鸡蛋清中溶菌酶的提取与抑菌作用
蛋清溶菌酶提取实验报告
一、实验目的1. 了解溶菌酶的生物学特性及其在食品、医药等领域的应用价值。
2. 掌握从鸡蛋清中提取溶菌酶的方法和操作步骤。
3. 学习蛋白质分离纯化的基本原理和实验技术。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种能够水解细菌细胞壁中N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4糖苷键的碱性酶。
它主要存在于鸟类和家禽的蛋清中，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
本实验采用盐析法从鸡蛋清中提取溶菌酶，通过改变溶液的离子强度，使溶菌酶从溶液中析出。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、去离子水、硫酸铵、盐酸、pH试纸、玻璃棒、滤纸、烧杯、漏斗、电子天平、移液管、离心机、恒温水浴锅、紫外可见分光光度计等。
2. 实验试剂：硫酸铵、盐酸、去离子水等。
四、实验步骤1. 鸡蛋清制备：将4-5个新鲜鸡蛋打破，分离出鸡蛋清，加入两倍体积的去离子水，搅拌拌匀，过滤杂质。
2. 盐析：向鸡蛋清溶液中加入适量硫酸铵，搅拌溶解，使硫酸铵浓度达到60%左右。
将溶液静置一段时间，使溶菌酶析出。
3. 沉淀分离：用滤纸过滤析出的沉淀，收集滤液。
4. 洗涤：向沉淀中加入少量去离子水，搅拌洗涤，去除杂质。
重复洗涤2-3次。
5. 离心：将洗涤后的沉淀转移到离心管中，以3000r/min离心10分钟，收集上清液。
6. 蛋白质浓度测定：采用紫外可见分光光度计测定上清液中蛋白质浓度。
7. 溶菌酶活性测定：采用溶菌酶活力测定试剂盒测定溶菌酶活性。
五、实验结果与分析1. 蛋白质浓度测定：上清液中蛋白质浓度为1.5mg/mL。
2. 溶菌酶活性测定：溶菌酶活性为200U/mL。
根据实验结果，从鸡蛋清中提取的溶菌酶蛋白质浓度为1.5mg/mL，活性为200U/mL，说明本实验提取的溶菌酶纯度和活性较高。
六、实验讨论1. 盐析法是一种简单、有效的蛋白质分离纯化方法，适用于溶菌酶的提取。
2. 在实验过程中，要注意控制硫酸铵的加入量，以免影响溶菌酶的活性。
鸡蛋清中溶菌酶的提取与抑菌作用
鸡蛋清中溶菌酶的提取与抑菌作用
黄敏;孔明航;王丽明
【期刊名称】《中国食品添加剂》
【年(卷),期】2010(000)003
【摘要】研究从鸡蛋清中提取与精制溶菌酶的方法,观察溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑制作用.从鸡蛋清提取溶菌酶的方法:取出鸡蛋清,过滤,用蒸馏水溶解,加氯化钠,调节溶液pH至5.0,加入溶菌酶晶种,4℃下静置结晶,过滤,可以得到溶菌酶粗品.将粗品溶菌酶溶解,按上述步骤溶解后结晶,重复3次,可以精制溶菌酶.用滤纸片法观察溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑菌作用.结果表明,鸡蛋清溶菌酶提取的较优条件是:酶液pH 10.0、氯化钠加入量5%、蛋清液用2倍体积蒸馏水稀释.70℃下保温5min,鸡蛋清溶菌酶的精制率最高.鸡蛋清溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌有明显抑制作用,80℃加热30min对鸡蛋清溶菌酶的抑菌作用影响很小.
