(完整版)裂解液主要特点与区分
红细胞裂解液
红细胞裂解液货号GM02原理:本公司生产的红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer),也称ACK Lysis Buffer,是一种用于从人或鼠等的血液或组织样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。
本裂解液经过优化配方,在裂解红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。
主要有效成分为氯化铵。
本裂解液不适用于有细胞核红细胞的裂解,例如鸟或禽类的红细胞。
本裂解液经过无菌处理,处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的原代培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。
保存条件:4℃保存,一年有效。
试剂盒组成:使用说明:对于组织细胞样品:1. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清。
2. 加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。
例如细胞沉淀的体积为1ml,则加入3-5ml的红细胞裂解液。
本步骤在室温或4度操作均可。
3. 400-500g离心5分钟,弃红色上清。
4℃离心效果更佳。
4. 如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。
通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5. 洗涤1-2次:加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500g离心2-3分钟,弃上清。
可再重复1次,共洗涤1-2次。
洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。
4℃离心效果更佳。
6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤:1. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清。
2. 对于0.2ml细胞沉淀加入1ml红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。
本步骤在室温或4度操作均可。
3. 加入15-20ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,混匀。
4. 400-500g离心5分钟,弃红色上清。
裂解液主要特点与区分
用于普通的Western、IP或co-IP,我们推荐使用Western及IP细胞裂解液,该裂解液已被国内各大研究机构广泛使用,用户普遍反映很好。
裂解细胞或组织后,没有非常粘滞的透明状DNA 团块形成,不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。
另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。
对于某些特殊蛋白的IP,如果发现Western及IP细胞裂解液效果不是非常理想,可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40裂解液。
如果发现IP的时候背景很高,即非特异的蛋白也被IP下来,则需要选用裂解强度较高的裂解液,例如RIPA裂解液(强或中)。
如果发现目的蛋白无法被IP下来,则说明裂解液的强度过强,可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
对于某些难溶解蛋白的Western,如果发现Western及IP细胞裂解液效果不是非常理想,可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如RIPA裂解液(强、中)或SDS裂解液。
RIPA裂解液(强)(RIPA Lysis Buffer)Code No. PG410501产品简介:➢本公司的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。
RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。
➢RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。
RIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。
➢RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris (pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS,以及sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂。
