植物生理学-过氧化氢酶的活性的测定

过氧化氢酶活力的测定

实验三过氧化氢酶活性的测定一、实验目的：了解过氧化氢酶的作用，掌握碘量法测定过氧化氢酶活性的原理和方法；二、实验原理:过氧化氢酶是一类色素蛋白，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢既是氧化剂又是还原剂。

R（Fe＋2）2＋H2O2---R(Fe+3OH)2R(Fe+3OH)2+ H2O2 ----R（Fe＋2）2+2H2O+O2并合上式：H2O2 ----2H2O+O2据此，可根据消耗H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。

在反应系统中加入一定量的过氧化氢溶液，经酶促反应后，加入过量的KI溶液生成的I2用标准的Na2S2O3滴定，根据N a2SO3消耗的体积计算H2O2的消耗量。

三、实验材料、仪器和试剂：1、实验材料：小白菜2、仪器：恒温水浴锅、研钵、容量瓶、刻度吸管、100mL三角瓶3、试剂：（1）0.05mol/L H2O2 （2）2mol/LH2SO4（3）0.1mol/L Na2S2O3（4）1%淀粉溶液（5）10%(NH4)6Mo7O24（6）pH7.8的磷酸缓冲液（7）20% KI（8）CaCO3四、实验步骤：（1）酶液提取：称取2.5g白菜叶，加少量CaCO3，2mLpH7.8的缓冲液少量，研成匀浆，移入100ml容量瓶，用上述缓冲液冲洗研钵数次转入容量瓶中定容，静置10分钟，过滤。

取滤液10mL于另一100mL的容量瓶中稀释定容待测（根据酶活高低而定）。

（2）酶促反应：取锥形瓶4个，编好号各加入10ml酶液之后，立即向两个瓶中加入2mol/L H2SO45mL，终止酶活性，作空白对照。

向另外两瓶各加H2O2 5mL，摇匀，在加入H2O2的那一刻起，记录时间，5分钟后迅速向实验瓶中加入2mol/LH2SO45mL，终止酶活性。

向三角瓶中加1mL 20% KI和3滴(NH4)6Mo7O24，摇匀后迅速用标准Na2S2O3溶液进行滴定至淡黄色，加入1mL1%淀粉指试剂，蓝色恰好消失，记录消耗的Na 2S 2O 3的体积V 0，V ；五、结果记录与数据处理：被分解的H 2O 2量（mg ）=（空白滴定值-样品滴定值）×Na 2S 2O 3摩尔浓度×17 过氧化氢酶活性（mg.g -1.min -1）=(min))()()(O H 22时间样品重测定取液量总体积量被分解的 g mg 六、结果分析与问题讨论：实验十还原型V C含量测定一、实验目的学会从生物样品中提取维生素C方法,了解蔬菜中维生素C的含量。

过氧化物酶活性的测定实验报告

一、实验目的了解过氧化物酶（POD）在植物生理学中的重要作用，掌握测定POD活性的方法，并分析不同因素对POD活性的影响。

二、实验原理过氧化物酶是一种广泛存在于植物组织中的酶，能够催化过氧化氢（H2O2）分解为水（H2O）和氧气（O2）。

在实验中，通过测定在一定时间内POD分解H2O2产生氧气的量，来评价POD的活性。

反应方程式如下：2H2O2 → 2H2O + O2本实验采用愈创木酚法测定POD活性。

愈创木酚在POD催化下被氧化，生成对苯醌，进而与氯化铁形成紫色络合物，通过测定紫色络合物的吸光度变化来反映POD的活性。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 植物叶片（如马铃薯、菠菜等）- 过氧化氢（H2O2）- 愈创木酚- 氯化铁- 磷酸氢二钠（Na2HPO4）- 磷酸氢钠（NaH2PO4）- pH计- 离心机- 分光光度计- 研钵- 试管- 移液器- 电子天平2. 实验试剂：- 0.1 M磷酸盐缓冲液（pH 7.0）- 0.1 M H2O2溶液- 0.5 M愈创木酚溶液- 0.1 M氯化铁溶液四、实验步骤1. 酶液提取：将植物叶片洗净、剪碎，加入预冷的磷酸盐缓冲液，在研钵中研磨成匀浆。

