菌种传代标准操作规程

菌种传代的操作方法

菌种传代的操作方法
菌种传代，是指将已有的菌株进行繁殖，并保持其遗传特性的操作。

以下是菌种传代的一般操作方法：
1. 选择合适的培养基：根据菌株的需求选择合适的培养基，如琼脂或液体培养基。

2. 培养菌株：将初始的菌株接种到培养基上，培养在适当的条件下，如温度、光照和湿度等。

3. 观察生长情况：观察菌株在培养基上的生长情况，如菌落形态、颜色和密度等。

4. 选取单一菌落：根据需要，从培养基上选择单一的菌落，避免杂交或干扰。

5. 转移到新的培养基上：将选取的单一菌落转移到新的培养基上。

可以使用传递环法，即在新的琼脂平板上划出线形、网状或圆形区域，将菌落转移到该区域；或使用菌液接种法，将菌悬液接种到新的培养基中。

6. 维持传代：继续重复步骤3-5，将菌株传代到新的培养基上，以保持其遗传特性。

需要注意的是，在菌种传代的过程中，应避免污染和混杂，保持无菌操作。

另外，菌种传代的频率也应根据需要和菌株的生长特性进行调整，以保证菌株的质量和稳定性。

细菌传代操作规程

细菌传代操作规程细菌传代操作规程引言：细菌传代是一种实验室技术，用于研究细菌在连续传代中的生物学特性和遗传变异。

正确的传代操作是维持细菌群体稳定且准确反映遗传特性的关键。

为了保证传代操作的成功和规范性，制定相关的操作规程是必要的。

一、实验前准备：1. 确定传代实验的目标和方案。

2. 准备所需的培养基、试剂和实验器材。

3. 检查实验器材的清洁和消毒情况，保证无污染。

二、细菌传代操作步骤：1. 第一代接种：a. 从冷冻细菌库中取出所需的细菌母种，转接到含有适当培养基的培养皿中。

b. 用接种环或接种针沾取适量的细菌悬液，均匀涂布在培养皿的表面。

c. 恒温培养箱中培养，温度和时间根据不同的菌株而定。

2. 后续代接种：a. 从前一代的培养皿中取适量的细菌悬液，转接到新的培养皿中。

注意保持接种量的一致性。

b. 重复上述步骤，逐代传代。

三、传代操作注意事项：1. 操作均需在无菌工作台或无菌条件下进行，以避免外源性污染。

2. 接种时避免直接接触培养基和装置内壁，以减少细菌的外源污染。

3. 接种环或接种针在使用前需经过高温炉高温灼烧，以杀灭潜在的细菌。

4. 尽量避免细菌的暴露在空气中的时间过长，以保证其活力。

5. 传代时应注意接种量的一致性，以减少菌群的变异。

四、细菌传代操作记录：1. 每次操作均需详细记录传代实验的日期、细菌菌株、传代代数等信息。

2. 记录每次传代的细菌生长情况，如菌落形态、数量等。

3. 定期保存样品用于后续的分析和验证。

五、实验后处理：1. 做好实验区域的清理和消毒，防止细菌污染蔓延。

2. 注射器、接种环和接种针等实验器材彻底清洗和高温灼烧。

3. 储存冷冻细菌库中的细菌母种。

六、应急措施：1. 若在实验过程中出现异常情况，如培养皿内出现异常菌落、污染等，应立即停止传代操作，并采取必要的消毒措施。

2. 若实验结果与预期不符，可重新设计实验方案或检查实验操作是否存在问题。

结语：细菌传代操作规程旨在规范实验操作过程，确保细菌传代的准确性和连续性。

菌种传代操作规程

菌种传代操作规程 Company number【1089WT-1898YT-1W8CB-9UUT-92108】G M P管理文件一、目的：为使菌种传代操作规范化、制度化，故建立此规程二、适用范围：菌种传代须按本规程执行。

三、责任者：微生物限度检查化验员，质量检测中心主任。

四、正文：1、培养基的制备按微生物限度检查用稀释剂、培养基配制操作规程及斜面配制操作规程配制好相应培养基。

大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、沙门菌、用胰酪大豆胨琼脂斜面培养基，白色念珠球菌、黑曲霉用沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基，制备好的培养基预培养48小时后，确认无菌落生长方可使用。

