生化制品技术实验指导教学内容
生化实验指导
实验1 氨基酸纸层析一、实验目的通过对氨基酸的分离和鉴定，掌握纸层析的基本原理及操作方法。
二、实验原理层析法又称色谱法。
是一项重要的分离技术。
利用混合物中各组分理化性质的不同，使各组分以不同程度分配在两相中。
层析的种类： 根据原理分为： a 分配层(纸层析) b 吸附层析 c 亲和层析 d 离子交换层析 根据支持物分为： a 纸层析 b 柱层析 c 薄层层析 d 凝胶过滤层析 分配层析的原理：各种物质在两种互不溶解的溶剂中的分配系数不同，从而达到分离的目的。
分配层析用于分离在水和有机溶剂中都可溶的混合物。
一种物质在两相中达到平衡时，在两相中的浓度之比是一个常数。
物质在流动相里的浓度物质在固定相里的浓度 纸层析:分配的过程：一部分溶质随有机相移动离开原点进入无溶质区，并进行重新分配，不断向前移动。
随着有机相不断向前移动，溶质不断地在两相间进行可逆的分配。
由于各种物质的分配系数不同，随展层溶剂移动的速率也不同，从而达到分离的目的。
移动速度可用比移（Rf ）值表示：色斑中心至上样原点中心的距离K D =图1 氨基酸纸层析示意图R f =溶剂前缘至上样原点中心的距离载体：滤纸固定相：滤纸吸附的水流动相：水饱和酚极性：谷氨酸＞丙氨酸＞脯氨酸对于水－饱和酚的溶剂体系，氨基酸极性越小，KD 值越大，Ｒｆ值也越大，一定时间内随流动相迁移的距离远，反之迁移距离小。
三、实验材料仪器⑴层析缸；⑵层析滤纸；⑶电吹风机；⑸喷雾器；⑹毛细管。
试剂⑴氨基酸标准液（6mg/mL）；⑵氨基酸混合液（6mg/mL)⑶展层剂：水饱和苯酚溶液。
⑷显色剂：0.3%茚三酮丙酮溶液四、操作步骤1、层析滤纸的准备用铅笔在层析滤纸上距离一端2-3cm处划线并标记点样位置。
2、点样(少量多次)用毛细管平口端蘸取少量样品溶液，点样于滤纸的相应位置，要求样品斑点直径不超过0.5cm，干燥后再点样，重复3次。
3、展层将滤纸放入层析缸，使滤纸浸入液面以下，但不要使液面没过点样线。
生化实验方案
生物化学实验教学内容（本部）实验内容与方法实验背景资料1：《小鼠肝脏过氧化氢酶的制备与测定》实验背景资料过氧化氢酶(Catalase) 是一种广泛存在于生物体内的氧化还原酶，尤其在动物的肝脏、肾脏、红细胞中含量较多，其生物学功能是催化细胞内H2O2分解，防止过多H2O2 对细胞的危害。
人工制备的过氧化氢酶可广泛应用于食品与乳制品业，造纸与印染业，农业与环保业，以及医疗卫生业等多领域。
小鼠肝脏过氧化氢酶分子量约为238KD，结构上由4个具有相同多肽链的亚基组成，是以铁卟啉为辅基的结合酶，在407nm波长下有特征性的吸收。
溶于水,几乎不溶于乙醇、氯仿、乙醚等有机试剂，酸性环境下溶解度低易析出，最适温度为37℃，最适pH值约为7.8。
本实验以小鼠肝脏为原料，根据过氧化氢酶溶解性和大分子等特性，通过组织匀浆、盐析、透析、分子筛层析等步骤，提取纯化过氧化氢酶，并对制备的过氧化氢酶进行蛋白浓度、分子量、米氏常数等测定。
2、3. 实验目的熟悉并掌握生化四大技术—离心、层析、比色、电泳。
熟悉并掌握分离纯化小鼠过氧化氢酶和测定其含量的技术和方法。
4. 实验原理匀浆原理：分离纯化某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性，所以要根据所提取蛋白质的性质采用适当的方法将组织和细胞破碎。
过氧化氢酶在乙醇、氯仿等有机溶剂中溶解度很小，而脂质在有机溶剂中溶解度较大,通过加入有机溶剂可实现过氧化氢酶与脂质的分离。
过氧化氢酶在乙醇、氯仿等有机溶剂中稳定性好，不易变性，而某些杂蛋白在有机溶剂中稳定性差，容易变性。
根据上述原理选择0.05mol/L，pH4.0醋酸-乙醇缓冲液以及氯仿作为匀浆缓冲液，通过匀浆法破碎肝组织细胞，匀浆液离心后脂质分配到有机相中，部分杂蛋白则沉淀下来，而过氧化氢酶主要存在于上清液中，分离出上清液即获得过氧化氢酶的粗提液。
盐析原理：蛋白质在高浓度盐溶液中由于水化膜被破坏而溶解度降低。
生化分离技术实践教学大纲
《生化分离技术》实验教学大纲一、实验教学内容与大体要求实验一用溶剂萃取法提取与精制红霉素（一）目的要求1．把握溶剂萃取法提取微生物药物的原理和方式。
2．把握溶剂萃取法提取微生物药物的步骤和操作要求。
（二）实验内容红霉素可在碱性条件下溶于乙酸乙酯有机溶剂中，在酸性条件下溶于水溶液中，在乙酸乙酯相中可成钾盐沉淀析出。
（三）所需实验设施设备1．材料 2g红霉素软膏。
2．器材量杯、烧杯、布氏漏斗及配套抽滤瓶、培育皿、分液漏斗、铁架及铁圈、玻璃棒、镊子、剪子、不锈钢扁匙、PH试纸、滤纸及纺绸布、真空烘箱。
3．试剂乙酸、乙酸乙酯（BA）、饱和食盐水、异丙醇、乙醇-醋酸钾溶液。
（四）教学形式及进程1.讲解实验进程及注意事项，20分钟。
人一组，分组实验。
实验二等电点沉析法分离牛乳中的酪蛋白（一）目的要求1．学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方式。
2．把握等电点沉析分离的大体操作技术。
（二）实验内容蛋白质、酶、氨基酸、核酸等都是两性电解质，当其溶液在某一pH值时，这些生物大分子的所带的正负电荷数量相等而呈电中性，现在溶液的pH值称为该物质的等电点。
生物大分子在其等电点的溶液中，溶解度最低，易发生沉淀，一样疏水性较强的蛋白质可用此法分离。
（三）所需实验设施设备1．材料鲜牛奶。
2．试剂醋酸钠、优级纯醋酸、95%乙醇、乙醚、蒸馏水、L pH 醋酸-醋酸钠缓冲液。
3．器具烧杯（100 mL、）、玻璃棒、滴管、量筒、离心机、水浴锅、布氏漏斗、周密pH 试纸或酸度计、表面皿、电子天平、抽滤瓶。
1.讲解实验进程及注意事项，30分钟。
人一组，分组实验。
实验三离子互换法分离氨基酸（一）目的要求学习用阳离子互换树脂柱分离氨基酸的操作方式和原理。
（二）实验内容本实验采纳磺酸型阳离子互换树脂分离酸性氨基酸天冬氨酸（Asp，pI=，分子量为）和碱性氨基酸赖氨酸（Lys，pI=，分子量为）的混合液。
在pH=条件下，因为pH值低于Lys的pI值，Lys可解离成阳离子结合在树脂上；Asp可解离成阴离子，不被树脂吸附而流出层析柱。
生化工程实验指导
新鲜菠萝皮 四、仪器设备
（一）全班共用：（ 1 ） 电力搅拌器1 台；（ 2 ）离心机 4000~1000rpm 4 台；（ 3 ） 754 紫外分光光度计（石英比色杯） 2-4 台；（ 4 ）水浴箱 2 台； （ 5 ）台式天平（离心平衡用） 2 台；（ 6 ）大漏斗1个，纱布1块；（ 8）蒸馏 水瓶（ 25L 或 50L ） 1 个。
（二）每组配置：洗瓶1个，离心管（10ml）2根。 五、玻璃器皿（以组为单位）
