菌种传代、接受和使用记录
205菌种复苏、传代、保存、使用、销毁标准操作规程
205菌种复苏、传代、保存、使⽤、销毁标准操作规程1 ⽬的规范微⽣物学检定⽤菌的管理，最⼤限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从⽽确保微⽣物学检验结果的准确可靠。
2 适⽤范围本规程适⽤于检定⽤菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使⽤及销毁等。
3 术语3.1 标准菌种是指由中国药品⽣物制品检定所医学微⽣物菌种保藏管理中⼼提供的冷冻⼲燥菌。
3.2 传代⽤菌种是指⽤标准菌种制备的采⽤特定保存⽅法长期固定保存的菌种，⽤于传代及制备⼯作⽤菌种。
3.3 ⼯作⽤菌种是指⽤标准菌种或传代⽤菌种接种⾄普通琼脂斜⾯培养后，作为⽇常⼯作使⽤的菌种。
3.4 菌种的传代是指将其接种⾄⼀新鲜培养基上或培养基内，每萌发⼀次即称为⼀代，从菌种保藏中⼼获得的冷冻⼲燥菌种为第0代。
4 职责4.1 品管部主管负责菌种的申购、接收、保存、分发。
4.2 微⽣物检验员负责菌种的确认、传代、使⽤及销毁。
5内容5.1冻⼲菌种的复苏菌种复苏、接种在超净⼯作台内按⽆菌操作要求进⾏。
准备好菌种安瓿管（安瓿管从冰箱取出后⾸先置室温30分钟）、灭菌的⽑细滴管、培养⽫、镊⼦、1ml注射器（配有长针头）、营养⾁汤培养基、灭菌⽔及琼脂斜⾯，将以上物品移⼊菌种室，⽤75%⼄醇棉球擦净安瓿管外壁放在⽆菌培养⽫内晾⼲，点燃酒精灯，将安瓿管的封⼝⼀端在⽕焰烧灼红热，⽤⽑细管吸取灭菌⽔少许滴在灼热处，使其骤冷⽽炸裂。
在不离开⽕焰圈内，迅速⽤1ml注射器抽取0.3ml⾁汤培养基加⼊安瓿管内并摇动使冷冻块溶解，摇匀。
⽤注射器吸取该安瓿管中内溶物分别接种⾄1⽀⾁汤培养基、2⽀琼脂斜⾯培养基。
将接种后的⾁汤及培养基斜⾯根据菌种特性分别置于菌种相适宜的温度培养，培养完毕，取出培养物，⽤⽆菌接种环蘸取少许⾁汤培养物，然后在平⽫接种处进⾏划线使其形成单菌落，根据菌种特性分别置于适宜的温度下培养18-24⼩时，进⾏⾰兰染⾊镜检及相应的⽣化试验或采⽤细菌鉴定条对其进⾏确认。
如不符合要求，应及时与⽣产商联系。
菌种传代记录
菌种名称
菌种代数
传代传代次数
传代数量
传代人
传代结束日期
保存温度
培养时间（小时）
传代步骤：
1、在无菌条件下，将经复活后的菌种置于洁净工作台面。
2、点燃酒精灯，在火焰旁的上部空间操作。
3、灼烧接种环，环进入试管的部分，在通过火焰灼烧。灼烧时，把环置于酒精灯的外焰上，灼烧完毕将环稍冷片刻再进行操作。
7、先将灼烧过的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，如有熔印则表明接种环未冷却，能烫死细菌。一定待冷后，再从斜面上挑取菌苔少许。取出时接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管，在斜面上轻轻划线接种。划线时先由下而上划一直线后，再由下而上划曲线。操作过程应迅速，勿使菌苔沾至管壁或管口。
8、当接种完毕，立即将管口通过火焰灭菌，右手到火焰旁塞上棉塞，不要将管口离开火焰旁去迎接右手的棉塞。最后将接种环灼烧灭菌放置原处，再把可能未塞紧的棉塞塞紧，即可进行培养。
9、每支菌种需标明菌株编号、传代次数、菌种名称、接种日期、有效期、接种人。
10、将接种好的培养基放置培养箱中（按照菌种说明书所规定的时间和温度要求培养），观察菌种生长情况。
传代管编号：________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
4、菌种管与接种管持在左手，菌种管在前，接种管在后。应斜持试管呈45°角，使试管斜面向上。
5、以右手在火焰旁转动两管的棉塞，以便接种易于拔取。再以右手持接种环的柄端，把接种环在火焰上烧灼。顶端的环必须烧红，以彻底灭菌。
菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,操作规程完整
菌种管理制度1、目的建立菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程，规范微生物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。
2、适用范围本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的购买、保存、传代、使用及销毁等。
3、定义标准菌株是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。
传代用菌种是指用标准菌株制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。
工作用菌种是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。
4、职责4.1部门主管负责菌种的申购、接收、保存分发。
