组织裂解液和细胞裂解液的配制
细胞组织裂解(提蛋白)方法
第一种方法蛋白匀浆缓冲液：50 mM Tris-HCl (pH7.5) 150 mM NaCl5 mM EDTA1 % NP-40 1 mM PMSF操作步骤直接用这个进行组织匀浆然后于10000 rpm 离心20分钟收集上清作SDS－PAGE电泳从染色的情况来看所得到的总蛋白纯度都不错条带比较清晰。
我是作的小鼠八种常规组织也包括肾脏在内。
将抽提好的蛋白分装后直接放在负八十保存。
上样大概3~8ul每孔都可以的具体看个人需要。
70v浓缩，150v分离第二种方法裂解液配方：尿素：8M CHAPS:4% DTT:65mM(现加）PMSF:1mM(现加）MiliQ 水操作步骤：取300mg样品在液氮环境下研磨，加入1ml裂解液混匀，室温静置1小时（实验证明改为匀浆更好，蛋白降解轻），15000g离心1小时，取上清测定蛋白质浓度。
在裂解液中加IPG buffer有两个作用:1,增强蛋白质的溶解性2,可以结合核酸,在沉淀的时候予以除去。
建议最好加，浓度从0.5-2%不等（这取决于您样品蛋白质的难溶程度）。
IPG buffer 是载体两性电解质，IPG buffer另外一个作用是促进蛋白质溶解的,所以IEF前一定要加，裂解液中没有IPG buffer可以么？（可以的，最后上胶条的时候可以再加）不过，我觉得液氮研磨以后，最好是粗离心一下，把一些结缔组织给离心掉（150g既可）然后再加裂解液。
裂解液加1ML应该没什么问题，主要取决你以后蛋白的浓度。
用这个方法最好经丙酮沉淀一次比较好）第三种方法建议最好加完裂解液后再用超声波破碎，我做肝脏蛋白提取时一般采取400W工作10秒，间歇10秒，次数15次，一次结束后大约30分钟再重复上述步骤一次（因为不同的样品用一根超声柱子，可能会导致污染，所以一定要用双蒸水冲洗干净，再用70%乙醇洗一下，再用水洗一次），另外样品超声时要置于冰浴中，以免产热做过的是用10ml蛋白裂解液来匀浆3克的组织，最终用考马斯亮兰染色法测得的蛋白浓度大概为30~50 ug/ul测595 OD值时，设定一个只用水的空白，把所有测得的值都减去这个空白。
组织裂解液和细胞裂解液如何配制
组织裂解液和细胞裂解液如何配制组织裂解液和细胞裂解液是在实验室中用于将组织或细胞中的生物分子（如蛋白质、核酸等）裂解或溶解的溶液。
这些液体通常包含一系列试剂和缓冲液，以帮助维持理想的酸碱平衡和溶解条件。
以下是组织裂解液和细胞裂解液常见的配制方法。
1. 常用的组织裂解液配方为RIPA裂解液（RIPA lysis buffer），其成分包括：- 50 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）-150mM氯化钠（NaCl）- 1% NP-40或Triton X-100-0.5%钠脱氧胆酸或SDS-0.1%SDS-1mMEDTA-1mM苯甲硫酸酯（PMSF）2.配制方法：a. 称取所需量的Tris-HCl缓冲液和NaCl溶解于蒸馏水中；b. 加入适量的PMSF和其他表面活性剂（如NP-40、Triton X-100）；c.配制完毕后，pH应调整至理想值；d.将裂解液过滤或使用高速离心去除悬浮物。
细胞裂解液的配制：1.常用的细胞裂解液配方为RIPA裂解液（同组织裂解液配方）或RIPA缓冲液（不含表面活性剂），以避免破坏裂解液中的蛋白质。
2.配制方法：a.同组织裂解液的步骤1；b.不加入表面活性剂，方便后续蛋白质的分析。
同时，裂解液的配制可以根据实验需要做出适当更改，以满足特定的研究目的和条件。
在裂解液的配制过程中，需要注意以下几点：1.所选择的缓冲液的pH应调整到适合所需实验的范围内，以确保溶液的稳定性；2.表面活性剂的添加量应适中，以满足蛋白质溶解的需要，但过多的添加会造成裂解液的稀释和稳定性下降；3.裂解液的配制应注意在低温下进行，以防止试剂的降解和活性的损失；4.在裂解液的使用过程中，最好将裂解液与细胞/组织充分接触，并且较长时间地孵育，以满足完整的裂解过程。
组织裂解液和细胞裂解液如何配制？
组织裂解液和细胞裂解液如何配制？一、细胞裂解液配制方法一一、试剂准备1、新鲜配制冷的 RIPA 裂解缓冲液:150 mM NaCL1% NP-40 (去垢剂)0.1% SDS (去垢剂)2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)2ug/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)1 mM PMSF (蛋白酶抑制剂)1.5 mM EDTA (蛋白酶抑制剂)1mM NaVanadate (磷酸脂酶抑制剂)(任选)以上所有试剂均按比例溶于150 mM NaCL溶液中。
2、冷的PBS 中加入 1 mM PMSF1.5 mM EDTA1mM NaVanadate （钒酸钠）(任选)3、对数期生长状态佳的细胞，75cm至少3-4瓶（90%以上生长面积）。
二、实验步骤1、将长满细胞的培养瓶放置在冰上，用吸液管吸出培养液。
加入足够的冷的PBS在培养瓶中充分洗涤细胞表面，以洗去瓶中残留的培养基，倒掉PBS ，重复以上操作2-3遍。
在最后一次洗涤中尽可能吸干残留的PBS，尽量在冰上操作。
2、向培养瓶中加入冷的RIPA 裂解缓冲液 (每75cm2 培养瓶加1ml). 然后用细胞刮子沿着瓶壁开始刮细胞，如果所需要刮的同种细胞有多瓶，则将第一瓶刮下的细胞液吸出转入下一瓶中继续刮 (由于处理后的细胞裂解液较粘稠，所以宜用直径大点的吸液管吸取)。
3、吸出刮好的细胞裂解液置于14ml 离心管中（置于冰上），然后重复步骤2以刮取剩下的细胞。
4、尽可能将多的细胞裂解液收集到14ml的离心管中，样品插入冰盒进行超声，超声强度以不产生泡沫为准，超声每次2-3秒，重复3-4次。
如仍有细胞碎片或沉淀，应离心10000rpm,10分钟，留取上清。
5、取出小量细胞裂解液测其蛋白浓度（用Biorad Bradford 试剂盒或紫外分光光度计，在A280测定），分装保存在 -70℃。