试管（ 6 根），100 ml 烧杯（ 1 个），吸管（ 2 个）、玻棒（ 1 个），移 液管或移液器 5ml(1) 、 1ml(2) 、 0.5ml （ 1 ），漏斗（ 3个），滤纸（ 3~6 张），
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试管架（1）
六、实验试剂
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肌 醇 衍 生 物 ， 在 酸 性 溶 液 中 ， 用 钒 钼 酸 铵 处 理 生 成 黄 色 的 （ NH4 ） 3PO4·NH4VO3·16MoO3 复合物，可在 415nm 波长下比色测定其含量。 三、实验材料 黑曲霉固体发酵培养基 四、仪器设备 （一）全班共用：（ 1 ）离心机 4000~1000rpm 4 台；（ 2 ）721分光光度计（玻 璃比色杯） 2-4 台；（ 3 ）水浴箱 2 台；（ 4 ）台式天平（离心平衡用） 2 台； （ 5 ）蒸馏水瓶（ 25L 或 50L ） 1 个。 （二）每组配置：洗瓶1个 五、玻璃器皿（以组为单位） 20ml 试管（4 根），移液管或移液器 5ml(3) 、 1ml(1) ，试管架（1） 六、试剂与药品： 乙酸缓冲液：称取 34.02g 三水乙酸钠于 1000ml 容量瓶中，加入 1ml 吐温 80，加 900ml 蒸馏水溶解，用 HCl 调至 pH5.5，蒸馏水定容至 1000ml(2 月内有效)。 植酸钠溶液：称取 0.3464g 植酸钠于 50ml 容量瓶中，用乙酸缓冲液溶解，并定容到 刻度（现配现用）。 硝酸溶液:浓硝酸与水以 1:2 的比例混匀。 25％钼酸铵溶液：称取 10g 钼酸铵于 100ml 容量瓶中，加 1.0ml 氨水，蒸馏水定容 至刻度。 0.235％矾酸铵溶液：称取 0.235g 矾酸铵于 100ml 棕色容量瓶中，加入 2ml 硝酸溶 液用蒸馏水定容至刻度（避光，一周内有效）。 反应终止液：钼酸铵溶液、矾酸铵溶液、稀硝酸溶液按 1：1：2 配成反应终止液。 植酸酶粗酶液：称取含酶的霉菌培养物 8g 于烧杯中，加 pH5.0 乙酸缓冲液 30ml， 在摇床 150r/min 振荡 1h，室温静置 10min，单层滤纸过滤，离心取上清液，即为粗 酶液。 磷酸二氢钾：做基准物。 七、实验步骤： 1、标准曲线的制作：
现代生化技术实验讲义(生工10)
实验一双缩脲法测定蛋白质含量一、实验目的了解双缩脲法测定蛋白质浓度的基本原理；熟悉双缩脲法测蛋白质浓度的实验操作方法。
二、实验原理双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出1个分子氨后得到的产物在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。
凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过1个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。
测定范围为1~10mg蛋白质。
干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。
此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。
主要缺点是灵敏度差。
因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。
三、材料与试剂硫酸铜、酒石酸钾钠、NaOH、KI、酪蛋白双缩脲试剂：取0.75g硫酸铜和3.0g酒石酸钾钠溶于250ml蒸馏水，加入150ml 10%NaOH溶液（可另加0.5gKI以防止Cu2+自动还原成一价氧化亚铜沉淀），用水稀释至500ml。
此试剂可以长期保存。
10mg/ml标准蛋白溶液：取 1.0gNaOH加入500ml蒸馏水中，配成0.05mol/lNaOH溶液。
用0.05mol/lNaOH溶液溶解0.25g酪蛋白，定容至25ml。
待测样品液：可以用酪蛋白配制，也可用蛋清，牛血清蛋白。
实验器材：容量瓶，试管，移液管，量筒，烧杯，胶头滴管，吸耳球，洗瓶，分光光度计。
四、操作方法1、标准曲线的制作在6支刻度试管中，分别按下表所示量加入各种试剂，振荡均匀混匀。
室温下反应30min后，用0号管校零，测定各管在540nm波长下的吸光度，以吸光值作为纵坐标，蛋白质含量为横坐标绘制标准曲线。
2、样品蛋白质含量的测定在刻度试管中加入蛋白样品溶液1m，双缩脲试剂4ml，室温下振荡均匀，显色30min后，用分光光度计于540nm测定各管吸光度，从标准曲线查出样品蛋白质含量。
生化制备技术实验操作指导
生化制备技术实验操作指导温州大学生命与环境科学学院2012年2月实验须知1．实验室规则(1) 实验课须遵守实验室开放时间，应自觉遵守课堂纪律，严禁在实验室吃东西、大声喧哗等行为。
每组成员可按个人时间协作完成实验过程，但必须每位成员都参与到实验当中，并由组长预先提交实验分工安排书，交予指导教师作为签到依据。
(2) 使用仪器、药品、试剂和各种物品必须注意节约, 应特别注意保持药品和试剂的纯净, 严防混杂污染。
(3) 实验台、试剂药品架必须保持整洁, 仪器药品摆放井然有序。
实验完毕,需将药品、试剂排列整齐, 仪器洗净倒置放好, 实验台面抹拭干净, 经教师验收仪器后, 方可离开实验室。
实验仪器为配套使用，不可随意调换。
每组组长在实验进行之前及结束之后负责对仪器和耗材进行清点，及时反映问题。
(4) 使用和洗涤仪器时, 应小心谨慎, 防止损坏仪器。
使用精密仪器时, 应严格遵守操作规程, 发现故障应立即报告教师, 不要自己动手检修。
(5) 在实验过程中要听从教师的指导, 严肃认真地按操作规程进行实验, 并简要、准确地将实验结果和数据记录在实验记录本上。
课后写出实验报告, 实验课程完全结束后由学习委员收齐交给教师。
(6) 仪器损坏时, 应如实向教师报告, 认真填写损坏仪器登记表。
(7) 实验出现问题，不建议盲目重做，应及时总结原因，给出合理解释。
实验课不完全以最终实验结果为评分依据，更重要的是考察分析问题和解决问题的能力。
(8) 每次实验课安排同学轮流值日, 值日生要负责当天实验的卫生和安全检查。
2．实验记录实验课前应认真预习实验内容，将实验名称、实验原理、实验内容和步骤等简单扼要写在记录本上。
实验记录本要标明页码，不能随意撕掉任何一页。
实验中使用的试剂纯度和终浓度以及使用的仪器类型等都要记录清楚。
实验中观察到的现象、结果和得出的数据，应及时直接记在记录本上，绝对不可以随意记在单片纸上。
原始记录必须准确、简练、清楚。
生化实验技术与方法.
