细胞爬片HE染色方法

细胞爬片HE染色方法一、原理苏木素（Hematoxylin）－伊红（Eosin）染色法，简称HE染色法。

HE染色法采用两种染料即碱性染料苏木素和酸性染料伊红分别于细胞核和细胞质发生作用，使细胞的微细结构通过颜色而改变它的折光率，从而在光镜下能清晰地呈现出细胞图像。

该染色过程既有化学反应，又有物理作用参与。

从化学反应看，组织细胞内含有酸性物质和碱性物质，细胞的酸性物质与碱性染料的阳离子结合，而细胞核的碱性物质与酸性染料的阴离子结合，使其中酸性细胞核被碱性的苏木素染成蓝色，而碱性的胞浆被酸性染料伊红染成红色。

其结果胞核呈蓝色，胞浆呈红色。

从物理现象看，主要有吸附、吸收之说。

HE 染色提供良好的核浆对比染色，是细胞化学染色最常用的一种方法。

二、实验用品1、固定液：常用95％乙醇和冰丙酮2、苏木精染液：称取苏木精粉0.5g，铵矾24g溶解于70ml蒸馏水中，然后取NaIO 31g，水5ml，再加入甘油30ml和冰醋酸2ml，混合均匀，滤纸过滤，备用。

3、伊红染液：称取0.5g水溶性伊红染液，溶于100ml蒸馏水中。

4、稀盐酸乙醇溶液：用75%乙醇配制1％盐酸。

5、系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶。

6、培养瓶、培养皿、眼科镊、盖玻片、载玻片、显微镜。

三、实验步骤1、样品制备：对于贴壁生长细胞，胰酶消化，调整细胞浓度约1×105/ml，滴加于盖玻片上（置于6孔板中），培养相应时间后，取出细胞爬片，用PBS洗涤3次。

2、样品固定：95％乙醇固定20min，PBS洗涤2次，每次1min。

3、染核：苏木素染液染色2－3min，自来水洗涤。

4、分色：镜下观察，若细胞核染色过深，用1％盐酸酒精溶液分色数秒，自来水洗涤。

5、染胞质：浸入伊红染液染色1min，自来水洗涤。

6、吹干或自然晾干细胞爬片后，中性树胶封片。

若细胞用4％多聚甲醛固定，则染色时间相应延长，苏木素染色12-15min，伊红5min 即可。

he染色——精选推荐

一、HE染色石蜡切片制作的基本过程作者：未知来源：生物秀时间：2007-12-71、取材与固定：?从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林，Bouin氏固定液等)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。

2、脱水透明：一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。

再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。

3、浸蜡包埋：将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。

待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好容器(如折叠一小纸盒)，倒入已溶化的石蜡，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。

冷却凝固成块即成。

包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。

4、切片与贴片：?将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5—8微米厚。

切下的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。

5、脱蜡染色：?常用HE染色，以增加组织细胞结构各部分的色彩差异，利于观察。

苏木精(Hematoxylin，H)是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。

伊红(Eosin，E)是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。

染色前，须用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，最后入蒸馏水，就可染色。

HE染色过程是：?①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。

?②酸水及氨水中分色，各数秒钟。

?③流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。

?④入70％和90％酒精中脱水各10分钟。

?⑤入酒精伊红染色液染色2—3分钟。

6、脱水透明：?染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明。

7、封固：?将已透明的切片滴上加拿大树胶，盖上盖玻片封固。

待树胶略干后，贴上标笺，切片标本就可使用。

he染色的操作流程原理

he染色的操作流程原理下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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将组织样本迅速放入固定液中，以防止组织自溶和腐败。

HE染色步骤[推荐]

