微藻工厂化培养经验分享(附单胞藻的培养配方)

微藻工厂化培养经验分享（附单胞藻的培养配方）

大家好，很高兴今天能跟大家交流一下微藻的规模培育。规模培育在水产养殖方面现在主要运用于大棚生物饵料方面(一定地点建立车间、浓缩之后近距离管道运输到养殖区域)、提取色素添加在饲料中，至于土塘泼洒，如何控制量、增氧和开口饵料这方面正在摸索，需要大家一起总结出经验。今天我跟大家主要跟大家分享一下藻种的工厂化规模化培育。

群里面应该很多人都培育过藻，大家都知道藻种的培育分为一级、二级、三级培养，今天我是简单从一级、二级、三级培养过程可能中遇到的问题、日常管理、接种、藻种营养配方这些方面做一下简单的交流。

因各地环境气候、温度、光照、水质条件不同。不同季节、藻种性质不同，单位水体养殖品种的需求量也不同。所以培养条件、营养盐配方等各有不同。今天我主要是以金藻为例，引申出其他藻种的营养配方，让大家学习一下其中的相似点。

国内大部分水产育苗企业，在育苗生产中都是自备微藻养殖设施，自行生产各类饵料用微藻。但是一般育苗场都普遍缺乏相应的专业技术力量，只能利用各自的藻池和天然水体粗放培养，在饵料微藻种质、生产技术和应用方法上都各自为正，导致微藻种质混乱、供应不稳定、营养成分不平衡、饵料效价低、缺乏多品种集约化生产应用技术；同时，受限于微藻高密度养殖、采收技术和浓缩液保藏技术的限制，国内几乎没有统一的、专业化的饵料微藻质量标准和集中供应点。所以工厂化育苗需要及时的补充藻种，开口饵料非常重要。

首先从工艺流程上来说

一级培养：主要用于保种，主要用的仪器是锥形瓶，其能够完全消毒，所以应用在保种上面特别多。

二级培养：主要是用塑料白桶（聚丙烯材料），生产上也用20L的饮水桶，但是瓶口小，操作不方便，消毒也不彻底；而用氧气袋又易破裂。在南方经常可以见到用玻璃制作的大型鱼缸和氧气袋。

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举报|来自Android客户端2楼2016-03-03 08:04

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•xiazaiba06

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知名人士

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三级培养：主要有小型的10 m3、20 m3、30m3左右的室内水泥池，采光良好，白色透明玻璃钢瓦或塑料薄膜于车间顶部用于培育藻种。

接下来我主要简单的讲一下容器和工具的洗涤、消毒。

培藻过程中所有的容器和工具，比如锥形瓶、矿泉水桶、搅拌棒等必须经过去污渍、肥皂等刷洗，之后再用消毒后的蒸馏水冲洗3-4遍。

消毒的方法一般有加热消毒法、化学试剂消毒法、紫外线消毒法。

一般小型仪器用加热消毒法，比如锥形瓶，方法是在锥形瓶瓶口放一培养皿，瓶中加水，煮沸，煮沸完之后，用牛皮纸或纱布包住，备用，这种方法能杀死营养体的部分芽孢。

大型仪器、工具、培养池用化学药品消毒（漂白粉、酒精、高锰酸钾、铬酸洗液等），漂白粉的有效氯含量一般是30-35%，漂白精的有效氯的含量是漂白粉的2倍，消毒时按1/10000-3/10000的含量配成水溶液，浸泡容器、工具半小时，再用消毒水冲洗3-4次（消毒水既是煮沸、沉淀、过滤其中的水）。

水泥池的消毒可配成高浓度的浆糊状漂白溶液，淋洒池壁，半小时后用消毒水冲洗干净。也可以用较低含量的漂白粉进行全池浸泡后，用消毒水冲洗，停放12小时后才可使用。

酒精消毒一般用于人为操作，如在活化藻种、摇瓶或者搅拌的时候，涂抹手，消毒小的仪器上使用。酒精一般是配置成70-75%左右，杀菌效果是最显著的，使生物蛋白脱水变性凝固，故有杀菌效果。

海水的消毒，一般海水的消毒有过滤和加入化学消毒剂法。因为海水消毒主要用于三级培养，三级大规模培养时候主要用于杀灭有害生物，处理水必须无毒，对培养藻类的生长繁殖影响不大。水消毒必须简单、经济、易行，不然大规模运水特别多的时候培藻成本会加大。

补充：消毒海水时可根据培养的目的和方式选用以下方法之一。

1、加热消毒法：经沉淀、过滤的海水，一般加温至90℃左右维持5分钟或达到沸腾即可。由于海水中的一些对藻类生长有促进作用的有机物在高温时易遭破坏，所以加温时间不宜太长。