实验一糖的薄层层析一实验目的：(1) 熟悉硅胶H薄板的制备过程与方法；(2) 掌握薄层层析的原理以及利用薄层层析对糖类进行定性分析。
二实验原理：层析法是利用混合物中各组分物理化学性质的差异（如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等），使各组分在两相（一相为固定的，称为固定相；另一相流过固定相，称为流动相）中的分布程度不同，从而使各组分以不同的速度移动而达到分离的目的。
按操作形式不同可将层析法分为3种类型：柱层析，将固定相装于柱内，使样品沿一个方向移动而达到分离；纸层析，用滤纸做液体的载体，点样后，用流动相展开，以达到分离鉴定的目的；薄层层析，将适当粒度的吸附剂铺成薄层，以纸层析类似的方法进行物质的分离和鉴定。
按机理不同，可分为：吸附层析、分配层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析。
薄层层析是一种微量而快速的层析方法。
该法是把吸附剂或支持剂涂布在玻璃板上成为一薄层，将要分析的样品滴加到薄层上，然后用合适的溶剂进行展开，使样品各个成分分离，然后进行定性鉴定和定量测定。
根据原理的不同，薄层层析通常有4种类型：吸附薄层层析、分配薄层层析、离子交换薄层层析和薄层电泳。
薄层层析兼有柱层析和纸层析的优点，操作方便，设备简单，展开时间短，灵敏度高，还可在支持物中加入荧光染料有助于鉴别。
本次实验是以硅胶H为吸附剂的薄层层析。
三实验用品及器材：试剂：硅胶H、CMC溶液、鼠李糖、葡萄糖、两种糖混合液、展层溶剂（乙酸乙酯：甲醇：乙酸：水=12：3：3：2（体积比）、显色剂（苯胺-二苯胺-磷酸试剂）；仪器：薄板、烘箱、微量注射器、层析缸。
四实验步骤及结果：(1)硅胶H薄板的制备称取1.2g硅胶H放入事先准备好的研钵中，缓缓加入4.0ml0.5%CMC溶液并研磨，以赶出硅胶当中的气泡，研磨数分钟后，倒在预先准备好的玻璃板上，用手拿着玻板的一角轻轻震荡，使浆液均匀铺开（注意胶一定要均匀），放在水平台上，带水分蒸发后，置105℃烘箱30min。
生化制品技术实验指导
《生化制品技术》实验大纲一、实验目的本实验是《生化制品技术》课程的配套实验，目的是增加学生对生物药物及生物技术制药的感性认识及提高学生的实验操作能力。
要求学生熟悉并掌握生物药物的制备过程和生物技术制药的基本操作方法。
二、适用专业及层次适用于生物制药技术专业学生三、实验内容和学时分配实验一牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备一、实验目的1.掌握盐析法的原理和操作。
2.掌握等电点沉淀法的原理和基本操作。
二、实验原理乳蛋白素是一种广泛存在于乳品中，合成乳糖所需要的重要蛋白质。
牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白（caseins），酪蛋白在pH4.8左右会沉淀析出，但乳蛋白素在pH3左右才会沉淀。
利用此一性质，可先将pH降至4.8，或是在加热至40℃的牛奶中加硫酸钠，将酪蛋白沉淀出来。
酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中除去脂类杂质。
将去除掉酪蛋白的滤液的pH调至3左右，能使乳蛋白素沉淀析出，部分杂质即可随澄清液出去。
在经过一次pH沉淀后，即可得粗乳蛋白素。
三、实验器材烧杯（250ml和100ml）、玻璃试管（10mm×100mm）、离心管（50ml）、磁力搅拌器、pH计、离心机、水浴锅。
四、试剂和材料脱脂牛乳或低脂牛乳、无水硫酸钠、0.1mol/L HCL、0.1mol/L NaOH、滤纸、pH试纸、浓盐酸、乙酸缓冲溶液0.2mol/L （pH4.6）、乙醇。
五、操作步骤1.盐析或等电点沉淀制备酪蛋白（1）将50ml牛乳倒入250ml烧杯中，于40℃水浴中加热并搅拌。
（2）向上述烧杯中缓缓加入（约10min内分次加入）10g无水硫酸钠，再继续搅拌10min（或加热到40℃，再在搅拌下慢慢地加入50ml40℃左右的乙酸缓冲液，直到pH达到4.8左右，将悬浮液冷却至室温，放置5min）。
（3）将溶液用细布过滤，分别收集沉淀和滤液。
沉淀悬浮于30ml乙醇中，倾于布氏漏斗中，过滤出去乙醇溶液，抽干。
生化技术实验指导
实验一 DNS（3,5-二硝基水杨酸）比色法测定还原糖一、实验目的掌握还原糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；精密pH试纸。
2．主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11（2）大离心管：50mL×2（3）烧杯：100mL×1（4）三角瓶：100mL×1（5）容量瓶：100mL×3（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1（7）恒温水浴锅（8）沸水浴（9）离心机（10）扭力天平（11）分光光度计3．试剂（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂四、操作步骤1．制作葡萄糖标准曲线取7支20mL具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
生化实验室作业指导书
生化实验室作业指导书
1. 实验目的，指导书会明确列出每个实验的目的，即该实验的重点是什么，学生需要通过实验达到什么样的学习目标。
2. 实验原理，指导书会详细介绍实验涉及的生化原理和相关背景知识，以便学生能够理解实验的理论基础。
3. 实验步骤，具体的操作步骤是指导书中非常重要的一部分，会详细描述每个实验的步骤和操作方法，以及所需的实验器材和试剂。
4. 安全注意事项，在进行生化实验时，安全是非常重要的，指导书会列出实验室的安全规定和注意事项，包括化学品的使用、实验器材的操作注意事项等。
