PCR反应及琼脂糖电泳实验报告
pcr技术实验报告
pcr技术实验报告PCR技术实验报告引言PCR（聚合酶链式反应）是一种重要的分子生物学技术，它能够在短时间内扩增DNA片段，从而使得微量的DNA得以扩增至足够多的量进行进一步的分析和研究。
本实验旨在通过PCR技术扩增目标DNA片段，验证其在实验条件下的可行性和准确性。
实验方法1. 样品准备：从细胞或组织中提取DNA，并进行纯化处理。
2. PCR反应体系的准备：按照所需的PCR反应体系配制反应液。
3. PCR扩增：将DNA模板加入PCR反应管中，进行PCR扩增反应。
4. 扩增产物分析：将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。
实验结果通过PCR技术扩增，成功获得了目标DNA片段，并在琼脂糖凝胶电泳中观察到了明显的扩增产物条带。
实验结果表明PCR技术在实验条件下具有较高的可行性和准确性，能够快速、高效地扩增目标DNA片段。
讨论本实验结果验证了PCR技术在实验条件下的可行性和准确性，为进一步的分子生物学研究提供了可靠的技术支持。
同时，本实验还表明PCR技术在分子诊断、基因克隆等领域具有重要的应用前景。
结论通过PCR技术实验，成功扩增了目标DNA片段，并验证了其在实验条件下的可行性和准确性。
PCR技术的高效、快速特点使其在分子生物学研究和临床诊断中具有广阔的应用前景。
总结PCR技术作为一种重要的分子生物学技术，已经成为现代生命科学研究中不可或缺的工具。
本实验结果验证了PCR技术在实验条件下的可行性和准确性，为进一步的研究和应用提供了可靠的技术支持。
PCR技术的不断发展和完善，将为生命科学领域的研究和临床诊断带来更多的可能性和机遇。
pcr扩增的实验报告
pcr扩增的实验报告PCR扩增实验报告在生物学研究中，PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学技术，它能够在体外快速、高效地扩增DNA片段。
本实验旨在利用PCR技术扩增目标DNA片段，并对扩增产物进行分析。
实验方法：1. 提取DNA样本：首先，我们从细胞或组织中提取目标DNA样本，这可以通过常规的DNA提取试剂盒来完成。
2. PCR反应体系：将提取的DNA样本与引物、dNTPs、Taq DNA聚合酶和PCR 缓冲液混合，构建PCR反应体系。
3. PCR扩增：将PCR反应体系置于热循环仪中，进行一系列的温度变化循环，包括变性、退火和延伸步骤，以使DNA片段得以扩增。
4. 分析PCR产物：利用琼脂糖凝胶电泳或其他分析方法，对PCR扩增产物进行分析，确认目标DNA片段是否被成功扩增。
实验结果：经过PCR扩增反应后，我们成功获得了目标DNA片段的扩增产物。
通过琼脂糖凝胶电泳分析，我们确认了目标DNA片段的扩增产物大小和纯度，并且与预期的DNA序列相符合。
实验讨论：PCR扩增技术具有高度的特异性和灵敏度，能够在较短的时间内扩增目标DNA 片段，并且不受DNA起始量的限制。
因此，PCR扩增技术在分子生物学研究中具有广泛的应用价值，包括基因克隆、DNA测序、基因突变分析等领域。
结论：本实验成功利用PCR技术扩增了目标DNA片段，并对扩增产物进行了分析。
PCR扩增技术的成功应用为我们提供了一种快速、高效的DNA扩增方法，为后续的分子生物学研究奠定了基础。
通过本次实验，我们深刻认识到PCR扩增技术在生物学研究中的重要性，相信在今后的科学研究中，PCR技术将继续发挥重要作用，为生命科学领域的发展做出更大的贡献。
实验2-PCR与琼脂糖凝胶电泳-New
1）吸取18µl水稻总DNA+3µl loading buffer, 混匀
Mark DNA: 5µl λDNA-HindⅢ
2） PCR产物+3µl loading buffer，混匀
Mark DNA : 5µl 100bp DNA 5、电泳：打开电源开关，调节电压至3-5 V/cm（约 100V），注意电极方向（可见到溴酚蓝条带 从负极向正极移动）；约30min后可观察 。
