循环肿瘤细胞CTC检测及临床应用
外周血循环肿瘤细胞(CTCs)分离富集检测及其临床应用
仅能揭示瞬时的基因组特征 不可行 无 58%（肺癌）
49.6%（肺癌）
97.2%（肺癌） 未见报道 不可以 不可以 数据质量较差
CTC检测助力肿瘤诊疗
2 最具潜力的液体活检---CTC检测
7
2.1 CTC概念
循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cell,CTC)指从实体瘤中脱离出来并进入外周血液循环的肿瘤细胞。
03 非典型形态
• CTC入血后随血液快速流动。 • 与其他细胞碰撞、受到血管壁 的挤压。 • 受机体免疫系统以及药物的攻 击。 • CTC形态有别于肿瘤组织、细 胞大小、形态及表型发生变化。
瘤标志物
Weinberg提出CTC 可作为具有临床实 践价值的诊断指标， 为临床提供重要信
息
CTC的EMT状态与 肿瘤治疗效果和复
发相关
CFDA批准叶酸受 体阳性CTC检测试
剂盒
1869 1889
1976
1982
2004
2007 2008
2011
2012
2013
2014
2016 2017
提出“种子与土壤”假说， 即肿瘤细胞可随血液在 体内循环，进入其他器 官如同种子遇到土壤，
03 非典型形态
•相同肿瘤的不同细胞之间的基因 与表型存在差异。
• 不同实体肿瘤来源CTC，不同患 者CTC表面抗原表达、分布存在差 异。
Burrell RA, et. al. Nature. 2013 ;501(7467):338-45.
2.3 循环肿瘤细胞特点---非典型形态
01 稀有性
02 异质性
优点：非侵入式； 无创； 可重复性取样； 获取全面的疾病信息。
Alix-Panabières C, Pantel K. Clin Chem. 2013 Jan; 59(1):110-8.
人外周血循环肿瘤细胞(CTC)
人外周血循环肿瘤细胞(CTC)检测技术的研发及临床应用开发美国肿瘤协会于2006 年发表的年度报告指出，目前全世界范围内每3 人中就有1 人在其一生中会患有某种肿瘤，而且肿瘤发病率在发展中国家随着污染程度的增加，患病几率还会高于1/3 的比例。
现今全世界用于肿瘤治疗与防治的费用每年以16.5% 的比例递增。
仅用于乳腺癌，结直肠癌及前列腺癌（还不包括发病率最高的肺癌）的投资，目前世界范围内已达每年92 亿美元。
目前全世界用于肿瘤诊断的方法可归为三大类：病理学（活检切片）；影像学（超声，X光，CT, PET 等）和血清学（血清肿瘤相关蛋白，如CA-125, CA-199, CEA 等），但所有这些方法都有不可避免的缺点，例如灵敏性及特异性差，过于依赖医生判断的主观性等。
因此目前临床急需一种能够为医生及病人提供准确，快速的肿瘤检测手段。
经过长时间的大量研究，美国FDA 认证的人外周血循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cell, CTC）检测目前已被公认为最好及最可观的检测手段之一。
目前已有越来越多的国内外医生开始应用此技术作为肿瘤检查的重要辅助手段。
不仅于此，CTC 检测也被公认为是目前国外新近流行的肿瘤治疗方法-即阻断肿瘤细胞入血转移的唯一有效检测指标。
除了上述CTC可作为肿瘤检测手段外，CTC还可成功应用于以下一系列其它方面的用途：(1)个体化治疗的体外肿瘤药物筛选；(2)体内化疗药物药效的快速评估: 相对于每12周一查的CT 诊断，CTC在第1-2周即可显示药效结果，这一点对临床医生和病人尤为重要；(3) 根据CTC数目，判断病人愈后状况及存活时间；（4）肿瘤病人复发的监测与及时诊断；及（5）正常人群体检普查以利于尽可能的肿瘤早期诊断。
除了应用于临床外，CTC 亦可应用于众多药厂和科研机构的基础研究，包括寻找新的肿瘤标识物以及开发新的抗肿瘤药物等。
目前美国FDA已于2004年认证了美国上市公司Immunicon/Veridex的CTC检测技术及其临床应用。
ctc循环肿瘤细胞检测
CTC循环肿瘤细胞检测循环肿瘤细胞（CTC）是一种罕见的血液中的癌细胞，可以从原发肿瘤脱落，并通过血液循环传播到其他部位。
CTC的检测对于癌症的早期诊断、治疗选择和预后判断具有重要意义。
CTC循环肿瘤细胞检测是一种非侵入性、无创的方法，可以提供关于肿瘤发展和蔓延的有价值的信息。
本文将介绍CTC循环肿瘤细胞检测的原理、方法和应用。
原理CTC循环肿瘤细胞检测的原理基于CTC的特殊性质。
CTC具有一定的生物特性，如细胞形态学特征、表面标记、核酸和蛋白质表达等，使其能够与正常血液细胞区分开来。
通过对CTC进行特异性标记和分离，可以将其从血液中分离出来，并进行进一步的表征和分析。
目前，CTC的检测方法大致可以分为两类：物理方法和生物学方法。
物理方法包括密度梯度离心、滤膜分离和微流控芯片等，通过差异化的物理性质实现CTC的分离。
生物学方法则利用CTC与正常血液细胞之间的生物学区别，如表面标记的差异、特定蛋白和核酸标记等，通过生物学分子靶向的方式进行CTC的富集和分离。
方法CTC循环肿瘤细胞检测的方法多样，具体的选择取决于实验室的设备和研究目的。
下面将介绍几种常见的CTC检测方法：密度梯度离心法密度梯度离心法是最早用于CTC检测的方法之一。