【总页数】4页(P154-157)
【作者】黄敏;孔明航;王丽明
【作者单位】长江大学生命科学学院,荆州,434025;湖北省国营大垸农场,大
垸,433300;长江大学生命科学学院,荆州,434025
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.2+5
【相关文献】
1.鸡蛋清中溶菌酶的提取工艺研究 [J], 于洋
2.鸡蛋清中溶菌酶的分离提取 [J], 傅冰;季秀玲;俞汇颖;魏云林
3.鸡蛋清中溶菌酶提取技术的研究 [J], 迟晓艳;葛宜和;韩立亚;侯月利
4.鸡蛋清溶菌酶的提取纯化工艺研究 [J], 李书丰
5.鸡蛋清中溶菌酶的提取 [J], 陈中
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鸡蛋清中溶菌酶的提取与抑菌作用
2 结果与分析
211 蛋清液稀释倍数对溶菌酶粗提取率的影响 固定 pH 为 1018, 氯化钠的添加量为蛋清溶
液体积的 5% ( w / v, 以下同 ), 在 4e 下静置 1 w 结晶, 分别 加入蛋清体积 1、 2、 3、 4 倍的蒸馏 水, 提取溶菌酶的结果见图 1。
由图 1可见, 蛋清液加入 1倍体积蒸馏水稀
过滤并混匀, 按蛋清体积加入蒸馏水, 轻轻搅拌 5m in, 使蛋清溶液的稠度均匀。之后向蛋清溶液 中缓慢加入氯化钠细粉并轻轻搅拌。加完氯化钠 后, 再用氢氧化钠溶液调节 pH, 加入定量标准溶 菌酶结晶作为晶种。 4e 下静置。待结晶完全后, 用布氏漏斗 滤出结 晶, 即得到 粗制 的溶 菌酶 晶 体。
在单因子试验的基础上, 选用 L9 ( 33 ) 正交 表, 进行正交试验, 优化溶菌酶粗提取的工艺参 数表。因素水平见表。
表 1 盐析法提取蛋清酶溶菌酶的因素水平表 L9 ( 33 )
水平
蒸馏水添加量 (倍 ) ( 因素 A )
pH (因素 B )
氯化钠加入量 (% w /v) (因素 C)
1
2
91 5
中国食品添加剂 试验研究
Ch ina Food Add itives
鸡蛋清中溶菌酶的提取与抑菌作用
黄敏 1, 孔明航 2, 王丽明 1
( 1. 长江大学生命科学学院, 荆州 434025; 2. 湖北省国营大垸农场, 大垸 433300)
摘 要: 研究从鸡蛋清中提 取与精制溶菌酶的方法, 观察溶 菌酶对大肠 杆菌与金黄 色葡萄球 菌的抑 制作
将溶菌酶液ph调至610一组在80e加热30m一组不加热测定对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌抑制作用产生抑菌圈直径的结果见表蛋清溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌产生的抑制圈直径mm菌种类酶处理对照0110溶菌酶0125溶菌酶0150溶菌酶1100溶菌酶大肠杆菌未处理酶热处理酶1312171319151918金黄色葡萄球菌未处理酶热处理酶1111012111312由表可见抑菌圈直径与溶菌酶浓度存在相表现为
鸡蛋溶菌酶提取实验报告
一、实验目的1. 掌握鸡蛋溶菌酶的提取方法。
2. 了解溶菌酶的性质和功能。
3. 培养实验操作技能，提高实验分析能力。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种广泛存在于生物体内的碱性蛋白质，主要来源于鸟类的蛋清、哺乳动物的泪液、唾液等。
溶菌酶具有水解细菌细胞壁的作用，能够有效抑制细菌生长，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
本实验采用鸡蛋清作为溶菌酶的提取原料，通过酶解、离心、透析等步骤提取溶菌酶。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、NaCl、NaOH、丙酮、硫酸铵、蒸馏水等。
2. 实验仪器：高速离心机、恒温水浴锅、玻璃棒、烧杯、漏斗、滤纸、透析袋等。
四、实验步骤1. 酶解：将新鲜鸡蛋打破，取出蛋清，加入适量的NaCl溶液（浓度为0.5mol/L），搅拌均匀，置于恒温水浴锅中，温度控制在37℃，酶解1小时。
2. 离心分离：将酶解后的溶液以3000r/min的速度离心10分钟，收集上清液。
3. 盐析：在上清液中加入适量的硫酸铵固体，搅拌溶解，使蛋白质沉淀。
静置2小时，收集沉淀。
4. 透析：将沉淀用蒸馏水洗涤，去除杂质，然后将其放入透析袋中，置于蒸馏水中，透析24小时，去除小分子物质。
5. 浓缩：将透析后的溶液在50℃下减压浓缩，使蛋白质浓度提高。
6. 纯化：将浓缩后的溶液加入适量的丙酮，使蛋白质沉淀。
静置2小时，收集沉淀。
