高效液相色谱法测定食品中的甜蜜素_段淑娥

第 40 卷第 7 期
段淑娥等： 高效液相色谱法测定食品中的甜蜜素
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中，加入 2 mL 1 ∶1 的硫酸溶液，振荡，使溶液混合均匀，加入 5 mL正己烷溶液，再加入 2 mL 次氯酸钠溶液（ 有效氯≥10% ） ， 剧烈振荡 1 min 后，将分液漏斗置于铁架台上静置分层，除去下 层水相； 加入 5 mL 0． 5 moL / L 的氢氧化钠溶液，再次剧烈振荡 1 min，静置分层后除去下层溶液； 向上层溶液再加入 5 mL 超纯 水，水洗 1 min 后用一次性滤膜（ 0． 22 μm） 过滤，以供高效液相 色谱分析用。
1 实验部分
1． 1 仪器与试剂
高效液相色谱仪（ LC － 20 A 型） ，日本岛津； 紫外检测器； 离 心机（ TGL － 16 G） ，湖南星科科学仪器公司； 电子天平 T － 214， 赛多利斯科学仪器（ 北京） 有限公司； 0． 45 μm 微孔滤膜； Milli － Q 超纯水系统； 120 D 超声波清洗机，宁波新芝生物科技股份有
限公司。 甜蜜素标准溶液（ 1000 μg / mL） ： 准确称取甜蜜素标准物质
0． 1001 g，置于 100 mL 容量瓶，加少量超纯水溶解，稀释、定容， 配成浓度为 1． 00 mg / mL 的标准溶液。使用时，用超纯水稀释成 所需要浓度的标准使用液 （ 0． 22 μm 滤膜过滤） 。
乙腈、甲醇、正己 烷 均 为 色 谱 纯，硫 酸，次 氯 酸 钠，碳 酸 氢 钠 等均为分析纯，实验用水为 Milli － Q 超纯水。
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广州化工
2012 年 4 月
600 μg / mL范围内线性良好。
图 7 甜蜜素标准曲线图 Fig． 7 The standard curve of sodium cyclamate
2． 4 流动相
分别以不同比例的乙腈 － 水、甲醇 － 水、乙腈 － 磷酸二氢 钠、甲醇 － 乙酸铵、乙腈 － 乙酸铵、等作流动相进行测定，发现当 乙腈 － 水体系中体积比为 97∶3 时，分离度和色谱峰形好，测量 的稳定性和重现性也较好，故选择乙腈 － 水（ 体积比为 97∶3） 作 为流动相。乙腈 － 磷酸二氢钠体系无法将安赛蜜，苯甲酸钠，山 梨酸和甜蜜素相互分离开来； 甲醇 － 乙酸铵体系中安赛蜜，苯甲 酸钠和山梨酸三 者 能 够 相 互 分 开，但 山 梨 酸 与 甜 蜜 素 保 留 时 间 几乎一样。在乙腈 － 乙酸铵体系中，安赛蜜、苯甲酸钠和山梨酸 与甜蜜素保留时间均相近，无法分离。
生成 N，N － 二氯环己胺，后者在紫外区具有较大吸收，用正己烷进行萃取后经过高效液相色谱分离，314 nm 检测定量。结果表明：
Shim － pack VP － ODS（ 4． 6 mm × 150 mm） ； 流动相为乙腈∶超纯水 97∶3； 流速 1． 0 mL / min； 柱温 30 ℃ ； 检测波长 314 nm； 进样量 20 μL，食品中的安赛蜜、苯甲酸钠、山梨酸等不影响测定。甜蜜素含量在 2 ～ 600 μg / mL 之间时，呈现良好的线性关系，相关系数为 0． 9979，加标回收率为 97． 24% ～ 104． 09% 。
439320 426396 427584 421480 433345 426870
1． 46
2． 7 回收试验
根据甜蜜素的标准曲线，由测量结果可知，每毫升的菊花茶 中大约含有甜蜜素 10 μg。准确吸取 10． 00 mL 的菊花茶样品溶
液置于 125 mL 的分液漏斗中，再准确吸取 10． 00 mL 50 μg / mL 的甜蜜素标准溶液与之混合均匀，稀释至 25 mL 定容，仍然按照 1． 3． 2 的方法进行衍生化处理。将最终得到的上层有机相经 0． 22 μm滤膜过滤，按以上色谱条件测定后，以测得值计算回收 率，结果列于表 2。由表 2 可知，甜蜜素的回收率为 97． 24% ～ 104． 09% ，实验结果表明该法测量的准确度较高。
关键词： 甜蜜素（ 环己基氨基磺酸钠） ； 高效液相色谱； 食品
中图分类号： TS264． 9
文献标识码： A
文章编号： 1001 － 9677（ 2012） 07 － 0136 － 03
Determination of Sodinum Cyclamate in Foods by HPLC
DUAN Shu － e，ZHANG Chang － hu，QU Ying － juan，WANG Jing （ Department of Chemistry and Chemical Engineering，Xi’an University
2． 3 标准曲线