HE染色步骤[推荐]
染色是加入染料将细胞或组织着色的过程。

HE染色是指使用
血红蛋白染成红色，细胞核染成蓝色的染色方法。

HE染色步骤如下：
1. 取制好的玻片（细胞或组织已固定在玻片上），用甲醇或乙醇进行脱水，使细胞或组织变得透明。

2. 将玻片放入染料盒中，加入苏丹三液（血红蛋白染料）浸泡。

时间通常为5-10分钟。

洗净玻片以去除多余的染料。

3. 将玻片放入氧化性酸液中（酸性洗涤液或稍微含有酒精的酸性水溶液），将苏丹三液中的铁离子还原成溶于水的亚铁离子。

时间通常为1-2分钟。

4. 接下来，将玻片放入碱性染色液中（含有甲苯重组溶液和酸性洗涤液的甲苯重组溶液），染色液中的亚铁离子被氧化成沉淀（血红蛋白）。

5. 最后，将玻片漂洗并脱水，然后用透明介质将玻片封闭，使其防止氧化。

通过HE染色，可以使细胞核染成蓝色，血红蛋白染成红色，
从而在显微镜下清晰地观察细胞或组织的结构和特征。

这是一种常用的组织学染色方法。

HE染色步骤

HE染色法是苏木精（hematoxylin）和伊红（eosin）的首个字母缩写。

苏木精是碱性染料，使细胞核染色质和胞质内的核糖体呈紫蓝色。

伊红是酸性染料，使细胞质和细胞外基质中带较强碱基的蛋白质成份着红色。

常规he染色步骤：(1)二甲苯（Ⅰ）15min(2) 二甲苯（Ⅱ）15 min（3）二甲苯：无水乙醇=1:1 2min(4)100%乙醇（Ⅰ）5min(5)100%乙醇（Ⅱ）5 min(6)80%乙醇5min(7)蒸馏水5 min(8)苏木精液染色5 min(9) 流水稍洗去苏木精液1-3 s(10) 1%盐酸乙醇1-3 s(11) 稍水洗10-30 s(12)蒸馏水过洗1-2 s(13) 0.5%伊红液染色1-3 min(14) 蒸馏水稍洗1-2 s(15) 80%乙醇稍洗1-2 s(16) 95%乙醇（Ⅰ）2-3 s(17) 95%乙醇（Ⅱ）3-5 s(18) 无水乙醇5-10 min(19) 石炭酸二甲苯5-10 min(20) 二甲苯（Ⅰ）2 min(21) 二甲苯（Ⅱ）2 min(22) 二甲苯（Ⅲ）2 min(23) 中性树胶封固注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步冲水时间需延长至20-30min。

②第（21）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。

冷冻切片HE染色步骤：（1）冰冻切片固定10～30 s（2）稍水洗1～2 s（3）苏木精液染色（60℃）30～60 s（4）流水洗去苏木精液5～10 s （5）1%盐酸乙醇1～3 s （6）稍水洗1～2 s（7）促蓝液返蓝5～10 s （8）流水冲洗15～30 s （9）0.5%曙红液染色30～60 s （10）蒸馏水稍洗1～2 s （11）80%乙醇1～2 s （12）95%乙醇1～2 s （13）无水乙醇1～2 s （14）石炭酸二甲苯2～3 s （15）二甲苯（Ⅰ）2～3 s （16）二甲苯（Ⅱ）2～3 s （17）中性树胶封固。

