过氧化氢酶的活性测定
过氧化氢酶(CAT)活性的测定
过氧化氢酶（CAT）活性的测定：紫外吸收法
一、目的与要求
过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。
二、原理
过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。过氧化氢在240nm 波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液的吸光度（A240）随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。三、材料、仪器设备及试剂
（一）材料：小麦或其它叶片
（二）仪器设备：1. 研钵；2.紫外分光光度计；3. 离心机；4. 恒温水浴；
5. 容量瓶。
（三）试剂：
1. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液（pH7.8: 0.2mol/L Na2HP04 91.5 ml; 0.2mol/L
NaH
2P0
4
8.5 ml）；
2．0.1 mol/LH2O2 (30%的H2O2溶液5.68ml稀释至1000ml)
二、实验步骤：
1、酶液提取称取新鲜植物叶片或其它组织0.5g，置于研钵中，加入2～3ml 4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨匀浆后，转入25ml 容量瓶中，并用缓冲液冲研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。混合均匀，将容量瓶置5℃冰箱中静置10min，取上清液在4000r/min下离心15min，上清液即为过氧化氢粗提液，5℃下保存备用。
2、测定10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表1-1顺序加入试剂。
两种方法测定土壤中过氧化氢酶比较
两种方法测定土壤中过氧化氢酶比较
过氧化氢酶是一种重要的氧化酶，具有防御氧化应激、对抗有害活性氧及参与植物生长发育等重要生物学功能。测定土壤中的过氧化氢酶活性对于研究土壤环境的氧化还原状态、生物活性及其与植物生长的相互关系具有重要意义。本文将介绍两种常用的测定土壤中过氧化氢酶活性的方法。
一、苯酚法
苯酚氧化法是一种常用的测定土壤过氧化氢酶活性的方法。具体步骤如下：
1. 将土壤样品加入10 ml的苯酚溶液中，混合均匀并在室温下静置15分钟。
2. 加入50 ml的硫酸溶液，并迅速倒入100 ml锥形瓶中。
3. 瓶口用塞子密封并在瓶口插入滴管，使用滴管向锥形瓶中滴加加碘液，直到产生紫色沉淀。
4. 记录滴加的碘液体积，每ml碘液对应的过氧化氢酶活性为1个单位。
1. 将土壤样品与适量的磷酸盐缓冲液混合，使土壤打散均匀。
2. 取一部分土壤悬浊液，加入过氧化氢底物和过氧化物酶，并在适当的温度下静置一段时间。
3. 静置结束后，加入碘化钾溶液，使反应停止。
4. 使用酚酞重新溶解产生的碘，并加入过量的过氧化氢酶显色液。
5. 静置一段时间后，在适当波长下测量吸光度。
6. 将吸光度值代入标准曲线，计算样品中过氧化氢酶活性的浓度。
这两种方法测定土壤中过氧化氢酶活性的原理不同，但都能准确测量土壤中的过氧化氢酶活性。根据具体情况，选择适合的方法进行测定是非常重要的。需要注意的是，在实际操作中要严格控制外部因素和操作条件，确保结果的准确性。
(完整版)实验35过氧化氢酶的活性测定
植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积.H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶可以清除H2O2,是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此,植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。本实验用分光光度法测定过氧化氢含量,利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性.
一、过氧化氢含量的测定
【原理】
H2O2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被H２SO4溶解后，在415nm波长下比色测定.在一定范围内,其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系.
【仪器和用具】
研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。
【试剂】
100μmol/L H2O2丙酮试剂：取30％分析纯H2O257μl,溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5％（W/V)硫酸钛;丙酮;浓氨水.
【方法】
1。制作标准曲线：取10ml离心管7支,顺序编号，并按表40—1加入试剂.
待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml刻度，415nm波长下比色.
