染色步骤
革兰氏染色实验步骤
革兰氏染色一．实验流程:1、取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画一个小圈(用来大致确定菌液滴的位置)。
涂菌的部位在火焰上烤一下,除去油脂。
2、涂片：液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。
固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上,使其薄而均匀。
3、晾干：让涂片在空气中自然干燥.4、固定:让菌膜朝上，通过火焰2—3次固定（以不烫手为宜）。
5、染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min。
6、水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。
简单染色结束可观察细胞形态。
7、媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。
8、脱色：吸去残留水，连续滴加95％乙醇脱色20-30s至流出液无紫色,立即水洗。
9、复染：滴加蕃红复染3—5min，水洗.至此，革兰氏染色结束。
二．染色结果：革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。
备注：1。
革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等)、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中,金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要等病原菌.2.革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属(绿脓杆菌等)、莫拉菌属（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌属(淋球菌、脑膜炎双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾杆菌等)、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等)、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等.。
革兰氏染色原理步骤
革兰氏染色原理步骤革兰氏染色是用于细菌分类和鉴定的一种常用染色方法。
其步骤如下：1. 准备好细菌培养物。
将待染色的细菌培养物均匀涂布在玻璃片上，形成细菌涂片。
2. 固定细菌涂片。
将涂片在火焰上加热，杀死细菌并使其附着在玻璃片上。
3. 滴加革兰染色液。
将革兰染色液滴在细菌涂片表面，使其完全覆盖细菌。
4. 革兰染色液浸渍。
将细菌涂片放置在革兰染色液上，静置约1分钟，确保染色液充分浸渍细菌。
5. 温和洗涤。
用蒸馏水轻轻冲洗细菌涂片，以去除多余的革兰染色液。
6. 涂紫晶染色液。
将涂片放置在紫晶染色液上，静置约1分钟，使细菌染成紫色。
7. 温和洗涤。
用蒸馏水轻轻冲洗细菌涂片，以去除多余的紫晶染色液。
8. 加碘液。
将碘液滴在细菌涂片上，静置1分钟，使细菌形成革兰氏阳性细菌与革兰氏阴性细菌的复合物。
9. 温和洗涤。
用蒸馏水轻轻冲洗细菌涂片，以去除多余的碘液。
10. 酒精去色。
用75%乙醇溶液滴在细菌涂片上，静置10-30秒，直到溶液从细菌涂片上下滴。
11. 温和洗涤。
用蒸馏水轻轻冲洗细菌涂片，以去除多余的酒精。
12. 涂甲基蓝染色液。
将涂片放置在甲基蓝染色液上，静置30-60秒，使细菌染成蓝色。
13. 温和洗涤。
用蒸馏水轻轻冲洗细菌涂片，以去除多余的甲基蓝染色液。
14. 倒置晾干。
将细菌涂片倒置在干净的滤纸或架子上晾干。
完成上述步骤后，通过显微镜观察细菌涂片即可看到革兰氏染色的结果，革兰氏阳性细菌呈紫色，革兰氏阴性细菌呈蓝色。
细胞染色操作
细胞染色操作细胞染色是一种广泛应用于生物学研究的技术方法，通过染色剂将细胞的结构、组成以及功能等信息可视化。
细胞染色操作是进行细胞染色的关键步骤，下面将介绍细胞染色操作的基本流程和常用染色方法。
一、细胞染色操作的基本流程1. 固定：细胞染色前，需要将细胞固定在载玻片上，以保持其形态和结构。
常用的固定剂有甲醛和乙醛等，将细胞浸泡在固定剂中，使细胞膜和细胞内部结构固定。
2. 渗透：细胞固定后，需要将染色剂渗透到细胞内部，以便染色剂能够与细胞内的目标物质结合。
常用的渗透剂有甲醇、乙醇和醋酸等，将细胞浸泡在渗透剂中，使染色剂能够进入细胞内。
3. 染色：在细胞渗透后，可以选择合适的染色方法进行染色。
常见的染色方法包括荧光染色、核染色和蛋白质染色等。
荧光染色是利用荧光染料对细胞进行标记，常用的荧光染料有荧光素和荧光蛋白等。
核染色可以用来观察细胞核的形态和数量，常用的核染色剂有伊红和苏木精等。
蛋白质染色则是用来检测细胞内特定蛋白质的分布和表达水平，常用的蛋白质染色方法有免疫组织化学染色和免疫荧光染色等。
4. 洗涤：染色后，需要将细胞表面的多余染色剂洗去，以减少背景噪音的干扰。
