染色步骤

HE染色是应用最广泛的组织病理学常规染色技术。

㈠染色程序

1．石蜡切片HE染色（常规HE染色）

（1）二甲苯Ⅰ 5～10min

（2）二甲苯Ⅱ 5～10min

（3）无水乙醇Ⅰ 1～3min

（4）无水乙醇Ⅱ 1～3min

（5）95%乙醇Ⅰ 1～3min

（6）95%乙醇Ⅱ 1～3min

（7）80%乙醇 1min

（8）蒸馏水 1min

（9）苏木素液染色 5～10min

（10）流水洗去苏木素液 1min

（11）1%盐酸-乙醇 1～3s

（12）稍水洗 1～2s

（13）返蓝（用温水或1%氨水等） 5～10s

（14）流水冲洗 1～2min

（15）蒸馏水洗 1～2min

（16）0.5%伊红液染色 1～3min

（17）蒸馏水稍洗 1～2s

（18）80%乙醇 1～2s

（19）95%乙醇Ⅰ 2～3min

（20）95%乙醇Ⅱ 2～3min

（21）无水乙醇Ⅰ &, nbsp; 3～5min

（22）无水乙醇Ⅱ 3～5min

（23）石炭酸-二甲苯 3～5min

（24）二甲苯Ⅰ 3～5min

（25）二甲苯Ⅱ 3～5min

（26）二甲苯Ⅲ 3～5min

（27）中性树胶封固

注：①（12）和（13）项可省去，但（14）的冲水时间需延长至10～15min（细胞核显示更清晰）。

②（23）项可用无水乙醇代替；北方地区可省略。

2．冰冻切片HE染色

（1）冰冻切片固定 10～30s

（2）稍水洗 1～2s

（3）苏木素液染色（60℃） 30～60s

（4）流水洗去苏木素液 5～10s

（5）1%盐酸-乙醇 &n, bsp; &nbs, p; &nb, sp; 1～3s

（6）稍水洗 1～2min

（7）返蓝（用温水或1%氨水等） 5～10s

（8）流水冲洗 15～30s

（9）0.5%伊红液染色 1～2min

（10）蒸馏水稍洗 1～2min

（11）80%乙醇 1～2min

（12）95%乙醇 1～2min

（13）无水乙醇Ⅰ 1～2min

（14）无水乙醇Ⅱ 1～2min

（15）石炭酸-二甲苯 2～3min

（16）二甲苯Ⅰ 2～3min

（17）二甲苯Ⅱ 2～3min

（18）中性树胶封固

注：①（7）和（8）项可省去，但（9）的冲水时间需延长至10～15min（细胞核显示更清晰）。

②（15）项可用无水乙醇代替；北方地区可省略。

㈡染色结果：细胞核呈蓝色，细胞浆、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色。钙盐和细菌可呈蓝色或紫蓝色。

㈢染色注意事项

1．切片染色前，应彻底脱蜡。

2．用含有升汞液体固定的组织，其切片染色前应先脱去汞盐：

（1）石蜡切片脱蜡至水洗

（2）Lugol液 20min

（3）流水冲洗 5min

（4）95%乙醇 10min

（5）水洗 1min

（6）5%次亚硫酸钠水溶液 5min

（7）流水冲洗 5min

（8）显微镜观察除汞满意后，转入HE染色

3．脱除福尔马林色素（必要时）：

（1）石蜡切片脱蜡至水洗

（2）1%NaOH(1ml)与80%乙醇（99ml）混合液 10min

（3）流水冲洗 5min

（4）转入HE染色

4．严格执行HE染色流程，用显微镜控制细胞核的苏木素染色质量。HE染片应着色鲜艳，红、蓝分明，对比清晰。

5．载玻片自二甲苯中取出后，应立即用洁净、光亮的盖玻片和稠度适宜的中性树胶湿封载玻片。封盖处内无气泡，外无溢胶。封片时必须进行操作人员和局部环境的二甲苯污染防护。不应将组织切片烤干或风干后再行封片。

6．必须在载玻片的一端牢贴标签。标签上应印有病理科所在的医院名称。标签上应清楚显示有关的病理号及其亚号；标签上的病理号应准确无误，无涂改。7．制片完成后，技术人员应对切片与其相应的病理学检查记录单或取材工作记录单认真进行核对；确认无误后，将制备好的切片连同相关的活检申请单/活检记录单以及取材工作单等一并移交给有关的病理医师；交接双方经核对无误后，办理移交签字手续。

8．石蜡切片-HE染色的优良率（甲、乙级切片所占的比率）应≥85%。石蜡切片-HE染色质量的基本标准列于附表。

9．制片工作一般应在取材后2个工作日内完成（不含进行脱钙、脱脂等需要特殊处理的标本）。

10．制片过程出现意外情况时，技术室人员应及时向病理医师和科主任报告，设法予以补救。

附表常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准

优质标准满分质量缺陷减分

⒈组织切面完整，①组织稍不完整：减1～3分②不完整：减4～10分

内镜咬检、穿刺标本切面数 10 ③未达到规定面数：减5分

⒉切片薄(3～5μm)，厚薄均匀 10 ①切片厚(细胞重叠)，影响诊断：减6～10分

②厚薄不均匀：减3～5分

⒊切片无刀痕、裂隙、颤痕 10 ①有刀痕、裂隙、颤痕，尚不影响诊断：减2分

②有刀痕、裂隙、颤痕，影响诊断：减5分

⒋切片平坦，无皱褶、折叠 10 ①有皱褶或折叠，尚不影响诊断：各减2分

②有皱褶折或折叠，影响诊断：各减5分

⒌切片无污染 10 有污染：减10分

⒍无气泡（切片与载玻片间/ 10 ①有气泡：减3分

盖片与切片、载玻片间），②胶液外溢：减3分

盖片周围无胶液外溢

⒎透明度好 10 ①透明度差：减1～3分

②组织结构模糊：减5～7分

⒏细胞核与细胞浆染色对比清晰 10 ①细胞核着色灰淡或过蓝：减5分

②红(细胞浆)与蓝(细胞核)对比不清晰：减5分

⒐切片无松散，裱贴位置适当 10 ①切片松散：减5分

②切片裱贴位置不当：减5分

⒑切片整洁，①切片不整洁：减3分

标签端正粘牢，编号清晰 10 ②标签粘贴不牢：减3分

③编号不清晰：减4分

合计 100