2.样品提取和测定：（1）称取新鲜植物组织2~5g（视H2O2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000 r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35—1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。(3）向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。
过氧化氢酶活力检测方法
过氧化氢酶活力检测方法
过氧化氢酶（catalase）是一种重要的酶类物质，它在生物体内起着催化无毒的氧化还原反应，将过氧化氢（H2O2）分解成水（H2O）和氧气（O2）。由于其在维持细胞内氢离子浓度、氧化还原平衡和细胞抵抗氧化应激等方面的重要作用，因此过氧化氢酶活性的准确测定和分析显得非常必要。
在实验室中，常用的过氧化氢酶活力检测方法主要有光度法、气体检测法和电化学检测法。
首先是光度法，这是一种常用的测定过氧化氢酶活力的方法。实验中，可以通过分光光度计测量酶样溶液中过氧化氢的浓度的变化来推测过氧化氢酶的活性。具体的测定步骤一般为：首先，在酶样溶液中加入过氧化氢；然后，在适宜的温度下进行一段时间的潜伏期；然后，用过氧化氢检测试剂滴定到一定浓度时，观察溶液的颜色变化，并用分光光度计读取吸光度。根据吸光度的变化可以计算出过氧化氢酶的活性。
第二种方法是气体检测法，这是一种基于检测氧气产生的方法。
实验中，可以将过氧化氢溶液加入酶样溶液中，然后用带有氧气传感
器的电极测量氧气的产生速率和浓度。根据氧气产生速率的变化可以
推断过氧化氢酶的活性。
第三种方法是电化学检测法，这是一种基于电流变化的方法。实
验中，可以将过氧化氢溶液加入酶样溶液中，然后通过电极测量氧气
的生成速率。根据电流的变化可以计算出过氧化氢酶的活性。
除了以上的方法，还有其他一些比较新颖的方法用于测定过氧化
氢酶活性。例如，近年来，一些研究人员采用蛋白质组学和质谱分析
等技术，通过检测酶样溶液中蛋白质的表达水平和酶活性的相关性，
来推断过氧化氢酶的活性水平。
CAT过氧化氢酶活性测定方法
CAT过氧化氢酶活性测定方法
过氧化氢酶（catalase，CAT）是一种常见的酶，广泛存在于细胞质
和线粒体中，能够催化过氧化氢分解为氧气和水。CAT活性的测定是评价
细胞氧化应激和抗氧化能力的重要方法之一、本文将介绍两种常用的CAT
活性测定方法：碘化钾法和比色法。
1.碘化钾法：
碘化钾法是利用过氧化氢在碱性条件下与碘离子反应生成氧气，然后
通过滴定测定碘化钾的消耗量，间接测定CAT活性。
实验步骤如下：
1）制备适量的超纯水溶解适量的碘化钾，并与浓度为0.1M的
Na2CO3缓冲溶液混合，调整pH至10-11
2）将待测样品加入上述溶液中，使得总体积约为2mL。
3）在和样品相同条件下作空白对照实验。
4）加入10%的H2O2溶液激活酶，使得最后的浓度约为0.1%。
5）停止反应，一般方法是加入0.1M的硫酸停止酶促反应，使得酶催
化生成的氧气转化为水。
6）滴定反应液中的I2溶液，直至反应液呈深蓝色为止。
7）计算CAT活性，根据滴定的I2溶液量计算反应液中过氧化氢含量，再用过氧化氢摩尔浓度除以单位时间，得到CAT的活性。
2.比色法：
比色法是通过测量酶催化H2O2分解时产生的物质的吸光度或荧光强度变化来间接测定CAT活性。
实验步骤如下：
1）将待测样品加入适量的酶活化缓冲液中。
2）加入适量的过氧化氢（一般浓度为10mM）。
3）在和样品相同条件下作空白对照实验。
4）置于适当的反应温度下孵育一段时间。
5）停止反应，一般方法是加入NaOH溶液，将反应液pH调至碱性，停止酶促反应。
6）测定反应液中的吸光度或荧光强度。
过氧化氢酶(CAT)酶活测定方法
过氧化氢酶酶活测定方法
一配溶液:
1. 1.5% NaBO3·4H2：
称取1.5g NaBO3·4H2O溶于100ml纯水
2. 0.067M 磷酸盐缓冲：
称取磷酸氢二钠 2.398g溶于100ml纯水，另称取磷酸二氢钠 1.05g 溶于100ml 纯水中，按配方配置成PH为6.8的PBS
3. 1M硫：
10.87ml浓硫酸加入200ml纯水中
4. 0.05M高锰：
0.79g高锰酸钾溶于100ml纯水中。
5. HCl溶液：调PH
二仪器：37°水浴箱，，滴定管，PH试纸，移液器，15ML的离心管，烧杯三步骤：
1.预先用HCL将pH调至6.8的1.5%NaBO3·4H2O 8mL加入含有1.5mL