洗涤的次数和时间可以根据具体染色方法和试剂的要求来确定。
5. 固定封片：细胞染色完成后，需要将载玻片固定在显微镜片上，以便观察和保存。
常用的固定封片剂有海藻糖溶液和透明胶等，将载玻片浸入固定封片剂中，使其固定在显微镜片上。
二、常用的细胞染色方法1. 荧光染色：荧光染色是利用荧光染料对细胞进行标记，以实现对细胞内目标物质的可视化。
常用的荧光染料有荧光素、荧光蛋白和荧光标记的抗体等。
荧光染色可以用于观察细胞内特定分子的分布和定位，例如观察细胞内的细胞器如线粒体、内质网和高尔基体等。
2. 核染色：核染色是用来观察细胞核的形态和数量。
常用的核染色剂有伊红、苏木精和荧光染料DAPI等。
核染色可以用于观察细胞核的大小、形状和染色性质，从而研究细胞的生长和增殖过程。
革兰氏染色法的步骤
革兰氏染色法的步骤革兰氏染色法的步骤革兰氏染色法是一种常用的细菌分类和鉴定方法。
它根据细菌细胞壁的结构和化学成分，将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。
下面将详细介绍革兰氏染色法的步骤。
一、准备工作1.1 器材准备首先要准备好必要的器材，包括显微镜、无菌玻璃片、无菌钢笔、灯笼或 Bunsen 灯、草酸洗涤液、碘酒、脱色剂（95% 乙醇）、甲苯或二甲苯等。
1.2 样品准备样品可以是从患者体内采集的分泌物或组织样本，也可以是实验室中培养出来的纯种菌株。
无论哪种样品，都需要进行处理以获得高质量的染片。
二、染色操作2.1 制备涂片将无菌玻璃片取出并标记，然后用无菌钢笔在玻璃片上滴上一滴水或生理盐水。
取一小部分样品，用钢笔或无菌棉签将其涂抹在涂片上，制成薄而均匀的染片。
2.2 固定细胞将涂片用灯笼或 Bunsen 灯加热，使其完全干燥。
然后将涂片固定，可以使用草酸洗涤液或甲醛等固定剂进行固定。
2.3 染色操作（1）革兰阳性菌的染色操作① 将碘酒滴在涂片上，静置 1 分钟。
② 用脱色剂（95% 乙醇）冲洗涂片，直到洗出的颜色不再变深。
③ 用甲苯或二甲苯清洗干净，并在空气中晾干。
（2）革兰阴性菌的染色操作① 将甲基红溶液滴在涂片上，静置 1 分钟。
② 用脱色剂（95% 乙醇）冲洗涂片，直到洗出的颜色不再变深。
③ 将碘酒滴在涂片上，静置 1 分钟。
④ 用脱色剂（95% 乙醇）冲洗涂片，直到洗出的颜色不再变深。
⑤ 用甲苯或二甲苯清洗干净，并在空气中晾干。
三、观察和解释结果使用显微镜观察染色后的涂片。
革兰阳性菌会呈现紫色或暗紫色，而革兰阴性菌则会呈现红色或粉红色。
根据细菌的染色结果，可以推断出其细胞壁的结构和化学成分，进而进行分类和鉴定。
总结革兰氏染色法是一种简单而可靠的细菌分类和鉴定方法。
其步骤包括制备涂片、固定细胞、染色操作以及观察和解释结果。
通过这种方法，可以将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌，并推断出其细胞壁的结构和化学成分，为临床诊断和治疗提供重要参考依据。
革兰氏染色步骤6则
革兰氏染色步骤6则以下是网友分享的关于革兰氏染色步骤的资料6篇，希望对您有所帮助，就爱阅读感谢您的支持。
革兰氏染色步骤（1）革兰氏染色步骤步骤革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：1、涂片固定。
2、草酸铵结晶紫染1分钟。
3、自来水冲洗。
4、加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5、水洗，用吸水纸吸去水分。
6、加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7、蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。
干燥，镜检。
染色后，革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。
细菌分类：革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要等病原菌革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆菌等）、莫拉菌属（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等。
革兰氏染色法的步骤（2）详细阐叙革兰氏染色法的步骤浏览次数：174次悬赏分：0 | 解决时间：2011-5-25 17:44 |提问者：肖箫2011shaw最佳答案革兰氏染色一、目的：在细胞发放之前，利用标准的革兰氏染色法对即将发放的细胞悬液进行检测，判断细胞悬液中是否含有革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。
二、原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
羊毛织物染色的工艺流程
羊毛织物染色的工艺流程羊毛织物染色的工艺流程分为预处理、染色和后处理三个阶段。
下面将分别介绍每个阶段的具体步骤。
1.预处理阶段：在羊毛织物染色之前，首先需要对其进行预处理，以去除污渍、松弛纤维，使纺织品具备更好的染色条件。
（1）脱脂：将羊毛织物浸入碱性溶液中，去除其中的脂肪和油脂，通常使用碱性洗涤剂。