HE染色方法与步骤吐血整理

HE染色方法与步骤吐血整理染色是一种常见的实验技术，用于观察和分析生物样品中的细胞或组织结构。

HE染色是一种常用的组织和细胞染色方法，它能够同时染色细胞核和细胞质，因此得名HE（hematoxylin and eosin）染色。

下面是HE染色的步骤：1.染色前的准备工作：-选择合适的组织样品，通常是已固定和包埋的组织切片。

-准备好需要使用的试剂和设备，包括显微镜玻片、切片刀、染色盘、醇和蜡解剂、染色液和显微镜。

-将切片从包埋蜡中去蜡，并通过浸泡在蜡解剂中来溶解蜡质。

2.组织切片的处理：-将组织切片通过水洗涤，去除蜡解剂和剩余的蜡质。

-将切片通过不同浓度的醇溶液进行脱水处理，使得切片逐渐转移到无水状态。

-将脱水处理后的切片通过透明质量更好的试剂（如亚硫酸氢钠或甘油）进行透明处理，以利于细胞的观察。

3.组织切片的染色：-首先进行碱性染色，即将切片浸泡在染色盘中的伊洛酮溶液中，伊洛酮是一种天然的染色物质，能够与细胞核结构中的DNA结合，使细胞核染色为暗蓝色。

-然后进行酸性染色，即将切片浸泡在染色盘中的苏木精溶液中，苏木精是一种带正电荷的染色物质，能够与细胞质结构中的负电荷部分结合，使细胞质染色为粉红色。

4.组织切片的脱水和封片：-将染色后的切片通过不同浓度的醇溶液进行脱水处理，使得切片从水状态逐渐转移到无水状态。

-将切片在醇溶液中固定一段时间，然后转移到透明的试剂（如苏木精和二甲苯混合溶液）中进行浸泡。

- 最后将切片取出，放在显微镜玻片上，滴入固定剂（如Canada Balsam）并加盖玻片，使切片固定在玻片上。

5.显微镜观察和分析：-使用显微镜观察染色后的组织切片，并通过不同增大倍数的镜头进行详细观察。

-根据观察到的细胞和组织结构，进行分析和研究，并将观察结果记录下来。

需要注意的是，HE染色是一种简单、快速且广泛应用的染色方法，但在不同类型的组织和细胞中可能会有不同的染色效果。

因此，在进行HE染色时，需要根据具体实验要求和样品的特点，进行相应的优化和调整。

he染色流程步骤

he染色流程步骤HE 染色啊，这可是病理实验中的一项重要技术呢！就好像是给组织细胞精心打扮一番，让它们能更好地展现在我们眼前。

首先得准备好切片，这就像是给模特准备好展示的舞台。

切片要切得薄而均匀，就像裁衣服一样，得有好手艺。

然后把切片放到烤片机上稍微烤一下，让它能稳稳地待在那儿，就像给它定个型。

接下来就是染色的关键步骤啦！先把切片放到苏木精溶液里泡一泡，这苏木精就像是神奇的魔法药水，能让细胞核变得蓝汪汪的，特别好看。

就好像给细胞核穿上了一件蓝色的漂亮衣服。

染完细胞核，就得让细胞质也美起来呀。

这时候就要用到伊红溶液啦，把切片放进去，细胞质就会染上那鲜艳的红色，哇，一下子就生动起来了，就像给细胞质化了个美美的妆。

染完色可还没完事儿呢！还得经过一系列的脱水、透明步骤。

就好像给化好妆的模特做最后的整理，让一切都更加完美。

脱水呢，就像是把多余的水分挤出去，让切片变得更清爽。

透明呢，则像是给切片罩上一层薄薄的面纱，让它更有朦胧美。

最后一步就是封片啦！把切片用盖玻片封起来，就像是给模特穿上了一件华丽的外套，保护好它。

你说这 HE 染色是不是很神奇呀？就这么一步步的，把那些原本我们肉眼很难看清的组织细胞变得清晰又漂亮。

它就像是一个小小的魔法，让我们能更好地了解身体内部的奥秘。

想想看，如果没有 HE 染色，我们怎么能那么清楚地看到细胞的结构和形态呢？怎么能对疾病做出准确的诊断呢？它可是病理诊断的重要手段之一呢！所以啊，一定要好好掌握 HE 染色的流程步骤，这可关系到我们对生命的探索和了解呢！可不能马虎哟！这就像是学一门手艺，得用心去学，才能学好。

你说是不是呢？你要是学会了这一手，那可就厉害了，感觉就像掌握了打开生命奥秘大门的钥匙呢！。

he染色吉姆萨染色试剂方法[精华]

两种染色试剂和方法如下。

000000一、HE染色000000试剂：000000苏木素染液：苏木精1g；无水乙醇25mL；硫酸铝钾10g；蒸馏水350mL；碘酸钾0.1g；冰醋酸10mL。

A 液：用25mL 无水乙醇溶解1g苏木精，摇动即可溶解。

B 液：用350mL 蒸馏水溶解10g硫酸铝钾，摇动或振荡即可溶解。

把A 液和 B 液混合，加入碘酸钾摇动至颜色加深。

最后加入10mL冰醋酸，摇动颜色变为深葡萄酒红色。

染液配制当日即可应用于染色。

酸化液：醋酸20-35mL加蒸馏水至700mL。

000000伊红染液：储液：取1g伊红，溶于100mL 95%的乙醇，待溶解完全后加几滴冰醋酸至染液呈半透明状，避光保存备用。

工作液：取一定量的伊红储液，加入等量70%乙醇，此液即为伊红染液的工作液。

000000染色步骤：000000（1）细胞爬片放用PBS漂洗3次，每次5min，无水乙醇固定5min，风干。

000000（2）95%乙醇1min，75%乙醇1min，三蒸水1min。

000000( 3 ) 浸洗5 % 的醋酸液 ( 酸化液 ) 数秒。

000000( 4 ) 苏木精染液 3 - 5 m i n，胞核呈橙红色。

000000( 5 ) 自来水冲洗至颜色变蓝。

000000( 6) 盐酸乙醇液分化数秒，颜色再次返红。

000000(7) 自来水再次冲洗，返蓝。

000000( 8) 伊红染液5min，流水漂洗15min左右。

000000二、吉姆萨染色000000试剂：000000吉姆萨染液配制：取吉姆萨粉末1g溶于66ml甘油中研磨混匀，然后放置55-60℃水浴2h，冷却后加入66ml甲醇中混匀，过滤后棕瓶分装保存。

0000 00PBS甲醇液：PBS与甲醇一比一混合。

000000染色步骤：000000（1）细胞爬片使用PBS漂洗3次，每次5min。

000000（2）加PBS甲醇液静置2min，去掉PBS甲醇液。

000000（3）加甲醇固定10min，去掉甲醇，加入新无水甲醇漂洗去掉。

细胞爬片的方法与心得

细胞爬片的方法与心得【爬片的准备】1、爬片可用一般的盖玻片，也可用专用爬片；2、应用盖玻片，可根据自己的需要剪裁成合适的大小，以备置于6孔板、12孔板或24孔板；3、将剪裁好的爬片，置于浓硫酸中浸泡并过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再用三蒸水冲洗3遍（个人认为主要目的是冲洗干净就可以了），放在饭盒或者培养皿（一定是玻璃的哦，要不然就……）中烘干后进行高压消毒。