7. 干燥：将沉淀在50℃下真空干燥，得到溶菌酶粉末。
五、实验结果与分析1. 酶解过程中，蛋清逐渐变得透明，表明溶菌酶开始释放。
2. 离心分离后，上清液中溶菌酶浓度较高，下清液中含有其他杂质。
3. 盐析过程中，蛋白质沉淀较多，表明溶菌酶在硫酸铵溶液中具有较好的溶解性。
4. 透析过程中，透析袋中的溶液逐渐变得清澈，表明小分子物质已被去除。
5. 浓缩过程中，蛋白质浓度逐渐提高，有利于后续的纯化。
6. 纯化过程中，丙酮沉淀的蛋白质较多，表明溶菌酶在丙酮中具有较好的溶解性。
7. 干燥后，得到白色粉末，表明溶菌酶已被成功提取。
如何从蛋清中提取溶菌酶
盐析法实验步骤
• 将预处理的蛋清倾人烧杯中，边搅拌边加入蛋白质5％的 食盐粉末，促使氯化钠细粉及时溶解，以避免局部浓度过 高或沉淀于容器底部，否则会引起蛋白质的变性而产生大 量的白色沉淀．溶解后再用0．1mol／L的NaOH溶液调节 pH9．5-pH10.0。置于4℃环境中，数天后即有溶菌酶结 晶出现，将酶晶体过滤，收集结晶沉淀粉，用丙酮脱水， 真空干燥即为粗产品。将制得的粗品用pH4．6的醋酸溶 解，然后让酶液静置24小时，接着过滤除去不溶物，收集 滤液并量出体积，按每100毫升液体加5毫克NaCl的比例 加入，然后用0．1mol／L的NaOH溶液缓慢地将其pH值 调节到10．8后，低温下静置结晶。为加速结晶过程可向 酶液中加入溶菌酶晶种，待结晶完全后再倾去上清液，用 布氏漏过滤可得溶菌酶结晶。如纯度不高，可重复操作提 纯，直至达到所需的纯度为止，结晶于30—40℃得溶菌酶 产品。
离子交换法
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
从蛋清中提取溶菌酶的方法
溶菌酶作用机制
• 溶菌酶是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶。 • 它作用于N一乙酰氨基葡萄糖胺和N一乙酰胞壁酸 之间的B一1，4糖苷键，能使某些细菌细胞中粘 多糖成分分解。因而具有溶菌能力。 • 溶菌酶具有破坏细菌细胞壁结构的功能，处理革 兰氏阳性细菌可得到原生质体。溶菌酶是一种无 毒、无副作用的蛋白质，又具有一定的溶菌作用， 因此可用作食品防腐剂。
常用方法
• 盐析法 • 实验原理：高浓度的中性 盐溶液中存在着大量的带 电荷的盐离子，它们能中 和生物分子表面的电荷， 使之得以稳定的双电层受 损，从而破坏分子外围的 水化层；另外，大量盐离 子自身的水合作用降低了 自由水的浓度，从另一方 面压缩了水化层的浓度， 降低了它的亲水性，从而 沉淀析出。 • 离子交换法 • 实验原理：离子交换剂与 溶液中离子或离子化合物 的反应主要以离子交换方 式进行，或者借助离子交 换剂上电荷基团对溶液中 离子或离子化合物的吸附 作用进行，离子交换剂由 基质、电荷基团(或功能基 团)和反离子构成。
鸡蛋清中抑菌活性蛋白作用机制的研究进展
鸡蛋清中抑菌活性蛋白作用机制的研究进展杨晓雪，剧梦璇（东北农业大学食品学院，黑龙江哈尔滨 150030）摘 要：鸡蛋清中富含多种具有抑菌功能的生物活性成分。
随着鸡蛋贮存时间延长，蛋清中的浓蛋白会发生稀化现象，从而导致抑菌效果降低，微生物繁殖加快，鸡蛋品质下降。
本文对鸡蛋贮藏过程中的卵黏蛋白、溶菌酶及其复合物的相互作用形式、抑菌机制等进行探讨，以期为优化鸡蛋加工过程中的消毒杀菌工序、改良鸡蛋贮藏方法、延长鸡蛋保质期提供参考。
关键词：鸡蛋；蛋清蛋白；抑菌作用；蛋白相互作用Research Progress on the Mechanism of Antibacterial ActiveProteins in Egg WhiteYANG Xiaoxue, JU Mengxuan(Northeast Agricultural University, College of Food Science, Harbin 150030, China) Abstract: Egg white is rich in a variety of bioactive components with antibacterial function. With the prolongation of egg storage time, the concentrated protein in egg white will be diluted, which will lead to the decrease of bacteriostatic effect, the acceleration of microbial reproduction and the decrease of egg quality. In this paper, the interaction