2.菌种传代菌种传代前应准备好适于该菌种生长的培养基和培养设备，所有操作均应在符合生物安全保护的生物安全柜内进行。

点燃酒精灯，在火焰上部操作，将原有的菌种斜面（简称菌种管）与待接种的新鲜斜面培养基（简称接种管）持在左手拇指、食指及中指之间，菌种管在前，接种管在后，使试管内斜面向上，两支试管口平齐，应斜持试管呈45°角，以免管底凝集水浸湿培养基表面。

用右手在火焰旁转动两支试管胶塞，以便接种时易于拨取。

再用右手持接种环的柄端，垂直或稍斜地把接种环在火焰上灼烧。

将接种环烧红约30s，随后将接种棒金属部分在火焰上烧灼，以彻底灭菌。

用右手的小指和手掌之间以及无名指与小指之间，在火焰旁分别拔除两支试管的胶塞，持住。

在将试管口在火焰上通过以杀灭管口的细菌，但勿烧的过热，将烧灼的接种基上，如有溶印则表明接种环未冷却，待冷后，再从斜面上挑取少许菌苔。

取出时接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管，在斜面上由下而上划“Z”字型曲线，当接种完毕，立即将管口通过火焰灭菌，右手到火焰旁塞上胶塞，不要将管口离开火焰旁去迎接右手的胶塞。

最后将接种环烧灼灭菌放置备用。

3.培养将以上接种好的各菌管放入相应温度的培养箱内，白色念珠菌放入23-28℃培养箱内培养24-48h，黑曲霉放入23-28℃培养箱内培养5-7天，其它菌种放入30-35℃培养箱内培养18-24小时。

