天然药物化学实验指导

天然药物化学实验注意事项

天然药物化学试验的特点是实验周期长,所用溶剂和试剂品种多,而且用量较大。许多有机溶剂具有易燃、有毒、腐蚀性,刺激性和爆炸性等特点。在实验操作过程中又经常需要加热或减压等操作,学生将接触各种热源和电器。如果操作不慎,易引起中毒、触电、烧伤、烫伤、火灾、爆炸等事故。所以要求每个实验操作者,必须加强爱护国家财产和保障人民生命安全的责任心,严格遵守操作规程,树立严密的科学实验态度,提高警惕,消除隐患,预防事故的发生。

为了确保实验的安全进行,特作如下要求:

一、实验前要必须充分预习实验内容,明确实验原理、操作步骤及注意事项。实验开始前应检查仪器是否完整无损,装置是否正确,经检查合格后方可开始实验。

二、实验时要保持室内整齐、清洁、安静。不准做与实验无关的事情,不得擅自离开岗位。在实验过程中应密切观察实验进程是否正常,仪器又无漏气,破裂等现象。

三、倒取和存放易燃性有机溶剂时,要远离火源。不得随意将易燃性、易爆性的有机溶剂及药品倒入水槽或污水缸内。不得在烤箱内烘烤留有易燃性有机溶剂的仪器或物品。

四、使用精密仪器及电气设备时,应先了解其原理及操作规程,检查好电路,按操作规程进行。遇到不明了的问题应及时向老师请教,切忌自作主张,乱倒以仪器。电线及仪器不应放在潮湿处,不要用湿手接触电器。电器用完后,应立即清理,关好电源。

五、回流或蒸馏易燃性有机溶剂时,应检查冷凝水是否畅通,仪器装置是否漏气。不得用明火直接加热,应根据其沸点选用水浴、油浴或砂浴。蒸馏溶剂时要加入沸石,否则将发生爆沸。添加溶剂时要移开水浴,待溶剂冷却后再加,并应重新加沸石。

六、实验室中常用的苯、卤代苯、苯酚、苯胺、甲醇、二硫化碳、氰化物、汞和铅盐等化合物均为有毒或剧毒药品。人体中毒的途径一般为消化道、呼吸道或皮肤吸收。所以取用毒剧药时要注意切勿洒在容器外,不要接触皮肤或口腔。室内要通风良好,产生毒气的操作应在通风厨内进行。毒物及废液不得随意乱倒。实验室内严禁进食。

七、实验结束时,应将水、电、门窗关妥后,方能离开实验室。

八、实验时一旦不慎起火,应沉着冷静,积极灭火。首先立即切断实验室内所有电源及火源,搬走易燃易爆物品,同时针对起火点情况,选用适当灭火器材进行灭火。

九、急救常识。

(一)外伤:及时取出伤口中的碎玻璃屑或固体物质,用蒸馏水冲洗后涂上红药水,用消毒纱布包扎。大伤口则先按紧主血管,急送医院治疗。

(二)火伤:轻伤可在伤面涂以硼酸凡士林。重伤则须请医生诊治。

(三)试剂灼伤:

1.酸灼伤:立即用大量水冲洗,然后用3%碳酸氢钠溶液蘸洗。

2.碱灼伤:立即用大量水冲洗,然后用1%醋酸溶液蘸洗。

实验一薄层板的制备、活度测定及薄层层析、纸层析的应用

一、实验的目的要求：

1.掌握TLC、PC的原理。

2.掌握薄层层析板的制备及薄层层析、纸层析操作的基本方法。了解展开剂、吸附剂

的选择以及与被分离物质的关系。

3.应用薄层层析法、纸层析法检识中药草中的化学成分。

二、层析分类与应用概述

中草药的研究、鉴定工作中，对探讨中草药中含有哪些化学成分，如何将中草药中的有效成分提取、分离、精制，并鉴定结晶纯度等等。除常用的经典方法外，仍因中草药中化学成分复杂，许多成分结构类似，有效成分含量极少，仅仅采用经典方法往往难以达到分离的目的，所以必须配合各种近代的分离方法，其中常用分离效率高、操作较简便的层析分离法（Chromatography）。

