抗A、抗B血凝素检查方法确认实验
实验四 抗A抗B血型定型检测
抗A抗B血型定型检测
一、实验目的
观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型鉴定的原理。
二、实验原理
A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB型红细胞膜上含有A，B两种抗原，O型红细胞膜上不含有A、B抗原。
抗A、抗B血型试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。
当将已知的抗A、抗B血型试剂与受验者的红细胞混合时，与抗A血型试剂发生凝集都即为A型血型，与抗B 血型试剂发生凝集者即为B型血型，与抗A、抗B血型试剂均发生凝集者为AB 型血型，与抗A、抗B血型试剂均不凝集者即为O型血型。
三、实验试剂和器材
1.试剂
抗A定型试剂、抗B定型试剂、抗D定型试剂、酒精棉球、自身血液
2.器材
大头针、玻璃板，移液枪
四、实验步骤
1.在玻璃板背面分别标记A、Rh、B，然后依次在正面各加一滴抗A定型试剂、
抗D定型试剂、抗B定型试剂。
2.用酒精棉球消毒手指，使用大头针扎破手指，并用移液枪吸取微量血液，分
别滴加在玻璃板上的标记处，并混匀各自样品点。
3.观察凝血现象
五、实验结果
从血液凝集现象可观察，A、B处没有发生明显的凝血现象，在Rh处有明显
颗粒状凝血现象。
故可以判读血型为O型。
abo血型系统定型原则和实验方法
abo血型系统定型原则和实验方法
ABO血型系统定型原则是利用凝集试验技术，通过正定型（红细胞定型）和反定型（血清定型）两组试验来准确鉴定ABO血型。
具体步骤如下：
1. 正定型：取75×12mm干净小试管2支，分别标记抗A、抗B。
按标记滴加抗A、抗B试剂血清1滴。
再各滴加3-5%待检者红细胞悬液1滴，混匀。
2. 反定型：取75×12mm干净小试管3支，分别标记A细胞、B细胞、O 细胞。
3管各滴加待检者血清1滴。
按标记分别滴加混匀的A型、B型、O 型试剂红细胞1滴，混匀。
5管同时2档（3400转/分-15秒）离心。
3. 轻轻摇动试管，观察反应结果。
对于结果解释，如果被检红细胞膜上有与该试剂血清抗体相对应的抗原，或者被检血清中有与该试剂红细胞抗原相对应的抗体，则为阳性，即凝集为阳性。
如果不凝集，则为阴性。
以上是ABO血型系统定型原则和实验方法，仅供参考，建议查阅专业书籍或咨询专业人士获取更准确的信息。
血型的鉴定方法及操作全解
血型的鉴定方法及操作全解血型是指人体血液中红细胞表面的抗原特征，主要分为A、B、AB和O四种血型。
了解一个人的血型对献血、输血和婚姻等方面都有重要意义。
下面将详细介绍血型的鉴定方法及操作步骤。
一、血型鉴定的试剂1.抗A血清：含有抗A抗体，加入A型血液会凝集。
2.抗B血清：含有抗B抗体，加入B型血液会凝集。
3.抗AB血清：含有抗A和抗B抗体，加入A型、B型和AB型血液会凝集。
4.抗Rh血清（抗D血清）：含有抗Rh抗体，加入Rh阳性的血液会凝集。
二、操作步骤2.涂血滴定法鉴定血型：步骤一：取一根牙签，将其浸入患者或供血者的新鲜封闭伤口、创口或皮肤直至有微量血液，然后将牙签上的血涂于三个试管中的三个凹槽中。
步骤二：加入抗A、抗B和抗Rh血清。
步骤三：用滴管分别向三个试管中加入一滴抗A血清，观察结果。
如果出现凝集反应，则表示該人的血液中有A抗原，血型为A型；如无凝集反应，则表示人的血液中无A抗原，进入下一步鉴定。
步骤四：用滴管分别向三个试管中加入一滴抗B血清，观察结果。
如果出现凝集反应，则表示該人的血液中有B抗原，血型为B型；如无凝集反应，则表示人的血液中无B抗原，进入下一步鉴定。
步骤五：用滴管分别向三个试管中加入一滴抗AB血清，观察结果。
如果出现凝集反应，则表示該人的血液中有A和B抗原，血型为AB型；如无凝集反应，则表示人的血液中无A和B抗原，进入下一步鉴定。
步骤六：用滴管分别向三个试管中加入一滴抗Rh血清，观察结果。
如果出现凝集反应，则表示該人的血液中有Rh抗原，血型为阳性（+）；如无凝集反应，则表示人的血液中无Rh抗原，血型为阴性（-）。
3.精确测定法鉴定血型：步骤一：利用滴管取适量血液加入试管中。
步骤二：加入抗A血清滴定至血液凝结。
步骤三：记录滴定的比率，若比率超过1∶3，即滴入的抗A血清多于血液凝集，则表示为A型血液。
步骤四：继续加入抗B血清滴定至血液凝结。
步骤五：记录滴定的比率，若比率超过1∶3，即滴入的抗B血清多于血液凝集，则表示为B型血液。
实验一、ABO血型的鉴定
A 抗B凝集素
B抗A凝集素
4、ABO血型的鉴定 用已知的标准血清（含有凝集素），检测未知的凝集原
[结果分析]