10× PCR buffer：
500mM KCl 200mM Tris-HCl（pH8.3）
0.01% 明胶 （ gelatin ）
15-20mM MgCl2
1×TBE缓冲液（1000ml）：电场中的导体 Tris 硼酸 EDTA 10.8 g 5.5 g 0.93 g
载样缓冲液（6×）：含指示剂溴芬蓝和二甲苯青，可在 可见光下指示样品的泳动过程 溴芬蓝 二甲苯青 甘油 0.25 % 0.25 % 30 %
0.2 µ l 引物R（10 µ M） :22179R
0.2 µ l Taq酶（5U/ µ l） 15.2 µ l ddH2O Total 18.0 µ l 模板DNA， 混匀，放入PCR仪中开始反应
最后加 2 µ l
PCR技术
PCR反应混合液（总体积20 µl）
成 份 ddH2O 1 15.2 n n × 15.2 10 152 25 380
72 ℃，延伸5 min PCR反应在带热盖的PCR仪上进行，大约
需要2小时。
电泳技术
3、制胶（浓度为2%）：
1）称取2.0g 琼脂糖，加入盛有200ml 1×TBE电泳缓冲 液的500ml蓝盖瓶中，摇匀，在微波炉上加热至琼脂 糖完全溶解，冷却到60 ℃，加入10µl Goldview并摇 匀。
pcr及琼脂糖凝胶电泳结果
pcr及琼脂糖凝胶电泳结果下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by the editor. I hope that after you download them, they can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types of practical materials, suchas educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts, other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention!标题：PCR及琼脂糖凝胶电泳结果解读与分析导言PCR（聚合酶链式反应）和琼脂糖凝胶电泳是生物学领域中常用的两种技术手段，它们在基因分析、DNA扩增和分子生物学研究中发挥着重要作用。
11-琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物
【目的】 目的】
掌握DNA琼脂糖凝胶电泳检测的原理，熟悉其 琼脂糖凝胶电泳检测的原理， 掌握 琼脂糖凝胶电泳检测的原理 方法 。
【原理】 原理】
琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作 用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束， 用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型 凝胶。 凝胶。
Excitation
SG 5’ 3’ SG
SG SG
SG SG
SG 3’ 5’
Emission
Green结合的数量与DNA含量成正比 结合的数量与DNA SYBR Green结合的数量与DNA含量成正比
——定量 定量
PCR产物混合荧光染料（ PCR产物混合荧光染料（SYBR Green 产物混合荧光染料 I)以及指示剂 溴酚蓝） 以及指示剂（ I)以及指示剂（溴酚蓝）后，以琼脂糖 凝胶为支持介质，在电泳冲液中电泳， 凝胶为支持介质，在电泳冲液中电泳， 根据DNA片段的大小、 DNA片段的大小 根据DNA片段的大小、构型分离成不同区 在紫外光下观察。 带，在紫外光下观察。
1
1
轻轻混匀。 轻轻混匀。
制样
制胶 倒上缓冲 液，使其 没过点样 孔。 点样