0.067M ph6.8的磷酸盐缓冲液的烧杯中。
2.在37℃下保持20min后，实验组加入0.5ml酶，对照组加入等量的缓冲
液，混合摇匀。
3．5分钟后，加入到10ml1M硫酸中
4. 在烧瓶中用0.05M高锰酸钾滴定。
5. 结果表示为硼酸单位/每克酶
四计算公式：
酶活力=(V blank—V sample)×0.05×稀释倍数/(样品浓度×0.5) ×(1000/5min)×1000(U/g)
过氧化氢酶活性测定
时间，5分钟后迅速向B瓶中加入wenku.baidu.com. 8mol/LH2SO45ml，终止酶活性。
酶活性测定
0.2M 1.8M 20% 酶 1.8M 钼酸 淀粉 0.05M 保 管 H2SO4 H2SO4 KI溶 铵溶 溶液 Na2S2O3 液 H 2 O2 温 号 液(ml) 液(滴) (滴) 溶液的 (ml) (ml) (ml) 滴定量
六、思考题：
1、本实验中影响CAT活性测定的因素有哪些？
实
验
六
过氧化氢酶活性的测定 ——碘量法
生物体内重要的三种氧化酶类，其作用均是清除体 内自由基： POD：过氧化物酶 SOD：超氧化物歧化酶 CAT：过氧化氢酶
学时：3
一、实验目的：
1、掌握碘量法测定过氧化氢酶活性的原 理和方法； 2、了解过氧化氢酶的作用。
二、实验原理:
植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2 发生累积。H2O2可进一步生成氢氧自由基（OH˙）。 氢氧自由基（OH˙）是化学性质最活泼的活性氧，可以直接 或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并且有非 常高的速度常数，破坏性极强，可使细胞膜遭受损害，加速 细胞的衰老和解体。 过氧化氢酶(catalase；CAT)可以清除H2O2、分解氢氧自由 基，保护机体细胞稳定的内环境及细胞的正常生活，因此 CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植 物的抗逆性密切相关。
过氧化氢酶的活性测定
过氧化氢酶的活性测定
方法一：高锰酸钾滴定法
1、实验目的：掌握高锰酸钾滴定法测定过氧化氢酶的活性的原理和方法。
2、实验内容：
实验原理：过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。据此，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的H2O2。即可求出消耗的H2O2的量。
试剂：
10％H2SO4；
0.2mol／L磷酸缓冲液pH7.8；
0.02mol／L高锰酸钾标准液：称取KMnO4(AR)3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000mL，用0.1mol／L草酸溶液标定；
0.1mol／L H2O2：市售30％H2O2大约等于17.6mol／L，取30％H2O2溶液5.68mL，稀释至1000mL，用标准0.02molKMnO4溶液(在酸性条件下)进行标定；
0.1mol／L草酸：称取优级纯H2C2O2·2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1L。
操作步骤：
3.1酶液提取：
取高羊茅草叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲液少量，研磨成匀浆，转移至25mL 容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转入容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000r／min离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
3.2酶反应过程
取50mL三角瓶4个(3个测定，1个对照)，测定瓶中加入酶液2.5mL，对照瓶中加入煮死酶液2.5mL，再加入2.5mL 0.1mol／L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10％H2SO4 2.5mL。
过氧化氢酶活性测定实验报告
过氧化氢酶活性测定实验报告
《过氧化氢酶活性测定实验报告》
实验目的：
本实验旨在通过测定过氧化氢酶活性，探究该酶在生物体内的重要作用，并了解其在氧化还原反应中的作用机制。
实验方法：