方法二NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 8.0) 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟） 0.1mmol/L(100μg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 μmol/L(0.7μg/ml)Leupeptin（亮抑制肽） 0.5mg/mlAprotinin（抑蛋白酶肽） 0.3μmol/L(1μg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于0.01mol/LHEPES(pH8.0);Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）裂解操作程序：* 离心收集1×107个细胞* 加入4℃预冷1%NP-40裂解液100μl* 剧烈震荡使细胞充分悬浮混匀（如为组织进行匀浆）* 4℃放置15~30min* 4℃离心，15 000rpm,10min，取上清备用。
裂解液配制方法
裂解液配制方法 The manuscript was revised on the evening of 20211、红细胞裂解液（去除红细胞）配制试剂所需材料：1. Ammonium Chloride x10 Lysing Concentrate Solutiona) NH4Cl (1.5 M) 80 gb) KHCO3 (100 nM) 10 gc) Na4EDTA (10 nM) 3.7 gd) Distilled H2O 1000 mL2. 1N HCl or 1N NaOH（调节pH值用）配制步骤：1. 将以上a、b、c试剂溶于900ml 去离子水中；2.调节溶液pH值到，加去离子水定容到1000ml；3.在制备工作液时，将此储存液稀释10倍后使用。
保存：储存液储存于2-8°C不能超过半年（六个月）；2.在使用前，工作液每天都应该新鲜配制放置于室温，当日用不完的弃掉。
2、ripa裂解液NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟） L(100μg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 μmol/Lμg/ml)Leupeptin（亮抑制肽） mlAprotinin（抑蛋白酶肽）μmol/L(1μg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于LHEPES；Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）3、细胞裂解液（Tris－HCL）1．1M Tris 溶液的配置取Tris242.2g，加ddH2O至1600ml，加热溶解。
2．1M Tris－HCL Ph=溶液的配置取 1M Tris 溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=（需浓盐酸约），加ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用。
细胞组织裂解(提蛋白)方法
细胞组织裂解(提蛋白)方法编辑整理：尊敬的读者朋友们：这里是精品文档编辑中心，本文档内容是由我和我的同事精心编辑整理后发布的，发布之前我们对文中内容进行仔细校对，但是难免会有疏漏的地方，但是任然希望（细胞组织裂解(提蛋白)方法）的内容能够给您的工作和学习带来便利。
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蛋白匀浆缓冲液：50 mM Tris—HCl (pH7。
5) 150 mM NaCl 5 mM EDTA 1 % NP-40 1 mM PMSF操作步骤直接用这个进行组织匀浆然后于10000 rpm 离心20分钟收集上清作SDS－PAGE电泳从染色的情况来看所得到的总蛋白纯度都不错条带比较清晰。
我是作的小鼠八种常规组织也包括肾脏在内.将抽提好的蛋白分装后直接放在负八十保存。
上样大概3~8ul每孔都可以的具体看个人需要。
70v 浓缩,150v分离第二种方法裂解液配方: 尿素：8M CHAPS：4％DTT：65mM(现加) PMSF：1mM(现加）MiliQ 水操作步骤：取300mg样品在液氮环境下研磨，加入1ml裂解液混匀，室温静置1小时（实验证明改为匀浆更好，蛋白降解轻），15000g离心1小时，取上清测定蛋白质浓度。
在裂解液中加IPG buffer有两个作用:1，增强蛋白质的溶解性2,可以结合核酸，在沉淀的时候予以除去。
建议最好加,浓度从0。
5—2％不等（这取决于您样品蛋白质的难溶程度）。
IPG buffer 是载体两性电解质，IPG buffer另外一个作用是促进蛋白质溶解的，所以IEF前一定要加,裂解液中没有IPG buffer可以么？（可以的，最后上胶条的时候可以再加）不过，我觉得液氮研磨以后，最好是粗离心一下,把一些结缔组织给离心掉（150g既可)然后再加裂解液。
如何配置细胞裂解液
如何配置细胞裂解液
组织裂解液（全细胞蛋提取）：
1：Tris-HCL 50mmoL/L PH 7.4
2: Nacl 150 mmoL/L
3: 去氧胆酸钠0.25%
4：NP-40或Triton-x-100 1%
5: EDTA 1 mmoL/L
6：PMSF 1 mmoL/L
7：Aprotinin 1μg/ml
8: leupeptin 1μg/ml
9: pepstain 1μg/ml
其中:7,8,9作用不持久，要使用前加入。
细胞裂解液：1：NP-40裂解体系：150 mmoL/L Nacl 1.0%NP-40或Triton-x-100
50 mmoL/L Tris(PH8.0)
2：RIPA裂解体系：150 mmoL/L Nacl
1.0%NP-40或Triton-x-100
0.5%脱氧胆酸钠
0.1%SDS
50 mmoL/L Tris( ph8.0)
如何配置细胞裂解液 如何配置细胞裂解液 组织裂解液(全细胞蛋提取): 1:tris-hcl 50mmol/l ph 7.4 2: nacl 150 mmol/l 3:去氧胆酸钠0.25% 4:np-40或triton-x-100 1% 5: edta 1 mmol/l 6:pmsf 1 mmol/l 7:aprotinin 1μg/ml 8: leupeptin 1μg/ml 9: pepstain 1μg/ml 其中:7,8,9作用不持久,要使用前加入. 细胞裂解液:1:np-40裂解体系:150 mmol/l nacl 1.0%np-40或triton-x-100 50 mmol/l tris(ph8.0) 2:ripa裂解体系:150 mmol/l nacl 1.0%np-40或triton-x-100 0.5%脱氧胆酸钠 0.1%sds 50 mmol/l tris( ph8.0) 下载文档原格式( word原格式 ,共1页)
