叶绿素的提取和分离实验 PPT
实验二叶绿素的提取与分离
试验二叶绿素的提取与分别试验二叶绿素的提取与分别试验二叶绿素的提取与分别一、试验目的从富含叶绿素的菠菜叶片中提取叶绿素，并在薄层色谱上取样，使叶绿素呈现不同的颜色。
2、试验原理要求同学们先查询资料，了解叶绿素相关学问，试验课上教师讲解。
三、试验材料和仪器研钵、托盘天平、分液漏斗、枯燥锥形瓶、毛细管、薄层层析板、饱和nacl 溶液、无水 na2so4 四、试验步骤 1、叶绿素的提取将几片〔约 5 克〕菠菜叶放入容器中〔颖或冷冻均可。
假设是冷冻的，解冻后用纸包裹，轻轻按压以吸取左侧水分〕。
参与 10ml 石油醚和丙酮的 2:1 混合物，并适当研磨。
用滴管将萃取物转移到分别漏斗中，参与 10ml 饱和NaCl 溶液〔防止形成乳液〕以去除水溶性物质，分别H2O 层，然后用蒸馏水冲洗两次。
将有机层转移到一个小的枯燥锥形烧瓶中，参与2G 无水Na2SO4 并通风。
将处理过的液体倒入另一个锥形瓶中〔假设溶液颜色太浅，可以在通风柜中蒸发并适当浓缩〕。
2.采样点用一根内径 1mm 的毛细管，吸取适量提取液，轻轻地点在距薄板一端1cm在两个平行点上，两个点相距约 1 厘米。
假设第一次取样缺乏，可在样品溶剂挥发后进展其次次取样，但取样点直径不得超过 2mm。
3.开放先在小烧杯中放入开放剂[用石油醚和丙酮按 3：1 的比例进展混合作为开放剂，再将薄层板斜靠于层析缸内壁。
点样端接触开放剂但样点不能浸没于开放剂中，密闭层析缸。
待开放剂上升到距薄层板另一端约 1cm 时，取出平放，用铅笔或小针划前沿线位置，在空气中晾干或用电吹风吹干薄层。
毛细管取样薄层色谱开放4.观看色谱板并记录试验结果。
薄层层析时rf 值表示的是原点到层析斑点中心的距离与原点的到展层溶剂的前沿距离包括什么是最快的集中，什么是最慢的集中，什么是最宽的色素带，什么是最窄的色素带，哪两个色素带最远，哪两个最近，等等各种色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上集中的快，反之则慢。
绿叶中色素的提取和分离实验ppt课件
Ⅰ、提取叶绿素
•
• Ⅱ、探究pH对叶绿素稳定性的影响 取一些叶绿素粗产品，配成一定浓度的溶液，于室温（约25℃）下进行实验，方法和 结果如下表：
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• 小李想了解叶绿素粗产品中是否含有其他色素，请你提供检测方法并说出主 要步骤
参考答案： 纸层析法 。 主要步骤：1.制备滤纸条； 2.画色素液 细线；
操作目的 使滤液中叶绿素的含量高 有助于研磨充分和保护叶绿素
防止溶剂挥发，并充分溶解色素 使分离的色素分层，防止色素重叠 使分离的色素带清晰，便于观察 防止滤液溶解到层析液中，无法分离
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实验拓展、能力提升 1、用毛细吸管划滤液细线时很难保证细且直，有什么解决办法？ 2、课下搜集资料，探究其他色素提取和分离的方法 。
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设计实验
分离色素的原理
各种色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的随 层析液在滤纸上扩散得快，反之则慢，从而使各种 色素相互分离。
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实验步骤
两角
1cm
毛细吸管 细齐 直
一两
适量 滤液细线
滤液细线
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分组实验，探究要点
1、制备滤纸条时为什么要剪去两角，否则会出现什么现象？ 2、滤液细线为什么不能浸到层析液中？ 3、画滤液细线为什么要细且直，并待干后重复几次？ 4、为什么装有滤液和层析液的试管一定要用棉塞塞严？ 5、实验后滤纸条上出现了几条色素带?分别是什么颜色? 6、从上往下色素带顺序如何？各色素带宽窄如何？这些说明了什么？
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典例分析 （2012上海）图6表示叶绿体色素提取分离实验中纸层析的结果，据图判断用作
实验材料的叶片颜色为 • A．红色 B．黄色 • C．绿色 DB．紫色