4.2微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
5、规程5.1菌种的申购部门主管根据菌种的使用情况，提出年度购买计划（包括临时检验需要），填写申购流程，经审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌株）或传代用菌种，购买时，需确定菌种的代数，以便控制传代代数。
5.2菌种的接收菌种到达实验室后，由部门主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《标准菌株库存记录》上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其暂贮存于4～8℃冰箱中，在一周内必须完成转种。
5.3菌种的保存5.3.1工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。
将菌种接种在适宜的琼脂斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至4～8℃冰箱中保存。
此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。
保存时间根据菌种种类而不同，细菌：每个月转种一次；酵母菌及芽胞：3~6个月转种一次；丝状真菌每年转种一次。
205菌种复苏、传代、保存、使用、销毁标准操作规程
1 目的规范微生物学检定用菌的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。
2 适用范围本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁等。
3 术语3.1 标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。
3.2 传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。
3.3 工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
3.4 菌种的传代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。
4 职责4.1 品管部主管负责菌种的申购、接收、保存、分发。
4.2 微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
5内容5.1冻干菌种的复苏菌种复苏、接种在超净工作台内按无菌操作要求进行。
准备好菌种安瓿管（安瓿管从冰箱取出后首先置室温30分钟）、灭菌的毛细滴管、培养皿、镊子、1ml注射器（配有长针头）、营养肉汤培养基、灭菌水及琼脂斜面，将以上物品移入菌种室，用75%乙醇棉球擦净安瓿管外壁放在无菌培养皿内晾干，点燃酒精灯，将安瓿管的封口一端在火焰烧灼红热，用毛细管吸取灭菌水少许滴在灼热处，使其骤冷而炸裂。
在不离开火焰圈内，迅速用1ml注射器抽取0.3ml肉汤培养基加入安瓿管内并摇动使冷冻块溶解，摇匀。
用注射器吸取该安瓿管中内溶物分别接种至1支肉汤培养基、2支琼脂斜面培养基。
将接种后的肉汤及培养基斜面根据菌种特性分别置于菌种相适宜的温度培养，培养完毕，取出培养物，用无菌接种环蘸取少许肉汤培养物，然后在平皿接种处进行划线使其形成单菌落，根据菌种特性分别置于适宜的温度下培养18-24小时，进行革兰染色镜检及相应的生化试验或采用细菌鉴定条对其进行确认。
如不符合要求，应及时与生产商联系。
5.2菌种传代5.2.1准备准备需用的培养基斜面，在培养基管上贴注牢固的标签，标签上注明菌名及接种日期。
菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,操作规程
菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,操作规程传代用菌种采用甘油冷冻管保存法。
将菌种接种在适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，将菌液混合甘油并分装至冷冻管中，冷冻管标注菌种名称、代数、保存日期等信息，然后放置于-80℃冰箱中保存。
每年进行一次复苏和传代，保存时间不超过5年。
5.3.2.2液体石蜡保存法对于一些难以保存的菌种，采用液体石蜡保存法。
将菌种接种在适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，将菌液混合液体石蜡并分装至玻璃瓶中，瓶口用铝箔密封，标注菌种名称、代数、保存日期等信息，保存温度为-70℃。
每年进行一次复苏和传代，保存时间不超过5年。
5.4菌种的传代传代用菌种每年进行一次复苏和传代。
复苏后，将菌种接种至适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，按照规定的传代代数制备传代用菌种，并及时更新菌种库存记录。