该方法通过利用瘦脂蛋白或葡聚糖等高分子物质在不同浓度下形成的梯度来分离CTC。
通过对梯度离心后，在不同密度层次上找到CTC，并进行进一步的分析和鉴定。
滤膜分离法滤膜分离法基于滤膜的孔径大小来分离不同大小的细胞。
通过选择合适的滤膜孔径，可以将CTC与正常血液细胞分离开来。
然后，通过对滤膜上沉积的细胞进行进一步的标记和分析，即可获得CTC的信息。
微流控芯片法微流控芯片法是一种新兴的CTC检测方法。
该方法利用微流控技术，在芯片上制造出复杂的细流体网络，并通过微米级别的微通道将CTC富集和分离。
微流控芯片法具有高通量、高灵敏度和高特异性的优点，被广泛应用于CTC的检测。
应用CTC循环肿瘤细胞检测在临床和研究领域具有广泛的应用前景。
循环肿瘤细胞(CTC)检测 (2)
循环肿瘤细胞(CTC)检测引言循环肿瘤细胞（CTC）是指从原发肿瘤中脱落并进入血液循环中的癌细胞。
它们是肿瘤转移和复发的主要起源，能提供重要的生物学信息和预测患者预后的依据。
因此，CTC检测对于肿瘤的早期诊断、治疗监测以及指导个体化治疗具有重要意义。
在过去的几十年中，CTC检测技术得到了快速发展和广泛应用。
通过利用特定的标记物（如抗原、RNA或DNA等），结合高灵敏的检测方法，可以在血液样本中检测到极低浓度的CTC。
本文将介绍CTC检测的原理、常用的检测方法以及其在临床上的应用。
原理CTC检测的原理基于以下几个关键步骤：1.血液样本采集：通过采集患者的外周血样本，包括血浆或全血。
2.CTC富集：为了提高CTC的检测灵敏度，需要将CTC从血液中富集出来。
一种常用的方法是通过利用CTC表面标记物的特异性，使用磁珠、细胞捕获装置或微流体装置等实现。
3.CTC检测：将富集后的CTC进行分离和检测。
目前常用的检测方法包括免疫细胞荧光染色、聚合酶链反应（PCR）、流式细胞术（FACS）等。
这些方法可以通过检测CTC表面标记物的存在与否，或者检测CTC特异基因、蛋白质或RNA等分子标记来确定CTC的存在。
4.CTC鉴定和计数：根据CTC的特征，如核形态、大小、核质比等特征，对CTC进行鉴定和计数。
一些图像处理和自动化技术也可以用来提高鉴定的准确性和效率。
常用的CTC检测方法免疫细胞荧光染色法免疫细胞荧光染色法是目前最常用的CTC检测方法之一。
该方法利用免疫荧光染色技术，通过将CTC与特定的抗原结合，然后使用荧光染料进行标记。
通过在荧光显微镜下观察，可以准确识别CTC的存在与否。
PCR法PCR法通过扩增CTC特异基因的片段，来快速检测和鉴定CTC。
该方法的优点是灵敏度高、检测速度快，然而由于PCR 技术的特点，可能存在假阳性结果的问题。
FACS法FACS法通过流式细胞仪对CTC进行快速分离和检测。
该方法可以同时检测多个标记物，提高检测的准确性和灵敏度。
循环肿瘤细胞(CTC)检测
循环肿瘤细胞（CTC）检测一、什么是循环肿瘤细胞（CTC）？循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cell，CTC）是存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称，因自发或诊疗操作从实体瘤病灶（原发灶、转移灶）脱落，进入外周血循环的肿瘤细胞。
CTC非常稀少，每毫升血液中109血细胞只有几个CTC。
大部分CTC在进入外周血后会发生凋亡或被吞噬，少数能够逃逸并发展成为转移灶，增加恶性肿瘤患者的死亡风险。
二、肿瘤的发生及检测诊断全国肿瘤登记中心发布的2015年年报显示，2011年我国新增癌症病例约337万例，比2010年增加28万例——这相当于每分钟有6人被诊断为癌症。
然而，令人担忧的是这样的情势似乎仍未到达峰顶，未来可能还会不断增加。
美国约翰-霍普金斯大学Kinmel 癌症中心的Bert-Vogelstein 等专家在2013年3月份的一篇综述文章中写道：在今年将死于癌症的一百万人里，绝大部分是因为他们的癌症没有在发生、发展的前90%的时间内被发现。
因此，我们需要明确一点：癌症是一种慢性病，它只是被突然发现，并非是突然发生的。
我们需要尽可能早的发现它，从而提高治愈率。
伴随肿瘤的发生过程，肿瘤细胞的大小也随之增大。
传统方法诊断出癌症的时候，大部分已经是晚期。
晚期癌症的治愈率极低，其五年生存率也很低。
在肿瘤的发生过程中，早期到中期之间是最佳治疗期，因此，如果在早期就可以发现肿瘤的存在，必然可以提高治愈率。
临床癌症研究（Clinical Cancer Research）杂志上发表的荟萃分析（Meta-analysis）证实CTC在乳腺癌预测中的价值，结果表明早期和转移性乳腺癌患者的循环肿瘤细胞CTC检测是一个稳定的预测和预后工具。
如果将肿瘤易感性基因检测和循环肿瘤细胞检测完美结合，那么能够将肿瘤的早期发现率提高数倍。
肿瘤易感性检测是对未来可能患有癌症的一种风险预测。
如果风险等级高，除了改变生活方式外，还可以定期做循环肿瘤细胞检测，即CTC检测，而且检查频率可以适当增加，每2-3个月检查一次，从而达到实时监控的目的。
ctc检测的临床应用原理
CTC检测的临床应用原理什么是CTC检测CTC（循环肿瘤细胞）是指从主要肿瘤部位脱离，进入血液循环，并具有能够引起远处转移的潜能的肿瘤细胞。