将匀浆液转移至离心管中，4℃、12,000 rpm离心10分钟，取上清液即为酶液。

2. 测定酶活性：取5支试管，编号为1-5，分别加入以下试剂：- 空白组：0.1 M磷酸盐缓冲液1.0 mL、0.1 M H2O2溶液1.0 mL、0.5 M愈创木酚溶液1.0 mL- 实验组：0.1 M磷酸盐缓冲液1.0 mL、0.1 M H2O2溶液1.0 mL、0.5 M愈创木酚溶液1.0 mL、酶液0.1 mL将各试管混匀，置于37℃恒温水浴中保温5分钟。

取出试管，立即放入冰浴中终止反应。

使用分光光度计在波长560 nm处测定各试管吸光度。

3. 计算酶活性：以空白组吸光度为基准，计算各实验组吸光度变化值（ΔA）。

根据下列公式计算酶活性：酶活性（U/g·min）= ΔA × 0.05 × 10^3 / 酶液浓度五、结果与分析1. 不同植物叶片POD活性比较：实验结果显示，不同植物叶片的POD活性存在差异。

【高中生物】过氧化氢酶活性的测定(氧电极法)

【高中生物】过氧化氢酶活性的测定（氧电极法）原理过氧化氢酶广泛存在于所有植物组织中。

它能将过氧化氢分解为氧气和水，保护身体免受过氧化氢的毒性影响。

过氧化氢酶的测定有压力法、滴定法和分光光度法。

氧电极法测定氧释放速率灵敏、快速。

氧释放速率与过氧化氢酶活性成正比。

仪器药品氧电极记录仪电磁搅拌器超级恒温水浴注射器、微量注射器和容量瓶反应杯亚硫酸钠过氧化氢酶50mmol/l磷酸缓冲液，ph7.0（见附表2）。

50mmol/L过氧化氢溶液：取30%过氧化氢1.4ml，用磷酸缓冲液稀释至250ml。

标准过氧化氢酶溶液：称取过氧化氢酶(sigma)1.0mg(110u/mg)，溶于50mmol/l磷酸缓冲液(ph7.0)11ml中，使酶浓度为10u/ml。

操作步骤1．仪器的标定按照实验步骤88校准仪器，以获得记录纸上每个小网格的等效氧含量。

2．绘制酶活性标准曲线（1）在反应杯中加入过氧化氢磷酸缓冲液，打开电磁搅拌器搅拌10分钟，插入电极，吸收电极外溢出的溶液，调整换档旋钮，使记录笔约满刻度的10-20%，使记录纸四处移动，温度在1-2分钟后达到平衡，记录笔画出一条直线。

(2)用微量注射器从电极塞小孔中注入10μ110u/ml过氧化氢酶，立即记录最初90秒钟内的氧释放曲线。

（3）按照上述相同步骤，注入不同浓度的过氧化氢酶10μL（例如，浓度为20、30、40、50U/ml），并记录氧释放曲线。

(4)取放氧曲线的直线部分高中学习方法，根据其斜率及走纸速度，计算每分钟氧的释放量。

（5）以过氧化氢酶活性单位为横坐标，以每分钟释放的氧气量为纵坐标绘制标准曲线。

3．样品测定（1）将50mmol/L过氧化氢磷酸缓冲液注入反应室，搅拌10分钟，插入电极，记录10分钟后，以直线μL注入适当浓度的待测酶溶液样品，立即记录前90秒内的析氧曲线。

(2)根据样品的放氧曲线，计算得到每分钟的放氧量，在标准曲线上查得酶活性大小。

（3）如果没有标准过氧化氢酶且无法计算酶活性的单位，则每分钟的相对氧释放量也可用于显示酶的活性。

植物生理学-过氧化氢酶的活性的测定

过氧化氢酶的活性的测定－紫外线吸收法一、原理H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度（A240）随反应时间而降低。

根据测量率的变化速率即可测出过氧化氢酶的活性。

二、材料与设备植物材料：植物的叶实验材料：紫光分光光度计、离心机、研钵、250ml容量瓶、0.5ml 吸管1支、10ml试管1支试剂：0.2mol/LpH7.8磷酸缓冲液0.1mol/ H2O2（用0.1mol/L高锰酸钾标定）三、操作步骤1、酶提取液：称取叶片0.5g置于研钵中，加入pH7.0的磷酸缓冲液研磨成为匀浆，并用缓冲溶液清洗研钵数次（共用6ml磷酸缓冲液，缓冲液分几次加入），取上部澄清液在4000rpm下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液。

