P0013 Western及IP细胞裂解液
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB法)说明书
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)产品简介：谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法) (Glutathione Reductase Assay Kit with DTNB)是一种简单易行的通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase, GR)活性的试剂盒。
谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布，可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。
GSH 可以清除自由基和一些有机过氧化物，或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。
谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷胱甘肽(GSH)，而GSH 可以和生色底物DTNB 反应产生黄色的TNB 和GSSG ，并可以通过测定A 412来检测TNB 的生成量。
适当设置应体系，前后两个反应合并起来后，GSSG/GSH 过量而GR 相对不足时，该反应体系中谷胱甘肽还原酶就成为整个反应体系的限速因素，此时黄色的TNB 生成量和谷胱甘肽还原酶的活性呈线性正相关。
从而通过测定A 412就可以计算出谷胱甘肽还原酶的活性水平。
本试剂盒的具体反应原理如下：两个反应相合并：本试剂盒检测肝脏样品的检测效果如图1所示。
图中可见，对于肝脏样品可以检测到比较强的谷胱甘肽还原酶的活性并且有很好的剂量效应。
图1. 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)用于肝脏裂解样品的实测效果图。
本试剂盒可以检测组织匀浆液上清、细胞裂解液上清等生物样品中的谷胱甘肽还原酶的活性。
一个试剂盒共可以进行100次检测。
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线: 400-1683301或800-8283301 订货e-mail :****************** 技术咨询: ***************** 网址: 碧云天网站 微信公众号保存条件：-20ºC保存，一年有效。
WB试验参考
Western实验步骤Western，也称Western blot、Western blotting、Western印迹，是用抗体检测蛋白的重要方法之一。
Western 可以参考如下步骤进行操作。
1. 收集蛋白样品(Protein sample preparation)可以使用适当的裂解液，例如碧云天生产的Western及IP细胞裂解液(P0013)、RIPA裂解液等，裂解贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品。
对于某些特定的亚细胞组份蛋白，例如细胞核蛋白、细胞浆蛋白、线粒体蛋白等，可以参考相关文献提取这些亚细胞组份蛋白，也可以使用试剂盒进行抽提，例如碧云天生产的细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(P0028)。
收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。
根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。
因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。
如果使用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液或RIPA裂解液，可以使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)。
2. 电泳(Electrophoresis)(1) SDS-PAGE凝胶配制SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(P0012A)。
该试剂盒提供了除水和配胶器具外的所有试剂以及配制各种浓度SDS-PAGE的配方。
(2) 样品处理在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。
例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。
使用5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以减小上样体积，在相同体积的上样孔内可以上样更多的蛋白样品。
5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以参考相关文献资料配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)(P0015)。
碧云天生物技术过氧化氢酶检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号过氧化氢酶检测试剂盒产品编号 产品名称包装 S0051过氧化氢酶检测试剂盒100次产品简介：过氧化氢酶检测试剂盒(Catalase Assay Kit)是一种简单易行的通过显色反应来检测细胞、组织或其它样品中过氧化氢酶(Catalase)活性的试剂盒。
在过氧化氢相对比较充足的情况下，过氧化氢酶可以催化过氧化氢产生水和氧气。
残余的过氧化氢在过氧化物酶(Peroxidase)的催化下可以氧化生色底物，产生红色的产物(N-(4-antipyryl)-3-chloro-5-sulfonate-p- benzoquinonemonoimine)，最大吸收波长为520nm 。
用过氧化氢标准品，制作标准曲线，这样就可以计算出样品中的过氧化氢酶在单位时间单位体积内催化了多少量的过氧化氢转变为水和氧气，从而可以计算出样品中过氧化氢酶的酶活力。