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• 【实践应用】
叶绿素的提取ppt
四种色素的化学性质
• 均为亲脂性>亲水性： 均不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙
酮等有机溶剂提取。 • 极性大小：
叶绿素b>叶绿素a>叶黄素>胡萝卜素 根据相似相溶原理，在有机溶液中的溶解度：
叶绿素b<叶绿素a <叶黄素<胡萝卜素
三、叶绿素的光学性质
叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定 的吸收光谱，可用分光光度计精确测定。
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实验关键
1.选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的 叶片。如菠菜叶、棉花叶、洋槐叶等。
2.画滤液细线时应以细、齐、直为标准，重复 画线时必须等上次画线干燥后再进行，重复 2-3次。
3.层析时不要让滤液细线触及层析液。
1.因丙酮和层析液都是易挥发且有一定毒性的 有机溶剂，所以研磨要快，收集的滤液要用 棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶 剂的挥发。
➢实验报告
（西安交通大学实验报告纸） （写清姓名、班级、实验名称、日期等） 一、实验目的 二、实验原理 三、实验记录 1.讲义中的表格（改动见下页） 2.画图 四、讨论及思考题 1.谈谈你在实验过程中的成功经验，或失败的教训 2.思考题
叶绿体中色素的提取和分离
➢ 思考题
1.研磨时要使叶绿素能够提取出来，要破坏多少 层膜？ 2.滤纸剪角的目的是什么？ 3.到了秋天叶色变黄、变红掌握纸层析法分离叶绿体色素的原理和 步骤；
• 掌握叶绿体色素的部分理化性质。
二、实验原理
• 1.叶绿体中的色素能溶解在丙酮（有机 溶剂:酒精、汽油、苯、石油醚等）中， 所以用丙酮可提取叶绿体中色素。
实验六 叶绿素的提取、分离
叶绿素的提取、分离一、实验目的1.掌握从植物叶中提取叶绿素的方法。
2. 了解纸层层析的原理，掌握纸层析的一般操作和定性鉴定方法。
二、实验原理1. 叶绿素提取原理：叶绿素等是脂溶性的有机分子，根据相似相溶的原理，叶绿体中含有叶绿体色素（叶绿素a和b、胡萝卜素及叶黄素）等色素分子溶于有机溶剂而不溶于有极性的水。
故在研磨和收集叶绿色素时要用丙酮或乙醇等有机溶剂提取而不用水。
2. 色素分离的原理：纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各组分在；流动相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分离。
滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维常能吸20%左右的水），有机溶剂如乙醇等为流动相，色素提取液为层析试样。
把试样点在滤纸的滤液细线位置上，当流动相溶剂在滤纸的毛细管的作用下，连续不断地沿着滤纸前进通过滤液细线时，试样中各组份便随着流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相溶剂之间连续一次有一次的分配。
结果分配比比较大的物质移动速度较快，移动距离较远；分配比较小的物质移动较慢，移动距离较近，试样中各组分分别聚集在滤纸的不同的位置上，从而达到分离的目的。
毛细管点样薄层色谱展开三、仪器和药品研钵、毛细管、漏斗、纱布、小烧杯、试管、培养皿等剪纸形状滤液基线95%酒精、丙酮、石油醚碳酸钙，石英砂四、实验步骤（1）取菠菜或其他植物新鲜叶片20g左右，洗净，用滤纸擦干，去掉叶柄和中脉剪碎，放入研钵。
（2）研钵中加入少量碳酸钙和石英砂，加4-5ml 无水乙醇，研磨至糊状，再加10ml 无水乙醇充分混匀以提取叶片匀浆中的色素，15-20分钟后，过滤入50ml锥形瓶中加塞待用。
分离：（1）取圆形定性滤纸一张（直径15cm），将其剪成滤纸条（15cm×2cm），将其2cm一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方用铅笔画一条直线，作为画滤液细线的基准线（注意：滤液线必须距底边1-1.5cm）。
实验二-叶绿素的提取与分离
