罗丹明123染色检测线粒体膜电位

罗丹明123染色检测线粒体膜电位

化学名：Rh123 罗丹明123

别名：Rhodamine 123; Rh123

分子式：C21H17CLN2O3

分子量：380.82

配制：罗丹明123粉剂用甲醇配成1mg/mlde 储备液，染色时用DPBS缓冲液将其稀释为所需浓度

保存：冰箱-20度避光

一、检测原理：

罗丹明123（Rhodamine 123）是一种可透过细胞膜的阳离子荧光染料，是一种线粒体跨膜电位的指示剂。其在正常细胞中能够依赖线粒体跨膜电位进入线粒体基质,荧光强度减弱或消失。而在凋亡发生时，线粒体膜完整性破坏，线粒体膜通透性转运孔开放，引起线粒体跨膜电位(ΔΨm) 的崩溃, Rh123 重新释放出线粒体, 从而发出强黄绿色荧光，可用荧光显微镜、荧光光度计或流式细胞仪检测，通过荧光信号的强弱来检测线粒体膜电位的变化和凋亡的发生，可用于培养的细胞或从组织中提取出的线粒体的膜电位检测。

二、使用方法：

1．细胞染色及分析

（1）培养细胞1×106/mL重悬于培养基中；

（2）加入罗丹明123染液0.1μg/mL～50 μg/mL（根椐细胞种类不同而浓度不同，一般3～10 μg/mL）；

（3）37℃，5% CO2细胞培养箱孵育1～30 min（根椐细胞种类不同而不同，一般10 min）；

（4）离心以培养基洗细胞两次；

2．组织提取的线粒体染色及分析

（1）按常规方法提取的线粒体，用适量的1×Assays Buffer（将5×Assays Buffer 用水稀释5倍）重悬；

（2）常规方法进行蛋白含量测定后，用1×Assays Buffer调配成3mg/mL的线粒体溶液；

（3）取2mL 1×Assays Buffer和1mL线粒体溶液；

（4）加入适量待测化合物（同时设空白对照组），250C保温min；

（5）加入罗丹明123染液10 μL；

（6）荧光光度计检测：上述混合液全部加入石英比色皿中，置于250C下测定，激发波长488～505nm，发射波长530nm，连续记录从0 min～30 min内荧光强度的变化。

三、注意事项

1、操作时需戴手套

2、罗丹明123为通透性染料，可以自由进入细胞

3、孵育时，必须避免光照

4、使用时，避免污染母液

5、染色完成后，即刻进行荧光检测分析