1. 提取过氧化氢酶：将待测样品（如动植物组织、细胞等）在低温下破碎，利用离心等手段分离出过氧化氢酶。
2. 过氧化氢酶活性测定：将提取的过氧化氢酶与过氧化氢底物反应，通过监测底物消耗速率或产物生成速率来测定酶的活性。
实验结果：
通过实验测定，我们得到了不同样品中过氧化氢酶的活性数据。观察到在不同条件下，过氧化氢酶活性呈现出明显的差异，这表明过氧化氢酶的活性受到环境条件的影响。
实验结论：
通过本实验，我们深入了解了过氧化氢酶在生物体内的重要作用，以及其在氧化还原反应中的作用机制。同时，我们也发现了过氧化氢酶活性受到环境条件的影响，这为进一步研究酶的调控机制提供了重要的参考。
总结：
过氧化氢酶活性测定实验为我们提供了深入了解生物体内氧化还原反应的重要手段，为进一步研究酶的功能和调控机制提供了重要的参考。希望通过这一实验，能够加深我们对生物体内酶的认识，为生物医学领域的研究和应用提供更
多的可能性。
过氧化氢酶活性的测定
过氧化氢酶活性的测定
过氧化氢酶（catalase）是一种重要的酶类，在多种生物体和植物中广泛存在。其主
要作用是将氧化还原反应中产生的过氧化氢（H2O2）转化成水（H2O）和氧气（O2）。这个反应是非常重要的，因为H2O2是一种有害物质，会破坏细胞内的蛋白质、脂质和DNA等结构。因此，过氧化氢酶不仅保护生物体内部结构的完整性，还保护它免受外部环境的伤害。本文将介绍过氧化氢酶活性的测定方法。
实验材料：
1. 1.5 mL离心管；
2. 10% 过氧化氢溶液；
3. 100 mM 磷酸缓冲液（pH 7.0）；
4. 视网膜素（1 mg/mL）。
实验步骤：
1. 将取自动物或植物的新鲜组织（例如肝脏、叶片、果实）切成小块，加入绞肉机中充分研磨，随后用冷水冲洗，挤出汁液，离心5分钟，去除颗粒，收集上清液作为酶提取物；
2. 准备一组试管，分别加入0.1 mL酶提取物、0.5 mL100 mM磷酸缓冲液和0.4 mL 10% 过氧化氢溶液，并加入0.1 mL纯水作为对照试验管；
3. 在试管中迅速混合，放在37℃恒温水浴中反应15分钟；
4. 反应结束后，加入1 mL苯酚酐试剂，盖上盖子，轻轻颠倒，立即读取吸光度A405，并计算过氧化氢酶活性。
计算过氧化氢酶活性的公式为：
过氧化氢酶活性（U/mg）= [（对照A405 - 试验A405）/ 对照A405] × 1000/ [反应体系总反应时间（分钟）÷ 酶提取体积（mL）] × 酶提取物的蛋白质浓度（mg/mL）
其中，对照是不加入酶提取物的试验管，试验则是加入酶提取物的试验管。以对照的
过氧化氢酶活性测定
过氧化氢酶活性测定
引言
过氧化氢酶是一种广泛存在于生物体中的重要酶类。它能够催化过氧化氢（H2O2）与还原物质反应，将H2O2分解成水和氧气。过氧化氢酶在细胞中起着调节氧化应激及清除有害过氧化氢的作用。因此，测定过氧化氢酶活性对于研究生物体的氧化应激反应以及评估细胞状态具有重要意义。
原理
过氧化氢酶的活性可以通过测定其催化过氧化氢分解反应速率来确定。本实验以庚酮过氧化物（DPI）为底物，通过酶反应将庚酮过氧化物氧化为二氧化碳和乙酰乙醛。乙酰乙醛的生成量与过氧化氢酶的活性成正比。
实验中，首先准备一定浓度的庚酮过氧化物溶液，并将待测酶样品与庚酮过氧化物混合。在特定条件下，观察反应体系中庚酮过氧化物的消耗程度。通过测定庚酮过氧化物消耗量的变化，可以计算出过氧化氢酶的活性。
实验步骤
1.准备实验所需试剂和仪器：庚酮过氧化物溶液、酶样品、缓冲溶液、试管、分光光度计等。
2.设置实验条件：温度、pH值等。
3.分别取适量的庚酮过氧化物溶液和酶样品，加入相应的缓冲溶液，混合均匀。
4.在一组对照实验中，将庚酮过氧化物溶液替换为缓冲溶液，以消除庚酮过氧化物自身的分解。
5.在指定的时间间隔内，从不同实验体系中取出一定量的反应液，用分光光度计测定庚酮过氧化物的吸光度。
6.计算不同时间点庚酮过氧化物消耗量的变化，并绘制庚酮过氧化物消耗曲线。
7.根据庚酮过氧化物的消耗速率计算过氧化氢酶的活性。
数据处理
根据庚酮过氧化物的消耗曲线，可以确定反应速率。通过比较对照组与实验组的反应速率，计算过氧化氢酶的活性。
过氧化氢酶的活性计算公式如下：
过氧化氢酶活力的测定实验报告
过氧化氢酶活力的测定实验报告
实验目的，通过测定过氧化氢酶活力的实验，掌握酶活力的测定方法，了解酶活性受到什么因素的影响，为进一步研究酶的特性和应用提供理论基础。
实验原理，过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶，其活性可通过测定其催化分解过氧化氢的速率来间接反映。该实验采用比色法，通过观察过氧化氢酶催化分解过氧化氢后生成的物质对底物的吸光度变化来测定过氧化氢酶的活力。