样品（10μL） 样品（10μ
小心！！！ 小心！！！ 点样孔不要 戳破
3
制样
制胶
点样 80－100V， 40min, 负极向正极。 － 负极向正极。 ， 结束后，取出琼脂糖凝胶， 结束后，取出琼脂糖凝胶，置于 紫外观察箱中观察 中观察。 紫外观察箱中观察。
【试剂与器材】 试剂与器材】
• • • • • • 1.PCR产物、荧光染料（ 1.PCR产物、荧光染料（SYBR Green) PCR产物 2.样品缓冲液 含溴酚蓝） 样品缓冲液（ 2.样品缓冲液（含溴酚蓝） 2.微量加样器 2.微量加样器 3.电泳仪 电泳仪、 3.电泳仪、电泳槽 4.琼脂糖 4.琼脂糖 5.TBE电泳缓冲液 pH8.0） 电泳缓冲液（ 5.TBE电泳缓冲液（pH8.0）
PCR反应及琼脂糖电泳实验报告
多聚酶链式反应（PCR）扩增DNA片段及琼脂糖凝胶电泳产物检测一、实验目的：1、了解PCR技术的基本操作2、理解PCR的原理3、讨论PCR的应用二、实验原理：PCR是一种在体外模拟细胞内环境进行迅速扩增DNA片段的技术，这一技术需要模板、四种脱氧核苷酸等组分条件外，还需要不同温度环境以进行DNA的解旋和聚1、PCR反应组分细胞内DNA复制条件分析：此外，试验中用到的还有Mgcl2，Mg2+能激活酶的活性；10* Buffer 缓冲液，为Taq 酶提供合适的PH条件。
2、PCR反应条件PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合，现在使用的PCR 仪实质上也是一台能够自动调控温度的仪器。
PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分为三个基本步骤──变性、复性和延伸。
(!)变性（模板DNA解旋）模板DNA经加热至90℃以上。
一定时间后，使模板DNA双链解离，使成为单链，以便于它与引物结合，为下轮反应作准备。
(2)复性（退火）模板DNA经加热变性成单链后，温度降到50℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。
(3)延伸DNA模板－引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下以脱氧核苷酸为原料，以母链为模板，按碱基互补配对的原则与半保留复制的原理，合成一条新的DNA链。
3、PCR产物的检测(1)紫外分光光度计DNA在260nm的紫外波段有一强烈的吸收峰，可以通过与蒸馏水的对比进而计算扩增出DNA的含量。
(2)琼脂糖凝胶电泳DNA在电厂作用下，可以由电源的负极向正极泳动，泳动的速度与DNA片段的长度成负相关，与电压强度成正比，因此可以分离不同长度的DNA。
在有DNA marker（不同已知碱基对大小的DNA片段的混合物）的条件下，由于不同碱基大小的DNA片段在琼脂糖凝胶上涌动的速度不同，因此电泳完毕后会出现在胶块的不同位置。
通过将扩增出的DNA片段与已知的条带做比较，可以大概推测出该片段的碱基对的大小。
pcr扩增实验报告
pcr扩增实验报告篇一：DNA提取及PCR扩增实验报告PCR扩增及DNA琼脂糖凝胶电泳刘琳1131428 环境科学一、实验目的1．学习并掌握PCR扩增的基本原理与实验技术。
2．对扩增后的DNA进行琼脂糖凝胶电泳试验，并分析相应结果。
二、实验原理1. PCR扩增多聚酶链反应（PCR）技术的原理类似于DNA的天然复制过程。
在微量离心管中加入适量缓冲液，加入微量模板DNA、四种脱氧核苷酸（dNTP）、耐热Taq聚合酶及两个合成DNA的引物，而后加热使模板DNA在高温下（94℃）变性，双链解链，这是所谓变性阶段。
降低溶液温度，使合成引物在低温（55℃）与模板DNA互补退火形成部分双链，这是所谓退火阶段。
溶液反应温度升至中温（72℃），在Tap酶作用下，用四种dNTP 为原料，引物为复制起点，模板DNA的一条双链在解链和退火之后延伸为两条双链，这是延伸阶段。