过氧化氢酶分布非常广泛。
在肝脏、肾脏和红细胞中，过氧化氢酶的水平非常高，是清除能导致氧化损伤的过氧化氢的主要场所。
过氧化氢酶的活性也可以用紫外分光光度计测定A 240，但蛋白质或其它组份在A 240附近都有比较强的吸收，会对测定产生严重干扰。
因此，用紫外法测定过氧化氢酶的活性，比较适合纯化的过氧化氢酶。
本试剂盒通过检测A 520来测定过氧化物酶催化下由过氧化氢氧化生色底物产生的红色产物，受干扰的因素小，检测灵敏度高，可以检测出低达1U/ml 的过氧化氢酶。
本试剂盒可以检测全血、红细胞裂解产物、血清、组织匀浆产物、细胞裂解产物等生物样品中的过氧化氢酶的活性。
一个试剂盒共可以进行100次检测。
包装清单：产品编号 产品名称包装 S0051-1 过氧化氢酶检测缓冲液 60ml S0051-2 过氧化氢 (约1M) 5ml S0051-3 过氧化氢酶反应终止液50ml S0051-4 显色底物 20ml S0051-5 过氧化物酶 20µl —说明书1份保存条件：-20ºC 保存，一年有效。
Western及IP细胞裂解液
Western及IP细胞裂解液产品简介：多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，譬如Triton、SDS、NP-40等。
Western及IP 细胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP)，是采用一种非变性裂解方法来裂解细胞，并获得总蛋白的裂解液。
所获得的蛋白质可以用于SDS-PAGE，Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等，主要由Tris、Triton X-100组成，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。
用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用leagene BCA蛋白浓度测定试剂盒(PT0001测定蛋白浓度。
由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不宜用Bradford法测定由Western及IP细胞裂解液获得的样本的蛋白浓度。
产品组成：主要成分：主要由 Tris-HCl、NaCl、Triton X-100，以及sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、EDTA等多种蛋白酶抑制剂组成。
自备材料：1、高速离心机2、微量移液器3、PMSF，亦可采购Leagene的苯甲基磺酰氟溶液(PMSF,100mmol/L)(PI0011)操作步骤（仅供参考）：(一)贴壁培养细胞1、取Western及IP细胞裂解液置于室温溶解混匀后，使用前取适当量的裂解液加入PMSF，使其最终浓度为1mM。
2、去除贴壁细胞的培养液，用PBS、NS或无血清培养液清洗1次，低速离心，弃上清，留取沉淀。
3、按照6孔板每1孔加入100～200μl含有PMSF的裂解液的比例，加入Western及IP细胞裂解液。
移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。
通常裂解液作用于细胞1～5s内，细胞就会被裂解。
4、10000～12000g，离心3～5min（如果用冷冻离心机4℃离心效果更佳），取上清。
碧云天生物技术一氧化氮检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号一氧化氮检测试剂盒产品编号 产品名称包装 S0021S 一氧化氮检测试剂盒 500次 S0021M一氧化氮检测试剂盒2500次产品简介：碧云天生产的一氧化氮检测试剂盒采用了经典的Griess Reagent ，并对其测定的溶液体系进行了优化，使检测下限达到1µM ，在1-100µM 范围内有非常完美的线性关系。
检测速度极快，完成一条标准曲线或5-10个样品的测定只需3分钟。
样品范围广，可以检测细胞或组织及其培养液中的一氧化氮的含量，酚红和10%血清均对测定无明显干扰，也可以检测血清、血浆和尿液中一氧化氮的含量。
包装清单：产品编号 产品名称 包装 S0021S-1 1M NaNO 2 1ml S0021S-2 Griess Reagent I 25ml S0021S-3 Griess Reagent II25ml —说明书1份产品编号 产品名称 包装 S0021M-1 1M NaNO 2 1ml S0021M-2 Griess Reagent I 125ml S0021M-3Griess Reagent II125ml —说明书1份保存条件：-20ºC 避光保存，一年有效。
4ºC 避光保存，半年有效。
注意事项：本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
如保存不当导致溶液变色或沉淀，则说明该溶液已经失效，请购买新的试剂盒。
不建议使用RIPA 裂解液对细胞或者组织进行裂解，使用RIPA 裂解液可能在后续反应中产生沉淀，影响测试。
推荐使用碧云天的细胞与组织裂解液(一氧化氮检测用)(S3090)或Western 及IP 细胞裂解液(P0013)。
Western 裂解液
使用说明：
对于培养细胞样品： 1. 融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。 2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6
2. Cheng BQ, Geng Y, Wu JB, Jiang B. Influences of inhibiting Galectin-3 by RNA inter ference technique on the prolifer ation and apoptosis of human color ectal cancer cells LOVO. JournalofC linicalR ehabilitative Tissue E ngineering R esearch.April 22,2007 Vol.11,NO.16.
孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2 秒后，细胞就会被裂解。 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解 液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/ 管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。 3. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量 到150微升或200微升。 对于组织样品： 1. 把组织剪切成细小的碎片。 2. 融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。 3. 按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高 浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。) 4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。 5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上
western blot试验操作指南
蛋白表达研究系列之——Western Blot试验操作指南目录目录 (1)一、总蛋白的提取 (2)1 试验类型和蛋白类型 (2)2 样品组织类型 (3)3 蛋白表达峰度判断 (4)4 总蛋白提取的基本步骤 (4)4.1细胞样品总蛋白的提取操作步骤 (5)4.2组织样品总蛋白的提取操作步骤 (5)二、总蛋白BCA定量 (6)三、SDS-PAGE凝胶电泳 (7)四、转膜 (8)五、信号增强剂处理膜 (9)六、封闭、一抗孵育、二抗孵育 (9)1 封闭 (9)2 一抗孵育 (9)3 二抗孵育 (13)七、曝光显色 (14)八、灰度分析 (15)九、抗体及相关溶液配制 (15)1 抗体 (17)2 相关溶液配制表 (17)蛋白检测相对于DNA/RNA的检测来讲要困难许多，Western Blot作为蛋白检测的经典方法短时间内仍然无法被取代。
Western Blot的原理并不复杂，网上有很多这方面的材料，这里不作过多的介绍。
虽然原理、操作并不复杂，但做好Western Blot、得到满意的图片并非易事。
其操作过程中涉及到：蛋白提取、电泳、转膜、杂交、显色、抗体的选择、试剂的选择、设备应用等诸多内容，其中每一个环节的差错对最后的试验结果都会产生不小的影响，最终导致试验失败。
很多同学都在抱怨自己的Western Blot没有信号、目的条带太弱、杂带太多、条带弯曲、泳道中有涂抹状背景等诸多问题，大部分情况都会最终把矛头指向抗体，认为这个抗体质量不好。
抗体质量肯定会对试验产生相当重要的影响，但绝不是全部。
你的操作方法可能是对的，但，是否合理、是否适合你的试验要求，你可能未必了解。
我们课题组Western Blot的任务量极重（每年ECL的用量都在5L以上），课题组里面的一些同学总是在不停的问我关于条件优化的问题，我不可能为每一个人找到问题的关键点，因此，写一份关于Western Blot的系统性材料非常有必要，希望你们可以针对自己的问题，自我分析、自我解决，这样也能锻炼你们独立解决问题的能力。
WB实验步骤详解
Western实验步骤Western，也称Western blot、Western blotting、Western印迹，是用抗体检测蛋白的重要方法之一。
Western 可以参考如下步骤进行操作。
1. 收集蛋白样品(Protein sample preparation)可以使用适当的裂解液，例如碧云天生产的Western及IP细胞裂解液(P0013)、RIPA裂解液等，裂解贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品。
对于某些特定的亚细胞组份蛋白，例如细胞核蛋白、细胞浆蛋白、线粒体蛋白等，可以参考相关文献提取这些亚细胞组份蛋白，也可以使用试剂盒进行抽提，例如碧云天生产的细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(P0028)。
收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。
根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。
因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。
如果使用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液或RIPA裂解液，可以使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0011/P0012)。
2. 电泳(Electrophoresis)(1) SDS-PAGE凝胶配制SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(P0012A)。
该试剂盒提供了除水和配胶器具外的所有试剂以及配制各种浓度SDS-PAGE的配方。
(2) 样品处理在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。
例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。
使用5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以减小上样体积，在相同体积的上样孔内可以上样更多的蛋白样品。
5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以参考相关文献资料配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)(P0015)。
100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。
WB实验步骤详解
Western实验步骤Western，也称Western blot、Western blotting、Western印迹，是用抗体检测蛋白的重要方法之一。
Western 可以参考如下步骤进行操作。
1. 收集蛋白样品(Protein sample preparation)可以使用适当的裂解液，例如碧云天生产的Western及IP细胞裂解液(P0013)、RIPA裂解液等，裂解贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品。
对于某些特定的亚细胞组份蛋白，例如细胞核蛋白、细胞浆蛋白、线粒体蛋白等，可以参考相关文献提取这些亚细胞组份蛋白，也可以使用试剂盒进行抽提，例如碧云天生产的细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(P0028)。
收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。
根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。
因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。