可以有效抑制蛋白降解。
➢用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用本公司的BCA蛋白浓度测定试剂盒(PG400301)测定蛋白浓度。
裂解液
Western及IP细胞裂解液品名:Western及IP细胞裂解液简介:Western及IP细胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP),是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。
本细胞裂解液裂解的细胞,可以用于PAGE,Western,免疫沉淀(immunol precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)。
及IP细胞裂解液的主要成分为20mM Tris (pH7.5),150mM NaCl,1% Triton X-100,以及sodium pyrophosphate,β-glycerophosphate,EDTA,Na3VO4,leupeptin等多种抑制剂。
可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。
用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。
由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
别名:Cell lysis buffer for Western and IP使用说明:对于培养细胞样品:1. 融解Western及IP细胞裂解液,混匀。
取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。
按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。
用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。
按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。
再用手指轻弹以充分裂解细胞。
充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
蛋白裂解液的种类
蛋白裂解液的种类蛋白裂解液是一种常用于蛋白质提取和分析的试剂,具有多种不同的种类和配方。
下面将介绍几种常见的蛋白裂解液及其特点。
1. RIPA裂解液RIPA(Radioimmunoprecipitation Assay)裂解液是一种常用的蛋白裂解液,用于细胞裂解和蛋白质提取。
它的主要成分包括盐类、离子型洗涤剂(如NP-40或Triton X-100)、蛋白酶抑制剂(如苯甲酰氟化物)和缓冲剂(如Tris-HCl)。
RIPA裂解液能够有效地破坏细胞膜,并且可以溶解大部分细胞组分,适用于多种蛋白质的研究。
2. SDS裂解液SDS(Sodium Dodecyl Sulfate)裂解液是一种常用的蛋白裂解液,用于蛋白质电泳分析。
它的主要成分是SDS和Tris-HCl缓冲液。
SDS裂解液能够使蛋白质变性并带负电荷,使其在电场中按照分子大小进行迁移,便于分析和测定。
3. Urea裂解液Urea裂解液是一种常用的蛋白裂解液,用于蛋白质的变性和解聚。
它的主要成分是尿素和Tris-HCl缓冲液。
尿素能够破坏氢键和疏水作用力,使蛋白质变性并解聚,便于后续的分析和提取。
4. NP-40裂解液NP-40(Nonidet P-40)裂解液是一种非离子型洗涤剂,常用于细胞裂解和蛋白质提取。
它的主要成分是NP-40和Tris-HCl缓冲液。
NP-40裂解液能够有效地破坏细胞膜,并且具有低表面张力和渗透压,有利于蛋白质的提取和分析。
5. RIPA-Lysis裂解液RIPA-Lysis裂解液是一种改良版的RIPA裂解液,常用于细胞裂解和蛋白质提取。
它的主要成分包括盐类、离子型洗涤剂(如NP-40或Triton X-100)、蛋白酶抑制剂(如苯甲酰氟化物)和缓冲剂(如Tris-HCl),与RIPA裂解液相似。
不同之处在于RIPA-Lysis裂解液中添加了额外的蛋白酶抑制剂和磷酸酯酶抑制剂,可以更好地保护蛋白质的完整性。
总结:蛋白裂解液是一种用于蛋白质提取和分析的重要试剂,常见的种类包括RIPA裂解液、SDS裂解液、Urea裂解液、NP-40裂解液和RIPA-Lysis裂解液等。
trizol裂解液成分
trizol裂解液成分
Trizol裂解液是一种广泛应用于生物实验的试剂,主要用于提取total RNA 和DNA。
它的使用方法简单,提取效果显著,被广大科研工作者所青睐。
那么,Trizol裂解液的成分是什么?它又是如何发挥作用的?下面我们将详细介绍Trizol裂解液的成分及其在实验中的应用。
Trizol裂解液的主要成分包括:异丙醇、氯仿、柠檬酸钠、糖类、酚类等。
这些成分在裂解液中各自发挥着特定的作用。
异丙醇和氯仿主要用于破碎细胞膜和细胞器,释放细胞内的核酸;柠檬酸钠和糖类则可以稳定核酸,防止其降解;酚类化合物具有抗氧化作用,可以保护实验过程中核酸的完整性。