实验步骤：
1. 预先配制好过氧化氢酶的不同浓度溶液。
2. 在试管中分别加入过氧化氢酶溶液、过氧化氢底物和磷酸盐缓冲液，混合均匀。
3. 将混合液放入分光光度计中，记录吸光度随时间的变化。
4. 根据吸光度变化曲线，计算出不同浓度过氧化氢酶的活力。
实验结果与分析：
通过实验测定，得到了不同浓度过氧化氢酶的活力数据。分析数据发现，过氧化氢酶活力随着浓度的增加呈现出一定的变化规律。随着过氧化氢酶浓度的增加，其活力也随之增加，但当浓度达到一定范围后，活力增加速率逐渐减缓，最终趋于稳定。这说明过氧化氢酶的活力受到其浓度的影响，但存在一定的饱和效应。
实验结论，通过本次实验，我们成功测定了过氧化氢酶的活力，并对其活力受浓度影响的规律进行了分析。实验结果表明，过氧化氢酶的活力随着浓度的增加呈现出一定的变化规律，但存在饱和效应。这对于我们进一步研究酶的特性和应用具有一定的指导意义。
实验意义，本次实验通过测定过氧化氢酶的活力，掌握了酶活力的测定方法，了解了酶活性受到浓度影响的规律。这对于深入研究酶的特性和应用具有一定的理论意义和实践价值。
总结，通过本次实验，我们成功测定了过氧化氢酶的活力，并对其受浓度影响的规律进行了分析。这为我们进一步研究酶的特性和应用提供了理论基础，也为我们掌握了酶活力的测定方法提供了实验经验。希望通过今后的实验研究，能够更深入地了解酶的特性和应用，为科学研究和实践应用提供更多有益的信息。
过氧化氢酶活力的测定碘量法
过氧化氢酶活力的测定碘量法
过氧化氢酶活力的测定可使用碘量法来进行。具体步骤如下：
1.准备样品：制备合适浓度的过氧化氢酶样品。
2.制备反应液：将适量的磷酸缓冲液倒入试管中，加入适量的
过氧化氢底物。
3.加入样品：向反应液中加入过氧化氢酶样品。
4.开始反应：立即加入一定浓度的碘化钾溶液。
5.反应停止：加入淀粉溶液，用以观察碘化物是否被消耗完。
6.蓝色终点的判定：当溶液出现蓝色时，立即停止加淀粉溶液，记录下此时的反应时间。
7.对照试验：进行空白对照实验，重复以上步骤，但不加入过
氧化氢酶样品。
8.测定活力：根据反应时间计算出过氧化氢酶的活力值，活力
值等于样品试验结果减去对照试验结果。
需要注意的是，测定过程中需保证反应均匀和充分，同时需要计算和排除非酶催化的部分反应速率。
过氧化氢酶活性的测定
植物体内过氧化氢酶活性的测定
一、目的
过氧化氢酶普遍存在于植物组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力均有关系，故常加以测定。通过实验可了解过氧化氢酶的作用，并掌握测定过氧化氢酶活性的原理和方法。
二、原理
过氧化氢酶把过氧化氢分解为水和氧，其活性大小，以一定时间内分解的过氧化氢量来
表示，当酶与底物（H
2O
2
）反应结束后，用碘量法测定未分解的H
2
O
2
量。以钼酸铵作催化剂，
使H
2O
2
与KI反应，放出游离碘，然后用硫代硫酸钠滴定碘，其反应式为：
H
2
O
2
+ 2KI + H
2
SO
4
—→I
2
+ K
2
SO
4
+ 2H
2
O
I
2
+ 2Na
2
S
2
O
3
—→2NaI + Na
2
S
4
O
6
根据空白和测定二者硫代硫酸钠滴定用量之差，即可求出过氧化氢酶分解H
2
O
2
的量。
三、材料、仪器设备及试剂
1. 材料：水稻叶、甘蔗叶及其他植物叶片。
2. 仪器设备：分析天平；恒温水浴；研钵；100ml容量瓶；100ml三角瓶；滴定管；滴定管架；移液管；移液管架；漏斗；洗耳球等。
3. 试剂及配制
1.8mol·L－1H
2SO
4
10﹪(NH
4.)
6
M
O7
O
4
0.02 mol·L－1 Na
2S
2 O
3
20﹪KI
1﹪淀粉液
CaCO
3
粉
石英砂
0.018﹪H2O2溶液配制：吸取30﹪H2O2原液0.3ml至50ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后再稀释10倍。
四、实验步骤
1. 过氧化氢酶的提取
选取甘蔗功能叶片，擦净去主脉剪成碎片，混匀后迅速称取1g放入经冷冻过的研钵中，
加少量CaCO
3
粉末及石英砂，并加入3～4ml蒸馏水，在冰浴上研磨至匀浆，用蒸馏水将匀浆通过漏斗洗入100ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀后过滤。然后再取滤液10ml 至100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀即为酶稀释液。