如果使用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液或RIPA裂解液，可以使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0011/P0012)。
2. 电泳(Electrophoresis)(1) SDS-PAGE凝胶配制SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(P0012A)。
该试剂盒提供了除水和配胶器具外的所有试剂以及配制各种浓度SDS-PAGE的配方。
(2) 样品处理在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。
例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。
使用5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以减小上样体积，在相同体积的上样孔内可以上样更多的蛋白样品。
5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以参考相关文献资料配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)(P0015)。
100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。
Western免疫印迹 总结版
Western免疫印迹（Western Blot）一.原理：Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。
经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。
也应用于检测蛋白水平的表达。
二.试剂1.裂解液：碧云天RIPA裂解液（强）主要成分为：50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1%TritonX-100，1% sodiumdeoxycholate，0.1% SDS，以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多种抑制剂。
2.PSMF：中文-苯甲基磺酰氟，有剧毒；在水溶液中不稳定，应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中；100mmol/L PMSF溶液配制方法：溶解174mg的PMSF于足量的异丙醇中，定容到10ml，分装成小份贮存于-20℃，使用时终浓度一般为1mmol/L。
3.裂解液（含PMSF）的配制：1ml裂解液加100 mM 的PMSF 10 μl（只是比例关系，根据样品量计算出裂解液的实际体积再配制相应的裂解液）。
PMSF要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合4.丙烯酰胺和N,N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N,N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N,N’-亚甲双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。
)储于棕色瓶，4℃避光保存。
组织裂解液和细胞裂解液的配制
组织裂解液和细胞裂解液如何配制?一、细胞裂解液配制方法一一、试剂准备1、新鲜配制冷的RIPA 裂解缓冲液:150 mM NaCL1% NP-40 (去垢剂)0.1% SDS (去垢剂)2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)2ug/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)1 mM PMSF (蛋白酶抑制剂)1.5 mM EDTA (蛋白酶抑制剂)1mM NaVanadate (磷酸脂酶抑制剂)(任选)以上所有试剂均按比例溶于150 mM NaCL溶液中。
2、冷的PBS 中加入1 mM PMSF1.5 mM EDTA1mM NaVanadate （钒酸钠）(任选)3、对数期生长状态佳的细胞，75cm至少3-4瓶（90%以上生长面积）。
二、实验步骤1、将长满细胞的培养瓶放置在冰上，用吸液管吸出培养液。
加入足够的冷的PBS在培养瓶中充分洗涤细胞表面，以洗去瓶中残留的培养基，倒掉PBS ，重复以上操作2-3遍。
在最后一次洗涤中尽可能吸干残留的PBS，尽量在冰上操作。
2、向培养瓶中加入冷的RIPA 裂解缓冲液(每75cm2 培养瓶加1ml). 然后用细胞刮子沿着瓶壁开始刮细胞，如果所需要刮的同种细胞有多瓶，则将第一瓶刮下的细胞液吸出转入下一瓶中继续刮(由于处理后的细胞裂解液较粘稠，所以宜用直径大点的吸液管吸取)。
3、吸出刮好的细胞裂解液置于14ml 离心管中（置于冰上），然后重复步骤2以刮取剩下的细胞。
4、尽可能将多的细胞裂解液收集到14ml的离心管中，样品插入冰盒进行超声，超声强度以不产生泡沫为准，超声每次2-3秒，重复3-4次。
如仍有细胞碎片或沉淀，应离心10000rpm,10分钟，留取上清。
5、取出小量细胞裂解液测其蛋白浓度（用Biorad Bradford 试剂盒或紫外分光光度计，在A280测定），分装保存在-70℃。
4方法二NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 8.0) 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟）0.1mmol/L(100µg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 µmol/L(0.7µg/ml)Leupeptin（亮抑制肽）0.5mg/mlAprotinin（抑蛋白酶肽）0.3µmol/L(1µg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于0.01mol/LHEPES(pH8.0);Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）裂解操作程序：* 离心收集1×107个细胞* 加入4℃预冷1%NP-40裂解液100µl* 剧烈震荡使细胞充分悬浮混匀（如为组织进行匀浆）* 4℃放置15~30min* 4℃离心，15 000rpm,10min，取上清备用。
Western Blot及IP细胞裂解液
使用说明：
对于培养细胞样品： 1. 融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。 2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6
P0013D
P0013F
P0013G
RIPA裂解液(弱) NP-40裂解液 SDS裂解液
有效裂解成分
1% Triton X- 1% Triton X-100, 1%
1% NP-40, 0.5%
100
deoxycholate, 0.1% SDS deoxycholate, 0.1% SDS
1% NP-40, 0.25%
6. Dong S, Li C, Wu P, Tsien JZ, Hu Y. Environment enrichment rescues the neurodegenerative phenotypes in presenilins-deficient mice. Eur J Neurosci. 2007 Jul;26(1):101-12.