由于有效成分的类型不同、性质不同，因此选择层析法的种类也不同。可参阅教科书第二章第二节层析法的内容。

本实验着重介绍薄层层析法（Thin-Layer Chromatograp-hy,TLC）以及纸层析法(Paper Chromatograp、PC)的应用。这些方法主要用于选择粗提取物的分离条件;化合物纯度的鉴定;制备一定量的某些化合物;或在薄层选用不同配比的混合溶剂。吸附层析主要考虑的是展开剂的极性;但被分离物质在展开剂中的溶解度也要影响到它的层析行为。

在一种吸附上用多种展开剂试验后如果分离不成功,可改用另一种吸附剂来试验。分离的化合物在板上的比移值(Rf)在0.2-0.8之间为好。二组分之间Rf差值＞0.05,以免斑点重叠。(展开剂选用举例见教科书第19页表2-8)。

在吸附层析中，吸附剂的活度，展开剂的极性，被分离物质的极性，是层析条件三要素，这三者的关系是相互联系的，见图。

当A指向中极性物质时，则B就指向选用中等活度的吸附剂，C就指向选用中等极性的展开剂。如分别转到A＇B＇C＇的位置，则又是另一种情况。

分配薄层层析—有些强极性化合物，能被吸附剂强烈吸附，用洗脱能力很强的溶剂仍很难推动。这时就必须选用分配层析。它是利用被分离物质在两相中（如水和非极性有机溶剂中）分配系数的不同而达到分离的目的。

分配薄层层析常用的担体有硅胶、硅藻土、纤维素等。

选择展开剂的根据是被分离的物质在展开剂（固定相、流动相）中的溶解度相差最大的

溶剂组成不同的比例，为首用试剂。化合物在流动相中的溶解度愈大，则它在分配层上移动

得愈远，比移值就愈大。流动相应先用固定相饱和，固定相种类有水、不同PH的缓冲溶液、亲水有机相（甲酰胺、乙二醇、丙二醇、聚乙二醇等）。流动相为含固定相（常用如水）的有机溶剂，有时为了防止弱酸、弱碱的解离，加入少量的酸和碱。

薄层层析展开后的斑点检出，通常先在可见光下观察，划出有色物质的斑点位置，然后在紫外光分析灯下观察有无吸收或荧光斑点，并记录其颜色、位置及强弱，最后利用各化合物的特性反应，用喷雾器均匀地喷洒适当的显色剂，使层析谱显色。各类化合物所用的显色剂见附录4。

络合薄层层析—在络合剂处理的吸附剂上进行吸附薄层层析行为时，不饱和化合物（络

合物的供体）与络合剂（金属离子既络合物的受体）形成π络合物。

Ag+

在层析时可按照被分离的化合物不饱和度的位置、几何异构等情况，所形成络合物的络合强度不一，导致比值不同达到相互分离的目的。饱和脂肪酸不与受体络合，推向薄层的最前沿；含双键的比含三键的吸附牢；末端双键或环外双键比不是这种类型的吸附牢。

由于硝酸银的存在影响一些显色剂的灵敏度，如碘蒸气很少用于该法的显色。有关络合层析各类化合物的溶剂系统及显色剂见附录4。

三、一般操作技术

（一）薄层层析薄层板的制备

1. 不加粘合剂的薄层板涂布法

（1）氧化铝薄层将吸附剂置于薄层涂布器中，调节涂布器的高度，向前推动，即得均匀薄层。本实验主要用下述简易操作涂布薄层，取表面光滑，直径均一的玻璃棒一支，依据所制备薄层的宽度、厚度要求，在玻璃棒套上厚度为0.3-1mm的塑料圈或金属环，以使玻璃棒向前推动时能保持平行方向，操作时，将氧化铝粉均匀地铺在玻璃板上，按下图所示方式推动。