两种裂解液的成分和配制步骤
两种裂解液的成分和配制步骤 标签：细胞裂解液裂解液组织裂解液 摘要 : 细胞裂解液的成分包括了 Tris-HCl、EDTA 和 NaCl。
组织裂解液的成分主要 是 Urea、thiourea、CHAPS 等。
除了蛋白提取裂解液外，上述两种裂解液在一些实 验中的用途也不可小觑。
本文介绍这两种裂解液的配方和配制过程。
组织裂解液配 方：` 7M Urea(60. 06) 4.2042 g 2M thiourea(76.12) 1.5224 g 100mM DTT 0.1543 g 4% CHAPS 0.4 g 0.5mM EDTA 0.00146 g 40Mm Tris 0.0485 g 广州赛诚生物基因表达调控专题 Qiagen：10 个窍门助你更好掌控 qPCR 实验 沐赛生物:快速建立基因敲除细胞系 细胞裂解液的成分包括了 Tris-HCl、 EDTA 和 NaCl。
组织裂解液的成分主要是 Urea、 thiourea、 CHAPS 等。
除了蛋白提取裂解液外，上述两种裂解液在一些实验中的用途也不可小觑。
本文介绍这两种裂解 液的配方和配制过程。
组织裂解液配方：` 7M Urea(60. 06) 4.2042 g 2M thiourea(76.12) 1.5224 g 100mM DTT 0.1543 g 4% CHAPS 0.4 g 0.5mM EDTA 0.00146 g 40Mm Tris 0.0485 g 2%(v/v) NP-40 0.2 ml 1%(v/v) Triton X-100 0.1 ml 5mM PMSF 用前加 0.00871 g 2%pharmalyte 0.2ml 共 10ml 分装成 400µl/每管(可应用于 30-80 毫克组织裂解) 注：已配好分装成 400µl/每管可供应用 不需另配!!! 细胞裂解液配方： 6M Urea(60. 06) 1.8018 g 2M thiourea(76.12) 0. 7613 g 65mM DTT 0.050 g 4% CHAPS 0.2 g 40Mm Trisbase 0.02425 g 共 5ml 分装成 200µl/每管(可应用于 50-100ml 培养瓶内的细胞裂解) 1、溶液准备 2×样品缓冲液：130mM Tris-HCl ( pH8.0 ) , 20% ( v/v ) 甘油 , 4.6% ( w/v ) SDS , 0.02% 溴 酚蓝 , 2% DTT PBS ( pH7.4 ) ：10mM Na2HPO4 , 1.8mM KH2PO4 , 50mM NaCl , 2.7mM KCl RIPA 缓冲液：50mM Tris-HCl(pH7.4) , 150mM NaCl , 1mM EDTA , 1%Triton×100 , 1%去氧胆酸钠 , 0.1%SDS , 1mM PMSF , 1μ g/ml 牛胰蛋白酶抑制剂 ( aprotinin ) , 1μ g/ml 亮抑蛋白酶肽 ( leupeptin )裂解液缓冲液：10mM Tris-HCl(pH7.4) , 0.15M NaCl , 5mM EDTA(pH8.0) , 1%Triton×100;使用前 加 5mM DTT,0.1mM PMSF 异丙醇和 5mM ε -氨基己酸 2、裂解液的制备 制备细胞裂解液： 收集胰蛋白酶消化的细胞并离心，用 PBS 清洗。
lysis buffer 组织裂解方法
lysis buffer 组织裂解方法
组织裂解是将生物组织样本中的细胞膜破裂，释放细胞内的分子以进行后续实验。
Lysis buffer（裂解液）是一种用于组织裂
解的重要试剂，包含多种成分，如盐、缓冲液、蛋白酶抑制剂等。
以下是一种常见的组织裂解方法：
1. 准备裂解液：将PBS缓冲液配制至所需浓度，并添加蛋白
酶抑制剂（如PMSF）、EDTA等。
2. 将组织样本或细胞沉淀加入裂解液中，并用移液器充分悬浮。
3. 将混合液置于冰上或低温条件下，静置数分钟以使细胞完全破裂。
4. 可通过机械方法，如超声波处理或高压均质器处理来增加裂解效果。
5. 最后，可通过离心操作，除去细胞碎片和细胞核。
这是一种常规的组织裂解方法，可以根据实验需要进行修正和优化。
裂解液的成分和浓度也可以根据具体实验要求进行调整。
高效RIPA组织 细胞裂解液使用说明书
高效RIPA组织/细胞裂解液使用说明书货号：R0010规格：20ml/100ml本产品配有一支PMSF（0.3ml/1.5ml）保存：RIPA裂解液4℃保存，PMSF-20℃保存。
使用说明：如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
根据使用量，取每1ml RIPA加入10ul PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
混匀备用（PMSF现用现加）。
样本裂解均需要冰上或低温操作，裂解时间20-30分钟。
1、样品前处理：a)对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。
按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。
用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。
按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。
充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。
按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。
(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。
用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。
注意事项：本试剂为强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，若细胞量多会造成细胞裂解液粘稠：此时可以超声打断基因组或者直接加入蛋白上样缓冲液，煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若想测定浓度，可加入少量SDS（1%），煮沸后离心测浓度。