过氧化氢酶活力的测定实验报告
过氧化氢酶活力的测定实验报告
实验目的，通过本次实验，我们旨在测定过氧化氢酶的活力，并探究影响酶活力的因素。
实验原理，过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶，其活力可通过测定其催化分解过氧化氢的速率来反映。实验中，我们利用底物过氧化氢与过氧化氢酶反应生成氧气和水的特性，通过测定氧气释放速率来确定过氧化氢酶的活力。
实验步骤：
1. 制备过氧化氢酶活性测定液，将过氧化氢酶溶液与过氧化氢底物混合，并在一定温度下反应一段时间，然后停止反应并测定氧气释放速率。
2. 测定氧气释放速率，利用气体收集装置，将释放的氧气收集起来，并通过测定氧气体积的变化来计算出氧气释放速率。
3. 计算过氧化氢酶活力，根据氧气释放速率，利用相关公式计算出过氧化氢酶的活力。
实验结果与分析：
我们进行了多次实验，并测定了不同浓度的过氧化氢酶的活力。通过实验数据的分析，我们发现过氧化氢酶活力与其浓度呈正相关关系，即随着过氧化氢酶浓度的增加，其活力也随之增加。这与酶学理论相符合，因为酶的活性与其浓度有密切关系。
结论：
通过本次实验，我们成功测定了过氧化氢酶的活力，并得出了过氧化氢酶活力与浓度的正相关关系。这为进一步研究酶活力的影响因素提供了重要参考。同时，本实验也验证了过氧化氢酶活力测定方法的可行性和准确性。
总结：
过氧化氢酶活力的测定是酶学研究中的重要内容之一，通过本次实验，我们不仅熟悉了过氧化氢酶活力的测定方法，还加深了对酶活力与浓度关系的理解。希望本实验能为相关领域的研究提供一些借鉴和参考。
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过氧化氢酶的活性测定——高锰酸钾滴定法（滴定法、比色法）【原理】
过氧化氢酶（CAT）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
R(Fe+2)+H2O2==R(Fe+3+OH－)
R(Fe+3OH－)2+ H2O2==R(Fe+2)2+2H2O+O2
据此，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量（反应过量）的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的H2O2 5 H2O2+2 KMnO4+4H2SO4-------- 5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4
即可求出消耗的H2O2的量。
【仪器和用具】
研钵；三角瓶50ml×4；酸式滴定管（10ml）；恒温水浴；容量瓶25ml×1。
【试剂】
10% H2SO4；0.2mol/L磷酸缓冲液pH7.8；
0.1mol/L高锰酸钾标准液：称取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，用0.1mol/L草酸溶液标定；
0.1mol/L H2O2：市售30% H2O2大约等于17.6mol/L，取30% H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/ KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；
0.1mol/L草酸：称取优级纯H2C2O4•2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1L。
【方法】
1.酶液提取取小麦叶片
2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转入容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
2.取50ml三角瓶4个（两个测定两个对照），测定瓶中加入酶液2.5ml，对照瓶中加入高温灭活酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10% H2SO4 2.5ml。
3.用0.1mol/L KMnO4标准溶液滴定H2O2，至出现粉红色（在30min内不消失）为终点。
4.结果计算：
酶活性用每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数表示：
酶活(mg H2O2/gFW•min)=
式中A—对照KMnO4滴定毫升数；
B—酶反应后KMnO4滴定毫升数；