【培养板的准备】1、泡酸过夜2、冲洗，烘干（1、2步骤与前大致相同）3、放入超净工作台用紫外线照1～2小时就可以用了（在照之前可以将爬片一并放入，若细胞贴壁能力不强，可经多聚赖氨酸浸片后放入。

贴壁能力强的话，就可以省略了，进行紫外线消毒）注：此步自己的经验是爬片可以先浸入消毒后的PBS内，紧接着放入培养板内。

目的：浸过PBS的爬片依靠表面的液体，可以用培养板孔底贴和紧密，以利于细胞长到爬片上。

（自己刚开始做的时候，经常就是细胞全都长在了爬片与培养板之间，爬片上细胞罕见。

）【细胞爬片】1、胰酶消化细胞后计数2、根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可3、第二天即可进行干预措施多聚赖氨酸的浓度要求应该不严格，主要就是将贴壁能力弱的细胞固定上去，如0.1％（w/)，消毒可用紫外线照射。

园子里搜到的玻片的处理方法：玻片泡酸，自来水冲洗数遍，去离子水冲洗，就像细胞培养瓶等的那种处理就可以。

然后放在小饭盒或者玻璃皿里高压灭菌。

再烤干备用。

将玻片用灭菌镊子放于培养皿中，加细胞。

整个过程注意无菌操作就是了。

也没啥难的。

要注意的是：1.泡过酸的玻片特别脆。

用镊子夹着过水。

要冲得充分，和那些细胞培养用玻璃管，瓶等的原则一样。

2.如果你觉得玻璃片太大。

可以在泡过酸，水冲洗过用磨石在玻璃片上划痕，掰开。

我曾将一个玻璃片分成4个小片，在12孔，24孔板里放一两片那种。

3.有个问题我一直没有解决好：就是加上培养基后玻璃片拿动培养皿时，玻璃片会窜，常会压到长在皿底部的细胞。

HE染色操作流程

HE染色操作流程HE染色（Hematoxylin and Eosin Staining）是一种常用的组织学染色方法，用于观察和诊断组织学切片。

HE染色通过染色剂HE染料的组合，使细胞核染成紫色，胞质染成粉红色，从而揭示组织的结构与形态。

HE染色的操作流程一般包括标本处理、脱水、透明化、分解蜡和染色五个步骤。

下面将详细介绍每个步骤的具体操作。

1.标本处理：首先，将切割好的组织标本放入10%中性缓冲福尔马林进行固定，一般固定时间为24-48小时。

固定后，将组织标本转移到70%乙醇中进行离子交换，使组织中的水分逐渐去除。

2.脱水：将固定的组织标本依次转移到浓度逐渐提高的乙醇溶液中，如80%乙醇、95%乙醇和绝对乙醇，每个乙醇浓度保持15-30分钟。

这个过程称为脱水，目的是逐渐去除组织中的水分，使组织内的乙醇浓度逐渐升高。

3.透明化：将脱水后的组织标本依次转移到透明剂中，如苯并三氮唑、次氯酸、二氯甲烷等。

每种透明剂浓度和时间要根据实验需求进行调整，这个步骤的目标是使组织中的乙醇慢慢溶解，透明度增强。

4.分解蜡：将透明后的组织标本转移到蜡纸中，加热到60-65°C的融点，使固定的组织标本逐渐融化。

蜡纸是由石蜡和植物油混合而成，有助于固定和保护组织的形态。

5.染色：将脱蜡的组织标本依次转移到碱性染料（如血红素）溶液中，染10-15分钟，然后洗净；接着将组织标本转移到酸性染料（如紫杉醇）溶液中，染5-10分钟，然后洗净。