forms and antibacterial mechanism of ovomucin, lysozyme and their complexes during egg storage were discussed, in order to provide reference for optimizing the disinfection and sterilization process in egg processing, improving egg storage methods and prolonging egg shelf life.Keywords: egg; egg white protein; antibacterial function; protein interaction鸡蛋是一种营养配比均衡的食品，被称为“全营养食品”，具有营养全面、蛋白含量高（11%～13%）、蛋白易吸收（吸收率99.6%）等优点。
蛋清溶菌酶分离实验报告
一、实验目的1. 学习和掌握溶菌酶的提取、分离纯化技术。
2. 掌握电渗析/超滤内在耦合（EDUF）技术在分离蛋白中的应用。
3. 分析实验过程中影响分离效果的因素，优化实验条件。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种天然碱性蛋白质，具有抗菌、消炎和抗病毒等功能。
溶菌酶广泛存在于鸡蛋清中，含量丰富。
本实验采用EDUF技术，利用溶菌酶与卵白蛋白（OVA）在特定pH条件下的荷电性及分子量差异，从鸡蛋清中分离提取溶菌酶。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋清、PVDF100超滤膜、氯化钠、磷酸缓冲液、溶菌酶标准品等。
2. 实验仪器：电渗析/超滤装置、电子天平、pH计、分光光度计、离心机、恒温水浴锅等。
四、实验步骤1. 预处理：将鸡蛋清用4层纱布过滤，去除杂质。
2. 调节pH值：将过滤后的鸡蛋清用1 mol/L的HCl溶液调节pH值至7.0。
3. 电渗析/超滤：将调节pH值后的鸡蛋清加入EDUF装置中，设置操作电压为5.0V，原料室和回收室料液流量均为50mL/min，进行电渗析/超滤。
4. 收集溶菌酶：将电渗析/超滤后的溶液用离心机离心，收集沉淀。
5. 纯化：将沉淀用磷酸缓冲液（pH值为8.0）溶解，通过离子交换树脂纯化溶菌酶。
6. 活性测定：采用分光光度法测定溶菌酶的活性。
五、实验结果与分析1. 溶菌酶回收率：在操作电压为5.0V，采用PVDF100超滤膜，原料室和回收室料液流量均为50mL/min的条件下，溶菌酶的回收率可达21.05%。
2. 溶菌酶纯度：经纯化处理后，溶菌酶的纯度可达100%。
3. 溶菌酶活性：通过分光光度法测定，溶菌酶的活性为2.30U/mg。
4. 影响分离效果的因素分析：（1）pH值：溶菌酶在pH值为8.0时活性最高，因此在纯化过程中将pH值调节至8.0。
（2）操作电压：操作电压越高，溶菌酶的回收率越高，但电压过高会导致溶菌酶变性，因此选择5.0V为最佳操作电压。
（3）超滤膜材料：PVDF100超滤膜对溶菌酶的截留效果较好，因此选择该膜材料。
提取溶菌酶的实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握溶菌酶的提取方法；2. 了解溶菌酶的分离纯化过程；3. 掌握酶活力和蛋白浓度的测定方法；4. 学习溶菌酶纯度鉴定与分子量测定。
二、实验原理溶菌酶是一种胞壁质酶，主要存在于鸡蛋清中。
溶菌酶能够水解细菌细胞壁中的N-乙酰胞壁质，导致细菌细胞壁破裂，从而起到杀菌作用。
本实验通过提取鸡蛋清中的溶菌酶，对其进行分离纯化，并测定其酶活力、蛋白浓度、纯度和分子量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋、硫酸铵、氢氧化钠、盐酸、考马斯亮蓝G-250、邻苯二甲酸氢钾、苯酚、硫酸铜、氢氧化钠、无水乙醇等；2. 实验仪器：高速离心机、恒温水浴锅、分光光度计、pH计、电子天平等。
四、实验方法1. 溶菌酶的粗提取（1）取新鲜鸡蛋清，用4倍体积的0.1mol/L的NaOH溶液溶解；（2）将溶液搅拌均匀，置于4℃冰箱中过夜；（3）次日，将溶液用等体积的4倍体积的0.1mol/L的HCl溶液调节pH至4.5；（4）将溶液置于高速离心机中，以10000r/min离心30分钟；（5）取上清液即为粗提溶菌酶。
2. 溶菌酶的分离纯化及酶活力、蛋白浓度测定（1）取粗提溶菌酶溶液，用硫酸铵饱和溶液进行盐析，调节硫酸铵浓度为0.5mol/L；（2）将溶液置于4℃冰箱中过夜；（3）次日，将溶液用高速离心机以10000r/min离心30分钟，取沉淀；（4）将沉淀用0.1mol/L的pH 7.0的磷酸缓冲溶液溶解，得纯化溶菌酶溶液；（5）测定酶活力和蛋白浓度，酶活力单位以每分钟产生1μmol的产物为1个单位，蛋白浓度采用考马斯亮蓝G-250法测定。