1、甲玻片上红细胞在含抗A、B两种凝集素标准 血清中都不发生凝集，说明红细胞上A、B两种凝 集原都没有，则血型为O型。 2、乙玻片上红细胞在含抗B标准血清中不凝集， 在含抗A凝集素标准血清中发生凝集，说明红细 胞上含A凝集原，则血型为A型。 3、丙玻片与乙玻片刚好相反，说明红细胞上含B 凝集原，则血型为B型。 4、丁玻片上红细胞在A、B两种标准血清中都发 生凝集，说明红细胞上含有A、B两种凝集原，则 血型为AB型。
[异常பைடு நூலகம்象讨论]
本实验一般不会出现异常情况，但有时所测血型与某人原 来正式鉴定过的血型不相符，其原因一方面可能所采用的 标准血清存放时间过长，已失去标准血清的作用，需要用 重新校准的新鲜标准血清；其次可能系实验场所不清洁， 红细胞悬液及血清有严重污染而产假凝集。 [思考题]
[结论]
红细胞上的A、B凝集原被测知，即可作出ABO血型鉴定。 [注意事项] 1、实验前对所用A、B两种标准血清要经过校准，合格 者才能用。 2、加入玻片或试管中的A、B两种标准血液切不可混淆错 乱。 3、制备红细胞混悬液摇匀时，不可用力摇振，要轻轻将 试管来回倒置，以防红细胞破裂溶血。 4、玻片或试管内加入红细胞混悬液时所用牙签要分别专 用，不能两侧共用。
若无标准血清，已知某人血型为A型或B型，能否用来鉴 定他人血型？如何鉴定？
实验一
A B O血型的鉴定
[目的要求] 加深理解血型分型的依据及其意义； 学会一种鉴定血型的方法。
abo凝集素检测方法
abo凝集素检测方法
ABO凝集素检测方法是一种用于检测血型的实验室方法。
ABO血型系统是人类最常见的血型系统之一，分为A型、B型、AB型和O型四种血型。
在ABO血型系统中，红细胞表面有抗原A、抗原B或两者都有，同时在血浆中存在相对应的抗体。
ABO凝集素检测方法主要用于确定个体的血型，这对于进行输血、器官移植等医疗操作非常重要。
在ABO凝集素检测中，通常使用ABO血型试剂来检测患者血浆中的抗体。
这些试剂包含抗A抗体、抗B抗体和抗Rh抗体。
首先，将待测血浆与ABO血型试剂混合，观察反应是否发生凝集。
如果待测血浆中的抗体与试剂中的抗原相结合，就会出现凝集现象。
凝集程度可以根据凝集的大小和数量来判断。
另外，ABO凝集素检测方法还可以通过使用反凝血剂来判断特定血型。
反凝血剂可以阻止血浆中的抗体与试剂中的抗原结合，从而阻止凝集的发生。
除了ABO凝集素检测方法，还有其他一些检测血型的方法，如RBCT和PCR等。
RBCT是一种通过将被测血红细胞与已知血型的血清进行混合，观察凝集情况来确定血型的方法。
而PCR则是一种通过检测特定基因的方法，可以准确地确定个体的基因型，从而确定其血型。
总的来说，ABO凝集素检测方法是一种常用的血型检测方法，可以快速准确地确定个体的血型。
它在医学领域中的应用广泛，为输血和器官移植等医疗操作提供了重要的依据。
血型鉴定操作步骤
血型鉴定操作步骤
血型鉴定，主要是通过红细胞凝集试验来进行，操作步骤如下：
1、准备材料：包括清洁玻片、抗A和抗B血清、待测红细胞样本等。
2、划线分组：在玻片上用蜡笔划成几个区域，分别标明抗A、抗B等。
3、滴血清：在相应的区域滴上抗A、抗B血清。
4、加红细胞：在血清上滴上待测红细胞样本。
5、混合：用玻片轻轻转动，使血清与红细胞充分混合。
6、观察：静置一段时间后，观察红细胞是否发生凝集现象。
7、判断结果：根据红细胞凝集情况，判断血型。
此外还有试管法血型鉴定，其操作步骤类似，只是在观察凝集现象时使用试管代替玻片。
测血型实训报告步骤及结果
一、实训目的通过本次实训，掌握血型鉴定的基本原理和方法，了解不同血型之间的差异，提高对血型鉴定的实际操作能力。
二、实训时间2021年10月15日三、实训地点护理与健康学院实验室四、实训材料1. 血型鉴定试剂盒：包括抗A、抗B、抗A+B、抗A-B血清，红细胞悬液，生理盐水，玻片，吸管，采血针，消毒棉签等。
2. 实验器材：显微镜，离心机，恒温箱等。
五、实训步骤1. 准备工作（1）检查实验器材是否完好，确保实验顺利进行。
（2）将血型鉴定试剂盒中的血清和红细胞悬液取出，放置在恒温箱中预热。
2. 样本采集（1）取静脉血少许，放入生理盐水中混匀，配成2%红细胞原液。
（2）在双玻片反面两侧写上A、B以方便区分两类血清。
3. 血型鉴定（1）在玻片正面相应位置滴下抗A血清和抗B血清。
（2）用酒精棉签消毒无名指（或中指）腹和采血针。
（3）待酒精干后，用采血针迅速刺入皮肤深2~3mm，让血液自行流出。
（4）有些同学出血过少便在针口近端稍加挤压让血液流出，分别滴入抗A、B血清1~2滴。
（5）用两个吸管使红细胞悬液与抗体充分接触，注意严防两种血清接触。
（6）5~10分钟后用肉眼观察有无凝集现象发生。