实验二-叶绿素的提取与分离实验二叶绿素的提取和分离一、实验目的从富含叶绿素的菠菜叶片中提取叶绿素，并在薄层层析板上点样使叶绿素显示不同颜色。
二、实验原理要求同学们先查询资料，了解叶绿素相关知识，实验课上老师讲解。
三、实验材料、器具研钵、托盘天平、分液漏斗、干燥锥形瓶、毛细管、薄层层析板、饱和NaCl溶液、无水Na2SO4四、实验步骤1、叶绿素的提取在中放入几片(约5g)菠菜叶(新鲜的或冷冻的都可以．如果是冷冻的，解冻后包在纸中轻压吸左水分)。
加入10mL2:1石油醚和丙酮混合液，适当研磨。
将提取液用滴管转移至分液漏斗中，加入10mL饱和NaCl溶液(防止生成乳浊液)除去水溶性物质，分去H2O层，再用蒸馏水洗涤两次。
将有机层转入干燥的小锥形瓶中，加2g无水Na2SO4，通风处理。
处理后的液体倾至另一锥形瓶中(如溶液颜色太浅，可在通风柜中适当蒸发浓缩)。
2、点样用一根内径1mm的毛细管，吸取适量提取液，轻轻地点在距薄板一端1cm处，平行点两点，两点相距1cm左右。
若一次点样不够，可待样品溶剂挥发后．再在原处点第二次，但点样斑点直径不得越过2mm。
3、展开先在小烧杯中放入展开剂[用石油醚和丙酮按3：1的比例进行混合作为展开剂，再将薄层板斜靠于层析缸内壁。
点样端接触展开剂但样点不能浸没于展开剂中，密闭层析缸。
待展开剂上升到距薄层板另一端约1cm时，取出平放，用铅笔或小针划前沿线位置，在空气中晾干或用电吹风吹干薄层。
毛细管点样薄层色谱展开4、观察层析板并记录实验结果。
薄层层析时Rf值表示的是原点到层析斑点中心的距离与原点的到展层溶剂的前沿距离包括扩散最快的是什么，扩散最慢的是什么最宽的色素带是什么，最窄的色素带是什么哪两个色素带距离相距最远，哪两个最近等等各种色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散的快，反之则慢。
最快：胡萝卜素次之：叶黄素次之：叶绿素A最慢：叶绿素B颜色分别为：橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色，最宽的是叶绿素A最窄的是胡萝卜素胡萝卜素和叶绿素B最远叶绿素A和叶绿素B最近实验十四、植物色素的提取和薄层色谱分析一、实验目的：1、了解薄层色谱的基本原理和应用。
绿叶中色素的提取和分离(纸层析法).ppt
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3
实验步骤：
3.画滤液细线
2019-11-27
滤液细线的要求：
细、直、齐（使色素处于同 一起跑线）；
重复2—3次（防止色素太少 分离现象不明显）。
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4
实验步骤：
4.分离绿叶中的色素
培养皿
注意:
滤液细线
层析液
滤液细线不能触到层析液（防止色素溶解在层析液中）
烧杯要盖上培养皿、试管要塞上棉塞（层析液易挥发且有毒）
颜色
度
能
胡萝卜素 橙黄色 最少 叶黄素 黄色 较少
最大 较大
最快 蓝紫光 较快
叶绿素ａ 蓝绿色 最多 叶绿素ｂ 黄绿色 较多
较小 最小
较慢 蓝紫光 最慢 红光
与光合作用有关的色素存在于哪呢？
2019-11-27
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7
四种色素对光的吸收 叶绿体中的色素提取液
叶绿素a、b主要吸__蓝__紫__光__、__红__光___
胡萝卜素和叶黄素主要吸收_蓝__紫__光_____
2019-11-27
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叶绿体中色素提取和分离实验中几个关键问题
• 取叶要新鲜 ， 滤液中含有较多的色素；
• 研磨要迅速充分，防止无水乙醇挥发，同时可以得到色素浓度较大的
滤液；
• 画滤液细线要重复２－３次，以便色素带清晰；
• 滤液细线要细、直、齐，防止色素带重叠；
2019-11-27
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5
实验步骤：
5、观察与记录实验结果
胡萝卜素 捕 类胡萝 （橙黄色）
获 光 能
卜素
(占1/4)
叶黄素
（黄色）
的
叶绿素a
叶绿素的提取和分离
实验名称：叶绿素的提取和分离一、实验目的（1）掌握叶绿素提取的方法。
（2）了解纸层层析的原理，掌握纸层析的一般操作方法。
（3）了解叶绿体中所含色素种类及其在滤纸层析上的分布情况。