3. 溶菌酶纯度鉴定与分子量测定（1）取纯化溶菌酶溶液，进行SDS-PAGE电泳分析；（2）根据电泳结果，计算溶菌酶的分子量；（3）根据纯化溶菌酶溶液的蛋白浓度和酶活力，计算溶菌酶的纯度。
五、实验结果与分析1. 溶菌酶的粗提取通过实验，成功提取了鸡蛋清中的溶菌酶，提取率为0.5%。
实验-溶菌酶制备及其性质鉴定
实验结果
1、计算出溶菌酶的活力单位 2、请说出其它提取和纯化溶菌酶的方法吗？请写出相关的方法及原理。
谢谢观看
实验步骤
（3）加完氯化钠细粉后，再用1mol/L的氢氧化钠溶。
低温下静置7d，溶菌酶结晶将慢慢析出，于72-96h 达到最高产率。
（4）将结晶溶液4000r/min，离心5min，倾去上清液，加入等体积预冷0℃丙酮， 再4000r/min，离心5min，洗涤后弃去上清液，即可得到粗制的溶菌酶晶体。
实验
溶菌酶的制备及 其性质鉴定
实验原理
溶菌酶广泛存在于动植物及微生物体内，具有抗感染、消炎、消肿、增强体内免 疫反应等多种药理作用。
鸡蛋清内含有丰富的溶菌酶，向鸡蛋清中加入一定量的中性盐，并调节pH至溶菌 酶的等电点，溶菌酶即可结晶析出。
如若结晶不纯，可以重结晶。
实验原理
溶菌酶之所以溶菌，因它能催化革兰氏阳性细菌细胞壁黏多糖水解的缘故。 测定溶菌酶的活力，可以用某些细菌细胞壁作为底物，以单位时间内被它水解的
细胞壁的量表示酶活力的大小。
实验步骤
一、溶菌酶的提纯结晶
（1）将2只鸡蛋的蛋清置于小烧杯中，慢慢搅拌5分钟，使蛋清稠度均匀，然后 用两层纱布过滤除去卵带或碎蛋壳，记录蛋清体积。
（2）按每100ml蛋清溶液加入5g氯化钠的比例，向蛋清溶液中慢慢加入氯化钠 细粉，边加边搅拌，促使氯化钠细粉及时溶解，以避免局部浓度过高或沉淀于容 器底部，否则会引起蛋白质的变性而产生大量的白色沉淀。
实验步骤
二、溶菌酶的活力测定
（1）酶液的制备 准确称取溶菌酶样品100mg， 用0.1mol/L，pH6.2磷酸缓冲液 配成1mg/ml的酶液，再将酶液稀释成50µg/ml。 （2）将酶液2mL和底物悬液2mL（短小芽孢杆菌）分别置于25℃水浴中保温1015min，然后吸取底物悬液4mL放入比色皿中，450nm波长读出吸光度，此为0 时读数。 1min后，再读吸光度，记下读数。
蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究
蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究蛋清是一种富含蛋白质的食品，其中含有一种叫做溶菌酶的酶类物质。
溶菌酶具有很强的抗菌作用，可以在食品加工和医药领域中发挥重要的作用。
因此，对蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法的研究具有重要的意义。
一般来说，蛋清中溶菌酶的提取方法可以分为化学法和物理法两种。
化学法主要是利用酸、碱等化学试剂来提取溶菌酶，但这种方法存在一定的毒性和污染性，不太适合在食品加工中使用。
物理法则是利用高压、超声波等物理手段来破坏蛋白质的结构，使溶菌酶释放出来。
这种方法相对来说比较安全，但提取效率较低。
为了提高蛋清中溶菌酶的提取效率，研究人员提出了一种新的方法，即利用离子交换色谱技术来提取溶菌酶。
这种方法利用离子交换树脂将蛋清中的溶菌酶吸附在树脂上，然后通过洗脱的方式将溶菌酶从树脂上释放出来。
这种方法具有提取效率高、操作简单、无毒无害等优点，因此在实际应用中得到了广泛的应用。
除了提取方法的研究外，对蛋清中溶菌酶的定量测定方法也是非常重要的。
目前常用的定量方法有比色法、荧光法、酶联免疫吸附法等。
其中，比色法是一种简单易行的方法，可以通过测定溶菌酶与底物反应后产生的色素来确定溶菌酶的含量。
荧光法则是利用荧光染料与溶菌酶结合后产生的荧光信号来测定溶菌酶的含量。
酶联免疫吸附法则是利用特异性抗体与溶菌酶结合后产生的信号来测定溶菌酶的含量。
这些方法各有优缺点，可以根据实际需要选择合适的方法进行测定。
总之，蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法的研究对于食品加工和医药领域具有重要的意义。
未来，我们可以继续探索新的提取方法和测定方法，以提高溶菌酶的提取效率和测定精度，为人类健康和生活带来更多的福利。
鸡蛋溶菌酶提取
鸡蛋溶菌酶提取鸡蛋溶菌酶提取溶菌酶（又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶）是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。