本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。
组织裂解液和细胞裂解液如何配制
组织裂解液和细胞裂解液如何配制1.组织或细胞的类型：不同组织和细胞具有不同的特性，因此在配制裂解液时需要考虑到这些特性的差异，以获得更好的裂解效果。
2.细胞裂解方法：裂解液的配制需要考虑到裂解细胞的方法，如机械裂解、化学裂解或生物化学裂解等。
不同的裂解方法对配制裂解液的要求也不同。
3.细胞裂解液的功效：细胞裂解液的目的通常是获得特定的细胞组分，如蛋白质、核酸或酶等。
因此，在配制细胞裂解液时，需要选取适合的试剂和浓度，以达到期望的裂解效果。
以下是一种常用的组织裂解液和细胞裂解液的配制方法：1.组织裂解液的配制：（1）制备PBS缓冲液（含盐添加剂）：将10×PBS（磷酸盐缓冲液）按照使用指南稀释至1×PBS（0.01M磷酸盐缓冲液，含有0.138MNaCl和0.0027MKCl）。
（2）试剂配制：-加入适量的蛋白酶抑制剂，如苯甲酰甲氧基肼（PMSF）或氯化苯甲酰胺（TPCK）。
- 添加适量的蛋白酶抑制剂混合物，如无乳糜液（Nonidet P-40）、十二烷基磺酸钠（SDS）或吐温-20。
-根据实验需要，可以添加离心沉淀剂（如非洲明胶、凝胶或聚乙二醇）或染料（如溴化乙锭、溴化苏丹红或溴化丙酮）等。
2.细胞裂解液的配制：（1）制备PBS缓冲液（含盐添加剂）：同上。
（2）试剂配制：-加入适量的蛋白酶抑制剂，如PMSF。
-加入适量的细胞裂解剂，如RIPA缓冲液（含有苏丹三染料、SDS和有机溶剂）、天冬氨酰胎盐酸盐（DTT）或吐温-20等。
-根据实验需要，可以添加放化学物质，如硫酸铵等，以促进特定细胞组分的释放。
在配制裂解液时，需要注意以下几点：-选择高纯度的试剂，以避免产生不必要的背景信号。
-保持试剂的适当浓度，以确保有效的细胞裂解。
-配制时注意卫生和安全，佩戴适当的实验室用具和防护设备。
建议在裂解液的配制过程中参考相关文献和实验室经验，对裂解液的成分和浓度进行优化，以获得更好的裂解效果。
RIPA组织 细胞裂解液使用说明书
RIPA组织/细胞裂解液使用说明书货号：R0020规格：100ml/500ml本产品配有PMSF（100mM）保存：RIPA裂解液4℃保存，PMSF-20℃保存。
产品简介：RIPA组织/细胞裂解液是利用表面活性剂等来裂解细胞膜（包括核膜）。
本试剂提取的蛋白为可溶性总蛋白。
使用说明：如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
根据使用量，取每1ml RIPA加入10ul PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，混匀备用（PMSF现用现加）。
1、样品前处理：a)对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。
按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。
用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液，用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。
充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
如果细胞量较多，必需分装成5-10×105细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。
按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。
用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。
注意事项：1、使用本裂解液可以裂解细胞核，释放出核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，造成细胞裂解液粘稠，此时可以直接加入蛋白上样缓冲液煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若想测定浓度，可入加少量SDS （1%），煮沸后离心测浓度。
2、本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。
全蛋白提取组织裂解液配方
Western-Blot 全蛋白提取组织裂解液配方1.储备液1.110% Triton X-100Triton X-100 10ml蒸馏水90ml混合后37℃-40℃水浴中2-3hr，使其充分混匀1.210% 去氧胆酸纳去氧胆酸纳1g蒸馏水10ml避光保存1.3200mmol/L PMSF(苯甲基磺酰氯)PMSF 174.2mg异丙醇5ml分装，-20℃保存1.4100mmol/L EDTAEDTA 372.24mg蒸馏水10ml1.51mg/mL亮抑酶肽(Leupeptin)亮抑酶肽2mg蒸馏水2ml分装，-20℃保存1.61mg/mL 抑蛋白酶肽(Aprotinin)抑蛋白酶肽2mg蒸馏水2ml分装，-20℃保存1.71mg/mL 胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)胃蛋白酶抑制剂2mg甲醇2ml分装，-20℃保存2.工作液2.1Tris-base (50mmol/L，pH 7.4)：Tris-base 605mgNaCl 900mg蒸馏水75ml用HCl调整pH值为7.42.210% Triton X-100 10mL2.310% 去氧胆酸纳 2.5mL2.4100mmol/L EDTA 1mL2.5用前加入：1mg/mL亮抑酶肽100μl1mg/mL 抑蛋白酶肽100μl1mg/mL 胃蛋白酶抑制剂100μl200mmol/L PMSF 500μl各成分的终浓度Tris-base 50mmol/L，pH 7.4Triton X-100 1%去氧胆酸纳0.25%NaCl 150mmol/LEDTA 1 mmol/L亮抑酶肽1μg/mL抑蛋白酶肽1μg/mL胃蛋白酶抑制剂1μg/mLPMSF 1mmol/L。