如此反复，在同一反应体系中可重复高温变性、低温退火和DNA合成这一循环，使产物DNA 重复合成，并在重复过程中，前一循环的产物DNA可作为后一循环的模板DNA而参与DNA的合成，使产物DNA 的量按指数方式扩增。
经过30～40个循环，DNA扩增即可完成。
2. DNA琼脂糖凝胶电泳实验DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。
DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型的DNA分子的迁移速度不同。
该电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。
三、实验材料仪器：PCR扩增仪、薄壁管、离心管、移液枪、枪头、微波炉、电泳仪、水平电泳槽、制胶版、紫外透射仪。
试剂：TapDNA聚合酶、dNTP、buffer、两种引物、16S全长DNA样本、无菌ddH2O、模板DNA 、TBE、琼脂糖、EB、显色剂。
PCR反应及琼脂糖电泳实验报告
PCR反应及琼脂糖电泳实验报告摘要：本实验通过PCR反应和琼脂糖电泳的方法，对DNA分子进行扩增和分析。
通过设置不同的PCR反应条件，并检测扩增产物的大小，从而探究PCR反应的最佳条件。
同时利用琼脂糖电泳对PCR产物的大小和纯度进行分析，评估PCR反应的结果。
实验结果表明，PCR反应的最佳温度为60℃，最佳循环次数为30次。
琼脂糖电泳结果显示，PCR反应产物与目标DNA条带大小基本一致，且纯度较高。
关键词：PCR反应；琼脂糖电泳；扩增产物；循环次数；温度；目标DNA条带引言：PCR（Polymerase Chain Reaction）反应是一种快速扩增特定DNA序列的技术，具有高灵敏度和高特异性。
琼脂糖电泳则是一种常用的DNA分析方法，用于检测PCR扩增产物的大小和纯度。
本实验旨在通过PCR反应和琼脂糖电泳的方法，对DNA分子进行扩增和分析，探究PCR反应的最佳条件，并评估PCR反应结果的准确性。
材料与方法：1.材料实验所需的材料包括：PCR试剂盒、DNA模板、引物、琼脂糖、琼脂糖电泳缓冲液等。
2.方法2.1PCR反应首先，在PCR试剂盒中配置PCR反应混合液，包括DNA模板、引物、Taq聚合酶和其他试剂。
将混合液分装至PCR反应管中，并设置不同的PCR反应条件，如温度和循环次数等。
放入PCR仪中进行反应。
2.2DNA分析将PCR反应产物混合后，加入琼脂糖电泳缓冲液，将混合液加入琼脂糖电泳槽中。
开启电泳仪进行电泳，待电泳结束后，观察琼脂糖胶中的DNA条带，判断PCR反应产物的大小和纯度。
结果：3.1PCR反应条件优化本实验设置不同的PCR反应温度和循环次数，通过琼脂糖电泳分析PCR产物的大小，选取最佳PCR反应条件。
结果显示，在60℃的温度下，PCR反应产物的大小最合适，与目标DNA条带大小基本一致。
循环次数方面，30次循环给出了较好的PCR反应结果，产物表现出较高的纯度。
3.2琼脂糖电泳分析通过琼脂糖电泳分析PCR反应产物的大小和纯度。
pcr反应实验报告
pcr反应实验报告篇一：聚合酶链式反应PCR实验报告实验二聚合酶链式反应（PCR）一、实验原理聚合酶链式反应（PCR）是利用DNA片段旁侧两个短的单链引物，在体外快速扩增特异DNA片段的技术。
它应用热稳定的聚合酶，通过双链DNA模板的热变性、引物退火和引物延伸的重复循环，DNA片段以指数方式增加了百万倍。
从非常微量的DNA甚至单个细胞所含有的DNA起始，可产生ug量的PCR产物。