同时，这一步也可以去除部分污渍。
（2）除杂：使用金属棉或其他方法，将羊毛织物表面的杂质、灰尘等物质去除。
（3）预处理剂处理：根据需求，选择相应的预处理剂进行处理。
例如，使用碱性溶液进行碱处理，使纤维更柔软，便于染料渗透。
使用还原剂去除羊毛表面的氧化物等。
2.染色阶段：预处理完成后，开始羊毛织物的染色过程。
染色阶段是整个染色工艺的核心部分。
（1）染料配制：根据染色要求，选择合适的染料，并将其与染料助剂混合。
染料助剂可以提高染料的溶解度和附着性，使染色更加均匀。
（2）染色过程：将混合好的染料浸入羊毛织物中，一般采用浸染或者细鼓染等染色方式。
染色时间、温度和染料浓度等因素需要根据染色要求进行调控。
（3）上色速率控制：这一步是根据染色要求，调整染料的上色速率。
通过控制浸染时间和温度，使染料在纤维内有效地分散和吸附，达到所需要的颜色深浅。
3.后处理阶段：染色完成后，需要进行后处理以固定染色效果，并使染料与纤维更好地结合。
（1）漂洗：将染色后的羊毛织物进行漂洗，使用中性水洗剂，以去除剩余的染料和染料助剂。
（2）酸洗：使用酸性洗涤剂浸泡，使得染料分子和纤维分子发生反应，加强染料和纤维的结合力。
（3）定型：将羊毛织物加热定型，一般在100-120摄氏度范围内进行，以确定染色效果。
定型过程中，纤维表面温度较高，使纤维表面融化，染料分子更容易渗透到纤维内。
（4）洗涤：将定型后的羊毛织物进行洗涤，去除定型过程中产生的杂质和残留物，使染色后织物达到良好的外观和触感。
综上所述，羊毛织物染色的工艺流程包括预处理、染色和后处理三个阶段。
实验常用的染色方法
实验常用的染色方法实验常用的染色方法有很多种，下面我将介绍一些常见的染色方法，并附上使用步骤和注意事项。
希望对您有所帮助。
1. 费托染色法费托染色法是一种常用的染色方法，适用于奥林匹克焦磷酸胶原的标本染色。
具体步骤如下：1）将标本放在载玻片上，用甘油将样品漂浮于载玻片表面。
2）将标本置于75%的乙醇中浸泡1分钟，使细胞固定。
3）用氧化锇酸染液浸泡标本1-3分钟，然后将标本漂洗干净。
4）用甘油将标本封闭，并固定封片。
注意事项：- 费托染色法需要使用甘油和乙醇等试剂，请注意安全操作。
- 染液的浓度和时间可以根据样品特性进行调整。
2. 伊氏染色法伊氏染色法是一种常用的细胞和组织染色方法，常用于裂殖原细胞的观察。
具体步骤如下：1）将样品放在载玻片上，并用乙醇固定细胞或组织。
2）将标本漂浸于伊氏染色剂中，染色时间根据需要来确定。
3）用纯水洗涤标本，以去除多余的染色剂。
4）用甘油来固定封片。
注意事项：- 伊氏染色法在染色剂的选择和染色时间上需要一定的经验。
- 染过的载玻片应妥善保存，在显微镜下观察时要注意避免破坏样品。
3. 傅氏染色法傅氏染色法是一种常用的DNA染色方法，常用于荧光显微镜下观察细胞或组织中的DNA。
具体步骤如下：1）将样品固定在载玻片上，并用沙漏酸进行固定。
2）用荧光染料傅氏染料与标本进行染色。
3）用缓冲液洗涤标本，以去除多余的染料。
注意事项：- 傅氏染色法中染料的选择要根据需要进行，不同荧光染料对应不同颜色的发光。
- 染色时间和染料浓度对结果有影响，可以进行优化。
总结：以上是一些常见的实验染色方法，但还有其他多种染色方法，例如格里姆染色法、吉姆萨染色法等。
每种染色方法都有其适用的样本和特点，根据实验需要进行选择。
在进行染色实验时，要注意安全操作和实验条件的控制，以确保实验结果的准确性和可靠性。
染色方法的选择和优化对于正确解读实验结果和实现研究目标具有重要意义。
几种常用的染色方法
几种常用的染色方法染色是一种常见的化学处理技术，用于给纺织品、皮革、纸张等材料上色。
通过染色可以改变材料的颜色、增加美观性，并且可以单一或多种颜色的组合来满足各种需求。
下面将介绍几种常用的染色方法。
1.浸染法浸染是最常见的染色方法之一，通常用于染色液体量较大的纺织品。
该方法的步骤是：首先，将待染物料完全浸泡在染色液中，确保液体包裹所有的纤维。
然后，通过加热、搅拌等方法促进染料与纤维的充分接触，达到染色效果。
浸染法适用于各种纱线、织物、纤维等材料，染色效果饱满、均匀。
2.悬浮染色法悬浮染色法是使用悬浮液悬浮颜料颗粒，并通过材料的吸附和沉积来完成染色过程。
首先将颜料颗粒悬浮在水或其他溶剂中，形成颜料悬浮液。
然后将待染材料浸泡在悬浮液中，染色液通过材料表面的吸附和微细孔隙的滞留，使颜料颗粒沉积在材料上。
该方法适用于皮革、纸张等材料的染色，染色效果均匀，且能够实现多种颜色的组合。
3.组合染色法组合染色法是将不同颜色的染料分别染色在不同的区域，形成花纹或图案。
这种染色方法通常需要在染色过程中控制染料的扩散和固定，以确保颜色不相互渗透或混合。
组合染色法适用于织物、纺织品等材料，可以实现各种各样的花纹效果，可以按照设计师的要求进行自由创作。
4.印花法印花法是使用特制的印花模板将染料印在材料上，形成花纹或图案。
首先，将染料印在模板上，再将模板和材料相互接触，通过压力或其他方法使染料转移到材料表面。
印花法适用于各种纺织品、皮革等材料的染色，染色效果清晰、鲜艳，能够实现复杂的花纹。
5.气相染色法气相染色法是一种将染料以气态的方式转移到材料表面的染色方法。
首先，将染料在特定条件下加热并转变为气体，然后将待染材料置于染色室中，通过材料的孔隙和吸附等作用将染料从气体中吸附到材料上。