紫杉醇染料使细胞核染色成紫色，血红素染料使细胞胞质染色成粉红色。

最后用安全过滤垫将组织标本封装在玻片上，去除水分，然后用覆盖玻片进行固定。

HE染色操作常规流程

HE染色操作常规流程1.实验前准备：1.1收集待染色的样本（如组织切片、细胞涂片等），确保样本保存完整和无污染。

1.2准备好所需的染色试剂：包括有水洗试剂（如去离子水）、染色试剂（如伊红、伊红酒精和亚甲蓝）、染色剂工作液（如伊红酒精和亚甲蓝溶液）等。

2.试片处理：2.1将组织切片或细胞涂片分别放入热腺管或玻璃片上。

2.2连续经过苯酚甲酸苯酯脱脂、乙醇梯度洗脱等步骤，去除样本中的脂肪和碱性物质，以减少后续染色的干扰。

2.3用去离子水洗涤样本，使其充分湿润，除去残存的试剂。

3.染色操作：3.1把处理好的样本放入腺管或玻璃片，倒入伊红酒精溶液中，用大约15-30分钟染色，使细胞和组织成为红色。

3.2轻轻用清水漂洗试品，去掉多余染色液。

3.3加入亚甲蓝液，使样本转为蓝色，使细胞核染色成深蓝色，时间为1-2分钟。

3.4再次用清水将试品漂洗干净。

4.固定和封片：4.1用醋酸纤维素或氯仿等溶剂固定染色后的试片，使试样中的颜色得以固定。

4.2在试片上加一滴封片剂（如封片胶）。

4.3将盖玻片缓慢地放在试片上，使封片剂均匀地覆盖整个样本。

4.4将封片剂封住，使细胞和组织样本能够在显微镜下观察。

5.显微镜观察：5.1将染色好的试片放在显微镜下，调整镜头，适当调节光线强度和聚焦位置，以便观察样本的细节。

5.2观察细胞和组织的形态、染色强度和细胞核的染色情况，并进行必要的记录和照片拍摄。

以上就是HE染色操作的常规流程。

通过此流程，我们可以对细胞和组织样本进行染色，从而得到对染色体分辨和鉴定的结果。

这一技术使我们能够更好地了解细胞和组织样本中的结构和功能，对于生物学和遗传学的研究具有重要意义。

细胞爬片制作(Hela细胞为例)

细胞爬片SOP（以Hela为例）
1、在六孔板中加入细胞爬片，然后铺上5X105个细胞培养24h.
2、待细胞贴壁后，配制转染混合液，将2ugDNA加至250ul无血清DMEM中混匀，室温静置5min；加5ul soinfection 转染试剂加至250ul 无血清DMEM中混匀，室温静置5min；然后将两者混匀室温孵育30min.
3、将转染混合液缓慢而分滴加至6孔板中培养48-72h
4去细胞上清，用PBS清洗2次，新配80%冷丙酮固定液加入细胞中，室温作用10min，
5、PBS洗2遍，每次洗5min。

加入2%BSA（每孔500ul）封闭30min，再次PBS清洗两次
6、加入0.1% Triton-X100（每孔500ul）孵育10min,PBS清洗两次
7、加入稀释好的一抗（每孔50ul）至孔板中间部位，室温孵育1h。

8、PBS清洗3次，加入稀释好的二抗（每孔50ul）至孔板中间部位，室温孵育1h。

9、用PBS清洗三次后进行细胞核染色。

加1:200稀释好DAPI染色，室温作用30min。

10、用PBS清洗2次后，将爬片取出，用吸水纸吸干表面水并去除周边细胞，用记号笔圈出孵育抗体的细胞。

11、滴一滴封片剂在载玻片上，然后将细胞爬片倒放在载玻片上，用白色指甲油封片。

HE染色ppt课件

整理ppt
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几种常见的染色问题
脱蜡：
切片中白色的区域脱蜡不彻底，染色液由于石蜡斑点的残留而不能渗透着色。
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原因：①烤( 烘) 片温度
太低，脱蜡前没有充分烤 ( 烘) 干。 ②二甲苯脱蜡时间不足，或二甲苯使用过久，造成脱蜡不尽。
对策：①用无水乙醇去
掉玻璃片上的水分，重新
二甲苯脱去石蜡。 ②切
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原因：盖玻片上可能有封固切
片的封固剂。
对策：移去盖玻片，重新用干
净的盖玻片封片。
盖玻片上有封固剂所致切片组织模糊不清
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封片后镜下则会出现类似色素的点状结晶或类似“裸核”样的改变
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原因：切片封片前放置在
空气中时间太长，以至于二甲苯挥发切片干燥所致。
对策：移去组织切片上的
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（3）脱水。染色后通过各级酒精脱水，从低浓度到高浓度。低浓度酒精对伊红有分化作用，切片经过低浓度时要短，向高浓度逐渐延长脱水时间，脱水不彻底，使切片发雾，在显微镜下组织结构模糊不清。
（4）透明与封片。切片染色脱水后必须经二甲苯处理，使切片透明，才能用树胶封片。应引起注意的是，二甲苯纯度不纯使切片透明不够，会影响切片质量。
染色
细胞核
分化和蓝化
水解
渗透作用或者弥散作用完成负电荷色酸（染料有色部分）
染色
伊红
正电荷色酸
（染料无色部分）
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4
试剂
苏木素染液（细胞核着色）盐酸乙醇分化液稀氨水伊红染液二甲苯梯度浓度乙醇
整理ppt
5
染色步骤
3 × 5min
100% min

HE染色实验步骤

HE染色实验步骤HE染色是一种常用的细胞染色方法，用于染色细胞核和胞质。

以下是HE染色实验的详细步骤：1.组织样本的固定：将组织样本（如组织切片）固定在玻片上，以使其保持形态和结构。

常见的固定剂有甲醛、乙醇等。

将切片置于固定剂中浸泡一段时间，通常为24小时。

2.脱水：将固定的组织样本进行脱水处理，以去除其中的水分。

脱水过程常采用不同浓度的乙醇溶液，从低浓度到高浓度逐渐浸泡，通常为70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇和绝对乙醇。