8. Cheng BQ, Gong W, Geng Y, Chen L, Wu JB, Jiang B. Study of r elationship between expr ession of galectin- 3 and malignant degr ee of color ectal cancer in differ ential pathologic stage. China Journal of Modern Medicine. Jul.2007;Vol.17 No.13.
裂解液强中弱功能对比
清，用于后续实验。
直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。
该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。
在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。
如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。
附：碧云天生产的各种裂解液主要特点、差异和选择用，发表大量SCI论文，用户普遍反映很好。
裂解细胞或组织后，没有非常粘滞的透明状DNA团块形成，不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。
另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。
对于某些特殊蛋白的IP，如果发现Western及IP细胞裂解液(P0013)效果不是非常理想，可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40裂解液。
如果发现IP的时候背景很高，即非特异的蛋白也被IP下来，则需要选用裂解强度较高的裂解液，例如RIPA裂解液(强或中)。
如果发现目的蛋白无法被IP下来，则说明裂解液的强度过强，可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
对于某些难溶解蛋白的Western，如果发现Western及IP细胞裂解液(P0013)效果不是非常理想，可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如RIPA裂解液(强、中)或SDS裂解液。
使用RIPA裂解液(强)的用户也非常多，发表了大量SCI论文。
用于特定用途需要自行添加特定抑制剂或不需要添加抑制剂时，可以考虑选购P0013J或P0013K。
P0013J在很多时候可以兼容酶活性和生物小分子的检测，对于特定的酶或生物小分子的检测是否兼容需要自行测试，碧云天不提供具体的应用信息。
碧云天生物技术碱性磷酸酶检测试剂盒产品说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号碱性磷酸酶检测试剂盒产品编号 产品名称包装 P0321S 碱性磷酸酶检测试剂盒 100次 P0321M碱性磷酸酶检测试剂盒500次产品简介：碧云天生产的碱性磷酸酶检测试剂盒(Alkaline Phosphatase Assay Kit)是一种用于快速、便捷地检测细胞或组织样品的裂解或匀浆产物的上清液、血清、血浆、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酶活性的试剂盒。
碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, AP/ALP/AKP/ALKP/ALPase/Alk Phos)也称碱性磷酸酯酶(EC 3.1.3.1)，可以在碱性条件下催化磷酸酯键的水解。
哺乳动物中，肝脏、胆管、肾脏、骨头和胎盘中的碱性磷酸酶活性比较高。
常见的碱性磷酸酶包括肠道碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, intestinal, ALPI)、非组织特异性碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, tissue-nonspecific isozyme, ALPL)和胎盘碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, placental type, 也称placental alkaline phosphatase, PLAP)。
常见的小牛肠碱性磷酸酶(Calf Intestinal Alkaline Phosphatase, CIAP/CIP)被广泛用于二抗等的标记最终用于蛋白和核酸等的检测，也常用于DNA 或RNA 5´和3´末端的去磷酸化(去单磷酸化)，特别是质粒的5´末端去磷酸化以避免质粒自连等。
干细胞，如iPS 中，碱性磷酸酶的活性很高，常被用作iPS 成功诱导的标志。
碧云天
碧云天生产的各种裂解液主要特点、差异和选择首先请参考下表，了解各种裂解液的主要特点和差异。
产品编号P0013 P0013B P0013C P0013D P0013F P0013G产品名称Western及IP细胞裂解液RIPA裂解液(强)RIPA裂解液(中)RIPA裂解液(弱)NP-40裂解液SDS裂解液产品价格158.00元178.00元178.00元178.00元178.00元178.00元有效裂解成分1%TritonX-1001% TritonX-100, 1%deoxycholate,0.1% SDS1% NP-40, 0.5%deoxycholate,0.1% SDS1% NP-40,0.25%deoxycholate1% NP-40 1% SDS裂解强度温和强中温和温和强对膜蛋白的提取一般很好较好一般一般很好对胞浆蛋白的提取很好很好很好很好很好很好对核蛋白的提取较好很好较好较好较好很好胞浆磷酸化蛋白提取很好很好很好很好很好很好细胞核转录因子提取很好很好很好很好很好很好含蛋白酶抑制剂是是是是是是含磷酸酯酶抑制剂是是是是是是主要用途WB,IP,co-IPWB, IP WB, IP WB, IP, co-IPWB,IP,co-IPWB,ChIP用于普通的Western、IP或co-IP，我们推荐使用Western及IP细胞裂解液(P0013)，该裂解液已被国内各大研究机构广泛使用，用户普遍反映很好。
裂解细胞或组织后，没有非常粘滞的透明状DNA团块形成，不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。
另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。
对于某些特殊蛋白的IP，如果发现Western及IP细胞裂解液(P0013)效果不是非常理想，可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40裂解液。
如果发现IP的时候背景很高，即非特异的蛋白也被IP下来，则需要选用裂解强度较高的裂解液，例如RIPA裂解液(强或中)。