二、实验器材95％乙醇、CaCO3、醋酸铜结晶、浓盐酸、汽油，量筒，滤纸，大培养皿，小培养皿，长滴管，剪刀。
三、实验过程（1）提取色素将深绿色的植物叶剪碎放入研钵中。
放入少量的SiO2 和CaCO3再加入3滴管无水乙醇后迅速、充分研磨至糊状。
将糊状研磨物倒入放有尼龙布的漏斗中，用研钵锤挤压，将滤液收集到小玻璃瓶中，并盖上瓶盖。
（2）制备滤纸条将干燥的定性滤纸剪成稍小于试管长与直径的滤纸条，将一端减去两角，并在距这一端1厘米处用铅笔画一条细线。
（3）画滤液细线用毛细吸管吸取少量滤液,沿铅笔线均匀划出一条细线。
干燥后，重复一两次。
（4）色素分离取适量层析液倒入烧杯中，将滤纸条轻插入层析液中（滤液细线不能触及层析液，以防止色素溶解于层析液中而无法分离）,用培养皿盖住（防止层析液挥发）。
（5）观察与记录四、实验现象五、实验结论绿叶中有一种细胞器叫叶绿体，植物通过叶绿体进行光合作用，把光能、二氧化碳、水转化成化学能。
叶绿素分布在叶绿体的类囊体薄膜上。
叶绿素 a、叶绿素 b、胡萝卜素和叶黄素与类囊体膜结合成为色素蛋白复合体。
这些色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇等有机溶剂提取经过色素分离后，叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b为黄绿色，叶绿素占总量3/4。
叶黄素为鲜黄色，胡萝卜素为橙黄色。
类胡萝卜素占总量1/4。
实验绿叶中色素的提取和分离ppt课件
纸条接近液面时，其边缘表面的张力较大，
层析液沿滤纸边缘扩散过快，从而导致色 素带分离不整齐的现象。故需将插入层析 液的滤纸条一端剪去两个角。
2019 8
5.为什么滤液细线要重复画，且线要细、直？ 提示：重复画线是为了增加色素的浓度，使分离出的
色素带清晰分明。画线细、直是为了防止色素带之间
出现重叠。 6.层析时，为什么不能让滤液细线触及层析液？ 提示：滤纸条上的滤液细线触及(或没入)层析液，会 使滤液中的色素溶解于层析液中，滤纸条上得不到色
2019
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后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用
资料仅供参考，实际情况实际分析
答案：(1)叶绿素b (2)吸收光谱 (3)层析液触及滤液细线 (4)缺Mg植物不能合成叶绿素 (5)从预留的叶片中挑选出足量的、分量相等、大小相 近的已变黄的叶片和绿色鲜嫩的叶片为实验材料，在相同 条件下，再次进行绿叶中色素的提取和分离实验，测定和 记录实验结果，比较这两种叶片中各种色素的组成及含量 后，得出结论。
2019
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2019
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解析：本题通过实验来研究光反应的场所。叶绿体是 植物进行光合作用的场所。光合作用光反应过程中，H2O 光解，光能转换成活跃的化学能储存在ATP和[H]中，都是 在类囊体薄膜上进行的。类囊体薄膜上有进行光反应所需 要的各种色素和酶，故B试管能检测到光反应过程，A试管 则不能。C试管中缺少光反应所需的色素和酶，D试管中缺 少光反应所需的酶。
2019 31
素带，使实验失败。
7.滤纸条上色素带宽窄不同的原因有哪些？ 提示：不同种类的色素在绿叶中的含量不同，含量多 的在滤纸条上呈现的色素带宽，反之色素带窄。 2019 9
新版人教版 生物 实验绿叶中色素的提取和分离(共23张 ppt)学习演示PPT课件
3、滤纸条一端为什么要剪去两角？
4、画滤液细线时应注意什么？
5、为什么不能让滤液细线触及层析液？
1.提取：绿叶中的色素都能溶解于有机溶剂无水乙 醇中，所以可以用无水乙醇提取绿叶中的色素。
2.分离：纸层析法
色素有多种，都能溶于层析液中，但不同色素在层析液 中的溶解度不同； 溶解度高→在滤纸上扩散快 溶解度低→在滤纸上扩散慢
碳酸钙作用：防止叶绿体中色素被破坏二氧化硅作用：使研磨更充分
1、滤纸条上色素带宽窄不同的原因有哪些？
不同种类的色素在绿叶中的含量不同，含量多的 在滤纸条上呈现的色素带宽，反之色素带窄。
2、试分析分离色素时色素带颜色过浅的原因。
(1)叶片颜色太浅。(2)叶片放置时间太久。 (3)研磨不充分。(4)未加CaCO3。 (5)加入提取液量太多。(6)研磨时间太长。