气相染色法适用于纤维、薄膜等材料的染色，具有染色均匀，颜色鲜艳的优点。
以上是几种常见的染色方法，每一种方法都有自己的特点和适用范围。
在选择染色方法时，需要根据材料的特性、染色效果的要求以及工艺的条件来进行合理选择。
简述瑞氏染色法的步骤
简述瑞氏染色法的步骤
瑞氏染色法是一种常用的染色技术，可以用于细胞和组织的染色。
它
是由丹麦科学家汉斯·克里斯蒂安·瑞氏于1884年首次提出的。
该方法
通过使用甲苯和乙醇的混合物处理样本，然后用胰蛋白酶去除细胞膜上的
脂肪，最后用甲苯溶液进行染色，以显示细胞的核和胞质细胞器。
具体步
骤如下：
1.处理样本：首先，将待染色的细胞或组织样本置于甲苯中，以去除
样本中的脂肪。
2.脱水：将样本放入一系列乙醇浓度不断增加的溶液中，以脱水样本。
这一步骤有助于防止样本的脂肪重新进入细胞。
3.清洗：用清洁的甲醇或二甲苯清洗样本。
这一步骤有助于去除残留
的脂肪和乙醇。
4.染色：将样本放入瑞氏染色剂中。
瑞氏染色剂是一种由甲苯、酸性
染料（如酸性果胶酸和酸性红G）和邻苯二甲酸二丁酯组成的溶液。
该溶
液可以染色细胞核和胞质细胞器。
5.清洗：将样本从染色剂中取出，用甲醇或二甲苯轻轻洗涤，以去除
多余染料。
6.干燥：用空气吹干样本或者放置在加热器中干燥。
7.盖片：将样本置于玻璃盖片上，加入合适的封片剂（如硬脂酸树脂），然后覆盖另一块盖片。
8.固定：将盖片置于120°C的烘箱中固定，使其更加耐久。
使用瑞氏染色法可以染色细胞核为蓝色或紫色，并使胞质细胞器以深红色或橙色显现。
这种染色方法在生物学、医学和组织学等领域被广泛使用，它可以帮助研究人员观察细胞和组织的结构与功能，提供有关细胞和组织的信息。
简单染色法的原理和步骤
简单染色法的原理和步骤
简单染色法，听起来好像很复杂，但其实挺简单的。
就是给细
菌涂点颜色，让它们在显微镜下显形。
嗯，就这么回事！
要涂颜色，首先得有个“画板”，对吧？那个“画板”就是我
们的玻片。
用接种环挑点细菌，涂得薄薄的，就像画画一样。
然后，等着它自然晾干，或者稍微加热一下，让细菌黏在玻片上。
接下来，就是上色时间了！用结晶紫或者石炭酸复红，随便你选。
把染料涂上去，等个一两分钟，细菌就染上颜色了。
然后，就是冲洗。
用自来水轻轻地洗，直到流下来的水不再有
染料颜色。
注意啊，水流别太猛，别把细菌都冲跑了！
最后，晾干。
可以用吹风机，也可以自然晾干。
等干了以后，
就可以放在显微镜下看了。
看，简单染色法就这么回事！给细菌涂点颜色，让它们显形。
这就是微生物世界的小秘密！。
染布的方法和步骤
染布的方法和步骤
染色原则：由浅入深，只能由浅色向深色染，比如粉红染大红，反过来是基本染不上去的。
棉料最好，染色效果最好的是棉质衣物，如T恤，牛仔裤等，各种带纶字的面料基本是染不了的。
全体染色，染色的工艺决定花色衣服基本不能染，染了就变成1个颜色了，但是印花的花纹不会被染上，如T恤上的那种像软皮一样的花纹。
准备：各色染色粉，匀染剂，食盐，固色剂，大脸盆（瓷的那种），木棍
步骤：
1.先调出需要的颜色，如绿色需用正黄+正蓝，也有直接绿色的卖。
调完用个布条试一下颜色，满意了再用。
2.大脸盆放在电磁炉或煤气灶上放水烧开，水的量以淹没衣服为准。
3.加入染色粉，匀染剂，1：1的比例。
再放食盐（5倍染色粉）。
用木棍使劲搅均匀了。
4.衣物先洗干净甩干就带点湿放到盆里，一定要抖散了，不要窝在一起。
然后煮差不多半小时，期间每5分钟把衣服搅一搅。
5.捞出衣服漂洗几次，到基本无掉色。
6.固色剂约20克用60°以上的热水化开，把漂洗后的衣服放进去浸泡半小时，10分钟左右翻一下。
7.捞出来洗到水完全没颜色了甩干晾起来就好了。
革兰氏染色步骤
革兰氏染色步骤引言：革兰氏染色是一种常用的细菌染色技术，由丹麦细菌学家Hans Christian Gram于1884年发明。
该技术以细菌细胞壁结构的不同为基础，将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰氏染色的步骤简单易行，适用范围广泛，被广泛应用于医学、生物学等领域的细菌鉴定工作中。
本文将对革兰氏染色的步骤进行详细介绍，以帮助读者更好地了解和掌握革兰氏染色技术。
一、准备工作1.1 试剂准备进行革兰氏染色需要的试剂主要包括：革兰碘液、革兰洗涤液、乙醇和碱性紫。
1.2 样品处理将待染菌株铺在平板上，选择好光洁的玻璃片，取少量样品用针头将菌液均匀涂布在玻璃片上。
待菌落完全干燥后，即可开始染色。
二、革兰氏染色步骤2.1 固定将涂布好菌液的玻璃片朝上放置在架子上，使用银夹将玻璃片固定住。
将固定好的玻璃片在灯火或火焰中加热，直至菌液完全干燥。
此步骤的主要目的是固定菌液，使其不易脱落。
2.2 革兰碘液染色将固定好的玻璃片放入容器中，加入足量的革兰碘液，浸泡5-10分钟。
革兰碘液的作用是增强染色效果，使细菌细胞壁紧密结合革兰紫染料。
2.3 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。
这一步是为了去除多余的碘液。
2.4 乙醇洗涤将固定好的玻璃片放入容器中，加入适量的95%乙醇，浸泡20-30秒。
乙醇的作用是洗去革兰紫颜料。
2.5 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。
