菌种传代标准操作规程

目的：保证微生物检定试验的正常进行。

范围：适用于本公司产品检验中需用的检定用菌种。

责任：质量检验科、菌检室。

内容

1原则

1.1检定用标准菌种。按规定使用由福州市检验所提供的菌种。

1.2应按现行版中国药典附录，传代和制备。

2.菌种的传代

2.1准备需用的培养基，标记上菌名及接种日期。

2.2接种前用1：1000新洁尔灭擦拭工作台面并用紫外光灯照射30分钟以上进行灭菌。

2.3自冰箱取出菌种斜面，应在室温放置20分钟，待其至室温。

2.4进入缓冲间换鞋、戴帽和口罩，用1：1000新洁尔灭洗手，并将培养基及菌种移入接种室。

2.5点燃酒精灯，将菌种斜面的硅胶囊塞通过火焰转动使其松动，以免接种时粘住打不开。酒精灯应放在铺有1：1000新洁尔灭布的糖瓷方盘内，接种操作应在盘上进行，以防止细菌洒出，避免污染。

2.6接种操作，左手握住菌种斜面，将管口靠近火焰旁，右手持接种棒后端，将白金耳烧红约3-6分钟，随后将全部白金丝及金属棒部份在火焰上烧灼，往返通过3次。右手用无名指、小指及掌部夹住硅胶囊，左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手再轻轻拨开硅胶囊，夹在无名指、小指及掌部间并勿使其与任何物品接触，用右手的拇指、食指、中指操作接种棒，将白金耳伸入菌种管内，先在近管壁的琼脂表面靠一下，以稍冷却，再移至菌苔上刮取少量菌苔随即取出接种棒，并使菌种试管口在火焰旁将塞堵上，然后取培养基斜面，照上法在火焰旁打开塞，将白金耳伸入管内至规定的培养基斜面的底部，由底向上，将白金耳轻贴斜面的表面曲折移动，使细菌划在斜面的表面上，注意只划动一次，切勿重复划动。

2.7取出接种棒，在火焰旁将培养基管的塞堵上，然后将接种过细菌的白金耳在火焰上烧灼灭菌，注意烧灼时，先将白金耳离粘有细菌端的白金丝烧灼至红，使其传热至白金耳，使白金耳上残留的苔烧枯焦，炭化后，才将白金耳移至火焰中直接强热烧灼至红约30分钟。2.8接种完毕后，将菌种及已接种的培养基置于试管架的同一排上，排列整齐，便于操作完毕后进行核对。

3.注意事项

3.1无芽孢的菌种可每月移种一次。

3.2每周必须检查保藏菌种的冰箱的温度、湿度、一次检查菌种管的塞是否松动，如有异常应及时处理。

3.3每次移植培养后，应与原种的编号、名称逐一核对，检查培养特征无误时，在继续保藏。

3.4凡用琼脂斜面保藏菌种时，须用连续三代的培养物对照检查。

3.5保藏细菌的培养基应无糖，其他菌类含糖应≤2%为宜，以免产酸过多，影响菌种保藏。