D．紫色
溶解度低→在滤纸上扩散慢
答：滤液细线上的色素会溶解到层析液中，从而无
用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀划出一条细线，
2、为什么研磨时要迅速？为什么研磨时加入碳酸钙和二氧化硅？
2、通过动手操作，体验成功的喜悦，培养乐于思考与创新的精神，逐步提升生物科学素养。
色素是有机物,只能溶于有机溶剂,如无水乙醇。
制备滤纸条
将干燥的定性滤纸剪成略小于试管长与
直径的滤纸条，将滤纸条一__端__剪__去__两__角_ ，在距离剪角一端1 cm处用__铅__笔_
画一__条__细__的__横__线___
画滤液细线：用毛细吸管吸取少量的滤液，沿铅笔线均
匀地
画_一__条__细__线____，待滤液干后，再画一两次
3、关于叶绿体中色素的提取和分离实验的
叶绿素的提取与过滤(讲课课件)
那么，该实验的步骤应该怎样操作呢？
请同学们之间相互讨论一下：
2、实验步骤：
一、提取绿叶中的色素 二、制备滤纸条 三、画滤液细线 四、分离绿叶中的色素 五、观察与记录
Attention:
材料:5g鲜叶
细 节
一、 研磨
SiO2——使研磨充分 药品 CaCO3 ——防止色素破坏
无水酒精——溶解色素
决
黄绿色光
绿
体
色
素
胡萝卜素
橙黄色光
类胡萝卜素
叶黄素
黄色光
叶绿体色素具有吸收光能的作用
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知识回顾：
1、提取和分离色素的几个步骤分别是？
2、绿叶中的色素及其作用分别是？
课后作业：
下周末我们将到广州蔬菜种植基地参观、游玩， 请同学们查阅相关资料，思考一下，菜农们用大 棚种植蔬菜时，应选择什么颜色的玻璃、塑料薄 膜或补充光源？
问题探讨
哦，我知道了！
1.用这种方法有什么好处？这样做 对光合作用有影响吗？
提高光合作用的强度，因为叶绿素吸收最多的是蓝紫光和 红光。不同颜色的光照对植物的光合作用会有影响。
绿叶中色素的提取和分离
1．实验原理： （1）绿叶中的色素能溶解在有机溶剂无水乙醇中，所
以用丙酮、无水乙醇等能提取色素。
（2）绿叶中的色素在层析液中的溶解度不同，溶解度 高的随层析液在滤纸上扩散得快，溶解度低的随层析液 在滤纸上扩散得慢。所以用纸层析法来分离四种色素
本节课到此结束 复2~3次
败
！
三、层析液不能没及滤液细线
！
！
色素的种类
胡萝卜素（橙黄色）
类胡萝卜素
1 /4
叶黄素（黄色）
叶绿素
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捕获光能的色素
绿叶中会有哪些种类的色素呢？ 它们分别是什么颜色的？ 各种色素在绿叶的含量相同吗？
实验：绿叶中色素的提取与分离
实验材料和用具 (1)材料：新鲜的绿色叶片(如菠菜叶片) ; (2)用具：无水乙醇，层析液，二氧化硅，碳 酸钙；干燥的定性滤纸，烧杯(100ml)，研钵， 小玻璃漏斗，尼龙布，毛细吸管，剪刀，小试管， 培养皿盖，药勺，量筒(10ml)，天平。
滤纸一端剪去两角，在距干燥滤纸条窄端1cm处画一条铅笔细线。
1cm
3．画滤液细线
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可以询问和交流
用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀画出一条细、 齐、直的滤液细线。待干燥后重复2-3次。
滤液细线
1cm
４．分离色素
将滤纸条浸入层析液中，注意滤液细线不能浸入 层析液中。
实验：绿叶中色素的提取和分离
重点一：实验原理 (1)提取：叶绿体中的色素易溶于无水乙醇等 有机溶剂中。 (2)分离：叶绿体中的各种色素在层析液中溶 解度不同。
重点二：方法与步骤
1．提取色素
SiO2：使绿叶 充分研磨。 CaCO3：防止研 磨时色素受到破坏。 过滤：单层尼 龙布
2．制备滤纸条
层析液
滤液细线
重点三：实验结果（现象）：
胡萝卜素 叶黄素 叶绿素a
从上到下 胡黄 a b
叶绿素b 层析液
滤液细线
捕获光能的色素
绿叶中会有哪些种类的色素呢？ 它们分别是什么颜色的？ 各种色素在绿叶的含量相同吗？
滤纸上色带的排列顺序如何？
实验讨论：
宽窄如何？说明什么？
捕 获 光
类胡萝 胡萝卜素 卜素 (占1/4) 叶黄素
能
的
叶绿素a
色 素
叶绿素
(占3/4)
叶绿素b
Байду номын сангаас