这一步是为了去除多余的乙醇。
2.6 碱性紫染色将固定好的玻璃片放入容器中，加入适量的碱性紫，浸泡30-60秒。
碱性紫的作用是染色细菌细胞。
2.7 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。
2.8 水分干燥将玻璃片放置在架子上晾干或用纸巾轻轻吹干。
确保玻璃片完全干燥后，即可进行观察和分析。
三、结果观察和分析革兰氏染色后，观察玻璃片上的细菌染色情况。
革兰阳性菌一般呈紫色或深紫色，革兰阴性菌一般呈粉红色。
通过观察颜色的不同，可以初步判断细菌的分类，并进一步进行鉴定和分析。
需要注意的是，革兰氏染色技术在细菌鉴定中是一种初步的判断方法，对于一些特殊的细菌，染色结果可能会有一定的误差。
油红染色大体步骤
油红染色大体步骤
油红染色是一种用于观察组织或细胞内脂质分布的经典染色方法，主要用于病理学研究和脂肪含量检测。
以下是大体上进行油红O染色的一般步骤：
1. 取材与固定：
取得新鲜或固定的组织样本，如果样本为新鲜组织，可以选择冷冻保存或固定在10%福尔马林等固定液中，固定时间通常为数小时至过夜。
2. 组织处理：
对于冷冻组织，需先进行冰冻切片，厚度通常为6~10μm。
对于固定组织，切片后可选择不做脱蜡或进行脱蜡处理，取决于组织是否包埋在石蜡中。
3. 预处理：
切片用PBS缓冲液冲洗，去除多余的固定液或石蜡。
根据不同实验室和研究目的，切片可能需要进行复水、脱蜡、水化等步骤。
用60%异丙醇或其它醇类溶液浸泡一段时间（如5分钟），目的是封闭非脂质区域，促进脂质区域的染色。
4. 油红O染色：
将预处理后的切片放入油红O染液（通常为0.5%油红O
溶液，溶解在酒精或醇水混合液中）中避光染色，时间为1 0~60分钟，染色时间可根据实验需要调整。
染色过程中，油红O会与脂质结合，使脂质区域呈红色。
5. 分化与清洗：
染色结束后，用75%或更高浓度的乙醇或异丙醇进行分化，以去除非特异性吸附的染料。
再用蒸馏水或PBS缓冲液充分清洗切片，去除残留的分化液和未结合的染料。
6. 复染与封片：
如需要区分细胞核，可以进行苏木素等核染料的复染。
最后，切片用中性树脂或甘油等介质进行封片。
7. 观察与拍照：
在显微镜下观察染色结果，并使用显微摄影设备拍摄图片记录。
请注意，不同的实验室可能会有一些细节上的差异，因此在实际操作时应参考具体的实验规程或试剂盒说明书。
革兰氏染色步骤
革兰氏染色步骤
革兰氏染色法，是细菌学中广泛使用的一种重要的鉴别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的染色法，其主要步骤如下：
（1）制片
取活跃生长期的菌种培养物常规涂片、干燥、固定。
涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性；火焰固定不宜过热（以玻片不烫手为宜）。
（2）初染
滴加结晶紫（以刚好将菌膜覆盖为宜）染色1-2min，水洗。
（3）媒染
用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1min，水洗。
（4）脱色
用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，加入95%的乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗。
脱色时间一般为20-30s。
（5）复染：
用番红液复染约2min，水洗。
（6）镜检：
干燥后，用油镜观察。
菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌，被染成红色的为革兰氏阴性菌。
化学染色的原理和步骤
化学染色的原理和步骤
化学染色是一种常用的染色技术，通过化学反应使被染物质与染料结合，达到染色的目的。
其原理是染料分子与被染物质分子之间的化学相互作用。
化学染色的步骤一般包括以下几个步骤：
1.固定：将待染物质固定在载玻片上，常用的固定方法有热固定、乙醇固定和甲醛固定等。
2.脱水：将固定的样品通过一系列浓度逐渐增加的乙醇溶液，使样品中的水分逐渐被乙醇取代，最终脱水至无水状态。
3.透明化：将脱水的样品通过一系列浓度逐渐增加的透明剂（如二甲苯、苯酚等）溶液，使样品透明。
4.染色：将透明的样品浸泡在染料溶液中，染料分子与样品中的目标物质发生化学反应，形成染色产物。
5.洗涤：将染色后的样品用适当的缓冲溶液或去离子水进行洗涤，去除多余的染料和杂质。
6.脱水：将洗涤后的样品通过一系列浓度逐渐减少的乙醇溶液，使样品中的透明
剂逐渐被乙醇取代。
7.透明化：将脱水后的样品通过一系列浓度逐渐减少的透明剂溶液，使样品恢复透明。
8.封片：将处理好的样品覆盖一层封片剂，并用玻片覆盖，以保护样品并固定在载玻片上。
以上是一般化学染色的步骤，不同染色方法可能会有一些差异。
此外，染色的具体条件（如染料种类、染色时间、温度等）也会根据样品的不同而有所变化。
常用细菌染色方法
常用细菌染色方法常用的细菌染色方法主要包括革兰氏染色法、培养基染色法、酸碱快速染色法和特殊染色法等。
下面将对这些方法进行详细阐述。
1. 革兰氏染色法：革兰氏染色法是最常用的细菌染色方法之一。