菌种复苏传代保存操作规程

菌种复苏传代保存操作规程菌种复苏传代保存是微生物实验室中常见的操作之一，其目的是将冷冻保存的菌种从冷冻状态中恢复出来，并按照一定的方法传代保存。

以下是菌种复苏传代保存操作规程，共1200字。

一、实验准备1.1 准备所需物资：包括菌种冻存试管、培养基、称量仪器、吸管、移液器、贴标纸等。

1.2 检查完整的实验设备：包括洁净台、离心机、培养箱、移液枪等，确保设备无损坏。

1.3 检查所需培养基的质量：检查培养基的配制日期、有效期等，确保培养基适用于所需菌种。

二、复苏菌种2.1 取出含菌种的冻存试管：从冷冻保存箱中取出所需菌种的冻存试管，并将试管放置于洁净台上。

2.2 快速复苏：将冻存试管置于培养基底部，用力旋转数次，使菌种快速复苏。

2.3 开孔放气：用火焰消毒后的吸管尖端取出菌种后将其放入含菌种的冻存试管中，并迅速封闭试管口，以防菌种污染。

2.4 培养基选择：根据菌种类型的不同，选择相应的培养基进行培养。

如需选择无菌培养基时，需要在使用前先进行灭菌处理。

2.5 培养条件：将含菌种的试管放入预先灭菌处理过的培养基中，确保培养基将菌种完全覆盖，并在适当的培养条件下培养，包括温度、湿度、光照等。

三、传代保存3.1 菌种鉴定与纯化：复苏后的菌种应进行鉴定与纯化，以确保菌种的纯度和正确性。

3.2 菌种传代：将复苏后的菌种接种到新的培养基中，进行传代培养。

传代时应注意传代次数，一般不超过10次。

3.3 传代培养条件：传代时应保持相同的培养条件，以保证菌种的生长状态和性状的稳定。

3.4 保存方式选择：根据菌种的特性和实验需求，选择适当的保存方式，包括持续传代培养、冷冻保存、冷冻干燥等。

3.5 标识和记录：每次传代后，应及时贴标记于保存容器上，并记录传代时间、次数和相关信息，以便后续使用和管理。

四、实验安全与废弃物处理4.1 实验环境安全：在进行菌种复苏传代保存操作时，应注意实验室的环境安全，保持实验室干净、整洁，并严格遵守实验室操作规范。

检定菌保存传代使用销毁标准操作规程

检定菌保存传代使用销毁标准操作规程一、引言检定菌是指用于验证实验室检测方法准确性和可靠性的微生物菌种。

为确保检定菌的质量和有效性，需要制定一套标准操作规程，明确保存、传代使用和销毁的要求和流程。

本文将详细介绍检定菌保存传代使用销毁的标准操作规程。

二、保存要求1. 菌种的保存容器应为无菌、密封、耐高温高压的玻璃瓶或者塑料瓶，并在保存容器上标明菌种名称、保存日期和保存人员的姓名。

2. 菌种保存容器应储存在恒温冰箱或者液氮罐中，温度应控制在-70℃至-80℃之间。

3. 菌种保存容器应存放在避光和湿度适宜的环境中，避免受到阳光直射和湿气侵入。

三、传代使用要求1. 传代前应进行菌种活性检测，确保菌种仍然具有活性和稳定性。

2. 传代使用菌种的工作台、培养皿、试管等实验器材应经过高温高压灭菌处理，确保无菌状态。

3. 传代使用菌种时，应使用无菌技术操作，避免交叉污染。

4. 传代使用菌种的培养基应符合菌种的生长要求，避免影响菌种的生长和繁殖。

5. 传代使用菌种的培养条件应符合菌种的生长要求，包括温度、湿度、氧气浓度等。

四、销毁要求1. 菌种销毁应在生物安全柜中进行，避免菌种的扩散和污染。

2. 销毁菌种的容器应经过高温高压灭菌处理，确保菌种彻底死亡。

3. 销毁后的菌种容器应进行特殊处理，如破碎、焚烧或者化学处理，以防止菌种的再生和传播。

五、安全注意事项1. 在保存、传代使用和销毁菌种的过程中，操作人员应佩戴实验室必需的个人防护装备，如实验手套、实验眼镜等。

2. 操作人员应具备相关的微生物实验室操作技能和安全意识，遵守实验室安全规范和操作流程。

3. 在操作过程中，应注意避免菌种的意外泄露和污染，及时清理和消毒操作区域。

六、总结本文详细介绍了检定菌保存传代使用销毁的标准操作规程。

通过严格遵守这些规程，能够确保检定菌的质量和有效性，提高实验室检测方法的准确性和可靠性。

同时，操作人员应时刻关注实验室安全，遵守相关的安全规范和操作流程，确保个人和团队的安全。

菌种复苏传代操作规程

菌种复苏传代操作规程一、背景介绍菌种复苏传代操作是微生物实验室中常见的实验操作之一。

通过复苏并传代菌种，能够恢复其活性并扩大其数量，为后续的实验研究提供足够的菌种量。

本文将对菌种复苏传代操作进行详细的介绍和规程。

二、菌种复苏1.准备工作–检查实验室条件：确保工作台面、培养箱和工具的清洁程度，防止交叉污染。

–准备所需培养基：根据菌种类型选择合适的培养基，如琼脂培养基、液体培养基等，并按照要求配制。

–检查试剂：检查培养基和其他试剂的质量和保存情况，确保使用的试剂没有变质。

–备注标签：为每个培养皿或试管添加标签，标明菌种名称、菌株编号和日期等信息。

2.菌种复苏步骤–从冷冻细胞库中选择合适的冻存物：确保选择与实验目的一致的菌种冻存物进行复苏。

–快速复苏：将冻存物迅速取出，放在含有适量温和培养基的试管中，轻轻摇匀。

–孵育：将试管置于适当的温度和湿度条件下，进行孵育。