细胞组织裂解(提蛋白)方法
第一种方法蛋白匀浆缓冲液：50 mM Tris-HCl (pH7.5) 150 mM NaCl5 mM EDTA1 % NP-40 1 mM PMSF操作步骤直接用这个进行组织匀浆然后于10000 rpm 离心20分钟收集上清作SDS－PAGE电泳从染色的情况来看所得到的总蛋白纯度都不错条带比较清晰。
我是作的小鼠八种常规组织也包括肾脏在内。
将抽提好的蛋白分装后直接放在负八十保存。
上样大概3~8ul每孔都可以的具体看个人需要。
70v浓缩，150v分离第二种方法裂解液配方：尿素：8M CHAPS:4% DTT:65mM(现加）PMSF:1mM(现加）MiliQ 水操作步骤：取300mg样品在液氮环境下研磨，加入1ml裂解液混匀，室温静置1小时（实验证明改为匀浆更好，蛋白降解轻），15000g离心1小时，取上清测定蛋白质浓度。
在裂解液中加IPG buffer有两个作用:1,增强蛋白质的溶解性2,可以结合核酸,在沉淀的时候予以除去。
建议最好加，浓度从0.5-2%不等（这取决于您样品蛋白质的难溶程度）。
IPG buffer 是载体两性电解质，IPG buffer另外一个作用是促进蛋白质溶解的,所以IEF前一定要加，裂解液中没有IPG buffer可以么？（可以的，最后上胶条的时候可以再加）不过，我觉得液氮研磨以后，最好是粗离心一下，把一些结缔组织给离心掉（150g既可）然后再加裂解液。
裂解液加1ML应该没什么问题，主要取决你以后蛋白的浓度。
用这个方法最好经丙酮沉淀一次比较好）第三种方法建议最好加完裂解液后再用超声波破碎，我做肝脏蛋白提取时一般采取400W工作10秒，间歇10秒，次数15次，一次结束后大约30分钟再重复上述步骤一次（因为不同的样品用一根超声柱子，可能会导致污染，所以一定要用双蒸水冲洗干净，再用70%乙醇洗一下，再用水洗一次），另外样品超声时要置于冰浴中，以免产热做过的是用10ml蛋白裂解液来匀浆3克的组织，最终用考马斯亮兰染色法测得的蛋白浓度大概为30~50 ug/ul测595 OD值时，设定一个只用水的空白，把所有测得的值都减去这个空白。
裂解液配制方法
1、红细胞裂解液（去除红细胞）配制试剂所需材料：1. Ammonium Chloride x10 Lysing Concentrate Solutiona) NH4Cl (1.5 M) 80 gb) KHCO3 (100 nM) 10 gc) Na4EDTA (10 nM) 3.7 gd) Distilled H2O 1000 mL2. 1N HCl or 1N NaOH（调节pH值用）配制步骤：1. 将以上a、b、c试剂溶于900ml 去离子水中；2.调节溶液pH值到7.2-7.4，加去离子水定容到1000ml；3.在制备工作液时，将此储存液稀释10倍后使用。
保存：1.10x 储存液储存于2-8°C不能超过半年（六个月）；2.在使用前，工作液每天都应该新鲜配制放置于室温，当日用不完的弃掉。
2、ripa裂解液NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 8.0) 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟）0.1mmol/L(100µg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 µmol/L(0.7µg/ml)Leupeptin（亮抑制肽）0.5mg/mlAprotinin（抑蛋白酶肽）0.3µmol/L(1µg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于0.01mol/LHEPES(pH8.0)；Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）3、细胞裂解液（Tris－HCL）1．1M Tris 溶液的配置取Tris242.2g，加ddH2O至1600ml，加热溶解。
2．1M Tris－HCL Ph=8.0溶液的配置取1M Tris 溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=8.0（需浓盐酸约8.5ml），加ddH2O 定容至200ml，高压灭菌备用。
蛋白裂解 蛋白组织和裂解液的比例
蛋白裂解蛋白组织和裂解液的比例
蛋白裂解是生物学和生物化学研究中常见的技术手段，用于将蛋白质分解为更小的片段。
蛋白裂解需要使用裂解液，其中包含酶或其他化学物质，以加速蛋白质的分解。
在蛋白裂解的过程中，裂解液和待裂解的蛋白质比例是非常重要的因素，可以影响裂解的效率和所得到的片段大小。
一般来说，蛋白质的裂解需要使用足够量的裂解液，以确保所有的蛋白质都能被分解。
但是，如果使用过多的裂解液，会导致蛋白质分解得太彻底，产生过多的碎片，从而难以分离和鉴定。
因此，对于不同种类的蛋白质，需要根据实际情况来确定最佳的比例。
一般而言，对于细胞或组织的裂解，一般使用比较高浓度的裂解液，以确保细胞或组织的完全裂解。
而对于纯化的蛋白质，可以适当减少裂解液的使用量，以避免蛋白质的过度分解。
此外，不同种类的裂解液也会对裂解效果产生影响。
有些裂解液可以在较短时间内迅速分解蛋白质，但是会产生较多的碎片，影响后续的分离和鉴定。
而有些裂解液则能够在较长时间内缓慢分解蛋白质，产生较少的碎片，但是需要更长的时间才能完成裂解。
因此，在进行蛋白裂解前，需要根据实际情况选择合适的裂解液和比例，以确保裂解效果和后续实验的顺利进行。
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RIPA组织细胞裂解液使用说明
RIPA组织细胞裂解液使用说明RIPA（Radioimmunoprecipitation Assay）是一种经典的细胞裂解液，用于体外分析研究。
它通过破坏细胞膜结构和溶解细胞器膜来释放细胞内的蛋白质，并保护这些蛋白质不变性和稳定性。
1. 1 M Tris-HCl (pH 7.4)，这是缓冲液的最重要组分。
pH 7.4是维持蛋白质稳定性的最佳条件。
2.5MNaCl，这是一种高浓度的盐溶液，用于维持细胞内外的渗透平衡。
3.0.5MEDTA(pH8.0)，这是一种螯合剂，可与金属离子结合，防止细胞中的金属离子对蛋白质进行催化氧化。
4.10%NP-40，这是一种阴离子表面活性剂，具有良好的分散和乳化作用，有助于裂解细胞膜。