保存备用。

2、测定：取10ml试管1支，按表20-2顺序加入试剂。

紫外线吸收法测定H2O2样品配置表在管中加入0.3ml0.1mol/L的H2O2，加完后立即计时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔一分钟读数一次，共测三分钟，测完后，按下式计算酶活性。

四、结果计算以1min内减少0.1的酶量为一个酶活单位（u）△A240×V T过氧化氢酶活性（u/gFW/min）=0.1×V×t×FW=0.043×4.6÷0.1÷0.2÷0.3÷3 =10.99五、实验反思1、影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些？过氧化氢酶提取自植物的新鲜叶片中，新叶与旧叶的酶活性存在差异，所以叶片的选择会影响酶活性的测定。

温度的变化也会引起酶活性的测定研磨是否充分，洗涤是否洗干净也会影响。

2、实验测得的吸光度较小（吸光度的起始值较低），酶活性较小，可能是选取的叶片较老，实验中的失误，用滴定管滴定时，滴定的蒸馏水超过了1ml，造成了过氧化氢酶的浓度偏低，用紫外线吸收法测定时造成吸光度值偏低。

过氧化氢酶活性测定1

实验 48 过氧化物酶活性的测定（比色法）过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶，它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系，在植物生长发育过程中，它的活性不断发生变化，因此测量这种酶，可以反映某一时期植物体内代谢的变化。

一、原理在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在 470 nm 处有最大吸收，可用分光光度计测量 470 nm 的吸光度变化测定过氧化物酶活性。

二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料马铃薯块茎。

（二）试剂1 ． 100 mmol ／ L 磷酸缓冲液 pH6.0 （见附录）。

2 ．反应混合液： 100 mmol ／ L 磷酸缓冲液（ pH6.0 ） 50 mL 于烧杯中，加入愈创木酚 28 μl ，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入 30 % 过氧化氢 19 μl ，混合均匀，保存于冰箱中。

（三）仪器设备分光光度计，研钵，恒温水浴锅， 100 mL 容量瓶，吸管，离心机。

三、实验步骤1 ．称取植物材料 1 g ，剪碎，放入研钵中，加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆，以 4000 r ／ min 离心 15 min ，上清液转入 100 mL 容量瓶中，残渣再用 5mL 磷酸缓冲液提取一次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度，贮于低温下备用。

2 ．取光径 1 cm 比色杯 2 只，于 1 只中加入反应混合液3 mL 和磷酸缓冲液 1mL ，作为对照，另 1 只中加入反应混合液 3 mL 和上述酶液 1mL （如酶活性过高可稀释之），立即开启秒表记录时间，于分光光度计上测量波长 470 nm下吸光度值，每隔 1min 读数一次。

四、结果计算以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以ΔA 470 /[min · g （鲜重） ]表示之。