Trizol裂解液在生物实验中的应用非常广泛。
无论是对植物组织、动物组织,还是微生物组织,都可以取得良好的提取效果。
在使用Trizol裂解液时,要注意以下几点:
1.实验操作过程中,要严格遵守试剂说明书,确保实验结果的准确性。
2.由于Trizol裂解液具有较强的裂解能力,操作时要尽量避免接触到眼睛和皮肤,以免对人体造成伤害。
3.在提取RNA时,最后一个步骤是加入70%的乙醇进行洗涤,以去除残留的DNA。
这一步非常重要,否则可能会影响RNA的纯度。
4.实验废弃物要妥善处理,遵守实验室废弃物处理规定,以防对环境造成污染。
总之,Trizol裂解液作为一种优秀的生物实验试剂,凭借其高效的提取能力和简单的操作方法,赢得了科研工作者的信赖。
了解其成分和应用注意事
项,能够帮助我们更好地利用Trizol裂解液,提高实验效率和成果。
P0013B-RIPA裂解液_强_
RIPA裂解液(强)产品简介:碧云天生产的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。
RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。
RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。
RIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。
关于不同的RIPA裂解液以及碧云天生产的其它裂解液的主要特点和差异,以及如何选择裂解液可参考我们的相关网页:/lysis-buffer.htm 。
RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris (pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS,以及sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂。
可以有效抑制蛋白降解。
用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/ P0012S)测定蛋白浓度。
由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
保存条件:-20℃保存,一年有效。
注意事项:为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。
可以适当分装后使用。
需自备PMSF。
PMSF(ST506)可以向碧云天订购。
裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
关于裂解液的选择,一方面可以参考碧云天的相关网页:/lysis-buffer.htm 选择合适的裂解液;另一方面也需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:对于培养细胞样品:1.融解RIPA裂解液,混匀。
取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
裂解液强中弱功能对比
清,用于后续实验。
直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。
该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。
在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。
如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
附:碧云天生产的各种裂解液主要特点、差异和选择用,发表大量SCI论文,用户普遍反映很好。
裂解细胞或组织后,没有非常粘滞的透明状DNA团块形成,不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。
另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。
对于某些特殊蛋白的IP,如果发现Western及IP细胞裂解液(P0013)效果不是非常理想,可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40裂解液。
如果发现IP的时候背景很高,即非特异的蛋白也被IP下来,则需要选用裂解强度较高的裂解液,例如RIPA裂解液(强或中)。
如果发现目的蛋白无法被IP下来,则说明裂解液的强度过强,可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
对于某些难溶解蛋白的Western,如果发现Western及IP细胞裂解液(P0013)效果不是非常理想,可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如RIPA裂解液(强、中)或SDS裂解液。
使用RIPA裂解液(强)的用户也非常多,发表了大量SCI论文。
用于特定用途需要自行添加特定抑制剂或不需要添加抑制剂时,可以考虑选购P0013J或P0013K。