4. 结果分析根据凝集反应的结果，确定红细胞膜上A或B抗原的类型，从而确定血型。
六、实训结果本次实训中，同学们成功完成了血型鉴定实验，结果如下：1. A型血：观察到红细胞与抗A血清发生凝集反应，与抗B血清无凝集反应。
2. B型血：观察到红细胞与抗B血清发生凝集反应，与抗A血清无凝集反应。
3. AB型血：观察到红细胞与抗A血清和抗B血清均发生凝集反应。
4. O型血：观察到红细胞与抗A血清和抗B血清均无凝集反应。
七、实训总结通过本次实训，同学们掌握了血型鉴定的基本原理和方法，了解了不同血型之间的差异，提高了对血型鉴定的实际操作能力。
在实验过程中，同学们严格按照操作步骤进行，认真观察实验现象，对实验结果进行了分析。
在实训过程中，同学们还发现了一些注意事项，如实验用具严格消毒，消毒采血针应一人一针，吸管不可交叉使用等。
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。
(二)检验原理1.手工试管法、玻片法或纸板法利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO 血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B 抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。
2.微柱凝胶法ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
3.玻璃珠微柱法ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。
(三)适用范围适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。
(四)设备性能参数各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。
(五)器材与试剂1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO 血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100m m×12mm和75m m×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。
抗 a 抗 b 血型定型试剂(单克隆抗体+人血清)
抗 A 、抗 B 血型定型试剂（单克隆抗体）Kang A、Kang B Xuexing Dingxing Shiji (Dankelongkangti) Anti- A and Anti- B Blood Grouping Reagents (Monoclonal Antibody )本品系用A血型单克隆抗体或 B 血型单克隆抗体配制而成，用于鉴定人ABO 血型。
1 基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合凡例的要求。
2制造2.1 专用原材料2.1.1杂交瘤细胞杂交瘤细胞建株，需经几次克隆筛选，以 100 ％克隆孔上清相应抗体阳性的作为原始细胞株。
原始细胞株经传代，稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株为主细胞。
杂交瘤细胞库的建立及检定应符合“生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。
工作细胞库经血凝效价测定合格后方能用于生产。
2.1.2染色剂抗A可选用次甲基兰等蓝色染料、抗B可选用吖啶黄等黄色染料配制至适宜浓度。
2.1.3防腐剂可选用叠氮钠、硫柳汞钠盐等，配制至适宜浓度。
2.1.4稳定剂可选用蛋白质、葡萄糖、盐类等配制至适宜浓度，不得使用凝聚胺、聚乙二醇等促凝剂用于配制稳定剂。
2.2 制备程序2.2.1杂交瘤细胞培养物上清液的制备抗A 血型或抗 B 血型杂交瘤细胞经培养传代，待杂交瘤细胞过度生长后收取培养液上清．检测血凝效价合格后扩大培养即得。
2.2.2小鼠杂交瘤腹水的制备2.2.2.1小鼠腹腔预处理健康 BALB / c 小鼠腹腔用石蜡油预处理。
2.2.2.2接种检测抗 A 血型或抗 B 血型杂交瘤细胞培养物上清液抗体血凝效价合格后，用生理氯化钠溶液或不完全培养液重新悬浮细胞，接种于数天前用石蜡油处理过的小鼠腹腔内。
2.2.2.3腹水的收集接种后数周，处死小鼠收集腹水，离心去沉淀，以适当方法除纤维蛋白原，加入适宜的防腐剂，－30℃及以下保存。