也可以用每 min 内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位（ u ）表示。

过氧化氢酶活性测定实验报告

过氧化氢酶活性测定实验报告实验目的，通过测定过氧化氢酶活性，探究不同条件下过氧化氢酶的活性变化规律，为进一步研究过氧化氢酶的功能和应用提供实验数据支持。

实验原理，过氧化氢酶是一种重要的酶类，在生物体内起着重要的氧化还原作用。

本实验采用比色法测定过氧化氢酶活性，其原理是过氧化氢酶催化过氧化氢分解成水和氧气，过氧化氢酶活性与生成的氧气量成正比。

实验材料与方法，实验中所需材料包括过氧化氢酶、过氧化氢、磷酸盐缓冲液、吡啶甲酸钠盐等。

首先，按照一定比例将过氧化氢酶和过氧化氢混合，然后加入磷酸盐缓冲液和吡啶甲酸钠盐，使混合液在一定温度下进行反应。

接着，通过比色法测定生成的氧气量，进而计算出过氧化氢酶的活性。

实验结果与分析，在不同温度、pH值、底物浓度等条件下，测得过氧化氢酶的活性数据。

通过对比分析不同条件下的活性数据，发现过氧化氢酶在不同条件下呈现出不同的活性变化规律。

在温度较低时，过氧化氢酶活性较低；在酸性环境下，过氧化氢酶活性受到抑制；随着底物浓度的增加，过氧化氢酶活性呈现出逐渐增加的趋势。

结论与讨论，通过本实验，我们得出了过氧化氢酶活性与温度、pH值、底物浓度等因素之间的关系。

这些结果对于深入研究过氧化氢酶的功能机制，以及在生物医学、生物工程等领域的应用具有一定的指导意义。

同时，我们也发现过氧化氢酶在不同条件下表现出不同的活性变化规律，这为进一步探究过氧化氢酶的调控机制提供了重要的实验数据支持。

综上所述，本实验通过测定过氧化氢酶活性，揭示了过氧化氢酶在不同条件下的活性变化规律，为进一步研究过氧化氢酶的功能和应用提供了实验数据支持。

希望本实验结果能够为相关领域的研究工作提供一定的参考价值。

8实验8-过氧化氢酶活性测定

4 、 0.1mol/L H2O2：取30%H2O2 （17.6mol/L）溶
液5.68mL，稀释至1000mL，用标准0.02mol/L
KMnO4溶液（在酸性条件下）标定。 5 、 0.1mol/L 草酸：称取优级纯H2C2O4.2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1000mL。
2.2 材料:小麦叶片
2.3 主要设备离心机，试管，研钵，烧杯，吸耳球，滤纸，擦镜纸，恒温箱，铁架台，酸式滴定管
4 方法步骤
1、酶液提取
取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容， 4000转离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
2 、滴定
取50mL三角瓶2个（1个测定，另1个为对照），
测定瓶中加入酶液2.5mL，对照加煮死酶液2.5mL，再加入0.1mol/L H2O2 2.5mL ，同时计时，于30℃ 恒温水浴中保温10min，立即加入 10%H2SO42.5mL。
3、用0.02mol/L KMnO4标准溶液滴定，至出现粉红色
小麦叶片离心机试管研钵烧杯吸耳球滤纸擦镜纸恒温箱铁架台酸式滴定管23主要设备酶液提取取小麦叶片25g加入ph78的磷酸缓冲溶液少量研磨成匀浆转移至25ml容量瓶中用该缓冲液冲洗研钵并将冲洗液转至容量瓶中用同一缓冲液定容4000转离心15min上清液即为过氧化滴定取50ml三角瓶2个1个测定另1个为对照测定瓶中加入酶液25ml对照加煮死酶液25ml再加入01moll25ml同时计时于30恒温水浴中保温10min立即加入10h25ml3用002mollkmno标准溶液滴定至出现粉红色在30s内不消失为终点

过氧化氢酶活力的测定实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：实验35过氧化氢酶的活性测定植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使h2o2发生累积。

h2o2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。

过氧化氢酶可以清除h2o2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。

因此，植物组织中h2o2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。

本实验用分光光度法测定过氧化氢含量，利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。

一、过氧化氢含量的测定【原理】h2o2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被h２so4溶解后，在415nm波长下比色测定。

在一定范围内，其颜色深浅与h2o2浓度呈线性关系。

【仪器和用具】研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。

【试剂】100μmol/Lh2o2丙酮试剂：取30%分析纯h2o257μl，溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（w/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。

【方法】1.制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表40-1加入试剂。

待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml 刻度，415nm波长下比色。

2.样品提取和测定：(1)称取新鲜植物组织2~5g（视h2o2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。

(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。

沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。

(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。

过氧化物酶活性的测定

实验29 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。

一、原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。

可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。

在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。

即可求出消耗的H2O2的量。

二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：小麦叶片（二）仪器设备：1. 研钵；2. 三角瓶；3. 酸式滴定管；4. 恒温水浴；5. 容量瓶。

（三）试剂：1. 10%H2SO4；2. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；3. 0.1mol/L 高锰酸钾标准液称：取KMnO4（A R）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1mol/L 草酸溶液标定；4. 0.1mol/L H2O2市售30%H2O2大约等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；5. 0.1mol/L 草酸：称取优级纯H2C2O4.2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml。

三、实验步骤（一）酶液提取：取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm 离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。