CTC检测可以通过采集患者的血液样本，并对其中的循环肿瘤细胞进行分离和分析，从而评估肿瘤的侵袭性、转移潜力以及预后。
CTC检测的临床应用CTC检测已经被广泛应用于临床实践中，并且在肿瘤的早期诊断、疾病监测、治疗选择以及预后评估等方面发挥着重要的作用。
下面将介绍CTC检测的临床应用原理。
早期诊断CTC检测可以帮助早期诊断肿瘤，其原理是通过检测血液中循环肿瘤细胞的存在和数量来判断肿瘤的存在。
由于早期肿瘤往往没有症状或症状不明显，因此常常很难进行准确的诊断。
CTC检测可以提供一种非侵入性的检测方法，通过简单的血液采集即可进行，对于高风险人群或疑似肿瘤患者进行筛查，有助于尽早发现肿瘤并进行进一步的诊断。
疾病监测对于已经确诊的肿瘤患者，CTC检测可以用于监测疾病的进展和治疗效果。
肿瘤细胞往往具有高度异质性，肿瘤细胞内的基因组和表达谱会随着疾病的进展而发生变化。
通过定期的CTC检测，可以在治疗前后对比循环肿瘤细胞的数量和特征，评估治疗的效果和预测疾病的进展。
治疗选择CTC检测还可以帮助选择合适的治疗方案。
通过分析循环肿瘤细胞的特征和表达谱，可以评估肿瘤对不同治疗药物的敏感性，并指导临床医师选择最适合的治疗方案。
这种个体化的治疗策略可以提高治疗的效果，减少无效治疗的发生，从而改善患者的生存质量。
预后评估CTC检测在预后评估中也扮演着重要的角色。
研究表明，血液中循环肿瘤细胞的存在和数量与肿瘤的侵袭性、转移能力以及患者的预后密切相关。
通过定期的CTC检测，可以监测循环肿瘤细胞的动态变化，并以此评估肿瘤的进展风险和预测患者的生存期。
CTC检测的原理与方法CTC检测的原理是通过脱落细胞和循环肿瘤细胞的特征来进行区分和鉴定。
目前常用的CTC检测方法主要包括免疫细胞化学染色法、荧光原位杂交法、脱落细胞分选法以及微流控芯片技术等。
循环肿瘤细胞检测技术及其在癌症治疗中的应用
循环肿瘤细胞检测技术及其在癌症治疗中的应用随着科技的不断发展，循环肿瘤细胞检测技术越来越受到科研工作者和临床医生的关注。
循环肿瘤细胞(CTC)是指肿瘤细胞从原发病灶脱落，进入循环系统，定植到其他部位的肿瘤细胞。
CTC具有急性转移、远处转移、耐药性等特点，是癌症转移的重要载体和预后评估指标，因此检测、隔离和研究CTC的技术被广泛应用于癌症治疗研究领域。
CTC检测技术主要包括流式细胞术(FACS)、聚合酶链反应(PCR)、基于表面增强拉曼散射(SERS)、基于磁珠分选等技术。
其中，流式细胞术(FACS)是一种常用的CTC检测方法，其通过将CTC与血液中其他细胞分离，从而检测出肿瘤细胞。
PCR技术是一种高灵敏度和高特异性的CTC检测技术，可以检测出单个CTC。
基于表面增强拉曼散射(SERS)技术则可以通过分析CTC的分子特征，实现高效、准确、无创的肿瘤筛查和癌症治疗。
基于磁珠分选技术则可以利用特定标记物对CTC进行捕捉和分离，并进一步进行各种分析和研究。
CTC检测技术在癌症治疗中的应用主要表现在三个方面：癌症筛查、治疗监测和个体化治疗。
首先，CTC检测技术可以用于癌症筛查。
通过检测血液中的CTC，不仅可以有效地诊断出早期肿瘤，也可以进行癌症的风险评估，从而制定更加科学的健康管理方案。
而且，与传统的癌症筛查技术相比，CTC检测技术具有高灵敏度、高特异性、无创和操作简便的优点。
其次，CTC检测技术可以用于治疗监测。
通过跟踪血液中CTC 数量的变化，可以有效地评估治疗效果，并及时调整治疗方案。
同时，对于一些难以判断疗效的癌症类型，如淋巴瘤、脑胶质瘤等，CTC检测技术也可以提供参考依据。
最后，CTC检测技术可以用于个体化治疗。
由于不同患者的肿瘤细胞有着不同的分子特征和遗传变异，基于CTC的个性化治疗策略可以更精准地、更有效地治疗患者的肿瘤。
例如，一些针对CTC的靶向治疗和免疫治疗，可以通过精准制定个性化治疗方案，来实现更好的治疗效果。
循环肿瘤细胞检测技术及临床应用
基金项目：上海市科委自然基金项目（１５ＺＲ１４３７９００）资助*通讯作者文章编号：１００７－４２８７（２０１５）０７－１２２３－０５循环肿瘤细胞检测技术及临床应用曹雅楠，庄文芳，盛慧明*（上海交通大学医学院附属同仁医院检验科，上海２００３３６）循环肿瘤细胞（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ，ＣＴＣ）计数有助于早期诊断肿瘤转移，反映患者的治疗效果及肿瘤预后。
近年来循环肿瘤细胞检测的广泛应用大力推进了相关技术的发展。
本文对近年来外周血循环肿瘤细胞检测技术的发展，临床及研究领域的应用情况及未来展望做一简要综述。
循环肿瘤细胞（ＣＴＣ）一经发现，就得到了广泛重视，ＣＴＣ被认为是肿瘤播散转移的标志。
研究表明，肿瘤组织每天会释放大量肿瘤细胞入血，但在循环中的存活率极低，大多会发生凋亡，只有少量具有强侵袭力的肿瘤细胞可表达凋亡抑制因子得以存活［１］，这些存活下来的肿瘤细胞即ＣＴＣ。
ＣＴＣ在外周血中含量极少，一般每１０６-１０７个白细胞中仅含有１个。
所以，ＣＴＣ检测首先要进行细胞富集，以提高检测灵敏度，再对富集的细胞进行ＣＴＣ检测。
１ ＣＴＣ富集技术１．１ 以形态学为基础的富集ＣＴＣ细胞体积大，直径超过２５μｍ，胞核形状不规则，核浆比异常。
肿瘤细胞体积分离法和核孔分析技术通过滤网可将直径大于８μｍ的肿瘤细胞分离，但此类方法敏感性较低［２］。