5.5菌种的使用使用菌种前，应先确认菌种的品质和纯度，并按照规定的传代代数制备工作用菌种。
使用后，应及时更新菌种库存记录，并进行相应的消毒处理。
5.6菌种的销毁菌种在使用过程中，如出现变异或污染等情况，应及时进行应灭活处理，并填写《菌种销毁记录表》，经主管部门审核同意后，进行销毁处理。
菌种库存中长期未使用的菌种，应定期进行清理和销毁处理。
菌复苏、复壮；Sabouraud葡萄糖琼脂培养基：用于白色念珠菌复苏、复壮；青霉素-链霉素琼脂培养基：用于铜绿假单胞菌复苏、复壮。
5.4.1.1.3复苏步骤：1.取出保存好的菌种管，用接种针在酒精灯上消毒；2.将接种针在75%酒精中消毒，再用酒精棉球擦拭消毒；3.用接种针在相应的培养基上进行接种；4.置于适宜温度下孵育，待菌落出现后进行传代或进行实验。
5.4.1.2标准菌株的确认通过形态学、生理生化特性、分子生物学等方法进行鉴定，确认菌株的纯度和种属。
5.4.1.3标准菌株的传代将菌株从原始保存方式中转移到新的保存方式中，确保菌株的保存和传承。
传代次数不宜过多，一般不超过10代。
菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,操作规程
菌种管理制度1、目的建立菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程，规范微生物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。
2、适用范围本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的购买、保存、传代、使用及销毁等。
3、定义➢标准菌株是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。
➢传代用菌种是指用标准菌株制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。
➢工作用菌种是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
➢菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。
4、职责4.1部门主管负责菌种的申购、接收、保存分发。
4.2微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
5、规程5.1菌种的申购部门主管根据菌种的使用情况，提出年度购买计划（包括临时检验需要），填写申购流程，经审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌株）或传代用菌种，购买时，需确定菌种的代数，以便控制传代代数。
5.2菌种的接收菌种到达实验室后，由部门主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《标准菌株库存记录》上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其暂贮存于4～8℃冰箱中，在一周内必须完成转种。
5.3菌种的保存5.3.1工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。
将菌种接种在适宜的琼脂斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至4～8℃冰箱中保存。
此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。
保存时间根据菌种种类而不同，细菌：每个月转种一次；酵母菌及芽胞：3~6个月转种一次；丝状真菌每年转种一次。
菌种传代、使用、保存操作规程
菌种传代、使用、保存操作规程1.目的本文件规定了微生物检验用菌、无菌检验用菌及抗生素检验用菌的接种、保存，传代方法及要求，适用于中心化验室进行检验用菌的接种和传代操作。
2. 适用范围适用于中心化验室菌种管理人员进行检验用菌的接种、保存和传代操作。
3.职责菌种管理人员应按本程序的规定操作。
4.参考文件及相关程序B08(02)005 微生物实验室标准管理程序B08(02)019 微生物检验用菌标准管理程序B08(02)020 检验用培养基标准管理程序5. 程序5.1.对照菌株名称·金黄色葡萄球菌〔CMCC(B) 26 003〕·铜绿假单胞菌〔CMCC(B) 10 104〕·生孢梭菌〔CMCC(B) 64 941〕·枯草芽孢杆菌〔CMCC(B) 63 501〕·大肠埃希菌〔CMCC(B) 44 102〕·白色念珠菌〔CMCC(F) 98 001〕·黑曲霉〔CMCC(F) 98 003〕·短小芽孢杆菌〔CMCC(B) 63 202〕·藤黄微球菌〔CMCC(B) 28 001〕·乙型副伤寒沙门菌〔CMCC(B) 50 094〕5.2.菌种来源中国药品生物制品检定所提供的冷冻干燥菌种（即安瓿）。