通常温度为30°C，孵育时间根据菌种不同而异，一般为24-48小时。

–观察生长情况：观察菌种的生长情况，包括菌落数量和形态特征等。

确认菌种是否成功复苏。

三、菌种传代1.准备工作–准备培养基和试剂：根据菌种特性选择合适的培养基，并按照要求配制好。

–准备培养皿或试管：确保培养皿或试管干净，不含任何污染。

–注射器和接种环的消毒：使用75%乙醇对注射器和接种环进行消毒处理，避免交叉感染。

2.菌种传代步骤–挑取菌落：使用消毒过的注射器，挑取菌落，并迅速划线于新的培养皿或试管中。

–均匀接种：使用消毒过的接种环，将菌落均匀划线于培养皿或试管表面。

–孵育：培养皿或试管置于适当的温湿度条件下，进行孵育。

温度和孵育时间根据菌种特性而异，需根据实验需求进行调整。

–观察生长情况：观察菌种的生长情况，如菌落数量、形态特征和菌落色泽等。

四、菌种传代操作注意事项1.严格消毒–操作前要进行充分的手部卫生和工作台面的消毒。

–使用消毒过的工具，如注射器、接种环等，避免交叉感染。

菌种传代操作规程(1)知识讲解

菌种传代操作规程(1)GMP管理文件一、目的：为使菌种传代操作规范化、制度化，故建立此规程二、适用范围：菌种传代须按本规程执行。

三、责任者：微生物限度检查化验员，质量检测中心主任。

四、正文：1、培养基的制备按微生物限度检查用稀释剂、培养基配制操作规程及斜面配制操作规程配制好相应培养基。

大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、沙门菌、用胰酪大豆胨琼脂斜面培养基，白色念珠球菌、黑曲霉用沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基，制备好的培养基预培养48小时后，确认无菌落生长方可使用。

2.菌种传代2.1菌种传代前应准备好适于该菌种生长的培养基和培养设备，所有操作均应在符合生物安全保护的生物安全柜内进行。

2.2点燃酒精灯，在火焰上部操作，将原有的菌种斜面（简称菌种管）与待接种的新鲜斜面培养基（简称接种管）持在左手拇指、食指及中指之间，菌种管在前，接种管在后，使试管内斜面向上，两支试管口平齐，应斜持试管呈45°角，以免管底凝集水浸湿培养基表面。

用右手在火焰旁转动两支试管胶塞，以便接种时易于拨取。

再用右手持接种环的柄端，垂直或稍斜地把接种环在火焰上灼烧。

将接种环烧红约30s，随后将接种棒金属部分在火焰上烧灼，以彻底灭菌。

用右手的小指和手掌之间以及无名指与小指之间，在火焰旁分别拔除两支试管的胶塞，持住。

在将试管口在火焰上通过以杀灭管口的细菌，但勿烧的过热，将烧灼的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，如有溶印则表明接种环未冷却，待冷后，再从斜面上挑取少许菌苔。

取出时接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管，在斜面上由下而上划“Z”字型曲线，当接种完毕，立即将管口通过火焰灭菌，右手到火焰旁塞上胶塞，不要将管口离开火焰旁去迎接右手的胶塞。

最后将接种环烧灼灭菌放置备用。

3.培养将以上接种好的各菌管放入相应温度的培养箱内，白色念珠菌放入23-28℃培养箱内培养24-48h，黑曲霉放入23-28℃培养箱内培养5-7天，其它菌种放入30-35℃培养箱内培养18-24小时。

菌种传代操作规程2024版药典菌种传代

菌种传代操作规程2024版药典菌种传代
菌种传代操作规程2024版药典菌种传代将依照以下步骤进行：
1. 准备工作：确保操作台面和工具已经经过清洁和消毒处理，确保操作室内环境的无
菌状况。

准备所需的培养基、试管、移液器、平板等。

2. 菌种接种：将初代培养物中适量的菌液采用无菌的移液器转接到新的无菌培养基中，或将菌液均匀地刷在无菌平板上。

注意避免交叉污染。

3. 培养：将接种好的培养基或平板放置于恒温箱中，在适当的温度和湿度条件下培养
一定时间，以确保菌种生长繁殖。

4. 传代：在培养基的不同时间点上，将菌种取出进行传代。

传代时，选择菌落或液体
中适量的菌液接种到新的无菌培养基中，或刷在无菌平板上。

5. 观察和记录：观察传代后菌种的生长情况，如菌落形态、色素等，进行记录。

注意
观察菌种的纯度和无菌状态。

6. 储存：将传代后的菌种保存在适当的条件下，如冷冻保存或冷藏保存，以备后续使用。

7. 清理：完成菌种传代后，及时清理操作区域和工具，进行消毒处理，确保无菌状态。

以上操作规程为菌种传代的基本步骤，根据具体的实验目的和条件，还可以根据需要
进行相应的修改和调整。

菌种传代操作规程

文件 3 页附件 0 页版本 A 版生效日期年月日菌种传代操作规程制订/修订者：日期：签名：周培培日期：签名：复核者：陆莉萍日期：签名：核准者：陈锋铭分发部门：质量保证部 2份文件更换记录版本更改记录更改单编号批准人批准日期生效日期1 目的为了提高对实验用菌种的使用、管理，通过对菌种的传代、保存，从而确保其在实验中的有效性和准确性。