基于密度梯度分离原则的Ｏｎｃｏｑｕｉｃｋ，利用单个核细胞较其它血液成分相比密度低，采用１．０７７ｇ／ｍｌ的密度梯度将单个核细胞和肿瘤细胞与血液其它成分分离，同时增加设置多孔屏障，进而分离得到更加纯化的目的细胞［３］。
１．２ 以免疫学为基础的富集免疫磁珠法将磁性微珠包被单抗形成免疫磁珠，再结合靶细胞上的对应抗原形成抗原-抗体-磁珠复合物，在外加磁场作用下定向移动、吸附，进而与其它细胞分离。
该分离技术的方法有两种：（１）阳性分离法是直接从细胞混合液中分离出靶细胞；（２）阴性分离法则是利用免疫磁珠去除无关细胞，利用抗ＣＤ４５抗体或抗ＣＤ６１抗体去除血液中的巨核细胞和血小板，使靶细胞得以纯化［４］。
循环肿瘤细胞检测技术及其在结直肠癌中的应用研究
循环肿瘤细胞检测技术及其在结直肠癌中的应用研究摘要：结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是一种常见的消化道恶性肿瘤，目前对于结直肠癌的确诊主要依赖于结肠镜检以及CT、PET-CT影像学检查。
根治性切除术仍是结直肠癌的主要治疗方式，但是几乎半数患者在接受手术治疗后，存在肿瘤复发以及转移的问题。
循环肿瘤细胞（circulating tumor cells）是从原发肿瘤灶或者转移肿瘤灶中脱落进入血液循环的肿瘤细胞，脱落的肿瘤细胞在形态、分子、基因等特征上与其他正常细胞存在明显差异。
因此运用特定检测技术检测患者外周血中的CTC数目，能够有助于结直肠癌的诊断，有效预测肿瘤进展以及肿瘤转移情况，评估肿瘤治疗方案的有效性，推断肿瘤患者预后。
本文主要对近年来新的CTC检测技术以及其在结直肠癌中的临床应用进行综述。
关键词：结直肠癌，循环肿瘤细胞，检测技术，临床应用ABSTRACT：colorectal cancer is a commen digestive tract malignant tumor，the currently definite diagnosis for colorectal cancer mainly relies on colonoscopy and computed tomography、positron emission tomography-computed tomography examination.Curative resection remains the mainstay therapy for colorectal cancer，but approximately half of the patients who receiving surgery treatment，existed the problem of tumor recurrence and metastasis.circulating tumor cells is the tumor cells fall from primary tumor site or Metastatic tumour focal，and entered into the blood circulation，the fallen tumor cells has significant difference contrast with othernormal cells in morphology characteristics、molecule characteristic and gene characteristics.Therefore used specific detection technology testing the CTC numbersin p atients ′Peripheral blood，Can contribute to the diagnosis of colorectal cancer，Effectively predict the tumor progression and metastasis，evaluate the effectivenessof cancer treatment，predicted the prognosis of tumor patients.This paper mainly reviews the CTC detection technology in recent years and Its clinical application in colorectal cancer。
循环肿瘤细胞的检测方法及在小细胞肺癌中的临床应用
循环肿瘤细胞的检测方法及在小细胞肺癌中的临床应用
循环肿瘤细胞(CTC)是指从原发肿瘤中脱落的癌细胞进入血液
循环，并在其他器官形成转移瘤的细胞。
CTC的检测可以反
映肿瘤的生长和转移情况，为肿瘤的筛查、诊断、治疗和预后评估提供了有力的手段。
下面介绍一种常用的CTC检测方法
及其在小细胞肺癌中的临床应用。
1. CTC检测方法
目前常用的CTC检测方法主要包括免疫磁珠分选法、流式细
胞术、聚合酶链反应等。
其中，免疫磁珠分选法广泛应用于临床检测中。
该方法利用肿瘤细胞表面的特定抗原与磁珠偶联，经过样品预处理后，磁珠上的肿瘤细胞被磁场分选出来，再通过细胞形态学分析、免疫荧光染色和分子分析等方式进行检测和鉴定。
2. 在小细胞肺癌中的临床应用