5.3. 微生物检验用菌菌悬液的制备5.3.1.菌种的复苏与传代5.3.1.1. 取备妥的冷冻菌种安瓿，灭菌的毛细滴管、双碟、镊子、注射器、灭菌水及复苏菌种所需的培养基等物品，移入超净工作台。
5.3.1.2. 用75%酒精棉球擦净冷冻菌种安瓿外壁，放在灭菌双碟内，待干。
5.3.1.3. 点燃酒精灯，将安瓿的封口一端在火焰上烧灼，用灭菌毛细管吸取灭菌水或胰酪大豆胨液体培养基少许在灼热处，使其骤冷,用干燥无菌纱布包裹安瓿，安瓿掰开。
5.3.1.4. 在不离开火焰圈内，迅速用注射器抽取约0.5ml胰酪大豆胨琼液体培养基，注入安瓿内，轻轻震摇使冷冻菌块溶解、混匀，随即用注射器吸取安瓿内容物分别接种至1支胰酪大豆胨液体培养基，1支普通胰酪大豆胨胰酪大豆胨琼脂斜面培养基内。
检定用菌种传代、贮存、接种操作细则
检定用菌种、传代、贮存、接种操作细则传代与接种操作步骤：1、先点燃酒精灯，在火焰旁的上部空间操作，烧灼接种环。
2、再将菌种管（即原有的菌种斜面培养基）与待接种的新鲜斜面培养基（接种管）持在左手拇指、食指与中指之间，要注意能清楚的观察到斜面，菌种管在前、接种管在后，应斜持试管显45℃角，使试管内斜面上，两试管口平齐，注意不要持成水平，以免底管凝聚小浸湿培养基表面。
3、用右手将两管棉塞转动，以便接种时易于拔取。
再灼烧接种环注意灼烧时，接种环应垂直或稍斜的在外焰上灼烧，外焰温度与内焰高，顶端的环必须烧红，以彻底灭菌，环以上进入试管部分也应充分通过火焰灭菌。
4、使用右手小指与无名指及无名指中指之间，在火焰旁分别拔下两只试管的棉塞、持住，将试管口通过火焰，以杀灭管口可能沾污的细菌，但勿烧烫。
5、将灼烧过的接种环伸入菌种管，先接触无军生长的培养基快速冷却，若接触的培养基有熔印时则表明接种环未冷却，能烫死细胞。
待冷后，从斜面上挑取菌苔少许，在火焰旁边，迅速踌躇接种环伸入接种管，在管内斜面上划线接种。
划线时在斜面上应先由内向外划一直线后，再由内向外划曲线。
*注意事项：1、整个操作过程应迅速且在酒精灯上方操作，勿使菌苔沾至管壁或管口。
2、从菌种管取出少量菌种苔后接种环，切不可通过火焰，以免菌种被烧死，也不宜火焰太远。
（避免污染）3、接种完毕后，立即在火焰旁塞上棉塞，再将接种环灼烧灭菌放回原处，再把可能未塞紧的棉塞塞紧，即可置适宜温度培养。
4、操作过程中，若棉塞不慎触及火焰而着火，切忌用口吹，若是棉塞进试管塞内一端着火，可在刚刚着火时迅速塞入试管，因管内氧气不是会很快熄灭，若棉塞外着火，可用手捏熄，若棉烧坏不宜再用，可另取未接种斜面培养基的灭菌棉塞，代替塞上。
5、借重完毕，应做好记录。
菌种的分离鉴别操作细则目的：当菌种污染某菌时，可将菌种接种于平板培养基进行分离，再根据菌种形态，挑取典型纯菌落并鉴别制成菌种管。
分离方法及步骤：1、取已污染某菌的菌落管，左手拿着菌种管拧松棉塞。
菌株传代记录纯度
菌株传代记录纯度
标准菌株传代记录：
（1）菌株供应商的选择
选择有资质的标准菌株合格供应商，每批标准菌株必须附带有供应商的合格证或检测报告或说明书，来证明所采购的标准菌株是合格的。
（2）标准菌株和验收
实验室收到标准菌株，首先应进行符合性感官检查，记录菌株号和标准菌株来源途径信息，确保溯源性清楚。
同时还应记录标准菌株名称和数量、生产日期、接收日期和有无破损等情况。
（3）冻干标准菌株的复苏
购回的标准菌株一般为冻干粉剂，依照随产品附有的菌种复活方法，在相应的生物安全水平下打开包装，选择合适的培养基和培养条件（根据生产商说明或有关技术通则）进行复活。
冻干菌株的传代次数不得超过5代。
（4）菌株性能的确认
①菌株传代记录纯度检查（观察菌落形态）：取复活后的培养物，在相应的鉴别平板或非选择平板上划线分离，培养出单菌落，观察菌落形态是否符合该菌株要求，同一平板上的单菌落大小、形状、颜色、质地和光泽是否相似，对于出现两种以上形态的菌株，应再分别挑取单菌落划线，检测是否出现相同特征。
②细胞形态：取划线平板上的单菌落，革兰染色反应应符合要求，且呈现一致性。
③必要时进行生化鉴定。
④污染处理：如发现菌株有污染，挑选目标菌培养成功后，将培养物灭菌销毁（121℃，30分钟）。
菌种传代、接受和使用记录
菌种名称：
□Staphylococcus aureus /S.a/金黄色葡萄球菌□Escherichia coli /E.c/大肠埃希氏杆菌□Pseudomonas aeruginosa /P.a/铜绿假单胞菌□Bacillus subtilis /B.s/枯草芽孢杆
□Clostridium sporogenes /C.s/生孢梭菌□Candida albicans /C.a/白色念珠菌□Aspergillus niger /A.n/黑曲霉菌
菌种编号：
、、、
、、、
、、、
□传代菌种□工作菌种
保存条件：
传代所用菌种编号：
传代人/日期：
复核人/日期：
培养基/批号：
培养温度
□30-35℃
□20-25℃
培养时间：
□h
□d
传代数量：支
编号：
编号：
传代所用菌种编号：
传代人/日期：
复核人/日期：