2、过滤除菌法：把经沉淀的海水先经砂滤，把大型生物和非生物杂质去除，再用陶瓷过滤罐过滤，除去微小生物。

3、次氯酸钠消毒法：按每立方米海水20毫克有效氯的量加入次氯酸钠溶液，充气10分钟后停气，经6~7小时消毒后，按每立方米水体25克的量加入硫代硫酸钠，强充气4~6小时，用硫酸-碘化钾-淀粉溶液测试，若无余氯即可使用。

4、紫外线消毒：有成型的紫外线消毒器可供选用。但此法不易杀灭较大的浮游动物。最好和过滤法结合使用。

加热消毒我们就不解释了。

主要是过滤除菌消毒，沉淀后的海水经过纱虑池纱虑大型的生物及非生物杂质出去，再经陶瓷过滤罐过滤，除去微小生物，也可两次纱虑，两次纱虑也可以起到比较好的效果。

漂白粉和漂白液消毒的时候，向水中加入漂白粉和漂白液，用硫代硫酸钠中和余氯，中和余氯的过程以及操作流程的具体步骤如下：

氯含量测定

方法一

硫代硫酸钠滴定法

需要的物品:

1%碘化钾溶液(1 g溶于100ml水中)

1.58%硫代硫酸钠溶液(1.58g溶于100ml水中)

HCI 37%

样品溶于一定数量的水中的溶液（即稀释一定倍数）

程序

在滴定瓶中加50ml碘化钾溶液，0.25ml HCI 和1ml样品溶液，这时候瓶中溶液应该变为褐色用硫代硫酸钠滴定，直到瓶中溶液变为澄清（没有颜色）。

每ml硫代硫酸钠可以中和 3.55ppt的氯样品溶液的氯浓度= 硫代硫酸钠的毫升数×3.55 ×100/1000(%) 样品的氯含量=样品溶液的氯浓度×样品稀释倍数

方法二

1．试剂

（1）KI溶液：10%。

（2）淀粉溶液：0.5%。称取0.5克可溶性淀粉于小烧杯中，用少量水搅匀后加入100ml 的沸水中，加入后不断搅拌，并煮沸至溶液透明为止。加热时间不易过长且应迅速冷却，以免降低淀粉指示剂的灵敏性能。如需久存，可加入少量的HgI2或ZnCl2等防腐剂。

（3）H2SO4溶液：2 mol/L。

（4）K2Cr2O7标准溶液：0.1000 mol/L。将K2Cr2O7在150-180℃烘干2小时，放入干燥器中冷却至室温。准确称取1.2258克于100ml烧杯中，加蒸馏水溶解后转入250ml容量瓶中，用水稀释至刻度充分摇匀。

（5）Na2S2O3溶液：0.1 mol/L。将12.5克Na2S2O3 ·5H2O溶解在500毫升新煮沸冷却后的水中，加入0.1克碳酸钠，储于棕色瓶中并摇匀，保存于暗处一周后标定使用。（低浓度的溶液需稀释）

（6）丙二酸：20%溶液。

2．实验步骤

（1）硫代硫酸钠溶液的标定

用25毫升移液管吸取0.1000 mol/L重铬酸钾标准溶液三份，分别置于250毫升碘量瓶中，加入5毫升6N盐酸、5毫升20%KI，摇匀后在暗处放置约5min，待反应完全，用100毫升水稀释。用硫代硫酸钠溶液滴定至溶液由棕色到绿黄色，加入2毫升0.5%淀粉指示剂，继续滴定至溶液由蓝色至亮绿色即为终点。根据消耗的硫代硫酸钠溶液的毫升数计算其浓度。（低浓度的溶液标定类似）

（2）有效氯含量的测定

取10毫升待测消毒溶液，置于250毫升碘量瓶中，加入2 mol/L 硫酸10毫升，10%碘化钾溶液10毫升，此时溶液出现棕色。盖上盖并振摇混匀后加蒸馏水数滴于碘量瓶盖缘，在暗处放置约5min。打开盖，让盖缘蒸馏水流入瓶内。用硫代硫酸钠溶液（装于25毫升棕色滴定管中）滴定游离碘，边滴边摇匀，待溶液呈浅棕黄色时，加入10滴0.5%淀粉指示剂，溶液立即变蓝色，继续滴定至溶液由蓝色至无色即为终点。记录消耗的硫代硫酸钠溶液的毫升数（V，ml）。

重复测3次，取3次平均值进行以下计算。因1 mol/L硫代硫酸钠标准溶液