碧云天植物RIPA裂解液(强) 100ml 说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线: 400-1683301或800-8283301订货e-mail:******************技术咨询: *****************网址: 碧云天网站 微信公众号植物RIPA裂解液(强)产品编号产品名称包装P0045-100ml 植物RIPA裂解液(强) 100ml产品简介：碧云天生产的植物RIPA裂解液(Plant RIPA Lysis Buffer)是一种传统的植物细胞、组织或原生质体快速裂解液。
植物RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA 等。
本产品可以用于植物细胞、组织或原生质体样品，也可以用于动物的细胞或组织样品、真菌或细菌样品。
RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。
关于不同的RIPA裂解液以及碧云天生产的其它裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考我们的相关网页：/support/lysis-buffer.htm。
植物RIPA裂解液(强)的主要有效成分包括1% Triton X-100、1% sodium deoxycholate和0.1% SDS等去垢剂，以及sodium orthovanadate、sodium fluoride、EDTA和leupeptin等多种抑制剂。
可以有效抑制蛋白降解。
用植物RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/ P0012S)测定蛋白浓度。
由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
包装清单：产品编号产品名称包装P0045-100ml 植物RIPA裂解液(强) 100ml—说明书1份保存条件：-20ºC保存，一年有效。
RIPA裂解液(强)使用说明书
RIPA 裂解液（强） RIPA 裂解液是一种传统的组织以及细胞快速裂解液，主要用于从动物组织和哺乳动物
细胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。按照其裂解液的强度可分为强、 中、弱三类，具体特点和差异请参考附表，可根据实验需求选择相应产品。RIPA 裂解液（强） 可有效提取细胞核、细胞膜和胞浆蛋白，提取的蛋白可应用于蛋白定量、Western Blot、IP 等检测分析。
3 不同的细胞需要加入的裂解液的量可能会不同，需要根据具体条件进行条件筛选；
4. 若裂解液产生沉淀或者析出，可在 37℃水浴中孵育，振荡使沉淀或析出物溶解，若不能
溶解，可适当加热助溶。
温馨提示
为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，带手套等。
储存温度
RIPA 裂解液保存于 2~8℃，其余保存于-20℃。
解液
1% NP-40
温和 一般 很好 较好 WB, IP, co-IP
HCY015 SDS 裂解
液
1% SDS
强 很好 很好 很好 WB, ChIP
HCY017 Western 及 IP 细 胞裂解液
1% Triton X-100
温和 一般
很好
较好
WB, IP, co-IP
HCY018 Western 及 IP 细 胞裂解液 (无抑制
包装清单品名包装hcy009aripa裂解液强50mlhcy009b抑制剂05mlhcy009cpmsf05ml说明书相关产品hcy009hcy011hcy012hcy216hcy015hcy017hcy018产品名称ripasds裂解western及ip胞裂解液western及ip胞裂解液无抑制有效裂解成分1tritonx1001脱氧胆酸钠01sds1np4005脱氧胆酸钠01sds1np40025脱氧胆酸钠1np401sds1tritonx1001tritonx100裂解强度温和温和温和温和对膜蛋白提取很好较好一般一般很好一般一般对浆蛋白提取很好很好很好很好很好很好很好对核蛋白提取很好较好较好较好很好较好较好主要用途wbipwbipwbipcoipwbipcoipwbchipwbipcoipwbipcoip
碧云天生物技术 Beyotime Biotechnology 产品说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线：400-168-3301或800-8283301订货e-mail：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站微信公众号MuERVL-Gag Rabbit Polyclonal Antibody产品编号产品名称包装AF0240 MuERVL-Gag Rabbit Polyclonal Antibody 50μl产品简介：来源用途交叉反应性分子量Rabbit ICC, IF M 67KDa WB, Western blot; IP, Immunoprecipitation; IF, Immunofluorescence; IHC, Immunohistochemistry; ICC, Immunocytochemistry;FC, Flow Cytometry; ELISA, Enzyme-linked Immunosorbent Assay; ChIP, Chromatin Immunoprecipitation Assay.H, Human;M, Mouse; R, Rat; C, Chicken; Cw, Cow; Dg, Dog; Gp, Guinea pig; Hm, Hamster; Hr, Horse; Mk, Monkey; Pg, Pig;Rb, Rabbit; S, Sheep; Z, Zebrafish; All, all species expected.配套提供了Western一抗稀释液，可以用于Western检测或其它适当用途时的一抗稀释。