小细胞肺癌(SCLC)是一种高度侵袭性的肺癌，易发生转移和
复发，预后较差。
CTC检测作为SCLC治疗中的监测手段，
可以帮助医生及时评估治疗效果和预测患者的预后。
研究显示，采用CTC检测可以提高SCLC的诊断准确率和敏感性，尤其
对于无法取得组织样本的患者有较高的诊断价值。
同时，CTC 检测还可以预测SCLC患者的疗效和生存期，指导医生制定个体化的治疗方案和监测计划。
总的来说，CTC检测是目前肿瘤诊断和治疗的重要手段之一，
对于SCLC的诊断和治疗具有很强的临床应用价值。
随着技术的不断改进和完善，CTC的检测方法和临床应用将进一步完善和推广。
循环肿瘤细胞(CTC)和循环肿瘤干细胞(CTSC)的检测与结直肠癌临床资料的相关性分析
目录第一部分循环肿瘤细胞（CTC）及循环肿瘤干细胞（CTSC）的检测与结直肠癌临床资料的相关性分析中文摘要 2 英文摘要 4 前言 6 材料与方法8 结果12 讨论17 结论27 参考文献28 致谢32第二部分综述：胃、肠道肿瘤干细胞的研究进展综述33 参考文献37循环肿瘤细胞（CTC）及循环肿瘤干细胞（CTSC）的检测与结直肠癌临床资料的相关性分析中文摘要目的：通过检测结直肠肿瘤患者外周血中的循环肿瘤细胞（circulating tumor cells, CTC）以及循环肿瘤干细胞(circulating tumor stem cells, CTSC)，分析其数目与患者临床分期、肿瘤淋巴结转移、肿瘤远端转移等的相关性，验证它们作为患者预后评判指标的可行性，初步探讨CTC及CTSC与肿瘤转移的相关性。
方法：本论文入组首诊初治结直肠癌患者50人，在其手术治疗前，以及治疗后一周各抽取外周血15ml，利用Ficoll淋巴细胞分离液分离出外周血单个核细胞后，平均分成两份：CTC组标记表面标记物--CD45、EpCAM、CK，CTSC组标记表面标记物--CD45、EpCAM、CD44、CD133，并利用超高速流式细胞分选仪MOFLO XDP进行CTC及CTSC的检测分析。
结果：判定CD45-/EpCAM+/CK+细胞为CTC，CD45-/EpCAM+/CD44+细胞为CTSC1，CD45-/EpCAM+/CD133+细胞为CTSC2，CD45-/EpCAM+/CD44+/CD133+细胞为CTSC3。
判定手术前（手术后）检测出CTC ≥2个/7.5ml外周血者为阳性结果，CTC<2则为阴性；CTSC1≥1个/7.5ml外周血者为阳性结果，则CTSC1<1为阴性；CTSC2≥1个/7.5ml外周血者为阳性结果，则CTSC2<1为阴性；CTSC3≥1个/7.5ml外周血者为阳性结果，CTSC3<1为阴性。
循环肿瘤细胞检测技术在肝癌诊断和预后判断的应用
中国是肝病高发区，肝癌的发望在未来为广大患者带来便利。
明确的方法有肝脏动脉造影或肝脏病率很高。
早期发现肝癌至关重穿刺活检。
这些有创检查不利于接2.CTC检测在肝癌中的应用要。
随着液体活检技术的日臻成受治疗后的预后评估和监测，而肝癌起病隐匿，很多肝癌患者熟，尤其是循环肿瘤细胞检测在肿CTC检测实时、高效、可重复性发现已是晚期，失去了外科手术切瘤诊断、预后及疗效评估领域的突高。
所以对于肝癌诊断和预后评估除肿瘤灶的机会，而只能采取治飞猛进。
监测CTC不失为一种很有前景的疗、局部栓塞等其它治疗方法，导检测形式。
1.何谓循环肿瘤细胞致整体预后差。
临床工作中为了早 3.存在的问题循环肿瘤细胞(CTC)检测是指发现、早诊断、早治疗，以便为患从肿瘤原发灶或者转移性病灶脱落者提供最优的个体化方案需要定期CTC未来普及可能性很大，进入外周血液里肿瘤细胞的一种液复查，尤其是那些已经发展成为肝但也存在一些问题。
其一，目前国体活检技术，国际上Cell Search系硬化或有肝癌家族史的高危患者。
内CTC检测现成仪器尚未批量生统利用上皮细胞黏附分子的免疫磁目前应用最为广泛的肝癌筛查有甲产和推广，对于真实世界该技术检性富集技术成熟，已经实现胎蛋白(AFP)和腹部B超，但是临测效度有待进一步验证。
其二，CTC半自动化检测，具有较高的床工作中，上述肝癌筛查目前仍存CTC检测对于靶向治疗作用位点可重复性和准确性。
国内由中山医在缺陷，腹部B超针对极早期的肝及耐药监测作用可能不足，需待进院樊嘉院士、周俭教授团队自主研脏占位难以明确诊断，AFP阴性的一步优化。
其三，囿于肝癌分子生发了多种CTC分选检测技术，同肝癌也屡见不鲜，从而为肝癌早期物学水平机制未能完全明确，故是时也取得了CTC“全自动循环肿诊断带来了障碍。
其次对于难以确否存在比CTC更优的液体活检有瘤细胞分选检测系”相关专利，有诊的肝脏占位性病变，现在进一步待进一步挖掘。
循环肿瘤细胞检测技术在肝癌诊断和预后判断的应用贺凡（重庆医科大学附属第二医院感染科）37。
循环肿瘤细胞(CTCs)的临床应用-幻灯片
Yu M et al., Science , 2013
3.3%
2.7%
12.7%
主要内容 -个体化治疗时代的肿瘤实时 监测 肿瘤实时监测的必要性 现有监测技术的局限性 -循环肿瘤细胞检测临床应 进展 CTCs分子分型的临床应用 CTCs分子分析的临床应用 -CanPatrolTMCTC二代技术 助力肿瘤实时监测 全面捕获 精准分型 系统深入分析
CTCs-肿瘤状态实时监测专家
Science. 2013;339:580-4.