5.10%SDS，这是一种阴离子表面活性剂，用于溶解膜脂质和保持蛋白质的变性。
6. 1% sodium deoxycholate，这是一种胆汁酸衍生物，有助于裂解释放细胞器。
7. 1% Triton X-100，这是一种非离子表面活性剂，具有裂解细胞膜的能力。
8. 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)，这是一种蛋白质酶抑制剂，可保护蛋白质免受降解。
9. RIPA DTT（dithiothreitol）添加剂，用于还原RIPA缓冲液中的蛋白质和酶。
根据使用的具体实验目的，可以根据实验室的需要对以上配方进行微调。
在使用RIPA组织和细胞裂解液时，需要注意以下几点：1.充分冷藏和避光保存RIPA裂解液，并在使用前将其室温放置30分钟使其恢复到室温。
2.注意裂解液的体积与样本量的比例。
通常情况下，可以根据细胞数目和试管样本的比例使用1mL裂解液，用来裂解10^7个细胞。
3.细胞裂解液的裂解时间取决于样本的类型和使用的装置。
一般情况下，裂解液可以在4°C条件下裂解30分钟至1小时。
在裂解液中加入若干次轻微的震荡也有助于促进细胞的裂解。
4.在细胞裂解液孵育期间必须时常振摇或轻轻颠倒。
高效RIPA组织、细胞裂解液使用说明
高效RIPA组织/细胞裂解液使用说明货号：R0010规格：20ml/100ml本产品配有一支PMSF（0.3ml/1.5ml）保存：RIPA裂解液4℃保存，PMSF-20℃保存。
使用说明：如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
根据使用量，取每1ml RIPA加入10ul PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
混匀备用（PMSF现用现加）。
1、样品前处理：a)对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。
按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。
用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。
按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。
充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。
按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。
(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。
用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。
注意事项：本试剂为强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，若细胞量多会造成细胞裂解液粘稠：此时可以直接加入蛋白上样缓冲液，煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若想测定浓度，可入加少量SDS（1%），煮沸后离心测浓度。
本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。
如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清用于后续实验。
组织裂解液和细胞裂解液如何配制
组织裂解液和细胞裂解液如何配制一、细胞裂解液配制方法一一、试剂准备1、新鲜配制冷的 RIPA 裂解缓冲液:150 mM NaCL1% NP-40 (去垢剂)0.1% SDS (去垢剂)2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)2ug/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)1 mM PMSF (蛋白酶抑制剂)1.5 mM EDTA (蛋白酶抑制剂)1mM NaVanadate (磷酸脂酶抑制剂)(任选)以上所有试剂均按比例溶于150 mM NaCL溶液中。
2、冷的PBS 中加入 1 mM PMSF1.5 mM EDTA1mM NaVanadate （钒酸钠）(任选)3、对数期生长状态佳的细胞，75cm至少3-4瓶（90%以上生长面积）。
二、实验步骤1、将长满细胞的培养瓶放置在冰上，用吸液管吸出培养液。
加入足够的冷的 PBS在培养瓶中充分洗涤细胞表面，以洗去瓶中残留的培养基，倒掉PBS ，重复以上操作2-3遍。
在最后一次洗涤中尽可能吸干残留的PBS，尽量在冰上操作。
2、向培养瓶中加入冷的RIPA 裂解缓冲液 (每75cm2 培养瓶加1ml). 然后用细胞刮子沿着瓶壁开始刮细胞，如果所需要刮的同种细胞有多瓶，则将第一瓶刮下的细胞液吸出转入下一瓶中继续刮 (由于处理后的细胞裂解液较粘稠，所以宜用直径大点的吸液管吸取)。
3、吸出刮好的细胞裂解液置于14ml 离心管中（置于冰上），然后重复步骤2以刮取剩下的细胞。
4、尽可能将多的细胞裂解液收集到14ml的离心管中，样品插入冰盒进行超声，超声强度以不产生泡沫为准，超声每次2-3秒，重复3-4次。
如仍有细胞碎片或沉淀，应离心10000rpm,10分钟，留取上清。
5、取出小量细胞裂解液测其蛋白浓度（用Biorad Bradford 试剂盒或紫外分光光度计，在A280测定），分装保存在 -70℃。
4方法二NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 8.0) 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟）0.1mmol/L(100µg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 µmol/L(0.7µg/ml)Leupeptin（亮抑制肽） 0.5mg/mlAprotinin（抑蛋白酶肽）0.3µmol/L(1µg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于0.01mol/LHEPES(pH8.0);Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）裂解操作程序：* 离心收集1×107个细胞* 加入4℃预冷1%NP-40裂解液100µl* 剧烈震荡使细胞充分悬浮混匀（如为组织进行匀浆）* 4℃放置15~30min* 4℃离心，15 000rpm,10min，取上清备用。