主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。
溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。
性质：白色或微白色冻干粉，溶于水，不溶于乙醚和丙酮，pI为11.0-11.35，最适pH值6.5。
稳定性：酸性介质中可稳定存在，碱性介质中易失活；96℃， pH值为3条件下，15min后活力保持87%。
抑制剂有碘、咪唑和吲哚衍生物、表面活性剂(十二烷基硫酸钠、醇类和碳链不少于12的脂肪酸)。
1%水溶液在281.5nm 处的吸光系数为26.4。
通过水解细菌细胞壁的肽聚糖来溶菌作用：溶菌酶的用途极为广泛，在医药上，可与血液中的病毒结合，阻止流感、腺病毒等的繁殖；能分解粘多糖，有利于脓汁、痰液的排出；能清除坏死组织、增进抗生素的药效以及促进肠道有益细菌如乳酸菌的繁殖等作用；另外，它与抗生素联合应用还可治疗支气管炎、肺炎、白喉、小儿急性肾炎等多种疾病。
在食品上，卵清溶菌酶是无毒的蛋白质，能选择性地使目标微生物细胞壁溶解，而对其他物质无反应，人们利用它来代替有害健康的化学防腐剂（如苯甲酸及其钠盐），以达到保存食物的目的，是一种天然防腐剂；溶菌酶添加于牛乳，可使牛乳人乳化，提高了牛乳的营养价值。
提取工艺：（一）鸡蛋清中提取溶菌酶方法一——食盐盐析一．材料：原料：鸡蛋、NaOH、NaCl、丙酮、（市售溶菌酶粉剂）仪器与设备：搅拌器（200-300r/min）,离心机（4000r/min），抽滤机二．工艺流程：原料→ 清洗→ 去蛋壳→ 分离蛋清→ 搅拌→ 过滤→ 加盐→ 调节pH值→ 结晶→ 干燥→ 成品→ 包装三．实验步骤：1选择新鲜鸡蛋，蛋清的pH值不能低于8.0，否则不能用。
鸡蛋提取溶菌酶的方法
鸡蛋提取溶菌酶的方法鸡蛋白是一种丰富的蛋白质源，其中含有溶菌酶（lysosome），可以在细菌和真菌的溶解中发挥重要作用。
溶菌酶是一种具有溶菌、抗菌活性的酶类。
鸡蛋提取溶菌酶的方法主要包括以下几个步骤：1. 鸡蛋的分离：首先将新鲜的鸡蛋进行分离，只保留蛋清（蛋白质）部分，去除蛋黄。
2. 蛋清处理：将蛋清中的蛋白质与溶菌酶分离，可以采用酸碱沉淀法。
将蛋清加入适量的酸（如醋酸）中，使酸度下降到pH 4以下，随后使用碱（如氢氧化钠）中和酸性溶液，使溶液pH回升到中性左右。
这一过程中，溶菌酶会发生沉淀现象，可以方便地分离出来。
3. 溶菌酶的除杂：蛋清中可能还存在其他酶类或蛋白质，为了获得纯净的溶菌酶，可以进行一轮或多轮的洗涤与纯化。
例如，可以使用盐析法，通过逐渐增加溶液中的盐浓度来沉淀溶菌酶，然后用溶液洗涤沉淀物，最后得到纯净的溶菌酶。
4. 溶菌酶的浓缩与干燥：将纯净的溶菌酶溶液通过浓缩技术（如超滤或冷冻干燥）使溶液浓度增大，得到较为浓缩的溶菌酶溶液。
5. 溶菌酶的活性测定：对提取得到的溶菌酶进行活性测定，可以通过测定其对特定底物的溶解能力来评估溶菌酶的活性。
常见的测量方法包括显色法和滴定法等。
鸡蛋提取溶菌酶的方法相对简单，但有一些需要注意的注意事项：1. 鸡蛋的新鲜度对溶菌酶的提取效果有一定影响，新鲜的鸡蛋中溶菌酶的含量较高。
因此，在进行实验时应选择新鲜的鸡蛋。
2. 溶菌酶的活性与条件相关，如温度、酸碱度等。
在提取过程中需要控制好这些条件，以保证溶菌酶的稳定性和活性。
3. 提取得到的溶菌酶需储存于低温（通常-20C）下，否则易失活。
4. 鸡蛋中的蛋白质含量较高，在提取过程中需要留意对蛋白质的处理，避免产生其他影响或污染。
需要特别注意的是，提取溶菌酶并非只有上述方法，还可以根据实际需要结合其他技术和方法进行提取，例如离心、层析、电泳等。
总结起来，鸡蛋提取溶菌酶的方法包括鸡蛋的分离、蛋清处理、溶菌酶的除杂、溶菌酶的浓缩与干燥以及溶菌酶的活性测定等步骤。
鸡蛋卵清中溶菌酶的提取与纯化
四、实验材料和方法
四、实验材料和方法
1、实验材料：新鲜鸡蛋、磷酸缓冲液（PBS）、乙酸乙酯、正丁醇、蛋白酶 抑制剂、透析袋。
四、实验材料和方法
2、实验设备：高速离心机、真空泵、氮气仪、色谱柱。 3、实验方法： （1）鸡蛋卵清的收集：将新鲜鸡蛋打破，分离出卵黄和卵清， 收集卵清备用。 （2）粗提：将收集的卵清加入磷酸缓冲液（PBS），搅拌均匀 后进行高速离心，取上清液即为粗提液。 （3）沉淀：向粗提液中加入等体积的 乙酸乙酯，充分混合后静置分层，取下层沉淀。 （4）
鸡蛋卵清中溶菌酶的提取与 纯化
目录
01 一、背景介绍
03 三、实验原理
02 二、研究目的 04 四、实验分析
07 参考内容
06 六、结论与展望
一、背景介绍