建议抗体使用时的稀释比例如下(实际使用时需根据抗原水平的高低作适当调整)：WB IP IF IHC ICC FC ELISA ChIP- - 1:200 - 1:200 - - -抗体详细信息如下:About this AntibodyName MuERVL-Gag Rabbit Polyclonal AntibodyCategory Polyclonal antibody(pAb); Primary antibodyIsotype IgGPurification Peptide affinity purifiedAbout the ImmunogenImmunogen This antibody is produced by immunizing rabbits with a synthetic peptide (KLH-coupled) corresponding to MuERVL-Gag.Gene ID - SwissProt - Synonyms - CategoryBackground A large number of retrotransposons are expressed when the zygotic genome is first transcribed, including the endogenous retroviruses (ERVs), LINE-1 elements, and the non-autonomous SINE elements. At the 2C stage, MuERV-L/MERVL retrovirus-like elements are transiently de-repressed and produce 3% of the transcribed mRNAs. Following the 2C stage, MERVL-retroelement expression is silenced. The newly study discovered that this regulated pattern of MERVL expression overlapped with greater than one hundred 2C-specific genes that have co-opted regulatory elements from these foreign retroviruses to initiate their transcription.包装清单：产品编号产品名称包装AF0240 MuERVL-Gag Rabbit Polyclonal Antibody 50μlAZ050 Western一抗稀释液50ml－说明书1份保存条件：MuERVL-Gag Rabbit Polyclonal Antibody -20ºC保存，Western一抗稀释液-20ºC或4ºC保存，一年有效。
裂解液——精选推荐
全蛋白提取试剂盒Tissue or Cell Total Protein Extraction Kit产品说明：本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白，用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效,可以提取出培养细胞或动物组织中的决大多数蛋白质。
获得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀，酶活性分析，Pull down,EMSA等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂，可以每次从107个培养细胞或200mg动物组织提取蛋白质，本试剂盒可以使用50次。
储存条件：2～8℃。
产品特点：1．提取的蛋白质包括膜,核,核基质和胞质蛋白,而且最大限度保持蛋白质活性；2．整个操作过程只需要30分钟左右；3．即可以用于培养细胞（50x107个），有可以用于动物组织（50x200mg）蛋白质的提取；4．避免蛋白酶和磷酸酶对蛋白质的降解，保持蛋白质的完整性和天然活性；5．不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。
编号包装价格产地BSP003 50 Assays 520 生工RIPA裂解液IIRIPA Lysis Buffer II产品说明：RIPA裂解液II对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有中等强度裂解作用，可能是经典但最常用的细胞组织快速裂解液。
使用RIPA Buffer制备用于Western特别是用于免疫共沉淀的裂解产物已经是一种首选的标准操作，适用于大部分抗原表位的检测，特别适用免疫共沉淀检测蛋白质-蛋白质之间的相互作用胞浆磷酸化蛋白和细胞核转录因子检测等。
本产品包括裂解液和蛋白酶和磷酸酶抑制剂组成. 为1倍溶液，可以处理108个细胞或1g 组织。
含有(NaCl,NP-40, deoxycholate, SDS,Tris), proteinase inhibitor and phosphatas inhibitor cocktail 。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
是
是
是
是
含磷酸酯酶抑
主要用途
WB, IP,co-IP
WB, IP
WB, IP
WB, IP, co-IP WB, IP,co-IP WB, ChIP
¾ 用于普通的Western、IP或co-IP，我们推荐使用Western及IP细胞裂解液(P0013)，该裂解液已被国内各大研究机构广泛使
deoxycholate
1% NP-40
1% SDS
裂解强度
温和
强
中
温和
温和
强
对膜蛋白的提取
一般
很好
较好
一般
一般
很好
对胞浆蛋白的提取
很好
很好
很好
很好
很好
很好
对核蛋白的提取
较好
很好
较好
较好
较好
很好
胞浆磷酸化蛋白提取 很好
很好
很好
很好
很好
很好
细胞核转录因子提取 很好
很好
很好
很好
很好
很好
含蛋白酶抑制剂
是
是
¾ 用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/ P0011/P0012/P0012S)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂 解得到样品的蛋白浓度。
Hydroxytyrosol protects retinal pigment epithelial cells from acrolein-induced oxidative stress and mitochondrial dysfunction. J Neurochem. 2007 Oct 18. 11.Meng L, Huang M, Ye X, Fan M, Bian Z. Increased expression of collagen prolyl 4-hydroxylases in Chinese patients with hereditary gingival fibromatosis. Arch Oral Biol. 2007 Dec;52(12):1209-14. 12.Dong X, Wang JN, Huang YZ, Guo LY, Kong X. Cell-penetrating Peptide PEP-1-mediated Transduction of Enhanced Green Fluorescent Protein into Human Colorectal Cancer SW480 Cells. Chinese Journal of Cancer.2007,26(2):216- 219. 