2 范围：无菌检验、微生物限度检查检验用菌株。

3 内容3.1传代前将购进菌种及灭菌后的营养琼脂小斜面置于室温放置30分钟，待温度平衡后再移入阳性操作室内。

3.2 换好衣服，戴好口罩、手套，用消毒水将手清洗干净。

3.3第二、三代工作菌种的制备：从超低温冰箱中取出所需的菌种冷冻管，置于35～40℃的水浴中进行解冻1分钟。

解冻后，放入生物安全柜内，用冷却后的灭菌接种环从冷冻管中取一环菌液接种于10ml灭菌营养肉汤培养基中，置于30～35℃的培养箱内18～24小时，进行增菌培养。

〔第二代〕培养后，用冷却的灭菌接种环从增菌液中沾取一环接种于相应的培养基斜面上贴上菌种标签，置于30～35℃的培养箱内18～24小时，进行培养。

确认符合后置于5℃的冰箱内保存。

使用时将培养出的斜面用5ml的灭菌生理盐水将斜面上的菌落洗下制成菌悬液使用。

〔第三代〕在第三代菌种有效期内进行第四代的接种传代。

3.4 第四、五代工作菌种的制备：从5℃的冰箱内取出第三代工作菌种，用冷却的灭菌接种环挑取1个菌落接种于相应的琼脂斜面培养基中，置于30～35℃的培养箱内培养18～24小时后，确认符合后置于5℃的冰箱内作为第四代工作菌种保存，备用。

3.5 接种操作规范3.5.1点燃酒精灯，左手握住菌种斜面，将管口靠近火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种环烧红30秒钟，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过3次。

右手用无名指、小指及掌部夹住硅胶塞，左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手再轻轻拨开硅胶塞，将接种环伸入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮取少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁。

菌种保存、传代、使用、销毁管理及操作规程【最新版】

菌种保存、传代、使用、销毁管理及操作规程菌种管理制度1、目的建立菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程，规范微生物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。

2、适用范围本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的购买、保存、传代、使用及销毁等。

3、定义标准菌株是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。

传代用菌种是指用标准菌株制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。

工作用菌种是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。

菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。

4、职责部门主管负责菌种的申购、接收、保存分发。

微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。

5、规程菌种的申购部门主管根据菌种的使用情况，提出年度购买计划(包括临时检验需要)，填写申购流程，经审批后，向中检所菌种保藏中心或省(市)药检所购买冻干菌种(标准菌株)或传代用菌种，购买时，需确定菌种的代数，以便控制传代代数。

菌种的接收菌种到达实验室后，由部门主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《标准菌株库存记录》上，内容包括:名称、数量、编号(无编号者按检定菌种的编号原则编号)、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其暂贮存于4~8℃冰箱中，在一周内必须完成转种。

菌种的保存工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。

将菌种接种在适宜的琼脂斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至4~8℃冰箱中保存。

此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。

保存时间根据菌种种类而不同，细菌:每个月转种一次;酵母菌及芽胞:3~6个月转种一次;丝状真菌每年转种一次。

菌种复苏传代操作规程

菌种复苏传代操作规程一、引言菌种复苏传代操作规程是生物实验室中非常重要的一项工作，它关系到实验的可靠性和成功率。

本文将详细介绍菌种复苏传代操作规程，包括前期准备、菌液制备、培养基制备、菌种接种、传代等步骤。

二、前期准备1.准备好所需设备：无菌培养箱、移液器、显微镜等；2.准备好所需试剂：琼脂、葡萄糖等；3.清洗设备并消毒。

三、菌液制备1.从冰箱中取出需要复苏的菌株，将其在无菌条件下解冻；2.取出一定量的琼脂加入到试管中，并加入适量的葡萄糖和其他所需成分；3.将琼脂溶液加热至沸腾，然后冷却至50℃左右；4.将解冻后的菌株用移液器吸取适量细胞悬浮液，并滴入琼脂溶液中；5.轻轻摇晃试管使得细胞均匀分布在琼脂中；6.将试管放置于无菌培养箱中，在适当的温度下进行培养。