每个乙醇浓度的浸泡时间可以根据需要调整，但通常为2-3分钟。

3.渗透：为了使切片更容易与染料接触并吸收，需要对其进行渗透处理。

常见的渗透剂是亚麻酸，通常在乙醇浓度为90%时进行处理。

将切片放入亚麻酸中浸泡2-3分钟。

4.包埋：将渗透处理后的组织切片逐步置于熔蜡中，使其被包裹在蜡中。

可用化学品如戊二醛蜡、乙蜡等作为包埋材料。

首先，将切片置于低熔点蜡中，如55-60℃的乙蜡，浸泡30分钟至1小时。

然后，将切片置于高熔点蜡中，如60-65℃的戊二醛蜡，浸泡1小时至数小时。

5.包块切割：将包埋的组织块放在切片机中，用刀片切成薄片。

通常切片厚度为4-5μm。

切好的切片将浮在热水中，并从切片机上取出。

6.切片贴片：使用刷子将切片轻轻移至玻片上。

刷子应先浸泡在水中，然后轻轻刷过切片以避免切片损坏。

7.焙烧：将装有切片的玻片放在干燥器中，或将其放在烘箱中进行干燥。

干燥温度和时间可根据需要进行调整，通常为60-70℃，2-3小时。

8. 染色：使用Harris液体染料进行染色。

HE染色中的染料包括酸性染料苏丹Ⅰ（hematoxylin）和碱性染料伊红（eosin），也称为碱性苏丹染料。

将组织样本浸入苏丹Ⅰ染料中，时间为2-5分钟。

然后将其转移到酸性水中漂洗30秒至1分钟，以去除多余的苏丹Ⅰ染料。

接下来，将样本浸入伊红染料中，时间为1-2分钟。

最后，将样本漂洗并在流水下冲洗。

9.脱色：如果染色后的切片颜色过浓，需要进行脱色处理。

实验室做细胞常用的细胞固定及染色方法(详细)

实验室做细胞常用的细胞固定与染色方法一、爬片前盖玻片处理方法对于悬浮培养的细胞，在进行各种染色前常需先制备成涂片。

为了保证细胞在长时间的染色过程中不从载玻片脱落，必须使其牢固贴附于载玻片上。

在载玻片上涂布一层有助于细胞黏附的物质是经常采用的方法之一。

能促进细胞黏附的物质主要有多聚赖氨酸、铬矾明胶等，这里介绍多聚赖氨酸的涂布方法。

1、将载玻片用玻璃专用洗涤剂(如Decon)浸泡5min，间或振荡。

2、用自来水冲洗5min。

3、以1％盐酸—70％乙醇溶液浸泡5min。

4、烤箱干燥(至此即可用于普通染色)。

5、多聚L-赖氨酸(1:10溶于去离子水)浸泡5min，振荡。

6、入60℃烤箱1 h，或室温过夜干燥(用于细胞化学、免疫细胞化学及原位杂交细胞化学)。

二、细胞固定常用方法固定细胞的目的在于把组织和细胞的原有结构尽可能完整地保存下来，避免组织和细胞发生降解、自溶、腐败和变形等，使细胞和组织内的各种酶失去活性，防止细胞和组织的各种分子变性、解离，使细胞的化学物质和酶能准确定位，并在以后的处理和制片过程中亦不发生改变和破坏。

同时，固定还可使细胞的各部分易于着色，适于观察、长期保存和分析。

1.固定组织、细胞的基本原则：尽可能选用新鲜培养物；根据检测工具、对象、目的和要求选择固定剂和固定方法。

2.培养物的准备和固定前处理：各种细胞培养物，如双盖片悬滴培养物、悬液培养物、单层培养物和盖片单层培养物都可作固定材料。

对双盖片悬滴培养物和悬液培养物来说，常通过离心收集细胞，PBS漂洗2～3次后，备固定制片；对盖片单层培养物来说，将盖片从培养器皿中取出后，PBS液漂洗2～3次，以洗去血清和附着于细胞表面的残渣，备固定用。

3.常用固定液：常用的固定液分两类，一类是以单一化学物质配成的固定液，称简单固定液。

主要有甲醇、乙醇、甲醛、醋酸、丙酮、戊二醛、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、氯化汞、氯化镉、四氧化锇(锇酸)。

另一类是用两种或两种以上化学物质配合成的固定液，称混合固定液。

细胞爬片制作（Hela细胞为例）

细胞爬片制作（Hela细胞为例）
细胞爬片SOP（以Hela为例）
1、在六孔板中加入细胞爬片，然后铺上5X105个细胞培养24h.
2、待细胞贴壁后，配制转染混合液，将2ugDNA加至250ul无血清DMEM中混匀，室温静置5min；加5ul soinfection 转染试剂加至250ul 无血清DMEM中混匀，室温静置5min；然后将两者混匀室温孵育30min.
3、将转染混合液缓慢而分滴加至6孔板中培养48-72h
4去细胞上清，用PBS清洗2次，新配80%冷丙酮固定液加入细胞中，室温作用10min，
5、PBS洗2遍，每次洗5min。