组织裂解液
1.组织裂解液(500ml)：1MTris.Cl (PH=8) 25ml;0.5M EDTA(PH=8) 100ml; 2M Nacl 25ml;加入这三者后再加双蒸水定容至450ml,再进行高压灭菌，等冷却后再加入10%SDS(PH=7.2) 50ml（SDS不能高压灭菌）配成500ml组织裂解液。
2.1M Tris.Cl (PH=8)：称取60.57g Tris溶于400ml双蒸水，用Hcl调PH至8.0，定容至500ml，高压灭菌。
3.0.5M EDTA:称取EDTA.Na2.2H2o 93.05g溶于400ml双蒸水中，用氢氧化钠调PH至8.0，定容至500ml，高压灭菌。
4.10% SDS称取SDS50g,溶于500ml双蒸水中，高压灭菌。
5.2M Nacl:称取Nacl58.44g，溶于500ml双蒸水中，高压灭菌。
您好！这周已经过去了，在这里向你汇报下这个礼拜的工作情况及甲基化实验的一般思路。
本周工作情况：1.帮洪渊做了PCR实验，有关SOX9的，其中有两个有问题，做完洪渊拿去测序。
2.帮助徐盼提取RNA(十一期间抚州采的样）26个样3.对肝、脾、肾、膀胱、大脑、小脑（赵雪艳的样）进行匀浆，准备做ELISA试验。
甲基化实验：目的：转FSHb基因猪甲基化水平是否异常，对转基因猪有什么影响（对于具体目的有点不清楚）方法：转FSHb基因阴性猪与阳性猪甲基化水平进行对比实验思路：1.对转FSHb基因阴性猪与阳性猪脏器（心肝脾肺肾等，选取有关脏器还是？）做甲基化水平检测。
2.选取不同日龄（同一猪）进行甲基化水平检测，看随日龄的增加，甲基化水平发生怎样变化（正相关或负相关）？3.转FSHb基因猪外源FSHb基因甲基化异常（高甲基化，导致FSHb基因沉默，功能缺失）与转入外源基因后是否引起内源基因甲基化异常（某些功能异常）？4..转FSHb基因猪发生低甲基化还是高甲基化？过表达还是基因沉默？5.外源基因整合位点甲基化水平？6.启动子区域甲基化？7.CPG岛不易发生甲基化，转基因猪会否发生高甲基化？实验操作：1.DNA的提取及亚硫酸氢盐转化基因组 DNA（ EZ DNAMethylation-Gold TM Kit 试剂盒处理）2.使用数据库寻找CPG岛，设计亚硫酸盐测序 PCR引物，做MS-PCR3.PCR 扩增产物回收、连接、转化和测序鉴定4.提取mRNA，验证甲基化异常对转录的影响5.做蛋白有关实验，进一步验证甲基化异常对蛋白表达的影响（是否导致基因沉默，造成功能缺失）问题：1.某些数据库的使用及分析软件的应用2.是对基因组进行甲基化水平检测还是部分染色体基因进行甲基化检测或者与FSH基因有关进行甲基化检测3.目前思路还不是很清晰，有点理不顺，还有点混乱。
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组织裂解液和细胞裂解液如何配制?一、细胞裂解液配制方法一一、试剂准备1、新鲜配制冷的 RIPA 裂解缓冲液:150 mM NaCL1% NP-40 (去垢剂)0.1% SDS (去垢剂)2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)2ug/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)1 mM PMSF (蛋白酶抑制剂)1.5 mM EDTA (蛋白酶抑制剂)1mM NaVanadate (磷酸脂酶抑制剂)(任选)以上所有试剂均按比例溶于150 mM NaCL溶液中。
2、冷的PBS 中加入 1 mM PMSF1.5 mM EDTA1mM NaVanadate （钒酸钠）(任选)3、对数期生长状态佳的细胞，75cm至少3-4瓶（90%以上生长面积）。
二、实验步骤1、将长满细胞的培养瓶放置在冰上，用吸液管吸出培养液。
加入足够的冷的PBS在培养瓶中充分洗涤细胞表面，以洗去瓶中残留的培养基，倒掉PBS ，重复以上操作2-3遍。
在最后一次洗涤中尽可能吸干残留的PBS，尽量在冰上操作。
2、向培养瓶中加入冷的RIPA 裂解缓冲液 (每75cm2 培养瓶加1ml). 然后用细胞刮子沿着瓶壁开始刮细胞，如果所需要刮的同种细胞有多瓶，则将第一瓶刮下的细胞液吸出转入下一瓶中继续刮(由于处理后的细胞裂解液较粘稠，所以宜用直径大点的吸液管吸取)。
3、吸出刮好的细胞裂解液置于14ml 离心管中（置于冰上），然后重复步骤2以刮取剩下的细胞。
4、尽可能将多的细胞裂解液收集到14ml的离心管中，样品插入冰盒进行超声，超声强度以不产生泡沫为准，超声每次2-3秒，重复3-4次。
如仍有细胞碎片或沉淀，应离心10000rpm,10分钟，留取上清。
5、取出小量细胞裂解液测其蛋白浓度（用Biorad Bradford 试剂盒或紫外分光光度计，在A280测定），分装保存在 -70℃。
4方法二NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 8.0) 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟） 0.1mmol/L(100μg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 μmol/L(0.7μg/ml)Leupeptin（亮抑制肽） 0.5mg/mlAprotinin（抑蛋白酶肽） 0.3μmol/L(1μg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于0.01mol/LHEPES(pH8.0);Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）裂解操作程序：* 离心收集1×107 个细胞* 加入4℃预冷1%NP-40裂解液100μl* 剧烈震荡使细胞充分悬浮混匀（如为组织进行匀浆）* 4℃放置15~30min* 4℃离心，15 000rpm,10min，取上清备用。