培养基/批号：
培养温度
□30-35℃
□20-25℃
培养时间：
保存温度
有效期
复核人/日期
使用人/日期
用途
复核人/日期
备注
□ -20 ℃ □ 2-8 ℃
□ -20 ℃ □ 2-8 ℃
□ -20 ℃ □ 2-8 ℃
□ -20 ℃ □ 2-8 ℃
□ -20 ℃ □ 2-8 ℃
□ -20 ℃ □ 2-8 ℃
工作菌种接受和使用登记
菌种名称：
□Staphylococcus aureus/S.a/金黄色葡萄球菌□Escherichia coli/E.c/大肠埃希氏杆菌□Pseudomonas aeruginosa/P.a/铜绿假单胞菌□Bacillus subtilis/B.s/枯草芽孢杆
菌种保存、传代、使用、销毁管理及操作规程【最新版】
菌种保存、传代、使用、销毁管理及操作规程菌种管理制度1、目的建立菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程，规范微生物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。
2、适用范围本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的购买、保存、传代、使用及销毁等。
3、定义标准菌株是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。
传代用菌种是指用标准菌株制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。
工作用菌种是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。
4、职责部门主管负责菌种的申购、接收、保存分发。
微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
5、规程菌种的申购部门主管根据菌种的使用情况，提出年度购买计划(包括临时检验需要)，填写申购流程，经审批后，向中检所菌种保藏中心或省(市)药检所购买冻干菌种(标准菌株)或传代用菌种，购买时，需确定菌种的代数，以便控制传代代数。
菌种的接收菌种到达实验室后，由部门主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《标准菌株库存记录》上，内容包括:名称、数量、编号(无编号者按检定菌种的编号原则编号)、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其暂贮存于4~8℃冰箱中，在一周内必须完成转种。
菌种的保存工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。
将菌种接种在适宜的琼脂斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至4~8℃冰箱中保存。
此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。
保存时间根据菌种种类而不同，细菌:每个月转种一次;酵母菌及芽胞:3~6个月转种一次;丝状真菌每年转种一次。
26检定菌保存、传代、使用、销毁标准操作规程
当工作用菌种代数小于5时，可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种。取在冰箱4～8℃保存的工作用菌种用普通琼脂斜面传代，并将新传代的培养物替代原有的菌种，作为工作用菌种。也可取用“甘油冷冻管保藏法或液体石蜡覆盖保藏法”保存的菌种，进行复苏，直接作为工作用菌种。
细菌每1个月传代一次；酵母菌每2个月传代一次；霉菌及芽胞每3个月传代一次。当超过5代，须用传代用菌种传代。
6.8检定菌种（废弃）的销毁
6.8.1下列情况的菌种或培养物或被污染的器具等，必须采用121℃、30分钟湿热灭活处理：
新一代菌种制备成功后的上一代菌种；
使用完后的菌种和带有标准菌种的器具和培养物；
c、超过有效期的菌种；
d、凡被污染、变异、可疑等异常情况菌种；
e、其他应废弃的菌种。
6.8.2废弃菌种的销毁由微生物检验员提出申请，交QC主管批准后，进行灭活处理，并有其他人在场监督。
此种方法主要适用于需氧细菌和酵母菌的保藏（如大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等）。
6.4.2.2液体石蜡保存法
6.4.2.2.1无菌液体石蜡的制备：选用优质化学纯液体石蜡，将液体石蜡分装加塞，用牛皮纸包好，在121℃灭菌30分钟,置40℃恒温箱中蒸发水分，经无菌检查后备用。
6.4.2.2.2液体石蜡管的制备：将菌种穿刺接种于半固体高层培养基中，在适宜条件下培养结束后，在层流台下用无菌吸管吸取上述无菌液体石蜡至培养好的菌种管内，并使石蜡高出菌种表面约1cm使菌体与空气隔绝，并将试管直立，置于-20℃冷冻或2～8℃冰箱中保存。