准确 吸 取 1． 00 mg / mL 甜 蜜 素 标 准 储 备 液 0． 20 mL， 0． 50 mL，1． 00 mL，5． 00 mL，20． 00 mL，60． 00 mL，分 别 置 于 100 mL容量瓶中，用超纯水逐级稀 释 配 制 成 浓 度 为 2 μg / mL， 5 μg / mL，10 μg / mL，50 μg / mL，200 μg / mL，600 μg / mL 的一系列 标准溶液。将上述标准溶液按 1． 3． 2 的方法处理后进样分析， 以峰面积对质量浓度作图，得到标准曲 Y = 23340x － 163207，相 关系数 R2 = 0． 9979，环 己 基 胺 基 磺 酸 钠 （ 甜 蜜 素 ） 在 2 ～
图 3 苯甲酸钠标准色谱图 Fig． 3 Chromatogram of standard sodium benzoate
图 4 山梨酸标准色谱图 Fig． 4 Chromatogram of standard sorbic acid
图 1 甜蜜素标准色谱图 Fig． 1 Chromatogram of standard Sodium Cyclamate
of Arts and Science，Shaanxi Xi’an 710065，China）
Abstract： A rapid determination method of sodium cyclamate in foods by high performance liquid chromatography （ HPLC） was established． N，N － Dichlorocyclohexylamine was produced by sodium cyclamate with sodium hypochlorite in a strong acid environment and extracted with n － hexane，which had higher UV response． The results showed that a Shim － pack VP － ODS C18 column was 4． 6 mm × 150 mm and VCH3 CN∶VH2 O was 97∶3，the flow rate was 1． 0 mL / min and the detection wavelength was 314 nm with injection volume 20 μL in the HPLC system． The determination was not affected by acesulfame potassium，sodium benzoate，and sorbic acid． The calibration curve was linear over the range 2 μg / mL ～ 600 μg / mL with a correlation coefficient of 0． 9979，the recovery was 97． 24% ～ 104． 09% ．
Key words： sodium cyclamate； HPLC； foods
甜蜜素，化学名称为环己基氨基磺酸钠，是一种非营养型合 成甜味剂，其甜度为蔗糖的 30 倍，口感比糖精好，而价格仅为蔗 糖的 3 倍，曾经作为一种通用的食品添加剂而广泛使用。但甜 蜜素的致癌作 用 一 直 为 人 们 所 争 议［1］。目 前 欧 美、日 本 等 发 达 国家禁止在食品 中 使 用 甜 蜜 素，包 括 我 国 在 内 的 许 多 国 家 仍 然 允许在食品中添加甜蜜素。国标对甜蜜素在各类食品中的最大 使用量做了严格规定［2，3］，但市场上超量、超范围使用甜蜜素的 情况经常发生。
2． 5 检出限
以 3 倍信噪比求得甜蜜素的检出限为 1 μg / mL。
2． 6 精密度试验
准确吸取菊花茶 10． 00 mL 置于 125 mL 分液漏斗中，按照 1． 3． 2 的方法进行处理后，平行测定 6 次，计算测得值的相对标 准偏差； 按照同样方法测定海天酱油的相对标准偏差，结果同样 列于表 1。由表 1 可知，本法测得的结果精密度良好。
甜蜜素标准溶液的处理同样品溶液。
2 结果与讨论
2． 1 测定波长
对环己基胺基磺酸钠的衍生物 N，N － 二氯环己胺进行波长 扫描，在 210 nm、314 nm 处有两个吸收峰，但 210 nm 处会产生溶 剂和流动相的吸收干扰，而 314 nm 处的干扰少，基线稳定，实验 选择 314 nm 为检测波长。
2． 2 色谱图
图 1 ～ 图 4 分别为甜蜜素、安赛蜜、苯甲酸钠和山梨酸的标 准物质色谱图，图 5 为酱油样品的色谱图，图 6 为菊花茶样品色 谱图。在色谱条件下，甜蜜素的保留时间约为 6． 551 min，食品 中常见的添加剂安赛蜜，苯甲酸钠，山梨酸等对甜蜜素测定均不 产生干扰。安赛蜜的保留时间约为 1． 998 min，苯甲酸钠的保留 时间约为 2． 354 min，山梨酸的保留时间约为 2． 498 min。三种添 加剂的保留时间均在 2． 5 min 以内，对甜蜜素的测量不会造成影 响。
目前我 国 对 食 品 中 甜 蜜 素 的 测 定 方 法 主 要 有 气 相 色 谱 法［4 － 6］、比色法［7 － 8］和薄层层析法［9］等。操作繁琐、干扰因素多、 不易控制，本文所述方法采用高效液相色谱法［10 －12］成功地检测 了饮料中的甜蜜素，方法简单、快速、检出限低，能满足检测要求。