（二）取50ml三角瓶4个（两个测定，另两个为对照），测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5ml。

过氧化氢酶活性的测定

A 空 10 5 白
B 反 10 应
55 - 1
分钟
5
51
医学课件ppt
3
5 VA(空白)
=
VB(反应
35
液)
=
8
五、实验结果与计算：
1、被分解的H2O2量（mg） = （空白滴定值-样品滴定值）×Na2S2O3摩尔浓度×17
2、CAT活性（mg.g-1.min-1）= 被分解的H2O2量（mg）×(总体积÷测定取液量) 样品重（g）×时间（min）
H2O2（余）+2KI+H2SO4----→I2+K2SO4+2H2O
I2 +2Na2S2O3 --→2NaI+Na2S4O6（连二硫酸钠）
用硫代硫酸钠分别滴定空白液(可求出总的H2O2量)和反应
液(可求出未分解的H2O2量)，再根据二者滴定值之差求出分
解的H2O2量。
医学课件ppt
5
三、实验材料、仪器和试剂：
医学课件ppt
6
四、实验步骤：
1、酶液提取：
称取0.5g三叶草，加少量石英砂，CaCO3，2ml水，研成匀浆，移入50ml容量瓶，冲洗研钵数次，定容，静置，过滤。
2、酶促反应：
（1）取锥形瓶2个，编号A，B，各加入10ml酶液，之后立即向A瓶中加入1.8mol/L H2SO45ml，终止酶活性，作空白滴定。
医学课件ppt
9
六、思考题：
1、本实验中影响CAT活性测定的因素有哪些？
医学课件ppt
10
记录两次消耗Na2S2O3的体积医VA学(课空件白p)p，t VB(反应液)。
7
酶活性测定
管号
酶液

过氧化氢酶活性的测定

过氧化氢酶活性的测定过氧化氢酶（catalase）是一种重要的酶类，在多种生物体和植物中广泛存在。

其主要作用是将氧化还原反应中产生的过氧化氢（H2O2）转化成水（H2O）和氧气（O2）。

这个反应是非常重要的，因为H2O2是一种有害物质，会破坏细胞内的蛋白质、脂质和DNA等结构。

因此，过氧化氢酶不仅保护生物体内部结构的完整性，还保护它免受外部环境的伤害。

本文将介绍过氧化氢酶活性的测定方法。

实验材料：1. 1.5 mL离心管；2. 10% 过氧化氢溶液；3. 100 mM 磷酸缓冲液（pH 7.0）；4. 视网膜素（1 mg/mL）。

实验步骤：1. 将取自动物或植物的新鲜组织（例如肝脏、叶片、果实）切成小块，加入绞肉机中充分研磨，随后用冷水冲洗，挤出汁液，离心5分钟，去除颗粒，收集上清液作为酶提取物；2. 准备一组试管，分别加入0.1 mL酶提取物、0.5 mL100 mM磷酸缓冲液和0.4 mL 10% 过氧化氢溶液，并加入0.1 mL纯水作为对照试验管；3. 在试管中迅速混合，放在37℃恒温水浴中反应15分钟；4. 反应结束后，加入1 mL苯酚酐试剂，盖上盖子，轻轻颠倒，立即读取吸光度A405，并计算过氧化氢酶活性。

计算过氧化氢酶活性的公式为：过氧化氢酶活性（U/mg）= [（对照A405 - 试验A405）/ 对照A405] × 1000/ [反应体系总反应时间（分钟）÷ 酶提取体积（mL）] × 酶提取物的蛋白质浓度（mg/mL）其中，对照是不加入酶提取物的试验管，试验则是加入酶提取物的试验管。

以对照的A405为100%活性，试验管的活性则为相对活性。

过氧化氢酶的活性单位为U/mg，也可以表示为U/g或U/L。

本实验中，苯酚酐试剂可以与酶提取物中产生的H2O2发生氧化反应，形成深蓝色产物，进而测量吸光度，从而计算出过氧化氢酶的活性。

总之，本实验的目的是测定过氧化氢酶的活性，以此来了解生物体内的氧化还原反应是否正常，并研究它在细胞生物学中的作用。

实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定

实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定一、实验目的1.了解过氧化氢酶的作用和测定方法。

二、实验原理过氧化氢酶(CAT)是一种广泛存在于生物体内的酶，其主要作用是催化过氧化氢(H2O2)分解为水(H2O)和氧(O2)，具有清除细胞内产生的过氧化氢的作用，从而保护细胞免受氧自由基的损伤。