2.3 半成品2.3.1 半成品配制合并杂交瘤细胞培养物上清，可加入少量腹水混合，加入染色剂，使抗 A 血型定型试剂呈蓝色，抗B血型定型试剂呈黄色，除菌过滤。
abo血型测定实验报告
abo血型测定实验报告ABO血型测定实验报告。
实验目的，通过实验掌握ABO血型的测定方法，了解不同血型间的抗体和抗原反应，加深对血型遗传规律的理解。
实验仪器和试剂，玻璃量筒、试管、移液管、洗涤皿、显微镜、抗A血清、抗B血清、洗涤液、试纸条。
实验步骤：1. 实验前准备，将玻璃量筒、试管、移液管等实验器材清洗干净，准备好所需试剂和试纸条。
2. 取一张试验纸，用移液管吸取一滴被测血液滴在试纸上，分别滴加抗A血清和抗B血清。
3. 轻轻摇晃试纸，观察凝集反应。
若出现凝集，表示被测血液中含有相应的抗原。
4. 观察血型凝集反应结果，并记录下来。
实验结果：实验结果显示，被测血液在抗A血清中出现凝集反应，而在抗B血清中未出现凝集反应。
根据实验结果，可判断被测血液为A型血。
实验分析：根据ABO血型遗传规律，A型血的基因型可以是AA或AO，而B型血的基因型可以是BB或BO。
因此，被测血液为A型血，可能的基因型为AA或AO。
实验结论：通过本次实验，我们成功地测定了被测血液的血型，并对血型遗传规律有了更深入的了解。
实验结果表明，被测血液为A型血，可能的基因型为AA或AO。
实验总结：本次实验通过简单的试剂和试纸条，成功地测定了被测血液的血型，加深了对ABO血型的理解。
同时，也展现了血型遗传规律的重要性，为进一步的相关研究提供了基础。
实验注意事项：1. 实验过程中要注意个人安全，避免血液直接接触皮肤和黏膜。
2. 实验器材要保持清洁，避免交叉污染。
3. 实验操作要准确无误，避免误差产生。
通过本次实验，我们成功地掌握了ABO血型的测定方法，并对血型遗传规律有了更深入的了解。
这将为我们的学习和研究提供重要的基础，也为今后的实验操作积累了宝贵的经验。
ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项
ＡＢO血型鉴定得方法步骤与注意事项一、原理根据红细胞上有或无Ａ抗原或Ｂ抗原，将血型分为A型、B型、A Ｂ型及O型４种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型,就是用已知抗—A与抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应得A抗原或B抗原；所谓反定型，就是用已知Ａ细胞与Ｂ细胞来测定血清中有无相应得抗-Ａ或抗—B。
二、试剂与材料1.抗—A（B型血)、抗—B(Ａ型血）及抗—A十Ｂ(O型血)分型血清(制备方法见本节附注）2．5%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液,制备方法见本节附注；3．受检者血清;４．受检者5%红细胞盐水悬液,制备方法见本节附注。
三、方法1．试管法(1)取洁净小试管3支,分别标明抗—A、抗-B与抗—Ａ十B,用滴管分别加抗—A、抗—B与抗-A十Ｂ。
分型血清各l滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液１滴，混与。
（２）另取洁净小试管3支，分别标明A、B与O细胞。
用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B与Ｏ型5％试剂红细胞悬液l滴，混与。
（3)立即以10０0ｒ／mｉn离心1ｍiｎ。
（4）将试管轻轻摇动,使沉于管底得红细胞浮起,先以内眼观察有无凝集（或溶血)现象。
如内眼不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜检查.（5）观察结果时既要瞧有无凝集,更要注意凝集强度,此有助于A、B亚型、类B或cisAB得发现。
（6）凝集强度判断标准2、玻片法(1)取清洁玻片1张(或白瓷板1块),用蜡笔划成方格,标明抗—A、抗－Ｂ与抗—Ａ十B,分别用滴管滴加抗—A、抗—Ｂ与抗—A十Ｂ分型血清 l滴于标明得方格内，再各加受检者２%红细胞悬液１滴，混与.（2）另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞与Ｏ细胞，用滴管各加受检者血清１滴，再分别用滴管滴加A、B与O型试剂红细胞悬液1滴。
（3)将玻片（或白瓷板)不断轻轻转动,使血清与细胞充分混匀,连续约15min，以肉眼观察有无凝集(或溶血）反应.如以玻片作试验时,也可用低倍镜观察结果.四、［结果判定］AＢO血型正反定型结果注;“十”为凝集;“—"为不凝集。
孕妇O型血中抗A、抗B效价检测的方法学研究
１６１０ 一
文 章编 号 ：１００７— ４２８７（２Ｏ１８）Ｏ９—１６１０— ０２