一、背景介绍
溶菌酶是一种广泛存在于生物体内的天然抗菌酶，具有抗菌、抗炎、抗病毒 等多种生物活性。近年来，随着人们对食品安全和药物研发的度不断提高，从天 然生物资源中提取和纯化溶菌酶成为了一个热门领域。鸡蛋卵清作为一种丰富的 天然资源，具有较高的溶菌酶含量，因此成为了提取和纯化溶菌酶的重要来源。 本次演示旨在探讨鸡蛋卵清中溶菌酶的提取与纯化方法，以期为相关领域的研究 提供参考。
四、实验材料和方法
复溶：将沉淀物真空干燥后，加入适量正丁醇溶解，再加入透析袋中透析去 除小分子杂质。 （5）色谱分离：将透析后的溶液通过色谱柱进行分离，收集流 出液，检测其中溶菌酶的纯度和含量。 （6）鉴定：采用光谱分析、分子量测定 等方法对纯化的溶菌酶进行鉴定。
五、实验结果及分析
五、实验结果及分析
二、研究方法与技术
1、材料与设备
1、材料与设备
本研究采用新鲜鸡蛋作为原料，使用离心机、分光光度计、电泳仪等设备进 行实验。
蛋清溶菌酶的提取分离与活性研究
据文献报导，蛋清溶菌酶在较宽的温度范围 内都可以保持活性，鸡蛋白溶菌酶的最适ｐＨ值 比其它植物溶菌酶都略高在ｐＨ６左右。本实验 所得的最适ｐＨ值基本接近。（见图５） ２．６温度对酶比活性的影响
在２０～９０℃的温度范围内，溶菌酶均有一 定的活性。以６０℃时活性最高，约为２０ｃｃ时的
由图２及图３分析可得，在盐浓度为４％，
１２
中国食品学报
ｐＨ值为１０．５时酶的提取率可以达到最高。 据文献参考，蛋清提取率约为４．６３％０， 本
实验的酶提取率有一些偏低。
３．６倍；在３５—８５。Ｃ的范围内，活性为６０℃时的 ５０％以上，可见蛋清溶菌酶在很宽的温度范围内 均能起作用（见图６）。
３·５５
一！竺里生堕鱼堕里旦望堕！生坐堡堕！旦鲤墅！塑旦塑堕墅！地塑竺墅
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１０ｍＬ加入ＮａＣｌ ０．５９，滴加１Ｍ ＮａＯＨ溶液调ｐＨ 值至９．５—１０．０，置４０Ｃ冰箱中，结晶析出即 成）。在４℃下静置，溶菌酶结晶将慢慢析出， 不加晶种两周左右结晶率最高，反之７２—９６ｈ最 高。数天后，结晶完全时倾去上清液并离心即可 得到粗酶液，干燥后即得溶菌酶酶粉。 １．２．３溶菌酶的活力测定 将溶壁微球菌菌体 置入无菌水中，轻轻振荡使其溶解呈悬浮状。菌 体悬浮液移植于适宜的琼脂斜面，备用［６Ｊ６。将溶 壁微球菌接种到液体培养基上（牛肉膏Ｏ．５％、 蛋白胨１．０％、ＮａＣｌ ０．５％，调ｐＨ值至７．５）。摇 床温度３７。Ｃ，摇床转速２００ｒｐｍ，培养时间２０～ ４０ｈ。将培养的溶壁微球菌接种至固体培养基上 （液体培养基中加琼脂２．Ｏ％，调ｐＨ值至７．５）， 在２８℃下培养４８ｈ后用去离子水将菌体洗下，离 心（４ ０００ ｒｐｍ，２０ ｍｉｎ）收集菌体，反复洗涤， 离心数次，将菌体干燥后至低温下保存待用［７｜。
实验室技术手册：从蛋清中提取溶菌酶
实验室技术手册：从蛋清中提取溶菌酶各位看官，今天我们来聊聊如何在实验室里从蛋清中提取溶菌酶。
溶菌酶是一种能分解细菌细胞壁的酶，广泛应用于医药、食品等领域。
而我们从蛋清中提取溶菌酶，不仅可以研究其性能，还可以应用于实际生产中。
下面，就让我来为大家详细介绍这个实验的步骤吧。
第一步，将新鲜鸡蛋打入离心管中，加入适量柠檬酸钠溶液，用移液器反复吹打，使蛋清和蛋黄充分混合。
这一步是为了确保蛋清和蛋黄均匀混合，提高提取效率。
第二步，将混合液转移到另一个离心管中，加入适量磷酸缓冲液，再次用移液器吹打，使溶液充分混合。
这一步是为了提供一个适宜的pH环境，有利于溶菌酶的提取。
第三步，将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心10分钟。
这一步是为了将混合液中的固体物质沉淀下来，得到较纯净的蛋清水溶液。
第四步，取离心后的上清液，加入等体积的乙醚，用移液器反复吹打，使溶液充分混合。
这一步是为了去除蛋清水溶液中的脂溶性物质，提高溶菌酶的提取纯度。
第五步，将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心5分钟。
这一步是为了将混合液中的乙醚和脂溶性物质沉淀下来，得到较纯净的蛋清水溶液。
第六步，取离心后的上清液，用移液器移入干净的试管中，放入冰箱冷藏保存。
这一步是为了保存提取得到的溶菌酶，避免其降解。
总的来说，从蛋清中提取溶菌酶的实验步骤如下：1.将新鲜鸡蛋打入离心管中，加入适量柠檬酸钠溶液，用移液器反复吹打，使蛋清和蛋黄充分混合。
2.将混合液转移到另一个离心管中，加入适量磷酸缓冲液，再次用移液器吹打，使溶液充分混合。
3.将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心10分钟。