6.5.1.2菌种确认后，挑取平板上纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管，作为保存菌种（G2），也称传代用菌种，同时挑取纯菌落转接斜面菌种数支，作为工作用菌种，此为第3代（W3）。
菌种传代、保存、使用、销毁操作规程(第一版第0次修订)
1术语标准菌株是指由微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。
传代用菌种（标准储备菌株）是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。
工作菌株是指用标准菌种或传代用菌种接种至相应固体或液体培养基后作为日常工作使用的菌种。
菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基培养上，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。
2操作程序2.1菌种接收（验收）菌种到达实验室后，由菌种管理人员接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，进行记录，内容包括：名称、编号、数量、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其贮存于菌种说明书规定条件中，在有效期内完成菌种复苏。
2.2菌种复苏、复核、传代按菌种所附说明书进行复苏培养，或按检验标准中菌株的要求接种至适宜培养基内适宜温度和时间进行培养。
必要时按相应检验标准复核菌株，即接种上述培养物至适宜培养基中，适宜温度和时间进行培养后，观察菌落形态，或进行革兰氏染色及镜检，必要时进行进一步生化鉴定。
若菌种不纯或疑有污染，应查因及处理。
菌种复核后转接斜面或按冻存管说明书制备冻存液。
菌种管编号，将菌种冻存管冻存、斜面相应温度培养后适宜温度保存或使用。
菌株传代、使用不超过5代。
操作完成及时予以记录。
2.3菌种保存斜面低温保存法：将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至4～8℃冰箱中保存。
此法用于菌种的短期保存，使用时若发现污染杂菌和变异等异常情况，应停止使用并灭活销毁。
冻存管法：按产品说明书操作与保存。
斜面低温保存法主要用于工作菌种的保存，保存时间根据菌种种类不同而不同，细菌与酵母菌一般2个月，霉菌及芽胞一般3个月；冻存管法用于传代菌种的保存。
2.4实验室菌种的编号采用字母加数字表示：菌株保藏编号（代次）-保存年份-顺序号。
代次用G带有下标数字表示。
2.5菌种保管保存、领用与销毁菌种设双人双锁保管、领用。
菌种传代记录
QC 质量管理记录产品名称：制剂成品产品名称：___________________编号:RSB25-02检验操作记录复核员：检验员：共（）页，第（）页编号：RSB26-02 药品微生物限度检查实验记录①匀浆仪挡min ②研钵法③保温振摇法④薄膜过滤法2 水溶性供试品：取供试品g或ml 加乳化剂（g 或ml）3．抑菌性供试品处理方法：取供试品g或ml加入PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液ml 方法：①培养基稀释法②离心沉淀法③薄膜过滤法④中和法活螨检查检验员：复核员：编号:RSB27-01 HPLC检验操作记录编号:RSB28-01 原辅包装材料检验报告单检验员：复核员：部门负责人：中间体检验报告单部门负责人：复核员：检验员：成品检验报告单部门负责人：复核人：检验员：中间体检验台帐包装材料检验台帐编号:RSB33-01 留样样品处理申请单原辅料检验台帐检验剩余样品销毁记录标准品/剧毒品收发记录名称：编号:RSB37-01 试液配制记录编号:RSB37-01 试液配制记录编号:RSB38-01 滴定液配制及标化记录编号:RSB39-01 指示剂配制记录编号:RSB39-01 指示剂配制记录编号:RSB40-01 培养基配制及使用记录编号:RSB41-01菌种购入、使用记录菌种名称：编号：编号:RSB42-01菌种销毁记录菌种名称：金黄色葡萄球菌编号：CMCC(B)26 003编号:RSB43-01菌种传代管理记录菌种名称及代号：购入日期：检验仪器使用登记表编号:RSB44-02 仪器名称：仪器编号：编号:RSB45-01精密仪器档案档案号：建档年月日编号:RSB46-01 留样样品领用登记表编号:RSB47-01留样观察记录品名：规格：编号:RSB48-01 留样观察台帐留样考察记录品名：规格：留样样品处理登记记录编号:RSB51-01 高压消毒灭菌器使用记录编号:RSB52-01微生物室紫外灯使用记录编号：编号:RSB53-01培养基灵敏度试验记录编号：编号:RSB54-01 对照品（标准品）、菌种存放冰柜的温度记录温湿度记录监测房间：不合格品台帐容量仪器校正记录编号:RSB58-01纯化水检验报告单部门负责人：复核员：检验员：编号: RSB60-01 微生物检验室沉降菌测试原始记录测试依据测试状态环境温度°C 