P0013J在很多时候可以兼容酶活性和生物小分子的检测,对于特定的酶或生物小分子的检测是否兼容需要自行测试,碧云天不提供具体的应用信息。
Ficoll400裂解液(40% wv)菲可400裂解液
北京吉美生物技术有限公司
Ficoll400裂解液(40% w/v)菲可400裂解液
产品简介:
密度梯度离心是利用特定的介质形成连续或不连续的密度梯后,将组织匀浆或细胞悬液置于介质顶部,通过离心力或重力作用使细胞或细胞逐级分离开来。
Ficoll 400又称聚蔗糖400,分子量40KD,具有无毒、低渗透压、密度高等特性,容易使细胞聚集,是分离细胞或细胞器较好的介质。
Jimei Ficoll 400裂解液主要用于分级梯度分离细胞器如完整细胞等,主要由PM缓冲液、Ficoll 400、蛋白酶抑制剂等组成,经过滤除菌。
根据梯度不同,Ficoll 400含量分别为20%~50%不等。
产品组成:
操作步骤(仅供参考):
1、根据实验要求操作。
注意事项:
1、注意无菌操作,避免反复冻融。
2、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:6个月有效。
4。
C可储存1个月。
相关产品:。
裂解液——精选推荐
全蛋白提取试剂盒Tissue or Cell Total Protein Extraction Kit产品说明:本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白,用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer匀浆裂解组织或细胞,作用温和,提取过程简便高效,可以提取出培养细胞或动物组织中的决大多数蛋白质。
获得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀,酶活性分析,Pull down,EMSA等后续研究,但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究,因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂,可以每次从107个培养细胞或200mg动物组织提取蛋白质,本试剂盒可以使用50次。
储存条件:2~8℃。
产品特点:1.提取的蛋白质包括膜,核,核基质和胞质蛋白,而且最大限度保持蛋白质活性;2.整个操作过程只需要30分钟左右;3.即可以用于培养细胞(50x107个),有可以用于动物组织(50x200mg)蛋白质的提取;4.避免蛋白酶和磷酸酶对蛋白质的降解,保持蛋白质的完整性和天然活性;5.不需要超速度离心,可以同时处理多个样品。
编号包装价格产地BSP003 50 Assays 520 生工RIPA裂解液IIRIPA Lysis Buffer II产品说明:RIPA裂解液II对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有中等强度裂解作用,可能是经典但最常用的细胞组织快速裂解液。
使用RIPA Buffer制备用于Western特别是用于免疫共沉淀的裂解产物已经是一种首选的标准操作,适用于大部分抗原表位的检测,特别适用免疫共沉淀检测蛋白质-蛋白质之间的相互作用胞浆磷酸化蛋白和细胞核转录因子检测等。
本产品包括裂解液和蛋白酶和磷酸酶抑制剂组成. 为1倍溶液,可以处理108个细胞或1g 组织。
含有(NaCl,NP-40, deoxycholate, SDS,Tris), proteinase inhibitor and phosphatas inhibitor cocktail 。
大肠杆菌裂解液 体外蛋白表达
大肠杆菌裂解液是一种重要的生物工程工具,被广泛应用于体外蛋白表达和纯化领域。
本文将对大肠杆菌裂解液的主要特点和应用进行介绍,并探讨其在体外蛋白表达中的作用和影响。
一、大肠杆菌裂解液的主要特点1. 细胞壁破裂效果显著大肠杆菌裂解液具有高效破裂细胞壁的特点,能够有效释放细胞内的蛋白质和其他生物大分子。
2. 蛋白质保护能力强裂解液中含有丰富的蛋白酶抑制剂,能够有效保护被释放的蛋白质不受降解,有利于后续的纯化和分析。
3. 对细胞内组分影响小裂解液中的成分对细胞内其他生物分子的影响较小,不会对后续实验结果造成干扰。
二、大肠杆菌裂解液在体外蛋白表达中的作用1. 促进目的蛋白质的释放在体外蛋白表达中,通过添加大肠杆菌裂解液可以有效促进目的蛋白质的释放,提高表达效率。
2. 保护蛋白质不受降解裂解液中的蛋白酶抑制剂能够保护被释放的蛋白质不受降解,保证表达蛋白的稳定性和纯度。
3. 降低后续纯化的复杂性大肠杆菌裂解液中的成分对后续蛋白质纯化的影响较小,能够降低纯化过程的复杂性,提高纯化效率。
三、大肠杆菌裂解液的应用1. 体外蛋白表达和纯化大肠杆菌裂解液是最常用的细胞裂解方法之一,在体外蛋白表达和纯化过程中发挥着重要作用。
2. 药物开发在药物开发过程中,大肠杆菌裂解液可用于表达和纯化功能性蛋白,为药物研发提供重要的支持。
3. 生物工程研究在生物工程领域,大肠杆菌裂解液也被广泛应用于蛋白质的功能研究和分析。
四、大肠杆菌裂解液的影响因素1. 裂解液成分裂解液中不同的成分对目的蛋白质的释放和稳定性有影响,需要根据具体实验要求选择合适的裂解液。