加入2%BSA（每孔500ul）封闭30min，再次PBS清洗两次
6、加入0.1% Triton-X100（每孔500ul）孵育10min,PBS清洗两次
7、加入稀释好的一抗（每孔50ul）至孔板中间部位，室温孵育1h。

8、PBS清洗3次，加入稀释好的二抗（每孔50ul）至孔板中间部位，室温孵育1h。

9、用PBS清洗三次后进行细胞核染色。

加1:200稀释好DAPI染色，室温作用30min。

10、用PBS清洗2次后，将爬片取出，用吸水纸吸干表面水并去除周边细胞，用记号笔圈出孵育抗体的细胞。

11、滴一滴封片剂在载玻片上，然后将细胞爬片倒放在载玻片上，用白色指甲油封片。

he染色方法及步骤

he染色方法及步骤HE 染色啊，这可是病理实验里常用的染色方法呢！它就像是给细胞和组织化了个美美的妆，让我们能更清楚地看清它们的模样。

首先呢，得准备好切片。

这切片就像是一张等待上色的画布。

然后把切片放进二甲苯里，让它好好泡个澡，把上面的脏东西都洗掉。

接下来就是染色的关键时刻啦！把切片放进苏木精溶液里，这苏木精就像是神奇的魔法药水，能把细胞核染得蓝蓝的，就像给细胞核戴上了一顶蓝色的小帽子。

染完之后，再用水冲洗一下，把多余的苏木精冲掉。

然后呢，把切片放进盐酸酒精里分化一下，让细胞核的颜色更加清晰、分明。

再用水冲洗干净。

这时候，该伊红上场啦！伊红就像是给细胞穿上了一件红色的外衣，让细胞质变得红红的。

把切片放进伊红溶液里泡一泡，然后再冲洗干净。

经过这么一番折腾，切片就像是化好了妆的美人，变得格外动人啦！你想想啊，这就好像是给细胞举办了一场盛大的化妆舞会。

细胞核穿着蓝色的礼服，细胞质穿着红色的裙子，在显微镜下翩翩起舞。

染完色后，还要把切片进行脱水、透明。

就像是给化好妆的美人再喷上一层定妆喷雾，让妆容更加持久。

最后呢，用中性树胶封片，把这美丽的画面永远地保存下来。

HE 染色方法虽然看起来步骤挺多，但只要我们认真细心地去做，就一定能染出漂亮的切片。

这就像是我们做一件事情，只要有耐心，肯下功夫，就一定能做好。

而且啊，HE 染色对于病理诊断来说可是非常重要的呢！医生们通过观察染色后的切片，就能判断出细胞有没有病变，病情严不严重。

所以说呀，HE 染色可真是个神奇的技术呢！它让我们能更深入地了解细胞的世界，为医学研究和临床诊断提供了重要的帮助。

你说，这是不是很厉害呢？。

肿瘤细胞爬片HE染色方法

抗肿瘤药物对肿瘤细胞抑制及细胞形态观察实验导读细胞是生物体形态结构、生理功能和发育分化等生命现象的基本单位。

人体细胞种类繁多，大小不一，形态多样，结构和功能都不同。

每个细胞都由细胞膜、细胞质和细胞核三部分组成。

各种细胞具有一定的形态结构特点，合成与功能相关的特殊蛋白质，表达某种代谢特点和功能活动，即为细胞的表型。

为观察不同细胞或细胞在不同环境下的状态，染色是最常用、且最直观的方法。

染色是组织或细胞的某些成分与染料的化学结合或物理吸附作用而显色的过程。

染料是一种有机化合物，它们含有不饱和的基团，例如亚硝基（－N=O）、偶氮基（－N=N－）等称为发色团。

各种染料由于它们的发色团不同，显示的颜色就不同。

此外，染料还含有一些碱性基团如氨基（－NH2）或酸性基团如羧基（－COOH）或磺基（－SO3H），称为助色团。

含有氨基的染料是碱性染料，它在溶液内带阳电荷，为阳离子染料，它和组织内的酸性物质有亲和力。

含有羧基和磺基的染料是酸性染料，它在溶液内带阴电荷，为阴离子染料，它与组织内的碱性物质有亲和力。

5-氟尿嘧啶作为嘧啶类似物,用于固体瘤的治疗已经有近50年的历史。

目前作为首选抗代谢药用于临床治疗胃癌、乳腺癌等多种癌症。

5-氟尿嘧啶在细胞内先转变为5-氟-2-脱氧尿嘧啶核苷酸，后者抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶，阻断脱氧尿嘧啶核苷酸转变为脱氧胸腺嘧啶核苷酸，从而抑制DNA的生物合成。