相对湿度%培养基批号培养温度°C评定标准结论检验者复核者固体制剂车间沉降菌测试原始记录（2）测试依据测试状态环境温度°C 相对湿度%培养基批号培养温度°C静压差检测日期报告日期评定标准结论检验者复核者固体制剂车间沉降菌测试原始记录（3）测试依据测试状态环境温度°C 相对湿度%培养基批号培养温度°C评定标准结论检验者复核者编号:RSB67-01 固体制剂车间沉降菌测试原始记录（1）测试依据测试状态环境温度°C 相对湿度%培养基批号培养温度°C静压差检测日期报告日期评定标准结论检验者复核者编号:RSB65-01 原辅料车间沉降菌测试原始记录（1）测试依据测试状态环境温度°C 相对湿度%培养基批号培养温度°C静压差检测日期报告日期评定标准结论检验者复核者编号：RSB66-01 原辅料车间沉降菌测试原始记录（2）测试依据测试状态环境温度°C 相对湿度%培养基批号培养温度°C静压差检测日期报告日期评定标准结论检验者复核者编号: RSB59-01沉降菌测试原始记录测试依据测试状态环境温度°C 相对湿度%培养基批号培养温度°C静压差检测日期报告日期评定标准结论检验者复核者编号:RSB72-01留样样品领用登记表（二）编号：RSB73-00 剧毒品处理登记记录。
检定菌传代、贮存、接种操作规程
检定菌传代、贮存、接种操作规程目的：建立一个检定用菌的传代、贮存、接种操作规程。
范围：适用于所有检定菌的传代、贮存、接种。
责任人：质量检验部部长微生物检验员无菌检验人员抗生素生物检定检验人员内容：1 检定菌的来源：检定菌种由中国药品生物制品检定所提供的冷冻干燥品（安瓶）。
或由药检部门提供已接种好的菌种斜面。
2 检定菌的传代和接种：2.1芽胞杆菌3～6个月（其他细菌每个月）用普通琼脂斜面传代1次，将新传代的培养物代替原有的菌种，作为工作用（阳性对照）菌种。
传代和接种在菌种接种室内按无菌操作要求进行。
2.2 准备妥冷冻菌种安瓶或菌种斜面，灭菌的毛细滴管、双碟、镊子、注射器、肉汤培养基、灭菌水及普通琼脂斜面，移入接种室。
2.3冷冻菌种安瓶的接种。
2.3.1 用75%酒精棉擦净菌种安瓿的外壁，稍干。
2.3.2 点燃酒精灯，将安瓿的封口，一端在火焰上烧灼红热用毛细管吸取灭菌水少许在灼热处，使其骤冷而炸裂，2.3.3 在不离开火焰圈内，迅速用注射器取约0.3ml肉汤培养基加入安瓿内，并摇动使冷冻块溶解，摇匀，用注射器吸取安瓿内容物分别接种至1支肉汤培养基、2支普通琼脂斜面培养基。
2.3.4 将接种后肉汤培养基及普通琼脂斜面于37℃恒温培养24小时。
2.3.5 取出培养物，仔细观察菌落形态，有无杂菌，并转接3支普通琼脂斜面。
于37℃恒温培养24h，供菌种保存与传代用，同时作平板分离单个菌落及涂片镜检，应为典型的菌型。
2.4检定菌的传代2.4.1 将菌种管与接种管均用75%酒精棉擦净外壁，稍干。
2.4.2 先点燃酒精灯，在火焰旁的上部空间操作。
烧灼接种环。
2.4.3 再将菌种管与接种管持在左手拇指、食指及中指之间，要注意能清楚地观察到斜面，菌种管在前，接种管在后。
应斜持试管呈45°角，使试管内斜面向上，两试管口平齐，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。
2.4.4 首先，以右手在火焰旁转动两管的棉塞，以便接种时易于拔取。
菌种传代、接受和使用记录
菌种传代记录菌种名称：品种编号：□Staphylococcus aureus /S.a/金黄色葡萄球菌□Escherichia coli /E.c/大肠埃希氏杆菌□ Pseudomonas aeruginosa /P.铜a/绿假单胞菌□ Bacillus subtilis /B.s/ 枯草芽孢杆□Clostridium sporogenes /C.s/生孢梭菌□Candida albicans /C.a/白色念珠菌□Aspergillus niger /A.n/ 黑曲霉菌□ 传代菌种□ 工作菌种保存条件：传代所用菌种编号：培养基 /批号：培养温度培养时间：传代数量：编号：编号：传代人 /日期：□ 30-35℃□h支□ 20-25℃□d复核人 /日期：传代所用菌种编号：培养基 /批号：菌种数量：支培养温度培养时间：菌种编号：传代人 /日期：□ 30-35℃□h、、、□ 20-25℃□d、、、复核人 /日期：、、、□ 传代菌种□ 工作菌种保存条件：传代所用菌种编号：培养基 /批号：培养温度培养时间：传代数量：编号：编号：传代人 /日期：□ 30-35℃□h支□ 20-25℃□d复核人 /日期：传代所用菌种编号：培养基 /批号：菌种数量：支培养温度培养时间：菌种编号：传代人 /日期：□ 30-35℃□h、、、□ 20-25℃□d、、、复核人 /日期：、、、菌种编号规则：名称缩写 +代数 +传代日期 +顺序号。