Ｃｈｉｎ Ｊ Ｌａｂ Ｄｉａｇｎ，Ｓｅｐｔｅｍ ｂｅｒ，２０１８，Ｖｏｌ ２２，Ｎｏ．９
孕 妇 Ｏ 型 血 中抗 Ａ、抗 Ｂ效 价 检பைடு நூலகம்测 的方 法 学 研究
朱 文 刚 （阜 阳市 人 民医 院 南 区 输 血科 ，安 徽 阜 阳 ２３６０１１）
１６、１ ：３２、１ ：６４、１ ：１２８、１ ：２５６、１ ：５１２、１ ： １０２４、
１：２０４８倍 比稀 释 ，将 稀 释好 的各 管 分 别 按 顺 序 加 入对应 标记 的抗 人球 蛋 白卡 中 ，最后 将 Ａ、Ｂ红细 胞 悬液 （０．８—１．Ｏ）９／６加 入对 应 的抗人 球 蛋 白卡 中 ，温 育 １５ ｍｉｎ，离 心 ５ ｍｉｎ，观 察 、记 录结果 。 １．３．２ ４℃红细 胞吸 附处理 血浆 分别 取标本 血浆 ４００肚ｌ置 于标记 “Ａ”“Ｂ”２支试 管 中 ，并 置 于 ４℃温 箱 中 １ ｈ，将 （３．Ｏ一５．Ｏ） Ａ、Ｂ红 细胞 悬 液 ，并 置 于 ４℃温箱 中 １ ｈ，将红 细胞 悬 液各 ４００ １分 别加 人相 应 的加 入血 清 的标记试 管 中 ，３ ０００转／ｍｉｎ，离心 １５
人类 血型 至 今 已知 有 ３６种 ，ＡＢＯ血 型 系 统 在 临床 输血 及致 新生 儿 溶 血病 实 验 中意 义最 为 重要 ， 其 中孕 妇为 Ｏ 型 ，不 规 则 抗体 阴性 ，配 偶 为 非 Ｏ 型 常常需 要检 测 抗 Ａ、Ｂ效 价 ，因 为 孕 妇 体 内抗 Ａ、Ｂ ＩｇＧ 型抗体 效价 过 高 （大 于 ２５６）会通 过 胎 盘屏 障与 胎儿 （非 ０ 型）红 细胞结 合 、致敏 而 发生 新 生儿 溶 血 病 ＿１ ］。因此 ，常 通过 检 测 孕 妇血 浆 中抗 Ａ、Ｂ效 价 来 评估 新 生 儿 溶 血 病 发 生 的可 能 性 ［３］。 目前 用 ２一 Ｍｅ处 理 标 本 常 达 不 到 实 验要 求 ，为 了更 好 地 检 测 抗 体效 价 的真 实水 平 和 提 高检 出率 ，我 们利 用 ＩｇＭ 冷凝 集 的特性 ，在 ４℃用 标 准 Ａ、Ｂ红 细胞 吸 附 Ｏ型 孕妇 血 浆 中 的 ＩｇＭ 抗 体 与 ２－Ｍｅ处 理 样 本 进 行 比 较 ，并统 计分 析两 者 的检 出率 。 １ 材料 与方 法 １．１ 研 究对 象 收集 ２０１４年 １２月－２０１７年 ５月 门 诊 孕检 孕妇 Ｏ 型全 血 样 本 ８４２份 ，中位 年 龄 ２８岁 （１７—４５）岁 。 １．２ 主 要试剂 与 仪器 微柱凝 胶抗 人球 蛋 白卡 、微 柱凝 胶 蛋 白卡 专用 离 心机 （长 春博 讯 生 物 技术 有 限 公 司），标准 Ａ、Ｂ红 细 胞 、抗 筛 谱 细 胞 、２－Ｍｅ（上 海 血液生 物 医药有 限责 任 公 司 ），离 心 机 （武 汉 贝 索生 物有 限公 司），Ｓ．Ｈ Ｈ＿ｗ 型数 字 显示 式 恒 温 水 温箱 （上海 东荣 丰科 学仪器 有 限公 司 ）。 １．３ 用微 柱凝胶 抗人 球 蛋 白卡进 行检 测操 作步骤 １．３．１ ２－Ｍｅ处 理 血浆 将 ２－Ｍｅ与被 检测 血 浆各 ４００ ｌ按 １：１比例 加 入 标 记 的试 管 中 ，在 ３７℃下 温育 ３Ｏ ｍｉｎ处 理 ，用生 理盐 水按 照 １：４、１：８、１：
abo血型鉴定实验步骤
abo血型鉴定实验步骤
ABO血型鉴定实验是一种常见的血型鉴定方法，以下是步骤：
1.采集血液样本
首先需要采集被测者的血液样本，一般采用指尖血或静脉血采样。
2.制备实验所需试剂
制备实验所需试剂，包括抗A血清、抗B血清和抗Rh血清。
3.制备实验板
将实验板清洁干燥后，使用标签标记实验板编号，然后将每一孔填充一定量的液体支撑剂，等待其凝固。
4.加样
将被测者的血液样本滴入已凝固的实验板中的相应孔中，每个孔约加入一个滴。
5.加试剂
将抗A血清滴入A孔中，抗B血清滴入B孔中，抗Rh血清滴入Rh孔中，每个孔约加入一个滴。
6.观察结果
观察实验板中各孔的变化情况。
若A孔出现凝固反应，表示被测者为A型血；若B孔出现凝固反应，表示被测者为B型血；若AB孔均出现凝固反应，表示被测者为AB型血；若Rh孔出现凝固反应，表示被测者为Rh阳性血型。
7.结果判读
根据试验结果判断被测者的血型，一般以阴性血型为主，如O型血和Rh阴性血型。
注意事项：
1.实验前需要做好个人防护措施，穿戴实验室服和手套。
2.实验操作需要严格按照标准化程序进行，确保实验结果的准确性。
3.实验板需要清洗干净，避免污染或受到外界影响。
医院IgG抗A(B)测定规程
医院IgG抗Ａ（Ｂ）测定规程1.试剂和材料1.1.0.2mol/L巯基乙醇应用液：以pH7.4PBS（KH２PO41.73g,Na2HPO4˙12H2O19.35,NaCl8g加蒸馏水至100ml）稀释到100ml,用热合机分装到塑料管中，每段含0.25ml,保存冰箱备用。