2. 裂解条件裂解的温度、时间和压力等条件会影响裂解效果,需要进行优化以达到最佳表达效果。
3. 后续处理裂解后的样品需要适当的后续处理,比如清除细胞残渣、沉淀蛋白质等,以保证后续实验的准确性和可靠性。
大肠杆菌裂解液作为一种重要的生物工程工具,在体外蛋白表达和纯化中发挥着重要的作用,具有很高的应用价值。
新冠试剂裂解液成分
新冠试剂裂解液成分
新冠试剂裂解液主要用于新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的样本处理,以便进行后续的核酸检测。
裂解液的成分通常包括以下几部分:
1. 缓冲液:缓冲液用于维持病毒样本的稳定性和活性,常见的缓冲液有磷酸盐缓冲液、Tris-HCl 缓冲液等。
2. 病毒裂解剂:病毒裂解剂通常为胍类物质,如十二烷基磺酸钠(SDS)、聚乙二醇(PEG)等,它们可以破坏病毒的外壳,释放病毒核酸。
3. 表面活性剂:表面活性剂如Triton X-100、SDS等,可以破坏病毒膜结构,有
助于病毒核酸的释放。
4. 蛋白酶抑制剂:蛋白酶抑制剂如胰蛋白酶抑制剂、亮抑蛋白酶肽等,可以抑制病毒蛋白酶的活性,保持病毒核酸的完整性。
5. 其他辅助成分:根据不同厂家和试剂盒的配方,还可能包含一些其他辅助成分,如抗生素、糖类、盐类等,用于优化实验条件。
需要注意的是,不同厂家和型号的新冠病毒试剂盒成分可能略有差异,具体成分以实际产品说明书为准。
在使用试剂盒时,请严格按照说明书进行操作,以确保实验结果的准确性。
lysis buffer 组织裂解方法
lysis buffer 组织裂解方法
组织裂解是将生物组织样本中的细胞膜破裂,释放细胞内的分子以进行后续实验。
Lysis buffer(裂解液)是一种用于组织裂
解的重要试剂,包含多种成分,如盐、缓冲液、蛋白酶抑制剂等。
以下是一种常见的组织裂解方法:
1. 准备裂解液:将PBS缓冲液配制至所需浓度,并添加蛋白
酶抑制剂(如PMSF)、EDTA等。
2. 将组织样本或细胞沉淀加入裂解液中,并用移液器充分悬浮。
3. 将混合液置于冰上或低温条件下,静置数分钟以使细胞完全破裂。
4. 可通过机械方法,如超声波处理或高压均质器处理来增加裂解效果。
5. 最后,可通过离心操作,除去细胞碎片和细胞核。
这是一种常规的组织裂解方法,可以根据实验需要进行修正和优化。
裂解液的成分和浓度也可以根据具体实验要求进行调整。
(完整版)裂解液主要特点与区分
(完整版)裂解液主要特点与区分⽤于普通的Western、IP或co-IP,我们推荐使⽤Western及IP细胞裂解液,该裂解液已被国内各⼤研究机构⼴泛使⽤,⽤户普遍反映很好。
裂解细胞或组织后,没有⾮常粘滞的透明状DNA 团块形成,不必采⽤超声处理等就可以⾮常理想地⽤于后续操作。
另外该裂解液裂解的产物也适合⽤于磷酸化蛋⽩的Western检测。
对于某些特殊蛋⽩的IP,如果发现Western及IP细胞裂解液效果不是⾮常理想,可以尝试⽤RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40裂解液。
如果发现IP的时候背景很⾼,即⾮特异的蛋⽩也被IP下来,则需要选⽤裂解强度较⾼的裂解液,例如RIPA裂解液(强或中)。
如果发现⽬的蛋⽩⽆法被IP下来,则说明裂解液的强度过强,可以使⽤较为温和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
对于某些难溶解蛋⽩的Western,如果发现Western及IP细胞裂解液效果不是⾮常理想,可以尝试使⽤裂解强度更⾼的裂解液例如RIPA裂解液(强、中)或SDS裂解液。
RIPA裂解液(强)(RIPA Lysis Buffer)Code No. PG410501产品简介:?本公司的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是⼀种传统的细胞组织快速裂解液。
RIPA裂解液裂解得到的蛋⽩样品可以⽤于常规的Western、IP等。
RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。
RIPA裂解液的配⽅有很多种,根据其裂解液的强度⼤致可以分为强、中、弱三类。
RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris (pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS,以及sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂。
可以有效抑制蛋⽩降解。
组织细胞裂解液介绍
宝枫林组织细胞裂解液描述:组织细胞裂解缓冲液,为您提供完整的组织、细胞总蛋白制备方案,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。
裂解液中含有去氧胆酸钠和EDTA,裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。
储存:4℃保存。