例： E.c-G1-20161115-02 E.c-W3-20161215-05传代菌种接受和使用登记菌种名称：□Staphylococcus aureus /S.a/金黄色葡萄球菌□Escherichia coli /E.c/大肠埃希氏杆菌□Clostridium sporogenes /C.s/生孢梭菌□Candida albicans /C.a/白色念珠菌品种编号：□Pseudomonas aeruginosa /P.铜a/绿假单胞菌□Bacillus subtilis /B.s/ 枯草芽孢杆□Aspergillus niger /A.n/ 黑曲霉菌菌种编号规则：名称缩写 +代数 +传代日期 +顺序号。
菌种购进及领用记录
菌种购进及领用记录
菌种名称：
注：基质类型----冻干粉剂\甘油保存\石腊保存\瓷珠冻存\低温斜面等，按实际填写。
过期菌种在用途栏填：销毁。
保存菌种传代和使用记录
1菌种名称：母代代数及编号：子代代数及编号：
2接种培养培养基名称、批号：接种容器：培养温度：℃日期：
3 质控检查(或分离鉴定)记录编号：质控结果：
4 子代制备用无菌蒸馏水将培养物制成菌悬液，分装于分装支数：分装日期：
分装后的处理：传代人：5 保藏方法：有效期：保管人：
工作菌种制备和使用记录
1菌种名称：母代代数及编号：子代代数及编号：
2接种培养培养基名称批号：容器：接种支数培养温度：℃日期：3 质控检查(或分离鉴定)报告编号：质控结果：制备人：
5 保藏方法：入藏支数有效期：保管人：
菌种质控（鉴定）记录
菌种名称：编号：检查日期：检查人：记录编号：
结论：
菌种名称：编号：检查日期：检查人：记录编号：
结论：
菌种销毁记录。
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□d
菌种数量：支
菌 种 编 号：
、、、
、、、
、、、
菌种编号规则：名称缩写+代数+传代日期+顺序号。例：
传代菌种接受和使用登记
菌种名称：
□Staphylococcus aureus/金黄色葡萄球菌□Escherichia coli/大肠埃希氏杆菌□Pseudomonas aeruginosa/铜绿假单胞菌□Bacillus subtilis/枯草芽孢杆
□Clostridium sporogenes/生孢梭菌□Candida albicans/白色念珠菌□Aspergillus niger/黑曲霉菌
品种编号：
菌种编号规则：名称缩写+代数+传代日期+顺序号。例：
接收人/日期
接收数量
批号/编号
保存温度
有效期
复核人/日期
使用人/日期
用途
复核人/日期
备注
□ 2-8 ℃ □ 10-30℃
□ 2-8 ℃ □ 10-30℃
□ 2-8 ℃ □ 10-30℃
□ 2-8 ℃ □ 10-30℃
□ 2-8 ℃ □ 10-30℃
□ 2-8 ℃ □ 10-30℃
□ 2-8 ℃ □ 10-30℃
□ 2-8 ℃ □ 10-30℃
□ 2-8 ℃ □ 10-30℃
□ 2-8 ℃ □ 10-30℃
□ -20 ℃ □ 2-8 ℃
□ -20 ℃ □ 2-8 ℃
□ -20 ℃ □ 2-8 ℃
□ -20 ℃ □ 2-8 ℃
□ -20 ℃ □ 2-8 ℃
工作菌种接受和使用登记
菌种名称：
□Staphylococcus aureus/金黄色葡萄球菌□Escherichia coli/大肠埃希氏杆菌□Pseudomonas aeruginosa/铜绿假单胞菌□Bacillus subtilis/枯草芽孢杆
菌种传代、接受和使用记录
菌种传代记录
菌种名称：
□Staphylococcus aureus /金黄色葡萄球菌□Escherichia coli /大肠埃希氏杆菌□Pseudomonas aeruginosa /铜绿假单胞菌□Bacillus subtilis /枯草芽孢杆
□Clostridium sporogenes /生孢梭菌□Candida albicans /白色念珠菌□Aspergillus niger /黑曲霉菌
品种编号：
□传代菌种□工作菌种
保存条件：
传代所用菌种编号：
传代人/日期：
复核人/日期：
培养基/批号：
培养温度
□30-35℃□20-Leabharlann 5℃培养时间：□h
□d
传代数量：支
编号：
编号：
传代所用菌种编号：
传代人/日期：
复核人/日期：
培养基/批号：
培养温度
□30-35℃
□20-25℃
培养时间：
□h
□d
菌种数量：支
□Clostridium sporogenes/生孢梭菌□Candida albicans/白色念珠菌□Aspergillus niger/黑曲霉菌
品种编号：
菌种编号规则：名称缩写+代数+传代日期+顺序号。例：
接收人/日期
接收数量
批号/编号
保存温度
有效期
复核人/日期
使用人/日期
用途
复核人/日期
备注
□ -20 ℃ □ 2-8 ℃
菌 种 编 号：
、、、
、、、
、、、
□传代菌种□工作菌种
保存条件：
传代所用菌种编号：
传代人/日期：
复核人/日期：
培养基/批号：
培养温度
□30-35℃
□20-25℃
培养时间：
□h
□d
传代数量：支
编号：
编号：
传代所用菌种编号：
传代人/日期：
复核人/日期：
培养基/批号：
培养温度
□30-35℃
□20-25℃
培养时间：