1.2.5%A型和B型红细胞悬液1.3.抗球蛋白血清。
2 .操作2.1.吸取受检者血清0.2ml，加巯基乙醇应用液0.2ml,混合，将试管口塞紧，置37℃水浴中2h.2.2.排列小试管一排（10支），每管加pH7.4PBS0.2ml。
2.3.第一管加巯基乙醇应用液处理的血清0.2ml,混合，吸取0.2移至第二管内，混和，以此类推，作倍比稀释至第10管，每管内留有1:4, :8,1:16,…1:2048不同稀释度血清。
2.4.每管各加5%A（或B）型红细胞悬液0.2ml，置37℃致敏一小时。
2.5.结果观察，如在前几管内发现有红细胞凝集者，是由于高效价IgG抗A（B）或IgA抗A（B）所引起，2.6.其余红细胞未见凝集的试管，再以PH7.4PBS洗涤3次，除去洗涤液，留取压积红细胞。
2.7.各管各加pH7.4PBS2滴，混合。
2.8.每管各取1滴，分别移至另一排小试管中，再各加最适稀释度的抗球蛋白血清1滴，混合。
2.9.1000r/min离心1min。
2.10轻轻摇动试管，观察结果，红细胞凝集的最高稀释度的倒数即为IgG抗Ａ（B）效价。
3.附注：3.1 0.01mol/L二硫苏糖醇（DDT）盐水溶液也可用于灭活ＩgM抗体。
3.2当母亲血清中IgG抗A（B）效价大于1:64时提示婴儿有受害的机会，大于1:128时提示婴儿很可能受害，大于1:512时几乎100%发病。
3.3当父亲血型为AB时，应排列小试管两排，第一排加5%A 型红细胞悬液, 第二排加5%B型红细胞悬液,分别测抗A、抗B效价。
抗-A、抗-B血型定型试剂(单克隆抗体)质量检查规程
3.3 特异性检测：取6只小试管分两组，3管加 抗A、3管加抗B，每管2滴，标记A1c、Bc、 Oc，每管加5%相应RBC悬液1滴，混匀，置 18~22℃15分钟，离心观察结果。、 抗-A只与A1c凝集，不凝集B及O型细胞，无 溶血及不易分辨现象； 抗-B只与Bc凝集，不凝集A1及O型细胞，无 溶血及不易分辨现象。
3.1 外观：包装完好无渗漏、标识清晰、有批 批检防伪标识、产品在有效期内； 抗-A液应透明或微带乳光的蓝色液体； 抗-B液应透明或微带乳光的黄色液体，无摇不 散沉淀：取2排试管，每管加4滴生理盐 水（第一管不加），每排第1管、第二管加抗A、抗-B各4滴，从第2管开始倍比稀释，最后 1管吸取4滴弃去。 各管加对应5%红细胞悬液1滴，置18~22℃15 分钟，离心，凝集1+的最高稀释管为此效价。 抗-A、抗-B效价应≧128。
3.4 亲合力：将1滴待检试剂置洁净玻片上， 各加等体积相应10%红细胞悬液1滴，立即摇 动观察是否有凝集，应15秒以内出现凝集。 3.5 不规则抗体筛选：将0.5%的O型红细胞4 滴，加抗-A，抗-B 各1滴。
3.6 冷凝集试验：取2支试管，分别加抗-A、 抗-B液 4滴，每管加1滴5%O型红细胞，混匀 置4℃冰箱，2小时后看结果。 3.6 结果判断：合格的抗A(B)血清试剂应符合 以下标准： 3.6.1 抗A(B)效价≥128，无溶血。
抗-A、抗-B血型定型试剂（单克隆抗 体）质量检查规程
输血科
1、目的
为保证ABO血型鉴定的正确，对抗-A、抗-B血 型定型试剂的外观、效价、亲和力、特异性、 冷凝集等方面进行质量检查，确保血型鉴定准 确。
2、试剂
凝集反应（ABO血型的鉴定）
凝集反应（ABO血型的鉴定）实验一凝集反应（ABO血型的鉴定）[实验目的]1．掌握凝集反应的原理，玻片法和试管法凝集实验的实验方法和结果分析。
2．了解凝集反应基本类型及血型鉴定的各种方法包括正、反定型，血型板鉴定法和血型卡鉴定法。
[实验原理]在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。
人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。
据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。
[实验器材]1．器材：光学学显微镜，消毒缸2．材料：消毒干棉球，一次性采血针，载玻片，玻璃试管，一次性带刻度朔料吸管，医用黄色垃圾袋3．试剂：75%医用酒精，0.9%NaCl注射液，抗血清试剂抗A、抗B[内容与方法](一)玻片法凝集实验1.用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。
滴1至2滴血液于含有1ml生理盐水的试管内，摇匀，制成约0.5%血球悬液。
用干棉球止血。
2．取洁净载玻片1块，在中间用蜡笔画一条竖线，将抗A、B分型试剂分别加1滴于载玻片两端。