规格:100ml制备细胞裂解产物:1.800g 4℃离心 5 分钟收集培养细胞,估计细胞离心后的体积(PCV, 106cells=~20ul, 107cells=~100ul PCV);2.每 50~100ul PCV 加入 5 倍体积组织细胞裂解缓冲液(250~500ul),冰浴放置 10 分钟,每隔 5 分钟在漩涡混合仪上振荡 30 秒;3.12000g 4℃离心 10 分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物;注意:假如所得蛋白产物较为粘稠,可先95℃加热5 分钟,迅速冰浴5 分钟,然后再进行步骤3制备组织裂解产物:1.取 50-100 mg 组织在冰上剪成碎片,用预冷的 PBS 洗涤 2 次离心弃去 PBS;2.加入 0.5-1 ml 预冷的组织细胞裂解缓冲液;3.4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40 次,直到95%的细胞被破碎,然后在冰浴中放置10 分钟,并每隔5 分钟在漩涡混合仪上振荡 30 秒;4.12000g 4℃离心 10 分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物;注意:假如所得蛋白产物较为粘稠,可先95℃加热5 分钟,迅速冰浴5 分钟,然后再进行步骤4说明:1.在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物;2.在做免疫沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取,以避免某些不稳定蛋白的降解;3.在该裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂,用户可自行选择进行添加。
白细胞裂解液产品说明书(中文版)
白细胞裂解液产品说明书(中文版)主要用途白细胞裂解液是一种旨在通过使用化学方法快速充分裂解纯化白细胞,并在蛋白酶抑制混合剂的帮助下,通过超速离心,收集所有细胞内可溶性蛋白质的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种白细胞(动物、人体)等样品。
适用于后续蛋白鉴定、酶活检测、免疫反应等。
产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,裂解效果显著。
技术背景通过特殊裂解液和蛋白酶抑制混合剂可以防止裂解后细胞内各种活性蛋白成分遭到活化的内源性蛋白酶的破坏,充分保留细胞内蛋白质的免疫和生物学活性。
产品内容裂解液()毫升产品说明书份保存方式保存在-℃冰箱里,避免反复冻融,有效保证月用户自备缓冲溶液():用于清洗待测细胞样品毫升离心管:用于样品保存的容器毫升锥形离心管:用于样品操作的容器(微型)台式离心机:用于样品操作实验步骤1.移入待测的纯化白细胞悬液(细胞)到毫升锥形离心管2.放进℃台式离心机离心分钟,速度为3.小心抽去上清液4.加入毫升用户自备的缓冲溶液,用移液管混匀细胞颗粒群5.放进℃台式离心机离心分钟,速度为6.小心抽去上清液7.加入微升裂解液()8.强力涡旋震荡秒,充分混匀9.放进冰槽里孵育分钟,期间每分钟强力涡旋震荡秒一次10.用微升枪头移出细胞液到无菌的毫升离心管11.(选择步骤)如暂时停止,放进-℃冰箱里储存备用12.即刻放进℃微型台式离心机离心分钟,速度为(或,例如)13.小心移取上清液到新的毫升离心管14.放进-℃的冰箱里备用15.或放进冰槽里,继续后续(西方杂交、免疫沉淀、酶活性检测等)操作注意事项1.本产品为毫升规格,次操作2.建议使用纯化白细胞样品3.待测白细胞样品为细胞,约毫克细胞重量4.根据细胞量的不同,按比例调整试剂用量5.所有操作均须在℃状态下进行6.建议裂解液()适量分装储存7.如果放在-℃冰箱里储存备用,避免反复冻融8.本公司提供系列裂解试剂产品质量标准1.本产品经鉴定性能稳定2.本产品经鉴定无核酶和蛋白酶污染。
裂解液的作用
裂解液的作用裂解液是一种常用的化学试剂,它主要作用是将物质分解成更小的成分或分子。
它在许多领域中起着重要的作用,包括化学分析、有机合成和医药等。
首先,裂解液在化学分析中被广泛使用。
在分析化学中,我们需要将复杂的物质分解成单个的成分,以了解其组成和性质。
裂解液可以将化合物分解为更小的分子,这样可以更准确地进行定量分析,如测定有机物的含量或无机物的成分。
此外,裂解液还可以用于分离和富集目标物质,对于样品预处理起着重要的作用。
例如,DNA提取过程中,裂解液常被用来破坏细胞膜和核酸蛋白结合,使DNA从细胞中释放出来。
其次,裂解液在有机合成中发挥着重要作用。
有机合成是一门研究如何合成有机分子的学科,它广泛应用于制药、化妆品和材料科学等领域。
在有机合成过程中,裂解液通常用于酯化、醚化和酰化等反应中。
它可以破坏化合物之间的化学键,使它们重新排列成我们想要的产物。
此外,裂解液还可以用于去除某些反应中产生的副产物或杂质,从而提高合成产物的纯度和收率。
此外,裂解液还在医药领域中发挥着重要作用。
许多药物在体内或体外需要被裂解为活性物质,以发挥其药理效应。
例如,胃液和肠液中的酸性条件可以将口服药物中的化合物裂解成更小的分子,从而使其更容易被吸收和利用。
此外,体内的酶也可以通过裂解液的作用将药物转化为活性形式,以增加其生物活性。