二、器材与试剂1.器材：移液器，EP管，热盖PCR仪，电泳仪，量筒，锥形瓶，微波炉，电子天平，紫外照色仪2.试剂：引物，模板，T aq DNA聚合酶，原料（dNTPs），缓冲液与Mg2+，H2O, 2*PCRmix溶液，DNA染料三、实验步骤PCR反应体系的建立取离心管，依次加入试剂混匀1．H2O 12μl2．模板1μl3．引物T7 1μl4．引物sp61μl5．2*PCRmix15μlPCR仪的热循环反应把离心管放入PCR仪中，由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成1. 模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA 解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；2. 模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至56℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；3. 引物的延伸：经加热至72℃左右DNA模板--引物结合物在T aqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。
重复该循环30次，每次需要2-3分钟。
电泳检测结果扩增产物在琼脂糖凝胶电泳中，电泳结束后，放到紫外照射仪中进行透射，电泳明胶显示清晰的条带，如下图所示加入的为1号样，出现在500bp左右条带，而预算结果为扩增出492bp条带，故实验成功。
四、讨论1. Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。
pcr扩增实验报告
pcr扩增实验报告篇一：DNA提取及PCR扩增实验报告PCR扩增及DNA琼脂糖凝胶电泳刘琳1131428 环境科学一、实验目的1．学习并掌握PCR扩增的基本原理与实验技术。
2．对扩增后的DNA进行琼脂糖凝胶电泳试验，并分析相应结果。
二、实验原理1. PCR扩增多聚酶链反应（PCR）技术的原理类似于DNA的天然复制过程。
在微量离心管中加入适量缓冲液，加入微量模板DNA、四种脱氧核苷酸（dNTP）、耐热Taq聚合酶及两个合成DNA的引物，而后加热使模板DNA在高温下（94℃）变性，双链解链，这是所谓变性阶段。
降低溶液温度，使合成引物在低温（55℃）与模板DNA互补退火形成部分双链，这是所谓退火阶段。
溶液反应温度升至中温（72℃），在Tap酶作用下，用四种dNTP 为原料，引物为复制起点，模板DNA的一条双链在解链和退火之后延伸为两条双链，这是延伸阶段。
如此反复，在同一反应体系中可重复高温变性、低温退火和DNA合成这一循环，使产物DNA 重复合成，并在重复过程中，前一循环的产物DNA可作为后一循环的模板DNA而参与DNA的合成，使产物DNA 的量按指数方式扩增。
经过30～40个循环，DNA扩增即可完成。
2. DNA琼脂糖凝胶电泳实验DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。
DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型的DNA分子的迁移速度不同。
该电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。
三、实验材料仪器：PCR扩增仪、薄壁管、离心管、移液枪、枪头、微波炉、电泳仪、水平电泳槽、制胶版、紫外透射仪。
试剂：TapDNA聚合酶、dNTP、buffer、两种引物、16S全长DNA样本、无菌ddH2O、模板DNA 、TBE、琼脂糖、EB、显色剂。
琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果1
溴化乙锭在紫外光照射下能发射荧光，当DNA 样品在琼脂糖
凝胶中从负极向正极泳动时，溴化乙锭从正极向负极移动， 这样溴化乙锭分子就会嵌入DNA分子中形成络合物，使DNA在
紫外光下发射很强的荧光。在溴化乙锭足够的情况下，荧光
的强度正比于DNA的含量，这样就可以检测DNA的浓度
（一） 仪器
1. 2. 3. 4.