3. 用毛细吸管吸取血球悬液，在白瓷板的两个圆孔内各加一滴,并充分混匀，放置5－10分钟。
4.肉眼观察红细胞有无凝集发生。
如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。
若肉眼观察不明显，可在显微镜下观察是否存在微小凝集5.记录凝集情况，判定受检者的血型。
（二）试管法凝集实验1．用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。
滴1至2滴血液于含有生理盐水的试管内，摇匀，制成约0.5%血球悬液。
用干棉球止血。
2．取洁净试管2支，分别标记上A、B字样，将抗A、B分型试剂分别加1滴于相应标记的试管中3．用一次性吸管吸取血球悬液，在2支标记试管中各加一滴,并充分混匀，放置5－10分钟。
抗A、抗B血凝素检查方法确认实验
抗A、抗B血凝素检查法适用性验证日期：抗A、抗B血凝素检查法适用性验证方案目录1、主题内容 (4)2、适用范围 (4)3、引用文件 (4)4、职责 (4)5、概述 (4)6、验证目的 (5)7、实验要求 (5)8、验证项目 (5)9、偏差处理 (7)10、验证结果评定与结论 (7)1、主题内容本方案规定了我公司抗A、抗B血凝素检查法验证实验方案的实验方法及标准。
制定本方案是为了明确抗A、抗B血凝素检测的测定方法，确保检验结果的准确性。
2、适用范围本标准适用于本公司生产的静注人免疫球蛋白（pH4)的抗A、抗B血凝素检定。
3、职责3.1 验证领导小组3.1.1 验证领导小组：协调和组织验证实验项目，管理验证实验小组。
3.1.2 质量管理部负责人：赵学梅，审核验证实验方案及报告。
3.1.3 验证总负责人：刘欣晏，审批验证实验方案及报告，同时方法验证实验合格，签署合格证。
3.2验证小组3.2.1验证小组组长：班凯，负责方法验证实验的组织和协调工作。
3.3 验证小组组员3. 3.1姜志文：起草验证方案，负责实验的实施，起草验证实验报告。
3. 3.2邓应群、龙红玉：协助起草方案。
4、引用文件4.1《中国药典》2010年版三部。
5、概述根据<<中国药典>>2010版三部的要求,用于我公司生产的静注人免疫球蛋白（pH4)的抗A、抗B血凝素检查。
6、验证目的通过实验验证该方法是否适用于对我公司生产的静注人免疫球蛋白（pH4)抗A、抗B血凝素检查的目的。
7、实验要求7.1 A、B、O型红细胞悬液: 取健康人静脉血A、B、O型各3人份，分别混合，用生理盐水洗涤3次，末次2000rpm 离心5min弃上清，用生理盐水溶液制成5％（ml/ml）红细胞悬液。
红细胞于采集之日起1周内使用。
7.2 抗人球蛋白血清：为多价抗人球蛋白血清，用前须标定，选择适宜稀释度用于试验。
7.3 AB型血清：分离AB型人血清，用于阴性对照。
实验十 出血时间凝血时间的测定及血型鉴定
实验十 出血时间凝血时间的测定及血型鉴定
目的： 1.学习测定出血、凝血时间的方法，熟悉测定出血时间和凝血时间的意义 。 2.学习鉴别血型的基本方法。3.观察红细胞凝聚现象，掌握ABO血的原理。 原理：1、出血时间（P68）、凝血时间（P68）。 2、ABO血型系统根据受试者红细胞上是否含有凝集原和所含凝集原种类 的不同，将血型分为A、B、AB、O4种基本血型。将受试者红细胞分别加入 抗A、抗B血型定型试剂进行鉴定。 实验对象： 人或动物。 用品和材料：抗A抗B血型定型试剂，采血针、碘酒、酒精、棉签、牙签、标记 笔，双凹载玻片，小滤纸条、秒表。 实验步骤： 1、在双凹载玻片上分别滴1-2滴抗A抗B血型定型试剂。 2、用酒精棉球对左手无名指消毒，用Байду номын сангаас菌一次性采血针头刺破受检者，挤压出 血。在双凹载玻片两格中分别滴加受检者手指血1滴。用三根牙签分别逐个混 匀；室温静置10－15分钟后观察有无凝集。 3、出血时间的测定（P69）。(参考值1-4min） 4、凝血时间的测定（玻片法）（P69）。(参考值2-8min）
作业：记录自己的出血时间、凝血时间和血型。
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抗A、抗B血凝素检查法
适用性验证
日期：
抗A、抗B血凝素检查法适用性验证方案
目录
1、主题内容 (4)
2、适用范围 (4)
3、引用文件 (4)
4、职责 (4)
5、概述 (4)
6、验证目的 (5)
7、实验要求 (5)
8、验证项目 (5)
9、偏差处理 (7)
10、验证结果评定与结论 (7)
1、主题内容
本方案规定了我公司抗A、抗B血凝素检查法验证实验方案的实验方法及标准。
制定本方案是为了明确抗A、抗B血凝素检测的测定方法，确保检验结果的准确性。