测定过氧化氢酶活性的基本原理是利用过氧化氢酶催化过氧化氢分解的特性，测定其对过氧化氢的催化效率，从而求得过氧化氢酶的活性。

三、实验步骤1.将0.05 mL的0.1 mol/L H2O2加入到0.95 mL反应液中，混匀。

2.分别分装0.1 mL过氧化氢酶标准液A(1 U/mL)、待测样品液和纯水于三个小瓶中。

3.向3个小瓶中加入0.6 mL反应液，混匀后立即读取吸光度值。

4.将三个小瓶依次放入比色皿中，加入等体积的反应液，混匀。

5.在室温下，按照每分钟一次，共计计时5分钟，依次读取吸光度值。

6.根据吸光度值计算过氧化氢酶的活性。

四、实验注意事项1.使用新鲜的过氧化氢酶，避免长时间贮存或受热的过氧化氢酶，因其活性会降低。

2.必须按照比色皿上的顺序加入待测样品、过氧化氢酶标准液和纯水。

3.测定过氧化氢酶活性时，要注意比色皿内的反应物混匀程度和加液顺序。

4.读取吸光度时，要记录时间，使时间相同，以便计算活性值。

五、实验结果处理1.计算反应液的吸光度(OD)值。

2.计算酶活性的计算式为：CAT活性=(sample-Blank)/F/(T2-T1)其中，sample为待测样品的吸光度值；Blank为加入纯水的比色皿的吸光度值；F为稀释系数；T2-T1为反应时间，单位为分钟。

1.活性计算结果应该合理，符合实验要求。

2.实验结果能够表明过氧化氢酶的活性。

七、实验总结本次实验通过测定过氧化氢酶活性的方法，了解了测定过氧化氢酶活性的原理，熟悉了测定过氧化氢酶活性的步骤和操作方法。

同时，也掌握了计算过氧化氢酶活性的方法以及如何进行实验结果分析。

过氧化氢酶活性测定

过氧化氢酶活性测定引言过氧化氢酶是一种广泛存在于生物体中的重要酶类。

它能够催化过氧化氢（H2O2）与还原物质反应，将H2O2分解成水和氧气。

过氧化氢酶在细胞中起着调节氧化应激及清除有害过氧化氢的作用。

因此，测定过氧化氢酶活性对于研究生物体的氧化应激反应以及评估细胞状态具有重要意义。

原理过氧化氢酶的活性可以通过测定其催化过氧化氢分解反应速率来确定。

本实验以庚酮过氧化物（DPI）为底物，通过酶反应将庚酮过氧化物氧化为二氧化碳和乙酰乙醛。

乙酰乙醛的生成量与过氧化氢酶的活性成正比。

实验中，首先准备一定浓度的庚酮过氧化物溶液，并将待测酶样品与庚酮过氧化物混合。

在特定条件下，观察反应体系中庚酮过氧化物的消耗程度。

通过测定庚酮过氧化物消耗量的变化，可以计算出过氧化氢酶的活性。

实验步骤1.准备实验所需试剂和仪器：庚酮过氧化物溶液、酶样品、缓冲溶液、试管、分光光度计等。

2.设置实验条件：温度、pH值等。

3.分别取适量的庚酮过氧化物溶液和酶样品，加入相应的缓冲溶液，混合均匀。

4.在一组对照实验中，将庚酮过氧化物溶液替换为缓冲溶液，以消除庚酮过氧化物自身的分解。

5.在指定的时间间隔内，从不同实验体系中取出一定量的反应液，用分光光度计测定庚酮过氧化物的吸光度。

6.计算不同时间点庚酮过氧化物消耗量的变化，并绘制庚酮过氧化物消耗曲线。

7.根据庚酮过氧化物的消耗速率计算过氧化氢酶的活性。

数据处理根据庚酮过氧化物的消耗曲线，可以确定反应速率。

通过比较对照组与实验组的反应速率，计算过氧化氢酶的活性。

过氧化氢酶的活性计算公式如下：活性（μmol/min/mg）= (△A/min * Vt) / (ε * d * Venz * t * Venz)其中，△A/min为每分钟庚酮过氧化物的吸光度变化量，Vt为总体系体积，ε为庚酮过氧化物的摩尔吸光系数，d为光程，Venz为酶样品的体积，t为反应时间。