5. 数据记录与分析，指导书通常会要求学生记录实验过程中的数据，以及进行数据分析和实验结果的总结与讨论。
6. 实验报告要求，最后，指导书通常会明确要求学生完成实验报告的格式和内容要求，包括实验目的、原理、步骤、结果分析等
内容。
生化实验室作业指导书的编写需要考虑到学生的实际水平和实
验条件，以及实验的教学目标和要求。
指导书的内容应该清晰明了，能够帮助学生顺利完成实验并达到预期的学习效果。
同时，指导书
也应该注重培养学生的实验操作能力、数据处理能力和实验报告撰
写能力。
希望这些内容能够帮助你更好地理解生化实验室作业指导
书的内容和要求。
生化技术实验指导书(20学时)
生化技术实验指导书湖北工业大学生物工程学院二0一0年三月修订实验一酵母RNA的提取及其组分的鉴定一、实验目的1.了解稀碱法提取RNA及提取物组分鉴定的基本原理；2. 掌握稀碱法提取RNA及提取物组分鉴定的具体操作方法。
二、实验原理酵母中RNA的含量比较丰富（2.67%~10%），而DNA的含量相对地较少（据资料报道，酵母DNA的含量低于RNA的20%），因此从酵母中提取RNA比较方便。
RNA溶于碱性溶液，碱性溶液使蛋白质带负电荷，促进RNA(带负电荷)与蛋白质的分离，碱性溶液可使酵母细胞壁变性，同时进行加热，可增加细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。
因此，酵母粉用稀碱液加热抽提时，可将其中的RNA抽提出来。
当碱性抽提液中和后，加入2倍体积的95%乙醇时，可以使抽提物沉淀出来。
抽提物的主要成分是RNA的钠盐，并带有少量的蛋白质。
用碱抽提时，RNA会有不同程度的降解。
地衣酚（3，5-二羟基甲苯）是比较灵敏的测定戊糖的试剂，常用于测定RNA。
核糖与地衣酚试剂反应呈现鲜绿色。
地衣酚试剂反应灵敏，也易被其他物质干扰。
DNA中的脱氧核糖也可与地衣酚反应，因此，单靠地衣酚显色实验不能作为RNA 与DNA鉴别依据。
二苯胺试剂是常用于测定DNA中脱氧核糖的试剂，脱氧核糖与二苯胺试剂反应产生蓝色物质，而RNA中的核糖一般不与苯胺起反应。
嘌呤碱可与硝酸银反应生成白色的嘌呤银化合物的沉淀。
双缩脲反应是检验蛋白质常用的颜色反应。
双缩脲或含有两个以上肽键的化合物（蛋白质、肽等）在碱性条件下与硫酸铜反应生成紫红色的配合物。
如果蛋白质含量很低时，此颜色反应不易观察到。
三、试剂与器材1. 试剂：（1）酵母粉（药用）；（2）0.5%NaOH溶液；（3）乙酸；（4）10%硫酸溶液；（5）氨水；（6）5%硝酸银溶液；（7）95%乙醇；（8）地衣酚试剂（硫酸铁铵1.35g，地衣酚2g，用蒸馏水配成50mL作为母液，保存于冰箱中。
使用前，取母液2.5mL，加浓盐酸41.5mL再加蒸馏水60mL）；（9）二苯胺试剂（1.5g二苯胺溶于100mL高纯度的冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸）；（10）10%氢氧化钠溶液；（11）1%硫酸铜溶液。
《生化技术》课程实习实验指导书新格式(1)精品].doc
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望的工程专地《生化技术》课程实习指导书张如新、任光云编著邵阳学院生物与化学工程系2012年10月实习项目一、超临界CO2萃取山茱萸中有效成分熊果酸 (1)实习项目二、加携带剂超临界CO2萃取山茱萸有效成分熊果酸 (5)实习项冃三、HPLC法测定萃取物中有效成分熊果酸的含量 (7)实习项目一、山茱萸有效成分熊果酸的超临界CO2萃舟一、实验目的与要求1、掌握超临界CO2萃取的原理2、掌握超临界CO2萃取的操作3、掌握材料的处理与准备二、原理超临界CO2萃取是利用欲分离物质与杂质在超临界CO2中溶解度不同而达到分离的一种萃取技术。
超临界流体兼有气、液两者的特点，密度接近于液体，粘度和扩散系数接近于气体，它不仅具冇与液体溶剂相当的溶解能力，而且具冇优良的传质性能。
超临界流体CO2萃取技术就是利用这种超临界流体的特殊性质，在高压条件卜•与待分离的固体或液体混合物接触，有效成分能溶解在超临界流体co2,通过调节系统的操作压力和温度，可萃取所需要的物质。
随后通过降压或升温的方法，降低超临界流体CO2的密度, 使萃取物溶解度降低，使目的物与超临界流体分离，萃取得到有效成分即目的物。
三、材料与仪器1、材料：山茱萸2、CO2气体3、仪器：超临界CO?萃取装置4、植物样木粉碎机四、操作步骤1、材料的准备选择优质的山茱萸材料，把其中的杂质去掉，称取1公斤山茱萸在70-100 C烤箱中烘烤3〜4小时至完全干燥为止。
用粉碎机粉碎（过40目筛），粗粉要再次粉碎，直到能过40目筛。
2、萃取称取100 g粉碎的山茱萸装入萃取缸并把萃取缸安装好，在压力为30MPa、温度为40"C下萃取3〜4小时。
并按CO?超临界萃取装置使用说明书（见附页）开机进行萃取操作：（注意：一定要在熟练掌握原理和操作规则情况卜•才止式开机操作。
）3、收集萃取物在收集萃取物之前，应准备4个洗干净并烘干的250ml锥形瓶。
毎萃取1个小时收集一次，具体操作按说明帖。
生化实验教案
生化实验全套教案第一章：引言1.1 课程背景1.1.1 生化实验是生物科学领域的重要实践活动，通过实验可以让学生更好地理解生物学的理论知识。
1.1.2 生化实验能够培养学生的实验操作能力、观察能力和分析能力，提高学生的实践技能。
1.1.3 通过本课程的学习，学生将掌握基本的生化实验原理和方法，为今后的生物学研究或工作打下坚实的基础。
第二章：知识点讲解2.1 生化实验的基本原理2.1.1 生化实验是基于生物化学反应的原理进行的，学生需要了解各种生化反应的基本原理。
2.1.2 学生需要了解生化实验中常用的仪器设备及其使用方法。
2.1.3 学生需要掌握生化实验数据处理的基本方法，如标准曲线法、酶活性计算等。
第三章：教学内容3.1 实验一：蛋白质的提取与鉴定3.1.1 实验原理：通过盐析法提取蛋白质，使用SDSPAGE电泳鉴定蛋白质。
3.1.2 实验材料：鸡蛋白、盐、SDS、PAGE胶等。