因此,对于药物研发和治疗方案的设计来说,裂解液都是不可或缺的。
总的来说,裂解液在化学分析、有机合成和医药领域中起着重要的作用。
它可以将复杂的物质分解为更小的成分,使我们能够更深入地了解它们的化学性质和反应机制。
同时,裂解液也可以用于合成和制备特定的化合物,以及发掘药物的潜力。
通过不断改进和研究裂解液的性质和应用,我们可以更好地利用它的作用,进一步推动科学研究和技术发展。
单相裂解液
单相裂解液
单相裂解液是一种用于细胞或组织样品裂解的缓冲溶液,通常含有去垢剂和其他组分以帮助破坏细胞结构并释放其内容物。
以下是一些常见的成分和特点:
1. 离子型去垢剂:SDS(十二烷基硫酸钠)是一种强烈的去垢剂,能有效地破坏细胞膜和核膜,使DNA释放,常用于需要完全破开细胞的情况。
2. 非离子型去垢剂:NP-40是一种较为温和的去垢剂,主要破坏胞膜而对核膜的作用较弱,适合在非变性条件下溶解膜蛋白。
3. Triton X-100:这是一种介于NP-40和SDS之间的去垢剂,常用于细胞裂解,并在保护蛋白活性方面有一定作用。
此外,在使用单相裂解液时,样品通常需要在室温下放置一段时间以确保充分裂解。
如果样品中含有较多的蛋白、脂肪或多糖等,可能需要通过离心来清除这些物质,以便获得更清晰的裂解液。
裂解液和保存液成分及作用
裂解液和保存液成分及作用以裂解液和保存液成分及作用为标题,本文将介绍裂解液和保存液的成分和作用。
一、裂解液的成分及作用裂解液是一种常用的实验试剂,用于提取细胞或组织中的细胞器、蛋白质、核酸等生物分子。
它的主要成分包括缓冲溶液、蛋白裂解酶、蛋白质稳定剂等。
1.缓冲溶液缓冲溶液是裂解液中的主要成分之一,其作用是维持溶液的pH值稳定,使细胞或组织中的生物分子在裂解过程中不受pH值的影响而发生变性。
常用的缓冲溶液有磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液等。
2.蛋白裂解酶蛋白裂解酶是裂解液中的关键成分之一,它能够降解细胞或组织中的蛋白质,使其分解为氨基酸。
常用的蛋白裂解酶有胰蛋白酶、Trypsin等。
3.蛋白质稳定剂蛋白质稳定剂是裂解液中的一种辅助成分,它能够保护裂解液中的蛋白质不受蛋白酶的降解,从而保持蛋白质的完整性和稳定性。
常用的蛋白质稳定剂有BSA(牛血清白蛋白)、EDTA等。
裂解液的作用是通过破坏细胞膜和细胞壁,释放细胞内的生物分子。
缓冲溶液维持溶液的pH值稳定,使裂解过程中的生物分子不受pH 值的影响。
蛋白裂解酶降解细胞内的蛋白质,使其分解为氨基酸,从而方便后续的分析和测定。
蛋白质稳定剂保护裂解液中的蛋白质不受蛋白酶的降解,保持蛋白质的完整性和稳定性。
二、保存液的成分及作用保存液是一种用于保存生物样品的液体,它的主要成分包括缓冲溶液、防腐剂等。
1.缓冲溶液保存液中的缓冲溶液起到维持液体pH值稳定的作用,防止生物样品在保存过程中发生腐败和分解。
常用的缓冲溶液有磷酸盐缓冲液、PBS缓冲液等。
2.防腐剂防腐剂是保存液中的重要成分,它能够抑制细菌和其他微生物的生长繁殖,防止生物样品的腐败和变质。
常用的防腐剂有甲醛、氯化汞等。
保存液的作用是保持生物样品的原始状态,防止其在保存过程中发生腐败和变质。
缓冲溶液维持液体的pH值稳定,防止生物样品的分解和腐败。
防腐剂抑制微生物的生长,保持生物样品的完整性和稳定性。
裂解液和保存液在生物实验中起着重要作用。
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用于普通的Western、IP或co-IP,我们推荐使用Western及IP细胞裂解液,该裂解液已被国内各大研究机构广泛使用,用户普遍反映很好。
裂解细胞或组织后,没有非常粘滞的透明状DNA 团块形成,不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。
另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。
对于某些特殊蛋白的IP,如果发现Western及IP细胞裂解液效果不是非常理想,可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40裂解液。
如果发现IP的时候背景很高,即非特异的蛋白也被IP下来,则需要选用裂解强度较高的裂解液,例如RIPA裂解液(强或中)。
如果发现目的蛋白无法被IP下来,则说明裂解液的强度过强,可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或
NP-40裂解液。
对于某些难溶解蛋白的Western,如果发现Western及IP细胞裂解液效果不是非常理想,可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如RIPA裂解液(强、中)或SDS裂解液。
RIPA裂解液(强)
(RIPA Lysis Buffer)
Code No. PG410501
产品简介:➢本公司的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。
RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。