四、培养基制备1.准备好所需试剂：琼脂、葡萄糖等；2.将琼脂加入到试管中，并加入适量的葡萄糖和其他所需成分；3.将琼脂溶液加热至沸腾，然后冷却至50℃左右；4.将制备好的菌液接种到琼脂溶液中，并轻轻摇晃使得细胞均匀分布在琼脂中；5.将试管放置于无菌培养箱中，在适当的温度下进行培养。

五、菌种接种1.准备好所需设备：无菌移液器、显微镜等；2.从前一代培养基中取出需要传代的菌株；3.用移液器吸取一定量的细胞悬浮液，并滴入新的培养基中；4.轻轻摇晃试管使得细胞均匀分布在琼脂中；5.将试管放置于无菌培养箱中，在适当的温度下进行培养。

六、传代1.在前一代培养基中进行培养，当菌落数量达到一定程度时，即可进行传代；2.从前一代培养基中取出需要传代的菌株；3.用移液器吸取一定量的细胞悬浮液，并滴入新的培养基中；4.轻轻摇晃试管使得细胞均匀分布在琼脂中；5.将试管放置于无菌培养箱中，在适当的温度下进行培养。

七、结论通过以上步骤，我们可以成功地进行菌种复苏传代操作。

在实验过程中，我们需要注意保持无菌条件，并严格按照操作规程进行操作，以确保实验结果的准确性和可靠性。

SOP-QM-8190-03菌种传代、保存、使用、销毁标准操作规程

S O P-Q M-8190-03菌种传代、保存、使用、销毁标准操作规程(共7页)-本页仅作为预览文档封面，使用时请删除本页-山东鲁西药业有限公司GMP文件题目菌种传代、保存、使用、销毁标准操作规程新订修订√文件编码编制部门质量部制定人审核人批准人制定日期年月日审核日期年月日批准日期年月日颁发部门QA办生效日期年月日分发部门质量部目的：建立检定用菌种的管理制度，规范微生物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。

范围：本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁等。

责任：QC主管负责菌种的申购、接受、保存、分发；微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。

1、定义：标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。

传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。

工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。

菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。

2、规程：检定菌的申购QC主管每年根据检定菌种的使用情况（包括临时检验需要），提出购买计划，交由质量管理部部长审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌种）或传代用菌种，菌种购买时，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制代数。

检定菌的接收菌种到达实验室后，由QC主管接收菌种，检查其名称和数量以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息填写在《检定菌接收记录》（附表1）上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其暂贮存于4-8℃冰箱中，在一周内必须完成转种。

检定菌的保存工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。

菌种传代标准操作规程

文件制修订记录1.1原则1.1.1检定用标准菌种，按照规定选购辽宁省药品检验所提供的菌种。

1.1.2应按照现行版中国药典附录传代和制备。

1.2标准菌种的制备1.2.1菌种的复苏1.2.1.1准备适宜各种菌种生长的液体培养基和培养设备及操作器具。

1.2.1.2把购入的冻干粉菌种管，灭菌后的器具、1ml吸管、双碟、营养肉汤，改良马丁培养基等移入阳性对照室中的生物安全柜中。

1.2.1.3先用砂轮将冻干粉菌种安瓶颈部上三分之一处挫出刻痕，再将冻干粉菌种管外壁用75%酒精棉擦洗消毒、稍干，放在灭菌双碟内，点燃酒精灯，用干燥的无菌纱布包裹安瓶，在火焰旁将其掰开。

放入灭菌双碟内，取一支1ml吸管，在火焰旁吸取营养肉汤（或改良马丁培养基）0.5-0.8ml，加至菌种管底部并吹打，将冻干粉菌搅动，促使溶解，制成菌悬液，随即吸出管内菌液，接种至营养肉汤（或改良马丁培养基）试管内。