3.1.3 实验步骤：包括蛋白提取、蛋白分离、蛋白鉴定等步骤。
第四章：教学目标4.1 知识目标4.1.1 学生能够理解生化实验的基本原理和方法。
4.1.2 学生能够掌握实验操作技能，如蛋白提取、电泳等。
4.1.3 学生能够分析实验数据，得出合理的结论。
第五章：教学难点与重点5.1.1 学生需要掌握生化实验的基本原理和方法。
5.1.2 学生需要熟练操作实验仪器，掌握实验步骤。
5.1.3 学生需要学会分析实验数据，得出合理的结论。
后续章节待补充。
第六章：教具与学具准备6.1 教具准备6.1.1 生化实验室所需的仪器设备，如显微镜、离心机、PCR仪器等。
6.1.2 实验所需的化学试剂和生物材料，如蛋白酶、底物等。
6.1.3 实验讲义和相关参考书籍，供学生参考学习。
6.2 学具准备6.2.1 学生实验室所需的个人防护装备，如实验服、手套、护目镜等。
6.2.2 实验报告表格，用于记录实验数据和结果。
6.2.3 笔记本电脑或平板电脑，用于展示实验相关资料或软件操作。
生物化学实验指导
生物化学实验指导实验一生化实验基本操作一. 玻璃仪器的洗涤在生化实验中，玻璃仪器洁净与否，是获得准确结果的重要环节。
洁净的玻璃仪器内壁应十分明亮光洁，无水珠附着在玻壁上。
㈠常用的洗涤方法：1.一般仪器，如烧杯、试管等可用毛刷蘸肥皂液、合成洗涤剂仔细刷洗。
然后用自来水反复冲洗，最后用少量蒸馏水冲洗2~3次，倒置在器皿架上晾干或置于烘箱烤干备用。
2.容量分析仪器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能用毛刷刷洗。
用后应及时用自来水多次冲洗，细心检查洁净程度，根据挂不挂水珠采取不同处理方法。
（1）如不挂水珠，用蒸馏水冲洗、干燥，方法同上；（2）如挂水珠，则应沥干后用重铬酸钾洗液浸泡4~6小时，然后按上法顺序操作，即先用自来水冲洗，再用蒸馏水冲洗，最后干燥。
3.粘附有血浆的刻度吸量管等，有三种洗涤方法：（1）先用45%尿素溶液浸泡，使血浆蛋白溶解，然后用自来水冲洗；（2）也可用1%氨水浸泡，使血浆溶解，然后再依次用1%稀盐酸溶液、自来水冲洗；（3）以上二法如达不到清洁要求，可浸泡于重铬酸钾洗液4~6小时，再用大量自来水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2~3次。
4.新购置的玻璃仪器，应先置于1~2%稀盐酸溶液中浸泡2~6小时，除去附着的游离碱，再用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗2~3次。
5.凡用过的玻璃仪器，均应立即洗涤，久置干涸后洗涤十分困难。
如不能及时洗涤，先用流水初步冲洗后浸泡在清水中，待后按常规处理。
㈡使用重铬酸钾洗液（以下简称洗液）时应注意以下几点：1.需用洗液浸泡的容器，在浸泡前应尽量沥干。
否则会因洗液被稀释而降低洗液的氧化力。
2.Hg2+、Ba2+、Pb2+ 等离子可与洗液发生化学反应，生成不溶性化合物沉积在容器壁上。
因此，凡接触过上述离子的容器，应先除去上述离子（可用稀硝酸或5~10%EDTA钠清除）。
3.油类、有机溶剂等有机化合物可使洗液还原失效。
因此，容器壁上附有大量油类、有机物时，应先除去。
4.洗液的酸性和氧化性很强，使用时应格外注意，千万不要滴落在皮肤或衣物上，以免灼伤或烧坏。
检验科生化实验操作指南
检验科生化实验操作指南一、实验目的本实验操作指南旨在为检验科工作人员提供详细的生化实验操作指导，确保实验过程的准确和安全。
二、实验准备1. 准备所需实验材料和试剂。
2. 检查实验仪器和设备的完好性和正常工作状态。
3. 穿戴实验室个人防护装备，包括实验服、手套、口罩和护目镜。
三、实验步骤1. 将待测样本进行标识，并按照实验要求进行适当的处理和预处理。
2. 根据实验方案和操作要求，准确称取所需的试剂和溶液。
3. 按照实验要求，将试剂和样本进行混合或反应，注意搅拌均匀。
4. 使用实验仪器对混合液进行必要的测试和分析。
5. 记录实验数据和观察结果，保留实验样本和残留物。
6. 根据实验要求，对实验结果进行分析和解释。
四、实验注意事项1. 严格按照实验方案和操作要求进行操作，避免任意更改实验步骤。
2. 注意使用安全防护装备，保护自己和他人的安全。
3. 在实验过程中保持实验台面整洁，避免交叉污染。
4. 注意正确使用实验仪器和设备，避免人为破坏。
5. 注意实验材料和试剂的保存和管理，避免损坏和过期使用。
五、实验结果与分析根据实验数据和观察结果，结合实验要求和参考标准，对实验结果进行分析和解释。
目的是得出准确的结论并提供相关建议。
六、实验总结与改进根据实验过程和实验结果，总结实验的优点和不足之处，并提出改进的建议。
目的是提高实验的准确性和效率。
结束语此生化实验操作指南为检验科工作人员提供了详细的操作步骤和注意事项，帮助他们完成实验工作，确保实验结果的准确和可靠。
在实验过程中，工作人员要严格按照操作规程进行操作，并时刻关注实验安全。
通过实验结果的分析和总结，进一步优化实验方法，提高工作效率和准确性。
生化技术实验指导书(20学时)
生化技术实验指导书湖北工业大学生物工程学院二0一0年三月修订实验一酵母RNA的提取及其组分的鉴定一、实验目的1.了解稀碱法提取RNA及提取物组分鉴定的基本原理；2. 掌握稀碱法提取RNA及提取物组分鉴定的具体操作方法。
二、实验原理酵母中RNA的含量比较丰富（2.67%~10%），而DNA的含量相对地较少（据资料报道，酵母DNA的含量低于RNA的20%），因此从酵母中提取RNA比较方便。
RNA溶于碱性溶液，碱性溶液使蛋白质带负电荷，促进RNA(带负电荷)与蛋白质的分离，碱性溶液可使酵母细胞壁变性，同时进行加热，可增加细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。
因此，酵母粉用稀碱液加热抽提时，可将其中的RNA抽提出来。
当碱性抽提液中和后，加入2倍体积的95%乙醇时，可以使抽提物沉淀出来。
