酸溶液研磨成匀浆,转入100mL容量瓶中,用2%得草酸溶液洗研钵3-4次,一并转入容量瓶中,最后用2%草酸溶液定容至100mL摇匀,放置10分钟后过滤,滤液备用。
3、滴定:
空白滴定: 准确吸取10mL2%草酸溶液于100mL得锥形瓶中,加5滴1%淀粉指示剂,摇匀后用稀碘液滴定至浅蓝色,且30秒内不退色,即为终点,滴二个平行样。
样品滴定: 准确吸取10mL样品于100mL得锥形瓶中,加5滴1%淀粉指示剂,
摇匀后用稀碘液滴定至浅蓝色,且30秒内不退色,即为终点,滴二个平行样。
六、数据记录及计算
1、样品得重量(g):样品1:W
1
=
样品2:W
2
=
2、碘液得标定(mL): V
1 = V
2
=
=
3、样品得滴定(mL):
4、空白得滴定(mL):
5、计算:
每毫升碘液相当于Vc得毫克数K(mgVc/mLI
2
)= Vc得含量(mg/100g 样品)=
六、结果分析与讨论。