➢RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。
RIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。
➢RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris (pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS,以及sodium orthovanadate,
sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂。
可以有效抑制蛋白降解。
➢用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用本公司的BCA蛋白浓度测定试剂盒(PG400301)测定蛋白浓度。
由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法
测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
包装清单:➢RIPA裂解液(强)
➢说明书100ml 1份
保存条件:➢-20℃保存,一年有效。
注意事项:➢为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。
可以适当分装后使用。
➢需自备PMSF。
➢裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
➢为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:➢对于培养细胞样品:
♦融解RIPA裂解液,混匀。
取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入
PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
♦对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍
(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。
按照6孔板每孔加入
150-250微升裂解液的比例加入裂解液。
用枪吹打数下,使裂解液和细
胞充分接触。
通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
♦对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。
按照6孔板每
孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。
再用手指轻弹以充
分裂解细胞。
充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
如果细胞量较多,必
需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
♦充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的
PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明:通常6孔板每孔
细胞加入150微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加
大裂解液的用量到200微升或250微升。
➢对于组织样品:
♦把组织剪切成细小的碎片。
♦融解RIPA裂解液,混匀。
取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
♦按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。
(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。
)
♦用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
♦充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
♦如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。
然后同样离心取上清,用于后续实验。
直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
➢注:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。
该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。
在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。
如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可检测到这些转录因子。