革兰氏染色分为四个步骤：固定、染色、洗涤和显色。
首先，用热炙或炉火将菌液固定在载片上。
然后，将菌液投入到革兰染色液中，革兰染色液包括紫罗兰晶体染液和碘溶液。
之后，用乙醇洗涤，去除多余的染色液。
最后，用苏木精染液进行显色，细菌会变成紫色，而波尔多红会成为背景颜色。
通过这种染色方法，我们可以根据细菌的染色结果将其分为革兰阳性和革兰阴性。
革兰阳性菌会显色为紫色，革兰阴性菌则在淡粉红色或红色。
2. 培养基染色法：培养基染色法是一种将细菌培养在含有染料的培养基上的染色方法。
这种方法的优点是可以通过直接观察培养基的颜色来判断细菌的类型，而不需要进行染色操作。
通常会根据菌落形状、大小和颜色等特征来判断不同菌种。
例如，大肠杆菌产生灰绿色的金属光泽菌落，金黄色葡萄球菌产生金黄色菌落等。
这种方法简便易行，通常用于常规实验室工作中。
3. 酸碱快速染色法：酸碱快速染色法又称为朗斯快速染色法，是一种通过酸碱反应来进行细菌分类的染色方法。
根据细菌细胞壁的化学成分，结合酸碱染色原理，可以将细菌分为两类，即酸染菌和碱染菌。
酸染菌在酸性条件下显色，呈现出红色或粉红色，碱染菌在碱性条件下显色，呈现出蓝色、紫色或黑色。
这种方法被广泛应用于快速分类细菌，特别是在細菌在临床应用方面有重要意义。
4. 特殊染色法：特殊染色法包括Ziehl-Neelsen染色、抗酸杆菌染色、吉姆萨染色、印度墨染色等。
这些染色方法主要用于检测一些特殊类型的细菌，如结核杆菌、抗酸杆菌等。
其中，Ziehl-Neelsen染色是一种用来检测酸快杆菌的染色方法，通过使用染色剂将细菌显色为红色，而其他细菌则显色为蓝色。
这种方法可以帮助医生诊断和治疗结核病。
细菌染色方法的选择取决于实验目的和需要。
各个染色具体步骤终极版
Hematoxylin-Eosin stains1 脱蜡至水（30min）→流水冲洗2 苏木精染核20min左右→流水冲洗→镜观3 盐酸酒精分化10—15s→流水冲洗4 弱氨水返蓝10—15s→流水冲洗5 伊红染色20min左右→流水冲洗6 系列酒精脱水7 二甲苯I、II分别透明10min左右8 树胶封固结果：细胞核呈紫蓝色，细胞浆、基底膜、胶原纤维、肌纤维成粉红色，可观察细胞的种类和数量。
HE染色可充分显示肾小球的细胞增生，但不能区分内皮细胞、系膜细胞和上皮细胞的种类。
可显示中性多核和嗜酸性粒细胞浸润。
由于上皮细胞的被覆，肾小球基底膜呈略厚的假象。
苏木素小体呈淡紫红色。
纤维素样坏死呈深粉红色。
碎核呈深蓝色细胞核碎片。
微血栓呈粉色。
HE染色可以很好的显示肾小管上皮细胞的损伤和肾间质水肿以及炎细胞浸润。
Periodic acid-Schiff reaction1 脱蜡至水→流水冲洗2 1%过碘酸溶液10min→流水冲洗→吹干3 雪夫试剂37度孵浴→镜观→流水冲洗4 苏木精染核5min→流水冲洗5 盐酸酒精分化10—15s→流水冲洗6 弱氨水返蓝10—15s→流水冲洗7 系列酒精脱水8 二甲苯I、II分别透明10min左右9 树胶封固结果：细胞核呈蓝色，肾小球和肾小管基底膜、细胞浆、肾小球系膜基质、胶原纤维和肌纤维等呈红色。
PAS与HE染色一样可显示肾小球内的细胞增生和浸润，因其可很好的显示基底膜，可依细胞的位置区分内皮细胞、系膜细胞和上皮细胞。
尚可观察基底膜是否增厚、皱缩和毛细血管塌陷。
可观察肾小囊和肾小管基底膜是否增厚。
尚可观察肾小球硬化、系膜基质增生、系膜溶解。
PAS阳性的蛋白滴可见于蛋白尿患者的肾小球和肾小管上皮细胞浆内。
可显示细动脉硬化时的玻璃样变。
细胞性排异反应的肾小管炎在PAS染色中也可很好显示。
注意：第四步染色时间过长容易，颜色过深不容易分辨，所以一定要把握时间！！！PAsM染色（六胺银套马松三色混合染色）1 脱蜡至水→流水冲洗2 1%过碘酸溶液10min→流水冲洗3 六胺银溶液65度1h→镜观（注：如果六胺银溶液染色过深就要用氯化金分化）4 3%硫代硫酸钠定影→水洗5 苏木精染核20min左右→流水冲洗6 盐酸酒精分化10—15s→流水冲洗7 弱氨水返蓝10—15s→流水冲洗8 Masson染色：①Masson溶液染色1min左右→1%冰醋酸洗→镜观②亮绿橘黄剂溶液染色10S左右→1%冰醋酸洗9 高浓度系列酒精脱水10 二甲苯I、II分别透明10min左右11 树胶封固结果：基底膜、网状纤维和IV型胶原呈黑色，细胞核呈蓝黑色，背景呈粉红色，免疫复合物呈红色，III型胶原呈蓝色或者绿色。
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HE染色是应用最广泛的组织病理学常规染色技术。
㈠染色程序1．石蜡切片HE染色（常规HE染色）（1）二甲苯Ⅰ 5～10min（2）二甲苯Ⅱ 5～10min（3）无水乙醇Ⅰ 1～3min（4）无水乙醇Ⅱ 1～3min（5）95%乙醇Ⅰ 1～3min（6）95%乙醇Ⅱ 1～3min（7）80%乙醇 1min（8）蒸馏水 1min（9）苏木素液染色 5～10min（10）流水洗去苏木素液 1min（11）1%盐酸-乙醇 1～3s（12）稍水洗 1～2s（13）返蓝（用温水或1%氨水等） 5～10s（14）流水冲洗 1～2min（15）蒸馏水洗 1～2min（16）0.5%伊红液染色 1～3min（17）蒸馏水稍洗 1～2s（18）80%乙醇 1～2s（19）95%乙醇Ⅰ 2～3min（20）95%乙醇Ⅱ 2～3min（21）无水乙醇Ⅰ &, nbsp; 3～5min（22）无水乙醇Ⅱ 3～5min（23）石炭酸-二甲苯 3～5min（24）二甲苯Ⅰ 3～5min（25）二甲苯Ⅱ 3～5min（26）二甲苯Ⅲ 3～5min（27）中性树胶封固注：①（12）和（13）项可省去，但（14）的冲水时间需延长至10～15min（细胞核显示更清晰）。