方法三* 细胞裂解液的主要目的：1.利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；2. 溶解蛋白；3. 蛋白变性使其稳定；4. 抑制蛋白酶活性推荐RIPA buffer:. 50 mM Tris-HCl pH 7.4 缓冲体系· 150 mM NaCl 等渗体系· 1 mM PMSF 强大的蛋白酶抑制剂· 1 mM EDTA 变性剂和稳定剂· 5 μg/ml Aprotinin （抑肽酶）蛋白酶抑制剂· 5 μg/ml Leupeptin 蛋白酶抑制剂· 1% Triton x-100 破坏细胞·1% Sodium deoxycholate 中度变性剂和蛋白溶解剂* 细胞裂解液的主要目的：1.利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；2. 溶解蛋白；3. 蛋白变性使其稳定；4. 抑制蛋白酶活性推荐RIPA buffer:. 50 mM Tris-HCl pH 7.4 缓冲体系· 150 mM NaCl 等渗体系· 1 mM PMSF 强大的蛋白酶抑制剂· 1 mM EDTA 变性剂和稳定剂· 5 μg/ml Aprotinin 蛋白酶抑制剂· 5 μg/ml Leupeptin 蛋白酶抑制剂· 1% Triton x-100 破坏细胞·1% Sodium deoxycholate 中度变性剂和蛋白溶解剂·0.1% SDS 强变性剂和蛋白溶解剂其中PMSF等蛋白酶抑制剂最好另外配制，－20℃保存，用前混合。
蛋白酶抑制剂较贵，如果你的经费有限，可以仅用PMSF试一试，能出结果就可以。
* 用于普通的Western、IP或co-IP，我们推荐使用Western及IP细胞裂解液(P0013)，该裂解液已被国内各大研究机构广泛使用，用户普遍反映很好。
裂解细胞或组织后，没有非常粘滞的透明状DNA团块形成，不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。
另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。
对于某些特殊蛋白的IP，如果发现Western及IP细胞裂解液(P0013)效果不是非常理想，可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40 裂解液。
如果发现IP的时候背景很高，即非特异的蛋白也被IP下来，则需要选用裂解强度较高的裂解液，例如RIPA裂解液(强或中)。
如果发现目的蛋白无法被IP下来，则说明裂解液的强度过强，可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
对于某些难溶解蛋白的Western，如果发现Western及IP细胞裂解液效果不是非常理想，可以尝试使用裂解强度更高的裂解液,例如RIPA裂解液(强、中)或 SDS裂解液。
RIPA裂解体系：150 mmoL/L Nacl，1.0% NP-40或Triton-x-100 ，0.5%脱氧胆酸钠， 0.1% SDS， 50 mmoL/L Tris ( ph8.0)。
一、组织裂解液配制组织裂解液配方：`7M Urea(60. 06) 4.2042 g2M thiourea(76.12) 1.5224 g100mM DTT 0.1543 g4% CHAPS 0.4 g0.5mM EDTA 0.00146 g40Mm Tris 0.0485 g2%(v/v) NP-40 0.2 ml1%(v/v) Triton X-100 0.1 ml5mM PMSF用前加 0.00871 g2%pharmalyte 0.2ml共10ml分装成400μl/每管（可应用于30-80毫克组织裂解）注：已配好分装成400μl/每管可供应用不需另配！！！细胞裂解液配方：6M Urea(60. 06) 1.8018 g2M thiourea(76.12) 0. 7613 g65mM DTT 0.050 g4% CHAPS 0.2 g40Mm Trisbase 0.02425 g共5ml分装成200μl/每管（可应用于50-100ml培养瓶内的细胞裂解）细胞裂解液：组织裂解液配方：7 mol/L 尿素、 7M Urea(60. 06) 4.2042 g 2 mol/L硫脲、 2M thiourea(76.12) 1.5224 g2% NP-40、 2%(v/v) NP-40 0.2 ml1% Triton X-100、 1%(v/v) Triton X-100 0.1 ml65 mmol/L DTT、 0.1003g 100mM DTT 0.1543 g5 mmol/L PMSF、 5mM PMSF用前加 0.00871 g4% CHAPS、 4% CHAPS 0.4 g40 mmol/L Tris、 40Mm Tris 0.0485 g2% pharmalyte（pH3-10）、2%pharmalyte 0.2ml0.5mM EDTA 0.00146 g25 mg/L DNase I、7 mg/L RNase A、20 mg/L aprotinin、20 mg/L leupeptin、2 mmol/L Na3VO4、Phosphatase Inhibitor Cocktail 1Phosphatase Inhibitor Cocktail 21ml水化液配方：8M Urea(60.06) 0.48048 g2% CHAPS 0.02 g痕量溴酚兰 0.4 μl1%的痕量溴酚兰（10mg+1000μl双蒸水）450μl水化液加DTT 0.00135mgor 400μl水化液加DTT 0.00126mg各种细胞裂解液的功用都分别是什么，SDS ，NP-40 ，TritonX-100有何作用SDS ，NP-40 ，TritonX-100这三种去垢剂的作用是不同的，或者说作用力量强弱不同。
SDS属于离子型去垢剂，最厉害，基本可以把细胞完全破掉，DNA会释放出来，裂解液变得很粘稠。
NP-40是很温和的去垢剂，1%浓度的基本可以破坏掉胞膜，而对核膜破坏的作用弱，结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。
TritonX-100的能力介于NP40和SDS之间，偏向于NP40，也是常用的细胞裂解液成分之一，在保护蛋白活性方面有一定作用（SDS基本会使蛋白变性失活）。
但是去垢剂属性只是一方面，buffer、配比、浓度、提取方法和材料处理也都是关键因素，建议参考《分子克隆》来做。