2、适用范围
本标准适用于本公司生产的静注人免疫球蛋白（pH4)的抗A、抗B血凝素检定。
3、职责
3.1 验证领导小组
3.1.1 验证领导小组：协调和组织验证实验项目，管理验证实验小组。
3.1.2 质量管理部负责人：赵学梅，审核验证实验方案及报告。
3.1.3 验证总负责人：刘欣晏，审批验证实验方案及报告，同时方法验证实验合格，签署合格证。
3.2验证小组
3.2.1验证小组组长：班凯，负责方法验证实验的组织和协调工作。
3.3 验证小组组员
3. 3.1姜志文：起草验证方案，负责实验的实施，起草验证实验报告。
3. 3.2邓应群、龙红玉：协助起草方案。
4、引用文件
4.1《中国药典》2010年版三部。
5、概述
根据<<中国药典>>2010版三部的要求,用于我公司生产的静注人免疫球
蛋白（pH4)的抗A、抗B血凝素检查。
6、验证目的
通过实验验证该方法是否适用于对我公司生产的静注人免疫球蛋白（pH4)抗A、抗B血凝素检查的目的。
7、实验要求
7.1 A、B、O型红细胞悬液: 取健康人静脉血A、B、O型各3人份，分别混合，用生理盐水洗涤3次，末次2000rpm 离心5min弃上清，用生理盐水溶液制成5％（ml/ml）红细胞悬液。
红细胞于采集之日起1周内使用。
7.2 抗人球蛋白血清：为多价抗人球蛋白血清，用前须标定，选择适宜稀释度用于试验。
7.3 AB型血清：分离AB型人血清，用于阴性对照。
7.4 抗D血清(IgG型)，用于阳性对照。
8、验证项目
8.1 实验人员的确认。
8.1.1 合格标准：人员已经培训，并能独立操作。
8.1.2 确认方法：查看是否有培训记录。
8.1.3 结果：见（附表1）
8.2 SOP的确认。
8.2.1 合格标准：与该验证有关的SOP都已经批准。
8.2.2 确认方法：记录与该验证有关的SOP的名称和文件编号。
8.2.3 结果：见（附表2）
8.3 实验依据的确认。
8.3.1 合格标准：《中国药典》2010年版三部附录。
8.3.2确认方法：查看《中国药典》2010年版三部附录是否有狂犬病抗体效价检查方法。
8.3.3结果：见（附表3）
8.4 实验仪器的确认。
8.4.1 合格标准：实验仪器在检定有效期内。
8.4.2 确认方法：记录恒温水浴箱、生物安全柜验证方案名称和文件编号，查看上述实验仪器使用时间是否在再验证时间之前。
8.4.3 结果：见（附表4）
8.5 实验试剂的确认。
8.5.1合格标准：实验试剂在检定有效期内。
8.5.2确认方法：记录实验所用试剂名称，查看是否在有效期内。
8.5.3结果：见（附表5）
8.6 实验样品确认。
8.6.1合格标准：实验样品为我公司生产制品。
8.6.2确认方法：查看制品名称、批号。
8.6.3结果：见（附表6）
8.7实验方法的确认。
8.7.1合格标准：按SOP执行，通过三次实验，阴性对照及红细胞对照结果均呈阴性，阳性对照结果不低于“+++”，试验成立。
抗A效价、抗B效价应不高于1：64。
8.7.2确认方法：查看实验记录。
8.7.3结果：见（附表9）及实验记录。
9、偏差处理
在验证方案实施过程中如有与验证方案不一致的地方将被视为偏差。
9.1验证方案实施人员应对所发生的偏差进行描述并记录；
9.2 验证小组应评估偏差对验证方案的实施和该系统质量的影响，提出偏差纠正措施并经QA审核批准后实施；
9.3 以上偏差纠正措施的实施均应填写偏差纠正措施实施记录；
9.4 验证小组应对偏差纠正措施实施后的效果进行评价。
10、验证结果评定与结论
10.1 验证小组负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论，发放验证证书。
对验证结果的评审应包括：
10.1.1 验证实验是否有遗漏？
10.1.2验证实施过程中对验证方案有无修改？修改原因、依据以及是否经过批准？
10.1.3验证记录是否完整？
10.1.4验证试验结果是否符合标准要求？是否需要进一步补充试验？
附表1
人员确认记录表
备注：
偏差处理：
结论：
确认人：复核人：确认日期：复核日期：
附表2
SOP确认记录表
备注：
偏差处理：
结论：
确认人：复核人：确认日期：复核日期：
附录3
实验依据确认表
备注：
偏差处理：
结论：
确认人：复核人：确认日期：复核日期：
附录4
实验仪器确认表
备注：
偏差处理：
结论：
确认人：复核人：确认日期：复核日期：
附表5
实验试剂确认表
备注：
偏差处理：
结论：
确认人：复核人：确认日期：复核日期：
附表6
实验样品确认表
备注：
偏差处理：
结论：
确认人：复核人：确认日期：复核日期：
附表7
实验方法确认表
备注：
偏差处理：
结论：
确认人：复核人：确认日期：复核日期：。