水平式凝胶电泳槽 稳压电泳仪 电炉 紫外检测仪
5. 台式离心机
（二）试
剂
1. 琼脂糖
2. TAE电泳缓冲液(50×) Tris 242g
冰醋酸
0.5mol/L EDTA（pH8.0）
57.1ml
100ml
3. 溴化乙锭溶液 纸包装保存。
10mg/ml水溶液，室温，棕色瓶或铝铂
琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果
实 验 目 的
了解琼脂糖凝胶电泳的原理，掌握琼脂 糖凝胶的制作及进行电泳的方法。
实 验 原 理
琼脂糖凝胶电泳是基因工程操作中常规的实验方法，也是分
离和纯化DNA的常用方法，它能检测少量的DNA（如用肉眼观 察，可检测到10 ng的DNA）且检测的范围很广。它的原理是
4. 10×DNA样品上样缓冲液
实 验 步 骤
1. 洗净电泳槽、制胶槽、梳子，晾干。
2. 插好梳子。 3. 根据实验所需称取一定量的琼脂糖，放入制胶的容器中（一
般用三角瓶），然后加入适量的电泳缓冲液（1 × TAE）。
4. 加热，使琼脂糖完全溶解。 5. 溶液冷至约60℃时，用少量的琼脂糖溶液封好挡板底部及两
端。
6. 在剩余的溶液中加入溴化乙锭至终浓度为0.5 μ g/ml，轻轻 摇匀（避免剧烈摇晃产生气泡），倒入制胶槽上，迅速在制胶 槽一端插上梳子，检查有无气泡。
PCR实验报告范文
PCR实验报告范文一、实验目的通过PCR技术，掌握PCR实验的基本原理和操作方法，同时将酵母菌基因进行扩增，验证PCR的效果。
二、实验原理PCR (Polymerase Chain Reaction) 是一种体外人工合成DNA的技术，能在数小时内大量扩增特定DNA片段。
基本原理是不断进行DNA的模板复制，其中关键剂量是DNA模板、引物、酶和核苷酸。
实验步骤：1.DNA模板制备：从酵母菌提取DNA，测定其浓度及质量。
2.引物设计及合成：根据目标基因的核酸序列，设计合成引物。
3.PCR反应体系配制：根据实验室配套试剂盒说明书配制PCR反应液。
4.PCR反应条件设置：根据实验室配套试剂盒说明书设置PCR反应条件和温度梯度。
5.PCR扩增：将PCR反应体系放入热循环仪进行扩增。
6.PCR产物电泳：将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。
7.验证PCR效果：观察电泳结果，并进行PCR产物的测序验证。
三、实验步骤与操作方法1.DNA模板制备-取适量的酵母菌培养物，使用琼脂糖溶解酵母菌细胞壁。
-使用酸酶处理，释放DNA。
-使用PCR纯化试剂盒进行提取和纯化。
-使用试剂盒中提供的试剂测定DNA的浓度和质量。
2.引物设计及合成-根据目标基因的核酸序列，采用合成引物。
-PCR引物的设计需要根据目标基因的序列进行选择，并考虑引物的长度和互补性。
3.PCR反应体系配制-根据实验室配套试剂盒说明书配制PCR反应体系。
-将DNA模板、引物、酶和核苷酸按比例混合，加入PCR反应液中。
4.PCR反应条件设置-根据实验室配套试剂盒说明书设置PCR反应条件和温度梯度。
-设置PCR反应的时间和温度。
5.PCR扩增-将PCR反应体系放入热循环仪进行扩增。
-根据设定的PCR反应条件，进行PCR扩增，反复循环扩增。
6.PCR产物电泳-取适量PCR反应产物，加载到琼脂糖凝胶上。
-运行琼脂糖凝胶电泳，观察DNA片段的扩增情况。
7.验证PCR效果-观察电泳结果，发现扩增出的DNA片段是否与预期长度相符。
PCR产物的琼脂糖凝胶电泳分析
PCR产物的琼脂糖凝胶电泳分析【实验目的】1.学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术；2.掌握群体遗传学基因频率与基因型频率的计算方法。
【实验原理】1. 凝胶电泳是分离、鉴定、纯化及制备DNA片段最常用的方法，可分为两类，一类是琼脂糖凝胶电泳，适用于l kb和大于l kb以上DNA；另一类是聚丙烯酰胺凝胶电泳，适用于小于l kb的DNA。
琼脂糖凝胶电泳是一种简便易行的分离、纯化和鉴定DNA片段的方法。
分为水平板和垂直板两种，一般采用水平电泳。
2. 琼脂糖凝胶在DNA分子泳动时兼有“分子筛”和“电荷”的双重作用。
3. DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。