结论通过测定过氧化氢酶的活性，可以评估生物体内的氧化应激程度以及细胞的状态。

过氧化氢酶活性的测定

植物体内过氧化氢酶活性的测定一、目的过氧化氢酶普遍存在于植物组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力均有关系，故常加以测定。

通过实验可了解过氧化氢酶的作用，并掌握测定过氧化氢酶活性的原理和方法。

二、原理过氧化氢酶把过氧化氢分解为水和氧，其活性大小，以一定时间内分解的过氧化氢量来表示，当酶与底物（H2O2）反应结束后，用碘量法测定未分解的H2O2量。

以钼酸铵作催化剂，使H2O2与KI反应，放出游离碘，然后用硫代硫酸钠滴定碘，其反应式为：H2O2+ 2KI + H2SO4—→I2+ K2SO4+ 2H2OI2+ 2Na2S2O3—→2NaI + Na2S4O6根据空白和测定二者硫代硫酸钠滴定用量之差，即可求出过氧化氢酶分解H2O2的量。

三、材料、仪器设备及试剂1. 材料：水稻叶、甘蔗叶及其他植物叶片。

2. 仪器设备：分析天平；恒温水浴；研钵；100ml容量瓶；100ml三角瓶；滴定管；滴定管架；移液管；移液管架；漏斗；洗耳球等。

3. 试剂及配制1.8mol·L－1H2SO410﹪(NH4.)6MO7O40.02 mol·L－1 Na2S2 O320﹪KI1﹪淀粉液CaCO3粉石英砂0.018﹪H2O2溶液配制：吸取30﹪H2O2原液0.3ml至50ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后再稀释10倍。

四、实验步骤1. 过氧化氢酶的提取选取甘蔗功能叶片，擦净去主脉剪成碎片，混匀后迅速称取1g放入经冷冻过的研钵中，加少量CaCO3粉末及石英砂，并加入3～4ml蒸馏水，在冰浴上研磨至匀浆，用蒸馏水将匀浆通过漏斗洗入100ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀后过滤。

然后再取滤液10ml 至100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀即为酶稀释液。

2. 酶活性测定2.1取100ml容量瓶4个，编号，向各瓶准确加入稀释后的酶液10ml，立即向3、4号瓶中加入1.8mol·L－1H2SO45ml以终止酶活性，作为空白测定。

过氧化氢酶活性的测定

=
VB(反应
35
液)
=
五、实验结果பைடு நூலகம்计算：
1、被分解的H2O2量（mg） = （空白滴定值-样品滴定值）×Na2S2O3摩尔浓度×17
2、CAT活性（mg.g-1.min-1）= 被分解的H2O2量（mg）×(总体积÷测定取液量) 样品重（g）×时间（min）
六、思考题：
1、本实验中影响CAT活性测定的因素有哪些？
（6）20% KI
四、实验步骤：
1、酶液提取：
称取0.5g三叶草，加少量石英砂，CaCO3，2ml水，研成匀浆，移入50ml容量瓶，冲洗研钵数次，定容，静置，过滤。
2、酶促反应：
（1）取锥形瓶2个，编号A，B，各加入10ml酶液，之后立即向A瓶中加入1.8mol/L H2SO45ml，终止酶活性，作空白滴定。
H2O2反应一定时间(t)后，再用碘量法测定未分解的H2O2，以钼酸铵作催化剂，H2O2与KI反应，放出游离碘，然后用硫代硫酸钠滴定碘，反应式为：
H2O2（余）+2KI+H2SO4----→I2+K2SO4+2H2O I2 +2Na2S2O3 --→2NaI+Na2S4O6（连二硫酸钠）用硫代硫酸钠分别滴定空白液(可求出总的H2O2量)和反应液(可求出未分解的H2O2量)，再根据二者滴定值之差求出分解的H2O2量。
酶活性测定
管号
酶液
(ml)
1.8M H2SO4 (ml)
0.05M
H2O2
保温
1.8M 20% 钼酸淀粉 H2SO4 KI溶铵溶溶液 (ml) 液(ml) 液(滴) (滴)
0.2M
Na2S2O3 溶液的滴定量