此外，通过阻止尿嘧啶和乳清酸掺入RNA，达到抑制RNA 合成的作用。

为细胞周期特异性药，主要抑制S期细胞。

各种组织或细胞的基本组成成分都是蛋白质、糖蛋白、或脂蛋白，蛋白质分子中既含有碱性的氨基，有含有酸型的羧基，它是两性电解质。

氨基和羧基在溶液内均可电离，如羧基的电离大于氨基时则蛋白质带阴电荷，此时它和阳离子的碱性染料亲和力大；如氨基的电离大于羧基时则蛋白质带阳电荷，此时它和阴离子的酸性染料亲和力大。

在一定的pH值时，某种蛋白质带有阴电荷和阳电荷的数目相等，此pH为该种蛋白质的等电点，此时蛋白质为不带电荷的两性物质，着色不佳。

免疫组化 HE染色 FISH ISH

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HE染色
苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ，HE)是石蜡切片技术里常用的染色法之一。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。 HE染色的原理：脱氧核糖核酸（DNA）两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。伊红是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染成红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。
• 3、5-10% 正常山羊血清封闭，室温孵育10-30min。倾去血清，勿洗。 • 4、滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃孵育1-2小时或4℃
过夜。 • 5、PBS冲洗，5min×3次。 • 6、滴加适当比例稀释的生物素标记二抗，37℃孵育10-30min；或滴
加第二代生物素标记二抗工作液，37℃或室温孵育10-20min。 • 7、PBS冲洗，5min×3次。 • 8、滴加SABC-FITC,37℃孵育10-30min，PBS冲洗5min×3次。 • 9、抗荧光萃灭封片液封片，荧光显微镜观察。
4、组织的固定：4%多聚甲醛固定一般1-2小时。固定后经充分的流水冲洗后进行脱水包埋。
5、组织脱水：主要用不同梯度的酒精进行脱水。一般情况下，组织经过 70％，80％，90％，95％，以至无水酒精的脱水程序，即可达到脱水的要求。但是为了能使大量的组织块同时进行脱水，则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％酒精，两次100％酒精重复进行脱水，以保证组织的水分脱净。
免疫组化切片组织前期处理
1、组织块大小应限于2cm×1.5cm×0.2cm 。 2、应用于光镜的免疫组织化学染色的切片厚度一般要求5μm左右，神经

HE染色的步骤及方法

HE染色的步骤及方法HE染色（hematoxylin and eosin staining）是一种广泛应用于组织学研究与临床病理学中的常规染色方法，用于显示组织和细胞的形态结构、特征和组织的组织学构造。

HE染色的主要步骤包括固定、脱水、透明、浸染、洗涤、脱色、洗涤、著色、酸洗、洗涤和封片等。

下面将详细介绍每个步骤的具体方法。

1.固定：将待染的组织标本放入含有4%至10%的缓冲醛（如10%的中性缓冲醛）中固定。

固定的时间一般为24至48小时，具体时间根据组织的大小和种类而定。

2.脱水：在固定后，将组织标本转移到带有不同浓度的乙醇溶液中进行脱水。

脱水的目的是逐渐将水分从组织中溶解掉，以便更好地进行后续处理。

常用的乙醇浓度为70%、80%、95%、绝对乙醇和绝对乙醇。

3.透明：将脱水的组织标本转移到透明剂中，如苯酚、甘油等。

透明的目的是去除残留的乙醇，并将标本与石蜡相容，以便进行后续处理。

4.浸染：将透明的组织标本转移到硬化的石蜡中，通过加热使其温度达到融点，使组织与石蜡充分浸透。

通常情况下，标本需要浸染多次以确保充分浸透。

5.洗涤：将浸染好的组织放入清洁的容器中，用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除未浸透的石蜡。

6. 脱色：将洗净的组织标本放入xylene或但醇溶液中进行脱色，以去除标本中的石蜡。

脱色时间视标本的大小和种类而定，通常为30分钟至1小时。

7.再洗：将脱色的组织标本用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除残留的脱色剂。

8. 著色：将洗净的组织标本置于染色剂中进行著色。

HE染色中，常用的染色剂为血红和嗜酸性染料安伊汀（Eosin）。

组织标本一般需在血红染色剂中浸泡2至5分钟，然后脱水，再在安伊汀染色剂中浸泡2至5分钟。

也可根据需要调整具体的染色时间。

9.酸洗：将著色好的组织标本用弱酸性缓冲液进行酸洗，以去除过量的染色剂。

酸洗时间一般为几秒钟至几分钟。

10.再次洗涤：将经酸洗的组织标本用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除残留的酸洗液。