抽提物的主要成分是RNA的钠盐，并带有少量的蛋白质。
用碱抽提时，RNA会有不同程度的降解。
地衣酚（3，5-二羟基甲苯）是比较灵敏的测定戊糖的试剂，常用于测定RNA。
核糖与地衣酚试剂反应呈现鲜绿色。
地衣酚试剂反应灵敏，也易被其他物质干扰。
DNA中的脱氧核糖也可与地衣酚反应，因此，单靠地衣酚显色实验不能作为RNA 与DNA鉴别依据。
二苯胺试剂是常用于测定DNA中脱氧核糖的试剂，脱氧核糖与二苯胺试剂反应产生蓝色物质，而RNA中的核糖一般不与苯胺起反应。
嘌呤碱可与硝酸银反应生成白色的嘌呤银化合物的沉淀。
双缩脲反应是检验蛋白质常用的颜色反应。
双缩脲或含有两个以上肽键的化合物（蛋白质、肽等）在碱性条件下与硫酸铜反应生成紫红色的配合物。
如果蛋白质含量很低时，此颜色反应不易观察到。
三、试剂与器材1. 试剂：（1）酵母粉（药用）；（2）0.5%NaOH溶液；（3）乙酸；（4）10%硫酸溶液；（5）氨水；（6）5%硝酸银溶液；（7）95%乙醇；（8）地衣酚试剂（硫酸铁铵1.35g，地衣酚2g，用蒸馏水配成50mL作为母液，保存于冰箱中。
使用前，取母液2.5mL，加浓盐酸41.5mL再加蒸馏水60mL）；（9）二苯胺试剂（1.5g二苯胺溶于100mL高纯度的冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸）；（10）10%氢氧化钠溶液；（11）1%硫酸铜溶液。
临床生化检验实验指导
临床生化检验实验指导实验指导书是临床生化检验的重要教学工具，通过指导学生熟练掌握临床生化检验方法、实验流程，提高学生的实验操作能力，培养学生的分析判断能力并促进其临床应用。
1. 实验前的准备工作在进行生化实验之前，一定要对实验室进行必要的准备工作。
首先，要准备好所需的生化试剂和仪器设备，并且需要按照相应的程序对仪器设备进行校准和检验。
其次，实验人员应该仔细阅读实验指导书，了解实验方法和流程，并在完成工作之前做好充分的准备和规划。
2. 实验的操作步骤完成实验需要遵循正确的操作流程，一旦开始操作，就不能有任何的不妥协议。
实验流程包括：洗手、准备工作、样品获取、样本处理、试管反应、数据汇总等步骤。
其中最关键的一步是进行样品获取，必须根据实验指导书上的详细流程操作，正确采集样品。
3. 实验时需要注意的事项在实验室，要特别重视实验安全。
切勿将独立的药剂配制在同一地点，不要吃东西，不能按照心情进行超量添加剂量以避免因此引发安全事故。
在进行实验的时候，一定要戴上实验手套和护目镜等防护措施，避免接触危险药品和化学试剂。
4. 完成实验后的数据处理完成实验之后，需要将所收集到的数据进行处理，根据实验指导书上的要求计算数据的平均值，并根据所得数据评估检测结果是否有问题。
如果发现有问题，需要进行仔细检查，并重新采集样品进行检测。
通过对临床生化检验实验指导的学习与实践，学生可以熟悉各项生化方法，并锻炼自己的实验操作能力。
对于生化学相关的工作岗位，熟练掌握实验技能将是一个优秀的加分项。
因此，我相信一份好的实验指导书对学习生化学和工作有着重要的意义。
医学生物化学实验指导第一章
医学生物化学实验指导第一章一、要求1．熟悉实验室规则及常用生化仪器2．清点洗刷实验用具。
3．把握各种仪器的正规操作及爱护二、常用生化仪器烧杯试管刻度吸量管离心管滴管搅棒枪式移液器及其配适吸头混匀器恒温水浴箱离心机分光光度计，电泳仪点收仪器；依照仪器清单，逐项查点是否完好(如有缺损向教师声明及时补充更换)。
本套仪器由本人使用保管至全部实验课程终止。
三、差不多操作1．玻璃仪器的洗涤(1)洗涤液：①洗洁精，肥皂水，洗衣粉。
②玻璃仪器专用洗涤液：要紧成份为中性稀氯氧化剂，上海日化研究所出品(2)洗涤的要求与步骤：要求：洁净的玻璃器皿表面应不挂任何水滴。
步骤：不净的器皿洗衣粉或肥皂水刷洗自来水冲净达到要求？是)蒸馏水涮洗2—3次(其目的是去除自来水中的杂质，故应少量多次，全面充分)烤干或晾干、备用对使用过的仪器应养成及时清洗的适应，专门是血液分析时用以吸取血液样本的吸管，用过后应当赶忙用水将所沾的血液冲去，否则放置过久，血液干燥硬结，就专门不容易清除。
(3)玻璃仪器的干燥一样的玻璃仪器均可洗净后倒置架上，让其水分蒸发自然干燥，如需迅速干燥者应按仪器的不同类型按下述不同方法处理：①试管、离心管、烧杯、烧瓶等一般玻璃器皿可置烤箱中100—105℃烘烤②少量仪器如需急用也可在电炉上或酒精灯上烘烤。
烘烤时应将器皿时时转动，务使受热缓慢且平均，并将管口(或杯口)倾斜向下，以便水蒸气冷凝成水滴，顺口流出，不致使水滴接触烘热了的器壁而使仪器爆裂。
③使用电吹风干燥一样玻璃仪器也专门便利常用。
④下列玻璃仪器应幸免烘烤：吸管：容易造成器壁变形而致容量不准。
比色杯：易在烘烤时发生破裂。
2．移液操作(1)吸量管的使用①吸量管的选择：在一次完成转移的前提下，应选用容量较小的吸量管。
·关于同一次实验中同一种试剂的移取，应选用同一支吸量管②操作(见图1—1)·用洗耳球将液体吸至超过标线·移开洗耳球，迅速用食指压紧管口·必要时将管尖端外围拭净·调液面至标线·放开食指，使液体流入容器·将最后液滴沿器壁而下或吹出③读数(见图1—2)·吸量管保持垂直·视线与液面应水平·管中液面与刻度线应呈切线注：关于刻度由上至下的吸量管应尽量使用上端刻度管尖残液是否需吹出，看清标记。
生化实验技术与方法
测定各条带的相对迁移率，将已知 分子量的标准蛋白质的相对迁移率 对分子量对数作图，可获得一条标 准曲线，根据未知蛋白质的电泳相 对迁移率即可在标准曲线上求得分 子量。
实验操作
0.8% Bis
2 3 4 5 6 7
总体积
pH 8.8 Tris -HCI
pH 6.8Tris- HCI 10%SDS
TEMED 10%AP H2O
12%分离 4%浓缩胶 胶 2.0ml 0.2ml 1.25ml 0.375ml 50ul 15ul 5ul 5ul 50ul 15ul 1.65ml o.9ml
SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS－PAGE）测定蛋白质分子量