主要内容 -个体化治疗时代的肿瘤实时 监测 肿瘤实时监测的必要性 现有监测技术的局限性 -循环肿瘤细胞检测临床应 进展 CTCs分子分型的临床应用 CTCs分子分析的临床应用 -CanPatrolTMCTC二代技术 助力肿瘤实时监测 全面捕获 精准分型 系统深入分析
不同形态 单细胞CTCs 细胞团CTM 血小板包裹的CTCs
不同型别 上皮细胞表型 间质细胞表型 混合表型
Science. 2013;339:580-4; Mol Cancer Res. 2011;9:997-1007. Cancer Letters 253 (2007) 180–204
CTC数量
37个
CTC基因突变情况
BRAF
阴性
PIK3CA
阴性
KRAS
G12V
EGFR
阴性
MFI值
突变检测结果
KRAS Codon12 G12V 突变
CanPatrolTM 助力肿瘤实时个体化治疗
主要内容 -个体化治疗时代的肿瘤实时 监测 肿瘤实时监测的必要性 现有监测技术的局限性 -循环肿瘤细胞检测临床应 进展 CTCs分子分型的临床应用 CTCs分子分析的临床应用 -CanPatrolTMCTC二代技术 助力肿瘤实时监测 全面捕获 精准分型 系统深入分析
循环肿瘤细胞CTC及循环肿瘤干细胞CTSC的检测在临床诊断中的应用研究
循环肿瘤细胞(CTC)及循环肿瘤干细胞(CTSC)的检测在临床诊断中的应用研究刘巧珍刘沁颖郑秋红 (福建省肿瘤医院生物治疗重点实验室福建福州350014)【摘要】目的：从实体瘤脱落进入循环系统的肿瘤细胞，称为循环肿瘤细胞(circulating tum o r cell，CTC)。
目前认为外周血中呈现CD45-／EpCAM+／CK+的细胞为CTC，其数目的多少，与肿瘤患者的临床分期、肿瘤淋巴结转移、肿瘤分化程度及预后密切相关。
但事实上，外周血中的CTC大部分进入凋亡途径，仅少数通过EMT形成循环肿瘤干细胞(circulating tumor stem cell，CTSC)，并在微环境适宜时形成转移灶。
本论文通过检测结直肠肿瘤患者外周血中的CTC 以及CTSC，并分析CTC及C TSC数目与患者临床分期、肿瘤淋巴结转移、肿瘤远端转移、肿瘤分化程度以及预后的相关性，验证CTC及CTSC作为临床诊断评判指标的可行性。
方法：本论文入组首诊初治胃癌患者54人，结直肠癌患者50人，在其手术治疗前，以及治疗后一周各抽取外周血15ml，Ficoll分离外周血单个核细胞后，平均分成两份，分别标记CTC表面标记物CD45、EpCAM、CK，或CTSC表面标记物CD45、EpCAM、CD44、CDl33，并利用超高速流式细胞分选仪MOFLO进行CTC及CTSC的分析。
结果：判定CTC (CD45．／EpCAM+／CK+)≥3个为阳性，CTC<3为阴性；CTSCl(CD45．／Ep CAM+／CD44+)芝l为阳性，CTSCl<1为阴性；CTS C2(C D45．／EpCAM+／CDl33+)≥1为阳性，CTSC2<1为阴性。
则结果显示：1、肠癌部分：(1)CTSCl(CD45．／EpCAM+／CD44+)检出率最高(49％)，CTC(CD45．／EpC AM+／CK+)的检出率较低(15％)，而CTSC2(CD45．／Ep CAM+／CDl33+)的检出率最低(5％)。
CTC循环肿瘤细胞详解及应用_20231031
CTC(循环肿瘤细胞)详解及应用9肿瘤异质性——肿瘤耐药的罪魁祸首之一空间异质性时间异质性疗程1疗程2疗程3液体活检- 动态监控- 实时调整用药方案- 及时进行疗效评估10液体活检技术——肿瘤精准治疗的指南针循环肿瘤细胞 (CTC)外泌体临床需求Ø癌症预警早诊Ø肿瘤预后复发监控Ø肿瘤耐药位点筛查Ø药敏筛查Ø药物疗效持续评估液体活检循环肿瘤细胞u 在肿瘤组织的全生命周期，特别是在极早期，就开始有完整的肿瘤细胞进入人体外周血，这些细胞成为循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cell,简称CTC)。
CTC以单个细胞或细胞团（又称循环肿瘤微栓子，CTC-microemboli，CTC-cluster，简称CTM）的形式存在于循环系统中。
u 循环肿瘤细胞(CTC)检测是一种非侵入性的液体活检技术，相比于组织活检，具有无创，可重复采样，可实时长期跟踪，可克服肿瘤异质性，结果准确等优势，目前已经越来越广泛地应用于肿瘤疗效监测、预后评估、复发监测等场景，成为辅助指导癌症患者的个体化治疗的一大“利器”，被麻省理工评为2015年“10大全球突破性技术”。
u 肿瘤细胞在进入外周血循环的过程中会发生上皮-间质转变（EMT，Epithelial Mesenchymal Transition），故CTC存在不同类型，包括上皮型、间质型和上皮-间质混合型。
CTM和间质细胞表型CTC具有更强的转移潜能。
u 研究表明，检测出CTM的患者平均PFS时间比仅有单个CTC的患者短。
同样，与只有单个CTC的患者相比，在多个时间点上检测出CTM的患者平均OS更短，死亡风险显著增高。
Clotilde Costa, et.al., Analysis of a Real-World Cohort of Metastatic Breast Cancer Patients Shows Circulating Tumor Cell Clusters (CTC-clusters) asPredictors of Patient Outcomes. Cancers (Basel). 2020 Apr 29;12(5).间质型CTC上皮型CTC混合型CTC上皮型CTM混合型CTM间质型CTMCTC检测优势显著12广阔的临床应用前景1314广泛的临床适用人群无药可用人群高危人群难取样人群复发人群用药方案筛选药敏筛选及疗效评估免疫抑制剂用药评估癌前筛查肝硬化、肺部结节、乳腺结节等辅助诊断鉴定原发灶；个性化用药指导复发监控靶向用药；耐药评估；NCCN乳腺癌临床实践指南正式引入含有CTC 的cM0(i+)分期。
循环肿瘤细胞(CTC)检测