并将吸管及菌种瓶，投入消毒液内。

将已接种的营养肉汤（或改良马丁培养基）试管置于30-35℃或23-28℃培养22-24h。

（为第一代）1.2.2菌种的纯度和特性确认1.2.2.1取出培养物，肉眼观察试管变浑浊。

确认有菌种生长繁殖。

1.2.2.2将上述增菌液，再进行第二次移种。

接种至3支营养琼脂（或改良马丁琼脂）斜面上，置30-35℃（或23-28℃）培养22-24h。

（为第二代）1.2.2.3取出斜面培养物，每个品种各用一支进行纯度和特性确认，仔细观察菌落形态，有无杂菌，涂片，革兰氏染色镜检，呈典型菌落后，可制成甘油冷冻管（第二代）或移种（第三代）即可应用。

如发现菌型不典型，可进行平板分离单菌落。

1.2.2.4各种典型菌落特性见附件-I1.2.3标准储备菌种甘油冷冻管的制备（第二代）1.2.3.1准备20%甘油及冷冻管和各操作用具。

1.2.3.2取经纯度确认后的第二代菌斜面，用无菌接种环轻轻刮取菌苔。

放入装有无菌纯化水的试管中，通过接种环与试管璧之间的轻轻摩擦，使细菌充分扩散到无菌蒸馏水中，调整菌液浓度，向已制备好的菌悬液中，加入等体积浓度为20%的无菌甘油，得到10%甘油菌悬液，轻轻振摇试管，使内容物充分混合，分装于无菌冷冻管中，拧紧菌种冷冻管的盖子。

菌种传代操作规程

菌种传代操作规程
《菌种传代操作规程》
一、实验室环境准备
1.1 实验室应保持干净整洁，确保操作台面无细菌污染。

1.2 实验室应配备足够的生物安全柜和消毒设备，以确保菌种操作过程的无菌性。

1.3 操作人员应穿戴实验服、手套和口罩，避免人员因素的污染。

二、菌种接种和传代
2.1 原始菌种接种时需注意避免外部污染，遵循良好的接种操作规程。

2.2 传代操作时需使用无菌培养基和器具，并在生物安全柜中进行操作，避免细菌的外源性污染。

2.3 每次传代应记录详细的操作过程和传代次数，以维护菌种的纯度和稳定性。

2.4 传代后的菌种应进行鉴定和测试，确保其遵循传代后的特性和功能。

三、菌种保管和管理
3.1 传代后的菌种应及时进行冻存或其他保藏方式，用于备份和长期保存。

3.2 菌种的标本信息应进行规范的管理和归档，确保其可追溯性和可查性。

3.3 实验室应建立完善的菌种管理制度，明确菌种的使用和处置程序，避免滥用和误用。

四、操作规程的培训和执行
4.1 实验室应对操作人员进行菌种传代操作规程的培训和考核，确保他们掌握正确的操作技能和知识。

4.2 操作人员应严格执行操作规程，避免不当的操作和污染行为，确保菌种的纯度和可靠性。

以上是关于菌种传代操作规程的基本内容，希望能够为实验室的菌种操作提供一定的参考和指导。

菌种传代操作规程

菌种传代操作规程Coca-cola standardization office【ZZ5AB-ZZSYT-ZZ2C-ZZ682T-ZZT18】G M P管理文件一、目的：为使菌种传代操作规范化、制度化，故建立此规程二、适用范围：菌种传代须按本规程执行。

三、责任者：微生物限度检查化验员，质量检测中心主任。

四、正文：1、培养基的制备按微生物限度检查用稀释剂、培养基配制操作规程及斜面配制操作规程配制好相应培养基。

大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、沙门菌、用胰酪大豆胨琼脂斜面培养基，白色念珠球菌、黑曲霉用沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基，制备好的培养基预培养48小时后，确认无菌落生长方可使用。

2.菌种传代菌种传代前应准备好适于该菌种生长的培养基和培养设备，所有操作均应在符合生物安全保护的生物安全柜内进行。

点燃酒精灯，在火焰上部操作，将原有的菌种斜面（简称菌种管）与待接种的新鲜斜面培养基（简称接种管）持在左手拇指、食指及中指之间，菌种管在前，接种管在后，使试管内斜面向上，两支试管口平齐，应斜持试管呈45°角，以免管底凝集水浸湿培养基表面。