13.Cheng BQ, Jiang B, Bao J. Construction and expression of ga lectin2 3 shRNA recombinant vector and its effect on prolifera tion ra te of colorecta l cancer lovo cells. J FourthMilMedUniv. 2007,28(11). 14.Guo M, Huang T, Cui Y, Pan B, Shen A, Sun Y, Yi Y, Wang Y, Xiao G, Sun G. PrPC interacts with tetraspanin-7 through bovine PrP154-182 containing alpha-helix 1. Biochem Biophys Res Commun. 2008 Jan 4;365(1):154-7. 15.He Z, Sun X, Mei G, Yu S, Li N. Nonclassical secretion of human catalase on the surface of CHO cells is more efficient than classical secretion. Cell Biol Int. 2008 Apr;32(4):367-73. 16.Tang Z, Zhao M, Li C, Wang Y, Peng S. Polyaspartoyl.l-arginine inhibits platelet aggregation through stimulation of NO release from endothelial cells. Eur J Pharmacol. 2008 Jun 24;588(1):41-6. 17.Fang Z, Cao W, Li S, Wang Q, Li C, Xie L, Zhang R. Significance of the C-terminal globular domain and the extra tail of the calmodulin-like protein (Pinctada fucata) in subcellular localization and protein-protein interaction. Cell Biol Int. 2008 Aug;32(8):920-7. 18.Wei Y, Weng D, Li F, Zou X, Young DO, Ji J, Shen P. Involvement of JNK regulation in oxidative stress-mediated murine liver injury by microcystin-LR. Apoptosis. 2008 Aug;13(8):1031-42.
孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2 秒后，细胞就会被裂解。 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解 液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/ 管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。 3. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量 到150微升或200微升。 对于组织样品： 1. 把组织剪切成细小的碎片。 2. 融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。 3. 按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高 浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。) 4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。 5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上
7. Chen Y, Sun R, Jiang W, Wei H, Tian Z. Liver-specific HBsAg transgenic mice are over-sensitive to Poly(I:C)-induced liver injury in NK cell- and IFN-gamma-dependent manner. J Hepatol. 2007 Aug;47(2):183-90.
6. Cheng BQ, Gong W, Geng Y, Chen L, Wu JB, Jiang B. Study of r elationship between expr ession of galectin- 3 and malignant degr ee of color ectal cancer in differ ential pathologic stage. China Journal of Modern Medicine. Jul.2007;Vol.17 No.13.
2. Cheng BQ, Geng Y, Wu JB, Jiang B. Influences of inhibiting Galectin-3 by RNA inter ference technique on the prolifer ation and apoptosis of human color ectal cancer cells LOVO. JournalofC linicalR ehabilitative Tissue E ngineering R esearch.April 22,2007 Vol.11,NO.16.
弱)或NP-40裂解液。如果发现IP的时候背景很高，即非特异的蛋白也被IP下来，则需要选用裂解强度较高的裂解液，例如
RIPA裂解液(强或中)。如果发现目的蛋白无法被IP下来，则说明裂解液的强度过强，可以使用较为温和的裂解液例如
RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
¾ 对于某些难溶解蛋白的Western，如果发现Western及IP细胞裂解液(P0013)效果不是非常理想，可以尝试使用裂解强度更高
¾ Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mM Tris (pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，以及sodium pyrophosphate，βglycerophosphate，EDTA，Na3VO4，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作 用。