循环肿瘤细胞(CTC)检测
循环肿瘤细胞（CTC）检测是通过检测血液中的肿瘤细胞来诊断和监测癌症的一种方法。
CTC是从原发肿瘤中脱落并进入循环系统的癌细胞。
它们可以通过血液样本分离和检测。
CTC检测的目的是实时监测肿瘤的疾病进展、评估治疗效果和预测患者的预后。
它可以提供有关肿瘤性状、转移倾向、治疗响应和耐药性的信息。
以下是CTC检测的一般步骤：
1.血液采集：通过静脉采集血液样本，通常使用抽血针或集
中式采血设备。
采集的血液样本需要尽快送至实验室进行处理。
2.血液处理：采集的血液样本经过预处理，通常包括红细胞
去除和白细胞富集，以减少其他细胞对检测的干扰。
3.CTC分离：采用特定的技术和设备对血液样本进行CTC的
分离。
这些技术包括免疫磁珠法、微流控装置、密度梯度离心或免疫荧光染色等。
通过这些方法，CTC可以从其他血细胞中分离出来。
4.CTC检测：分离的CTC可以通过免疫细胞化学、免疫荧光
染色、PCR、原位杂交等方法进行检测和分析。
这些技术可以检测CTC的表面标记物和基因组变异，以确认其为肿瘤细胞，并评估其数量和特征。
CTC检测的优势在于其非侵入性和实时性。
它可以通过反复检测来监测肿瘤的进展和治疗的效果。
这种检测方法仍在不断发
展和改进中，面临一些技术挑战和标准化的需求，但已被广泛应用于临床研究和患者管理中，对癌症的早期诊断、治疗监测和个体化治疗具有潜在的重要意义。
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循环肿瘤细胞C T C检测及临床应用Prepared on 22 November 2020循环肿瘤细胞检测及临床应用中文摘要：循环肿瘤细胞是从原发肿瘤扩散，进入到血液或淋巴系统的肿瘤细胞。
循环肿瘤细胞在血液中含量稀少，一般先将循环肿瘤细胞富集，然后再进行检测，现在已经开发了多种细胞富集和检测技术。
本文主要对CTCs的富集和检测技术研究进展，以及CTCs在临床分析和研究上的应用进行了综述。
关键词：循环肿瘤细胞富集检测临床Abstract:Circulatingtumorcellscomefromtheprimarytumorproliferation,andprolife ration,癌症转移的过程是循环肿瘤细胞(CirculatingTumorCells，CTCs)从原发肿瘤分离，通过循环系统扩散，进入血液或者淋巴系统，在远处形成新的肿瘤，最终导致大多数的癌症病人死亡。
1869年，Ashworth在一例癌症死亡患者的外周血中发现了类似肿瘤的细胞，并首次提出了CTCs的概念。
从此，越来越多的研究表明，CTCs的出现与癌症密切相关。
通过上皮-间质转化(EMT)，实体瘤的上皮细胞进行细胞的变化，使他们通过增加流动性和侵袭性脱离组织，进入到血液中，附着，、发展成远端转移。
由于CTCs能够代表原发肿瘤的表型和遗传组成，并能够作为任何转移性肿瘤的”液体活检”，CTCs的富集分离和特征研究，十分具有吸引力。
CTCs的富集和计数技术已经建立，其中CTCs的计数可以成为预测指标，当其大于已知的阈值时，就预示着病人就患有转移性乳腺癌，、前列腺癌，、结直肠癌等。
基于临床试验，美国FDA批准了一种临床检测CTCs的CellSearch技术，用于上述癌症的CTCs的富集和计数。
CellSearch技术成功的证明了CTCs确实表征了疾病的活跃，CTCs数量的增加预示着病情的恶化，可以通过CTCs了解原发性和转移性肿瘤，以CTCs为基础的分析，可以帮助人们实时诊断和预测，对病情做出决定，并取样检测耐药性。
大多数常规的癌症治疗方法在治疗转移性癌症方面难以成功，CTCs的可能促进肿瘤的临床研究。
CTCs在血液中极其稀少，数十亿的外周血细胞也阻碍了对CTCs的分离和分子鉴定。
现在已经开发了大量的技术用于富集和检测CTCs，其中有些已经成功的用于测试或者临床评估。
本文主要综述CTCs的富集和检测技术的研究进展，以及对CTCs的在临床分析和研究上应用。
1CTCs富集技术为了从大量血液细胞中捕获数量稀少的CTCs，富集分离技术必须足够敏感性，可重复性，可靠，、快速，、便宜，并且所需获取血液量要尽量少，方便实现过程自动化，方便下游分析。
此外，富集分离的CTCs要能够保持他们的活性，在富集分离的过程受到的干扰要尽量小，因为这可能改变CTCs的状态和表型。
CTCs富集的技术有很多种，这些技术使用多个性能参数评估(即捕获效率，纯度，细胞活力，富集速度，血液样本容量等)，然后通过检测临床样本进行验证。
最佳的富集分离方法可能需要之间的性能参数的折衷，而且可能依赖于下游的应用。
CTCs的富集技术主要根据免疫亲和性，物理性质和直接分析分为三类。
1.1免疫亲和性(Immunoaffinity)以免疫亲和性为基础的CTCs富集主要是利用捕获抗体(如EpCAM抗体)和CTCs靶抗原(如EpCAM)之间的高度特异性。
基于EpCAM抗体的富集技术有很多种，主要区别在于捕获的方法有所不同。
抗体捕获的方法主要有以下几种。
(Magneticbeads)免疫磁珠法富集CTCs主要是利用捕获抗体(如EpCAM抗体)和CTCs抗原(如EpCAM)之间的高度特异性反应，免疫作用促使抗原与耦合到磁珠的抗体发生特异性的结合，然后抗原-抗体复合物被置于磁场作用之下，通过磁场对磁珠固定从而使CTCs与其他血液细胞分离，产生富集效果。
CellSearch系统是免疫磁珠方法应用的典型代表。
在该方法中，经过密度梯度离心富集的外周血被收集到含有防凝剂的收集管中，然后被放置到一个自动化的制备系统。
该系统利用免疫磁珠富集EpCAM阳性的细胞。
捕获效率主要与EpCAM的表达水平有关。
有研究表明在EpCAM高表达的细胞中，有大约75%的捕获效率，而在EpCAM低表达的细胞中，大概只有42%的表达捕获效率。
在检测的过程中，富集的细胞与CD45，CK的抗体孵育，然后用DAPI染色。
CK和CD45分别用PE和APC荧光标记，然后，EpCAM阳性的CTCs被anti-ck-PE抗体标记，而白细胞被anti-CD45-APC抗体标记。