②（23）项可用无水乙醇代替；北方地区可省略。
2．冰冻切片HE染色（1）冰冻切片固定 10～30s（2）稍水洗 1～2s（3）苏木素液染色（60℃） 30～60s（4）流水洗去苏木素液 5～10s（5）1%盐酸-乙醇 &n, bsp; &nbs, p; &nb, sp; 1～3s（6）稍水洗 1～2min（7）返蓝（用温水或1%氨水等） 5～10s（8）流水冲洗 15～30s（9）0.5%伊红液染色 1～2min（10）蒸馏水稍洗 1～2min（11）80%乙醇 1～2min（12）95%乙醇 1～2min（13）无水乙醇Ⅰ 1～2min（14）无水乙醇Ⅱ 1～2min（15）石炭酸-二甲苯 2～3min（16）二甲苯Ⅰ 2～3min（17）二甲苯Ⅱ 2～3min（18）中性树胶封固注：①（7）和（8）项可省去，但（9）的冲水时间需延长至10～15min（细胞核显示更清晰）。
②（15）项可用无水乙醇代替；北方地区可省略。
㈡染色结果：细胞核呈蓝色，细胞浆、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色。
钙盐和细菌可呈蓝色或紫蓝色。
㈢染色注意事项1．切片染色前，应彻底脱蜡。
2．用含有升汞液体固定的组织，其切片染色前应先脱去汞盐：（1）石蜡切片脱蜡至水洗（2）Lugol液 20min（3）流水冲洗 5min（4）95%乙醇 10min（5）水洗 1min（6）5%次亚硫酸钠水溶液 5min（7）流水冲洗 5min（8）显微镜观察除汞满意后，转入HE染色3．脱除福尔马林色素（必要时）：（1）石蜡切片脱蜡至水洗（2）1%NaOH(1ml)与80%乙醇（99ml）混合液 10min（3）流水冲洗 5min（4）转入HE染色4．严格执行HE染色流程，用显微镜控制细胞核的苏木素染色质量。
HE染片应着色鲜艳，红、蓝分明，对比清晰。
5．载玻片自二甲苯中取出后，应立即用洁净、光亮的盖玻片和稠度适宜的中性树胶湿封载玻片。
封盖处内无气泡，外无溢胶。
封片时必须进行操作人员和局部环境的二甲苯污染防护。
不应将组织切片烤干或风干后再行封片。
6．必须在载玻片的一端牢贴标签。
标签上应印有病理科所在的医院名称。
标签上应清楚显示有关的病理号及其亚号；标签上的病理号应准确无误，无涂改。
7．制片完成后，技术人员应对切片与其相应的病理学检查记录单或取材工作记录单认真进行核对；确认无误后，将制备好的切片连同相关的活检申请单/活检记录单以及取材工作单等一并移交给有关的病理医师；交接双方经核对无误后，办理移交签字手续。
8．石蜡切片-HE染色的优良率（甲、乙级切片所占的比率）应≥85%。
石蜡切片-HE染色质量的基本标准列于附表。
9．制片工作一般应在取材后2个工作日内完成（不含进行脱钙、脱脂等需要特殊处理的标本）。
10．制片过程出现意外情况时，技术室人员应及时向病理医师和科主任报告，设法予以补救。
附表常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准优质标准满分质量缺陷减分⒈组织切面完整，①组织稍不完整：减1～3分②不完整：减4～10分内镜咬检、穿刺标本切面数 10 ③未达到规定面数：减5分⒉切片薄(3～5μm)，厚薄均匀 10 ①切片厚(细胞重叠)，影响诊断：减6～10分②厚薄不均匀：减3～5分⒊切片无刀痕、裂隙、颤痕 10 ①有刀痕、裂隙、颤痕，尚不影响诊断：减2分②有刀痕、裂隙、颤痕，影响诊断：减5分⒋切片平坦，无皱褶、折叠 10 ①有皱褶或折叠，尚不影响诊断：各减2分②有皱褶折或折叠，影响诊断：各减5分⒌切片无污染 10 有污染：减10分⒍无气泡（切片与载玻片间/ 10 ①有气泡：减3分盖片与切片、载玻片间），②胶液外溢：减3分盖片周围无胶液外溢⒎透明度好 10 ①透明度差：减1～3分②组织结构模糊：减5～7分⒏细胞核与细胞浆染色对比清晰 10 ①细胞核着色灰淡或过蓝：减5分②红(细胞浆)与蓝(细胞核)对比不清晰：减5分⒐切片无松散，裱贴位置适当 10 ①切片松散：减5分②切片裱贴位置不当：减5分⒑切片整洁，①切片不整洁：减3分标签端正粘牢，编号清晰 10 ②标签粘贴不牢：减3分③编号不清晰：减4分合计 100切片质量分级标准：①甲级片：≥90分（优）②乙级片：75～89分（良）③丙级片：60～74分（基本合格）④丁级片：≤59分（不合格）㈣HE染色试剂的配制1．苏木素染液（1）Harri苏木素染液苏木素 1g无水乙醇 10ml硫酸铝钾 20g蒸馏水 200ml氧化汞 0.5g冰醋酸 8ml先用无水乙醇溶解苏木素，用蒸馏水加热溶解硫酸铝钾；然后将该两液合并煮沸，加入氧化汞，继续加热和搅拌溶液至深紫色，随即用冰水冷却，恢复至室温后过滤备用。
使用前加入冰醋酸并混匀、过滤。
（2）Gill改良苏木素液苏木素 2g无水乙醇 250ml硫酸铝钾 17g蒸馏水 750ml碘酸钠 0.2g冰醋酸 20ml先用无水乙醇溶解苏木素，用蒸馏水溶解硫酸铝钾；然后将该两液混合，再依次加入碘酸钠和冰醋酸。