用右手在火焰旁转动两支试管胶塞，以便接种时易于拨取。

再用右手持接种环的柄端，垂直或稍斜地把接种环在火焰上灼烧。

将接种环烧红约30s，随后将接种棒金属部分在火焰上烧灼，以彻底灭菌。

用右手的小指和手掌之间以及无名指与小指之间，在火焰旁分别拔除两支试管的胶塞，持住。

在将试管口在火焰上通过以杀灭管口的细菌，但勿烧的过热，将烧灼的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，如有溶印则表明接种环未冷却，待冷后，再从斜面上挑取少许菌苔。

取出时接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管，在斜面上由下而上划“Z”字型曲线，当接种完毕，立即将管口通过火焰灭菌，右手到火焰旁塞上胶塞，不要将管口离开火焰旁去迎接右手的胶塞。

最后将接种环烧灼灭菌放置备用。

3.培养将以上接种好的各菌管放入相应温度的培养箱内，白色念珠菌放入23-28℃培养箱内培养24-48h，黑曲霉放入23-28℃培养箱内培养5-7天，其它菌种放入30-35℃培养箱内培养18-24小时。

菌种传代操作规程

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菌种传代操作规程
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铭
陈锋
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分发部门：质量保证部 2份
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更改单编批准人管理，通过对菌种的传代、保存，从而确保其在实验中的有效性和准确性。 2 范围：
无菌检验、微生物限度检查检验用菌株。 3 内容 3.1 传代前将购进菌种及灭菌后的营养琼脂小斜面置于室温放置 30分钟，待温度平衡后再移入阳性操作室内。 3.2 换好衣服，戴好口罩、手套，用消毒水将手清洗干净。 3.3第二、三代工作菌种的制备：从超低温冰箱中取出所需的菌种冷冻管，置于35～40℃的水浴中进行解冻1分钟。解冻后，放入生物安全柜内，用冷却后的灭菌接种环从冷冻管中取一环菌液接种于10ml灭菌营养肉汤培养基中，置于 30～35℃的培养箱内18～24小时，进行增菌培养。〔第二代〕培养后，用冷却的灭菌接种环从增菌液中沾取一环接种于相应的培养基斜面上贴上菌种标签，置于30～35℃的培养箱内18～24小时，进行培养。确认符合后置于5℃的冰箱内保存。使用时将培养出的斜面用5ml的灭菌生理盐水将斜面上的菌落洗下制成菌悬液使用。〔第三代〕在第三代菌种有效期内进行第四代的接种传代。 3.4 第四、五代工作菌种的制备：
从5℃的冰箱内取出第三代工作菌种，用冷却的灭菌接种环挑取1个菌落接种于相应的琼脂斜面培养基中，置于30～35℃的培养箱内培养18～24小时后，确认符合后置于5℃的冰箱内作为第四代工作菌种保存，备用。 3.5 接种操作规范 3.5.1点燃酒精灯，左手握住菌种斜面，将管口靠近火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种环烧红30秒钟，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过3次。右手用无名指、小指及掌部夹住硅胶塞，左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手再轻轻拨开硅胶塞，将接种环伸入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮取少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁。塞上硅胶塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂小斜面一支，右手用无名指、小指及掌部夹住硅胶塞，左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手再轻轻拨开硅胶塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的底部，由低向上，将接种环轻贴斜面的表面曲折移动，使菌划在斜面的表面上。 3.5.2 取出接种环，在火焰旁将培养基管硅胶塞堵上，然后将接种过菌的接种棒在火焰上烧灼灭菌。 3.5.3 将已接种好的细菌管置30—35℃细菌培养箱培养18—24小时，霉菌管置23—28℃霉菌培养箱培养5-7日。取出后放入冰箱保存并上锁。 3.6 菌种的传代次数不得超过5代，每一菌株每次传代不超过15 支；1支作为下次传代用，其余作为检验用，每月传代一次。 3.7 传代完毕后，在每支试管上标明菌株名称、代数、序号、传代日期、有效期。 3.8 实验用菌株均来自于上海市食品药品检验所。