4.取离心后的上清液，加入等体积的乙醚，用移液器反复吹打，使溶液充分混合。
5.将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心5分钟。
6.取离心后的上清液，用移液器移入干净的试管中，放入冰箱冷藏保存。
这样，我们就成功从蛋清中提取出了溶菌酶。
从鸡蛋清中提取溶菌酶
加入1.5倍体积的pH8.0 PBS缓冲液，搅拌均匀
用冰醋酸调pH4.7左右，充分搅拌
3500rpm，离心20min
弃沉淀，转移上清至烧杯中
加入1倍体积的pH8.0 PBS缓冲液，搅拌 均匀，并用5mol/L NaOH调pH8.0
滤纸过滤，取清液，测量并记录体积V2
取清液装在10mL离心管中 -20℃冻存备用。（样品S1）
溶菌酶广泛存在于动植物及微生物体内鸡蛋量约为24和哺乳动物的乳汁是溶菌酶的主要来源目前溶菌酶仍属于紧销的生化物质鸡蛋的蛋清中含有丰富的上述物质本实验以鸡蛋蛋清为原料对溶菌酶进行提取并分离纯化
从鸡蛋清中提取溶菌酶
制作者：
目录
1、溶菌酶的含义 2、溶菌酶的理化性质 3、溶菌酶的提取及分离 4、溶菌酶的用途
【试剂配制】
冰醋酸、 5mol/L NaOH、20%磺基水杨酸 溶液、 考马斯亮蓝染色液、 脱色液： 450mL甲醇：水（1：1）、50mL冰醋酸 、 0.02 mol/L PBS( pH8.0)
【实验步骤】
1.溶菌酶的粗提取（约两个半小时）
拿3个鸡蛋破壳取蛋清置于250mL烧杯中，轻轻 搅拌5分钟，使其的稠度均匀，然后用两层纱布 过滤，去除脐带和蛋壳。记录其体积V1
什么是溶菌酶？
溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质 聚糖水解酶，是一种能水解致病菌中黏 多糖的碱性酶。
溶菌酶的物理性质：
白色或微白色冻干粉，溶于水，不溶 于乙醚和丙酮，pI为11.0-11.35，最适 pH值6.5。稳定性：酸性介质中可稳定 存在，碱性介质中易失活。存储条件为 2-8摄氏度。
溶菌酶的化学性质：
【材料与仪器】 鸡蛋3个 DE-52纤维素 葡聚糖G50 0.5*7cm色谱柱、2.5*20cm色谱柱、烧 杯(100ml,250mL，1000mL)、锥形瓶 (100ml)、玻璃棒、漏斗、定性快速滤纸、 纱布、量筒（100mL,250 mL，1000 mL）、10 mL 离心管、1.5mL Ep管、高 速离心机、冰箱、电炉
不同品种鸡蛋蛋清溶菌酶粗提率及蛋清抑菌效果的比较
关键词 ： 鸡蛋品种 ； 蛋清 ； 溶菌酶 ； 粗提率 ； 抑 菌 效 果
中图分类号 ： ￥ ８ ５ ２ ． ６： Ｔ Ｓ ２ ０１ ． ３ 文献标识码 ： Ａ 文章 顺 序 编 号 ： １ ６ ７ ２ — ５１ ９ ０ （ ２ ０１ ７） ０１ 一 Ｏ ０１ ６ — ０ ２
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鸡蛋清中提取溶菌酶
• 结晶过滤或分离：用滤纸或尼龙布过滤，或用离 心机离心10min，得到溶菌酶结晶。
• 结晶洗涤：用丙酮将溶菌酶结晶洗涤数次（一般3 次即可）。
• 干燥：将溶菌酶结晶在常温或（50-60） ℃条件 下干燥制成成品，水分含量质量分数约为（2-3） %。
鸡蛋清中提取溶菌酶
溶菌酶
• 溶菌酶（lysozyme）又称胞壁质酶（muramidase）， 由 129个氨基酸组成的一种无毒、无副作用，又具有一定的 溶菌作用碱性球蛋白，可溶于水和酸性溶液，而且耐热 （pH4～7的范围内，在100℃处理1min仍有近100%的活 力，但在碱性环境条件下，酶稳定性较差 ），耐干燥，在 室温下可长期存放，性质稳定。溶菌酶存在于人体的各个 组织中，如心、脏、脾、肺和肾等，其中以肾和肺中含量 最高。鸟类和家禽的蛋清、哺乳动物的泪、唾液、血浆、 尿、乳汁等体液以及微生物中也含此酶，其中以蛋清含量 最为丰富。植物中有溶菌酶， 目前已从木瓜、无花果、芜 菁、大麦等植物中分离出溶菌酶，其分子量较大，约为 24000～29100。
Thank you！
工艺流程
原料 → 清洗 → 去蛋壳 → 分离蛋清 → 搅拌 → 过滤 → 加盐 → 调节pH值 → 结晶 → 干燥 → 成品 → 包装
实验步骤
• 选择新鲜鸡蛋，蛋清的pH值不能低于8.0，否则不 能用。
• 清洗:用水洗掉蛋壳表面的不洁之物。 • 将鸡蛋的两端各敲一个小洞，使蛋清流出。 • 用搅拌机搅拌，将蛋清搅拌稠度均匀即可，以不
溶菌酶的应用
• 医药方面
溶菌酶作为一种存在于人体正常体液及组织中的 非特异性免疫因素，具有多种药理作用，它具有 抗菌、抗病毒、抗肿瘤等功效，目前日本已生产 出医用溶菌酶，其适应症为出血、血尿、血痰和 鼻炎等。