使用前过滤。
（3）Mayer改良苏木素液A液：苏木素 2g无水乙醇 40mlB液：硫酸铝钾 100g蒸馏水 600ml将苏木素溶于无水乙醇中（A液）；稍加热，使硫酸铝钾溶于蒸馏水中（B液）。
将A液与B液混合后煮沸2min，再用蒸馏水补足至600 ml，加入400mg碘化钠充分混匀。
染液呈紫红色。
2. 盐酸－乙醇分化液浓盐酸 1 ml70%乙醇 99 ml3．伊红液（1）0.25～0.5%伊红Y水溶液伊红Y 0.25～0.5 g蒸馏水 100 ml冰醋酸 1滴（2）0.5%伊红Y-氯化钙水溶液伊红Y 0.5 g蒸馏水 100 ml无水氯化钙 0.5 g（3）0.25～0.5%伊红Y-乙醇溶液。
伊红Y 0.25~0.5 g80%乙醇 100 ml4．石炭酸-二甲苯混合液石炭酸 1份二甲苯 3份石蜡组织切片的HE染色1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，4μm切片。
2．切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸馏水洗2min。
3．苏木素染色5min，自来水冲洗。
4．盐酸乙醇分化30s（提插数下）。
5．自来水浸泡15min或温水（约50℃）5min。
6．置伊红液2min。
7．常规脱水，透明，封片：95％乙醇（I）min→95％乙醇（Ⅱ）1min→100％乙醇（I）1min→100％乙醇（Ⅱ）1min→二甲苯石碳酸（3：1）1min→二甲苯（I）1min→二甲苯（Ⅱ）1min→中性树脂封固。
免疫组化操作规程（一）、仪器设备1）18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉；2）水浴锅（二）、试剂1）PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L。
2）0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸0.4g。
3）0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L NaOH调至pH8.0,加水至1000ml。
4）1mol/L的TBS缓冲液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl调至pH8.0,加水至1000ml。
5）酶消化液： a、0.1%胰蛋白酶液：用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制。
b、0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配制。
6）3%甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。
7）封裱剂：a、甘油和0.5mmol/L碳酸盐缓冲液（pH9.0～9.5）等量混合；b、油和TBS(或PBS)配制。
8）TBS/PBS pH9.0～9.5，适用于荧光显微镜标本；pH7.0～7.4适合于光学显微镜标本。
（三）、操作流程1、脱蜡和水化脱蜡前，应将组织芯片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟。
1）组织芯片置于二甲苯中浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡10分钟；2）无水乙醇中浸泡5分钟；3）95%乙醇中浸泡5分钟；4）70%乙醇中浸泡5分钟；2、抗原修复用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片。
1）抗原热修复（1）高压热修复在沸水中加入EDTA（pH8.0）或0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）。
盖上不锈钢高压锅的盖子，但不进行锁定。
将玻片置于金属染色架上，缓慢加压，使玻片在缓冲液中浸泡5分钟，然后将盖子锁定，小阀门将会升起来。
10分钟后，去除热源，置入凉水中，当小阀门沉下去后打开盖子。
本方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。
（2）煮沸热修复电炉或者水浴锅加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）至95℃左右，放入组织芯片加热10~15分钟。
（3）微波热修复在微波炉里加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）至沸腾后将组织芯片放入，断电，间隔5~10分钟，反复1-2次。
适用的抗原有：AR，Bax，Bcl-2，C-fos，X-jun，C-kit，C-myc，E-cadherin，Chromogranin A，Cyclin，ER，Heat shock protein，HPV，Ki-67，MDMZ，p53，p34，p16，p15，P-glycoprotein，PKC，PR，PCNA，ras，Rb，TopoismeraseⅡ等。