标记的细胞被CellTrackAnalyzer计数和分析，最终，CTCs是CK+/DAPI+/CD45-，而白细胞是CK-/DAPI+/CD45+。
系统的这种半自动特征使得样本的检测非常迅速，而且具有很好的重复性。
磁铁清扫装置(magneticsweeperdevice)是新开发出来的技术，磁铁清扫装置提高被磁珠包被的EpCAM抗体的捕获能力。
这种技术的可以达到62%的捕获效率，51%的纯度，9ml/L的通量。
用这种磁珠清扫设备用RT-PCR的方法从30个转移性乳腺癌病人中的21个病人的血液中检测出了CTCs。
磁性筛装置(magneticsifterdevice)，通过微阵列的形式在磁场孔边缘产生极高的磁性区域，在富集过程中使用垂直流动构造，可以增强捕获效率到%，提高了处理速度，最优达到10ml/h。
AdnaTest(AdnagenAG，Langenhagen，Germany)是一个商业化的设备，它采用了磁珠与各种癌症(如乳腺癌，直结肠癌，前列腺癌，卵巢癌)的特异性抗体进行鸡尾酒式结合，并用多重RT-PCR的方式检测CTCs，这套实验装置已经真是可用于转移性乳腺癌，卵巢癌。
比较研究发现，AdnaTestbreastcancer装置从55个转移性乳腺癌病人中的29个病人血液中检测出了CTCs，而CellSearch装置只从26个检测出了CTCs。
Fig1CellSearch富集检测CTCs流程是一种基于免疫亲和以及芯片的CTCs检测技术，在970mm2的表面上，排列了78000个被EpCAM抗体包被的硅微柱，用于捕获CTCs。
通过抽气产生压力使血液样品以1-2ml/h的速度不间断的从芯片表面通过。
这种缓慢的流速可以保证CTCs吸附在EpCAM包被的微处理器上。
而这种硅微柱提供了大量的表面积用于接触，从而使EpCAM表达高或者低的CTCs的捕获效率差别不大，捕获效率超过60%，纯度大约50%。
用癌症患者和健康人体的血液样品经过CTCs-chip检测，从116个患者中的115个患者身上检测到了CTCs，而20个健康人体没有检测到CTCs，敏感性达到了%，特异性为100%。
同时，检测到的CTCs数目与病人的病情相关。
一种类似的微柱是在”geometricallyenhanceddifferentialimmunocapture”微芯片上连接前列腺特异性膜抗原(PSMA)，这种微芯片的捕获效率为85%，纯度为68%，并且从20个前列腺病人中的18个检测到了CTCs。
最近，Ozkumur等开发了”CTC-iChip”，该装置可以用于以阳性EpCAM抗体的CTCs筛选，也可以用于以大小为基础的富集步骤后对白细胞的消除。
据报道，他们的捕获效率达到了%，纯度为%。
CONG42个转移性癌症病人中的37个身上检测出了CTCs，而CellResearch仅从29个病人身上检测到CTCs。
Fig2CTC-chip富集检测CTCs流程(Nanostructuredsubstrate)Wang等利用纳米结构底物，以非常高的接触比表面积进行免疫亲和，用EpCAM抗体结合纳米柱，获得捕获效率95%，通量为1ml/h。
用这个方法从26个前列腺癌中的20个病人身上检测到了CTCs。
该芯片又被进一步修饰为以静电聚合物纳米纤维为底物，并与激光捕获显微切割联用，分离单个前列腺癌症CTCs，然后可用于扩增或全基因组测序。
Fig3纳米结构底物富集CTCs流程(Microtubes)Hughes等用仿生的方法模拟血管选择素接到的细胞粘附过程进行CTCs捕获。
选择素包被的围观外观诱导细胞附着和卷曲，促进CTCs与抗EpVAMEpCAM抗体和PSMA抗体，在h，这个装置的捕获效率为50%，纯度为66%，并且从14个测试病人的血样中全部能够检测到CTCs，而CellSearch 中质中只检测到9个。
体内采样(Invivosampling)Saucedo-Zeni等开发了一种体内采样的方法，将医学导线与EpCAM抗体连接，医疗导线通过插管注射到患者静脉30分钟，以润徐允许大体积的血液直接连续采样。
这个方法成功的在24个乳腺癌或者肺癌病人中的22个病人身上腹肌富集到了CTCs。
白细胞消除(Leukocytedepletion)使用白细胞抗原(如CD45，CD14等)的单克隆抗体，以减少造血起源的细胞。
一些策略包括抗体标记白细胞标记，通过免疫磁珠分离去除白细胞，这些方法都能够有很好的恢复率和对CTCs的最小干扰，但可能降低样品的纯度。
小结抗原-抗体反应的特异性是使CTCs的分离具有非常高水平的特异性。
然而，CTCs的富集结果将严重依赖于所实用使用的特定抗体的性能。
目前还有没已知的理想CTCs抗原靶，点可已可以将所有的CTCs捕获而对所有的造血细胞排斥。
最近的报告表明，抗EpCAM的方法可能错过不表现上皮表型的CTCs，这可能由于EMT和EpCAM在一些上皮细胞CTCs的可变表达。
使用鸡尾酒式的抗体组合，可能会增加捕获效率，但也可能会降低特异性和样品的纯度。
白细胞消除方法的好处是在分离过程中不会干扰CTCs的表型，但也可能会使附着在白细胞或者与白细胞相互作用的CTCs丢失。
白细胞消除法会导致CTCs的纯度比阳性免疫亲和方法获得的CTCs纯度降低。
一般来讲，免疫亲和方法需要长时间的孵育和反应时间，来富集更多地CTCs，这也可能成为加快速度的瓶颈。
对于用阳性筛选的免疫亲和方法而言，将CTCs从免疫亲和标签上分开也可能是个挑战。
1.2物理特征物理特征也可用于有效的地将CTCs从外周血中分离出来。
以下的一些技术主要是利用CTCs与其他细胞在密度，、大小，、变形性和电离特征等方面的差异进行分离的。
密度梯度离心(Densitygradientcentrifugation)密度梯度离心是一种分离CTCs的低成本有效的方式，依据密度的不同可以把单核细胞从血液中的红细胞和粒细胞中分离出来。
Weitz等使用聚蔗糖溶液的密度梯度离心来分离CTCs，用RT-PCR方法检测CK20的表达，发现在1ml血液中有1个CTCs，并且在58个结直肠癌患者中的24个患者血液中检测出了CTCs。