原理： SDS－ PAGE是最常用的定性分析蛋白质 的电泳方法，特别是用于蛋白质纯度检测 和测定蛋白质分子量。 电泳迁移率与颗粒的电荷、形状、大小 （分子量）有关，如电荷、形状都一样， 则电泳迁移率只与分子量有关。
SDS-PAGE是在PAG系统中引进SDS（十二烷基磺酸钠）。 SDS的作用：1.能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白 质的二级和三级结构，强还原剂（巯基乙醇）能使二硫 键断裂，使蛋白质完全变性。 2.能与变性的蛋白质按比例结合，形成SDS-蛋白质复合 物。 SDS-蛋白质复合物的特点：1. 由于结合大量的SDS，使 蛋白质丧失了原有的电荷状态，从而降低或消除了各种 蛋白质分子之间天然的电荷差异。 2.复合物都是椭圆棒状，从而降低或消除了各种蛋白质 分子之间天然的形状差异。 因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子 大小。
测定各条带的相对迁移率， 根据已知蛋白质分子量和 它们的相对迁移率，以相 对迁移率为横坐标，lgMr 为纵坐标作标准曲线。根 据未知蛋白质的相对迁移 率从标准曲线上查出它们 的lgMr，再换算成蛋白质 分子量．
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生化制品技术实验指导《生化制品技术》实验大纲一、实验目的本实验是《生化制品技术》课程的配套实验，目的是增加学生对生物药物及生物技术制药的感性认识及提高学生的实验操作能力。
要求学生熟悉并掌握生物药物的制备过程和生物技术制药的基本操作方法。
二、适用专业及层次适用于生物制药技术专业学生三、实验内容和学时分配实验一牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备一、实验目的1.掌握盐析法的原理和操作。
2.掌握等电点沉淀法的原理和基本操作。
二、实验原理乳蛋白素是一种广泛存在于乳品中，合成乳糖所需要的重要蛋白质。
牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白（caseins），酪蛋白在pH4.8左右会沉淀析出，但乳蛋白素在pH3左右才会沉淀。
利用此一性质，可先将pH降至4.8，或是在加热至40℃的牛奶中加硫酸钠，将酪蛋白沉淀出来。
酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中除去脂类杂质。
将去除掉酪蛋白的滤液的pH 调至3左右，能使乳蛋白素沉淀析出，部分杂质即可随澄清液出去。
在经过一次pH沉淀后，即可得粗乳蛋白素。
三、实验器材烧杯（250ml和100ml）、玻璃试管（10mm×100mm）、离心管（50ml）、磁力搅拌器、pH计、离心机、水浴锅。
四、试剂和材料脱脂牛乳或低脂牛乳、无水硫酸钠、0.1mol/L HCL、0.1mol/L NaOH、滤纸、pH试纸、浓盐酸、乙酸缓冲溶液0.2mol/L （pH4.6）、乙醇。
五、操作步骤1.盐析或等电点沉淀制备酪蛋白（1）将50ml牛乳倒入250ml烧杯中，于40℃水浴中加热并搅拌。
（2）向上述烧杯中缓缓加入（约10min内分次加入）10g无水硫酸钠，再继续搅拌10min（或加热到40℃，再在搅拌下慢慢地加入50ml40℃左右的乙酸缓冲液，直到pH达到4.8左右，将悬浮液冷却至室温，放置5min）。
（3）将溶液用细布过滤，分别收集沉淀和滤液。
沉淀悬浮于30ml乙醇中，倾于布氏漏斗中，过滤出去乙醇溶液，抽干。
将沉淀从布氏漏斗中移出，在表面皿上摊开以除去乙醇，干燥后得到的是酪蛋白。
准确称重。
2.等电点沉淀法制备乳蛋白素（1）将制备酪蛋白操作步骤（3）所得滤液置于100ml烧杯中，一边搅拌，一边利用pH计以浓盐酸调整pH至3±0.1。
（2）将溶液倒入离心管中，6000r/min离心15min，倒掉上层液。
（3）在离心管内加入10ml去离子水，振荡，使管内下层物重新悬浮，并以0.1mol/L氢氧化钠溶液调整pH至8.5～9.0（以pH试纸或pH计判定），此时大部分蛋白质均会溶解。
（4）将上述溶液以6000r/min离心10min，上层液倒入50ml烧杯中。
（5）将烧杯置于磁搅拌加热板上，一边搅拌，一边利用pH计以0.1mlo/L盐酸调整pH至3±0.1。
（6）将上述溶液以6000r/min离心10min，倒掉上层液。
取出沉淀干燥，并称重。
六、结果与讨论1.计算出每100ml牛乳所制备出的酪蛋白数量，并与理论产量（3.5g）相比较。
求出实际获得率（%）。
2.计算出100ml牛乳所制备出的乳蛋白素数量。
实验二卵磷脂的制备及鉴定一、实验目的学习从蛋黄中制备卵磷脂的方法和基本操作。
二、实验原理利用卵磷脂可溶于乙醇的性质，将卵黄溶于乙醇，卵磷脂从卵黄中转移到乙醇溶液中，可分离提取出来，而蛋白质等某些杂质从沉淀物中除去。
但由于乙醇溶剂抽提时，其他物质也一起被抽提，如甘油三脂、甾醇等。
利用卵磷脂不溶于丙酮的性质，用丙酮从粗卵磷脂溶液中沉淀磷脂，能使卵磷脂与其他脂质和胆固醇分离开来。
无机盐和卵磷脂可生产络合物沉淀，因此可利用金属盐沉淀剂将卵磷脂从溶液中分离出来，由此除去蛋白质、脂肪等杂质，再用适当溶剂萃取出无机盐和其他磷脂杂质，这样可大大提高卵磷脂纯度。
三、实验器材离心机、旋转蒸发仪、布式漏斗、抽滤瓶、真空干燥箱、层析缸、紫外分光光度计。
四、试剂和材料95%乙醇、丙酮、10%ZnCl2、2%氯仿、碘、甲醇、0.1%乙醇、无水乙醇。
五、操作步骤1、粗提室温下，取适量的鸡蛋卵黄用2倍于卵黄体积的95%乙醇进行提取，混合搅拌，离心分离（3000r/min，5min），将沉淀物重复提取3次，回收上清夜；然后减压蒸馏（45℃）至近干，用少量石油醚洗下粘壁的黄色油状物质；加入丙酮，抽滤，分离出沉淀物，真空干燥（40℃，30min），得到淡黄色的粗卵磷脂，称重。