过氧化氢酶活力的测定

过氧化氢酶活力的测定（张一顺 p138）一、实验原理植物体内的黄素氧化酶类代谢物常含有过氧化氢。

植物在逆境下或衰老时，体内活性氧代谢加强，也会是过氧化氢发生积累。

过氧化氢的积累不但可导致破坏性的氧化作用，也会直接或间接的氧化细胞内的核酸、蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭到损坏，从而加速细胞的衰老和解体。

过氧化氢酶是清除过氧化氢的重要保护酶，是植物中重要的酶促防御系统之一，能将过氧化氢分解为O2和H2O2,使植物有机体免受H2O2的毒害作用。

其活力与植物的抗逆性密切相关。

过氧化氢酶活力的测定原理：H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解H2O2，是反应溶液吸光度随反应时间而降低，根据测定吸光度的变化速度即可测出CA T活力。

二、材料、仪器设备及试剂新鲜的子叶或茎段、研钵2个、冰浴槽两个、研锤2个、1ml注射器2个、石英砂1瓶、药勺1把、吸水纸若干、试剂瓶1个、冰块若干、大瓷缸1个、移液枪若干把、风光光度计一台、蒸馏水两瓶、干燥的试管若干个、试管架、离心机一台、离心管若干个、记号笔1个、标签纸若干、水笔1个、水浴箱1台。

Ph=7.8 0.2mol/L的磷酸缓冲液；0.1mol/L H2O2溶液：取30%的H2O2溶液5.65ml，用蒸馏水稀释至1000ml。

Ph=7.8 0.2mol/l配置：A液：91.5ml B液：8.5ml 混合后即可，总体积100ml三、试验方法与步骤1、粗酶液的提取准备工作：离心管14个，分别标号0~6和0Y~6Y（标有Y的装子叶研磨液,带0的表示实验组），冰浴槽2个，从冰箱中刚拿出的研钵2个（带研锤）放在冰浴槽中。

取1个棕色试剂瓶放入高瓷缸中，再向里面放一冰袋（目的磷酸缓冲液保持在较低温度下），从并行中拿出磷酸缓冲液倒入棕色试剂瓶中适量。

再拿出准备好的2个1ml注射器备用，取出石英砂和药勺（去石英砂用，用最小的那个）。

取出准备好的吸水纸若干放在适当位置（用于擦拭研钵中的水珠），干毛巾一个（在向离心管中到液体前用于擦拭研钵底部的水珠）。

过氧化氢酶活力的测定实验报告doc

过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：过氧化氢酶活性测定实验29 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。

一、原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。

可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。

在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。

即可求出消耗的H2O2的量。

二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：小麦叶片（二）仪器设备：1. 研钵；2. 三角瓶；3. 酸式滴定管；4. 恒温水浴；5. 容量瓶。

（三）试剂：1. 10%H2SO4；2. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；3. 0.1mol/L 高锰酸钾标准液称：取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1mol/L 草酸溶液标定；4. 0.1mol/L H2O2市售30%H2O2大约等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；5.0.1mol/L 草酸：称取优级纯H2C2O4.2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml。

三、实验步骤（一）酶液提取：取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。

（二）取50ml三角瓶4个（两个测定，另两个为对照），测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5ml。

过氧化物酶活性的测定

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植物生理学实验报告
实验题目：过氧化物酶活性的测定
姓名
班级
四、数据分析
△A470的值太小可能是由于叶片放置过久导致过氧化物酶活性丧失。

五、思考题
1）过氧化物酶在植物体内的主要作用是什么？
答：它与光合作用、呼吸作用及生长素的氧化等都有关系。

在植物生长发育过程中它的活性不断发生变化。

一般老化组织中活性较高，幼嫩组织中活性较弱。

这是因为过氧化物酶能使组织中所含的某些碳水化合物转化成木质素，增加木质化程度，而且发现早衰减产的水稻根系中过氧化物酶的活性增加，所以过氧化物酶可作为组织老化的一种生理指标。

（2）比色时为什么要在3min 内完成。

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答：因为这个反应的速度很快，在一定时间里反应物就被消耗光。