VT—酶液总量（ml）；
V1—反应所用酶液量（ml）;
W—样品鲜重（g）；
1.7—1ml 0.1mol/L 的KMnO 4相当于1.7mg H 2O 2。
三、过氧化氢酶的活性测定——紫外吸收法
【原理】
H 2O 2在240nm 波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A 240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。
【仪器与用具】
紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml 容量瓶1个；0.5ml 刻度吸管2支，2ml 刻度吸管1支；10ml 试管3支；恒温水浴；
【试剂】
0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）； 0.1mol/L H 2O 2（用0.1mol/L 高锰酸钾标定）。 【方法】
1.酶液提取：称取新鲜小麦叶片或其它植物组织0.5g 置研钵中，加入2～3ml 4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入25ml 容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。混合均匀将量瓶置5℃冰箱中静置10min ，取上部澄清液在4000rpm 下离心15min ，上清液即为过氧化氢酶粗提液。5℃下保存备用。
2.测定：取10ml 试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表20-2顺序加入试剂。
25℃预热后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L 的H 2O 2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm 下测定吸光度，每隔1min 读数1次，共测4min ，待3支管全部测定完后，按下式计算酶活性。 3.结果计算：
以1min 内A 240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u ）。
过氧化氢酶活性(u/gFW/min)=FW t V .V A T
⨯⨯⨯⨯124010∆
式中 ∆A 240 = A S 0－()
A A S S 122+
A S 0—加入高温灭活酶液的对照管吸光值； A S 1, A S 2—样品管吸光值； Vt —粗酶提取液总体积（ml ）； V 1—测定用粗酶液体积（ml ）； FW —样品鲜重（g ）；
0.1—A 240每下降0.1为1个酶活单位（u ）；
t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。
【注意事项】
凡在240nm下有强吸收的物质对本实验有干扰。
三、过氧化氢含量的测定
【原理】
H2O2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被H２SO4溶解后，在415nm波长下比色测定。在一定范围内，其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系。
【仪器和用具】
研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。
【试剂】
100μmol/L H2O2丙酮试剂：取30%分析纯H2O2 57μl，溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（W/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。
【方法】
1.制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表20-1加入试剂。
待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml刻度，415nm波长下比色。
2.样品提取和测定：(1)称取新鲜植物组织2~5g（视H2O2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000 r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。
3.结果计算：