2、精制取一定量的卵磷脂粗品，用无水乙醇溶解，得到约10%的乙醇粗提液，加入相当于卵磷脂质量的10%的ZnCl2水溶液，室温搅拌0.5h；分离沉淀物，加入适量冰丙酮（4℃）洗涤，搅拌1h，再用丙酮反复研洗，直到丙酮洗液为近无色止，得到白色蜡状的精卵磷脂；干燥；称重。
3、鉴定（1）薄层色谱分析将卵磷脂样品与对照品分别配成2%氯仿溶液，用GF254硅胶板进行层析，展开剂为氯仿∶甲醇∶水（65∶25∶4），层析完毕后，取出薄板，干燥，碘蒸汽显色。
（2）紫外吸收光谱测定将一定量卵磷脂样品溶于无水乙醇，配成0.1%乙醇溶液，用紫外分光光度计扫描其在90～400nm的吸收光谱，可测得卵磷脂的紫外最大吸收峰。
卵磷脂紫外最大吸收峰在215nm波长。
六、结果与讨论1.计算卵磷脂得率，讨论影响卵磷脂得率的主要因素。
2.根据薄层色谱图谱、紫外吸收光谱分析所制备的卵磷脂的纯度。
实验三薄层板的制备及使用实验一薄层色谱板的制备和使用目的要求：通过实验进一步理解薄层色谱技术理论，熟悉掌握薄层色谱板的制备和使用方法。
一、薄层层析的基本原理把吸附剂（固定相）均匀地铺在一块玻璃板上，将待分离的样品溶液点加在一薄层板的一端，在密闭的容器中用适当的溶剂（流动相）展开，由于吸附剂对不同物质的吸附力大小不同及溶剂对不同物质溶解分配系数不同，当溶剂流过时，各物质在吸附剂和溶剂之间发生连续不断地吸附，解吸附，再吸附，再解吸附。
不易被吸附或易被溶剂溶解的物质相对移动得快一些。
经过一段时间的展开，不同的物质被彼此分开，最后形成相互分离的斑点。
将展开完毕的薄层板从密闭容器中取出后，应用特定的试药或方法将斑点显色，从而达到定性和定量的目的。
二、薄层板的制备1．玻璃板用一块玻璃板涂上很薄的吸附剂，如硅胶或氧化铝等，玻璃板要求薄厚一致，大小相同，表面光滑平整，一般玻璃只要合乎这些要求就可。
如果找不到平整均一的，将旧光学照像底片截成同样大小也可以。
用前先将玻璃用肥皂和水洗干净，必要时浸泡在清洗液中，然后水洗烤干，用纱布擦光。
玻璃板大小有各种规格，一般有20×20、20×10、20×5厘米，也有更小的，可根据需要自行设计。
宽度要求至少能点开两三个样品，每两点之间相隔至少1.5厘米，玻板长度一般要满足展开10厘米的距离。
点样的起点应距底边至少1.5厘米的距离。
2．吸附剂应用最广泛的为硅胶和氧化铝，市场上有专供薄层色谱用的吸附剂，规格分不含粘合剂的硅胶H，氧化铝H和含有粘合剂熟石膏的硅胶G，氧化铝G，如市售硅胶G含13％熟石膏，氧化铝分中性、酸性、碱性三种。
吸附剂的粒度范围最好在180－200目之间，太小了流速慢，太大则影响分离效果。
如不合要求，应过筛。
3．薄层板的涂布最简单的涂布方法是用两条比玻璃板厚0．25毫米的玻璃条或有机玻璃条（或在同样厚度的玻璃条下粘一层胶布），将玻璃板夹住，把调好的吸附剂浆液平铺在薄层板上，然后用一有机玻璃条或直尺，迅速均匀地向前推进，就象推血片一样，只要推进的速度均匀一致，即可得到薄厚均匀的薄层板，如在一块玻璃板末端再接一块相同的玻璃板，把剩余的装液接过去，可使涂层边缘整齐，厚度一致，吸附剂浆液的加水量和搅拌时间是涂布成败的关键，像12×8平方厘米的玻璃板需要2~3克硅胶G，加4~6毫升水即可，只要技术熟练即能涂成厚薄一致，光滑平整的一块薄层板。
不同性质不同批号的吸附剂，加水量和搅拌时间有时可有差异，应根据情况摸出规律。
为了达到涂布的各板厚度均匀一致，最好采用涂布器进行薄层的涂布。
为了增加薄层的牢固性及易于保存，可在涂布过程中加入某些粘合剂以增加薄层的硬度。
一般采用添加剂羧甲基纤维素钠（CMC—Na），应用方法是取CMC-Na 1克溶于100毫升水中，加热煮沸溶解，按比例与硅胶搅匀，铺板。
涂成之后先把玻板放在平面上，室内干固，再对光检查，看是不是均匀，有无气泡，平整光洁度如何，合格的上烤箱110℃加热30分钟进行活化，冷却后贮于干燥器内备用。
在进行实验时，应尽量可能采用同批号涂布活化的薄层板，以减少因活化不一致引起的Rf值发生差异，目前国内市场已有成品供应，如黄岩化学分析材料厂即有各种类型的薄层板出售。
三、薄层板的使用1．点样将样品溶于适当的溶剂中（应尽量避免有水），取微量注射器或玻璃毛细管截齐后，吸取一定量的检样，轻轻接触到薄层上，使样品自动吸到薄层上，点的直径不要超过0.3厘米，一次不能点完，待干后再点，稍有过分就会损伤板面，影响展开后的斑点形状。
每两个样点之间相距至少1.5厘米。
点样的起点距薄板底边至少1.5厘米，以免样点浸入展开溶剂中，同块薄板上各样点应保持在与底边平行的一条直线上，为控制好点样距离，应用薄层点样尺架。
2．展开根据薄层板大小，自行选用适当玻璃标本缸，长方形，如17×10×6厘米的标本缸可容纳下15×9厘米的玻璃板。
采用较大的玻璃缸和玻璃板时，在缸内沿周围缸壁衬一层预先浸有溶剂的滤纸，以便缸内展开溶剂易达到饱和，防止边缘效应（即两边缘的点走得快）和同一物质Rf值不一致现象。
一般将薄层板斜置展开容器内，密闭。
先不使溶剂浸湿薄层板，饱和10~15分钟后再进行展开，展开溶剂沿着薄层板向上移动。
对加粘合剂的涂板可以近于垂直的状态进行展开，而对未加粘合剂的薄层板则必须以倾斜状态（15度角）进行展开。
为了防止产生“边缘效应”和展开溶剂不饱和现象。
还可采用夹心式展开容器，其方法是将薄层板的左右两侧各刮去5~10毫米，垫上条状玻璃或塑料，盖一块与薄层板同样大小的玻璃，用夹子将两边夹好，插入展开溶剂中进行展开，并能取得良好效果。
3．显色薄层展开后，凉干。
如含粘合剂，即可直接喷显色剂，使之显色，有的还需经紫外线（254nm）照射后方能显色；对不含粘合剂的薄板，在喷显色剂时应尽量远离薄层板，否则会连吸附剂一起吹掉，应予以注意。
四、检样的定性定量分析1．比移值（Rf）的测定当样品的薄板一端被展开，经过毛细管作用流向另一端，样品是按一定的比例分配在固定相与流动相之间。
并沿着溶剂流动的方向移动，由于样品中各组分在两相中分配系数不同，各组分的移动速度也不同，经一定距离后使各组分彼此分离。
样品各组分移动的速率，亦即分离后在薄层板上的位置与溶剂展开前沿的距离的比值为比移植。