4. 由于琼脂糖凝胶具有网络结构，因此电泳时，带电颗粒的分离速度不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小。
5. 由于实验中相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此他们能以同样的速度向正极移动。
6. 相对分子质量小者泳动快，大的泳动慢。
7. 溴化乙锭是分子生物学实验中常用的DNA荧光染料，含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团，它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。
DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料，被吸收的能量在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。
溴化乙锭-DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍。
所以当凝胶中含有游离的溴化乙锭（0.5μg/mL）时，可以检测到少至10ng的DNA条带8. TBE（成分：Tris，EDTA，硼酸，蒸馏水）的作用：a.稳定体系酸碱度（正负极氧化还原反应，使正极变酸、负极变碱性）b. 使溶液具有导电性，以利于DNA分子的迁移c. 其中的EDTA螯合镁离子，防止电泳时激活DNA酶9.引物二聚体: 引物二聚体是引物的3’端间相互错配扩增形成的。
引物二聚体的出现是必然的，只是或多或少的问题，电泳时看不到引物二聚体带也不代表没有二聚体出现，只是含量低我们的肉眼看不到而已。
琼脂糖凝胶电泳进行PCR结果分析
琼脂糖凝胶电泳进行PCR结果分析琼脂糖凝胶电泳是一种常用的PCR结果分析方法，它可以用来检测PCR扩增产物的大小和纯度。
在分子生物学研究中，琼脂糖凝胶电泳是非常重要的一步，因为它可以帮助研究人员确定PCR反应的成功与否，并分析PCR产物的质量。
首先，琼脂糖凝胶电泳电泳是一种以琼脂糖为基质的凝胶，通过电场作用将DNA分子在凝胶中进行分离的方法。
琼脂糖凝胶由琼脂糖和缓冲剂混合而成，再通过加热、冷却形成凝胶。
凝胶中的琼脂糖会形成一种网状结构，用来限制DNA分子的流动，使得不同大小的DNA分子能够分离开来。
在进行PCR结果分析时，首先需要将PCR反应产物与DNA标记物混合在一起。
DNA标记物通常是一种特定长度的DNA分子，可以用来作为参照物来确定PCR扩增产物的大小。
常用的DNA标记物有DNA ladder，它是一种包含了多个不同长度DNA片段的混合物。
在琼脂糖凝胶电泳中，DNA标记物会在电场作用下在琼脂糖凝胶中移动，并形成一个长度标记的图案。
将PCR反应产物和DNA标记物加载到琼脂糖凝胶槽中后，接通电源进行电泳。
电泳时间和电压需要根据实验需要进行调节，一般来说，电泳运行时间为30分钟至2小时，电压为50-150V。
在电泳结束后，需要对凝胶进行染色，以可视化DNA分子的位置。
常见的染色剂有乙溴化锂（EB）和SYBR Green。
这些染色剂可以与DNA分子结合并发出荧光，使得DNA分子能够被观察到。
染色后，凝胶通常在紫外光下进行观察和记录。
根据琼脂糖凝胶电泳的结果，可以进行PCR产物的大小和纯度分析。
通过与DNA标记物的比较，可以确定PCR扩增产物的大小范围。
如果PCR扩增产物的大小与预期一致，则说明PCR反应成功。
另外，通过观察PCR 产物带的强度，可以初步判断PCR产物的丰度和纯度。
高强度的PCR产物带通常表示PCR扩增产物的丰度高，纯度好，反之则表示存在杂交DNA或PCR扩增产物不纯的情况。
总之，琼脂糖凝胶电泳是一种常用的PCR结果分析方法，在分子生物学研究中具有重要的应用价值。
RT-PCR及琼脂糖凝胶电泳原理与结果
RT-PCR反应程序
(1) 42℃30min， (2) 94℃3min， (3) 94℃变性3min，
(4) 94℃变性30sec，
(5) 52 ℃退火30sec， (6) 72 ℃延伸1min。 (7) goto(4)repeat29, （8）72 ℃延伸10min。
（9）hold at 4℃ 。
cDNA PCR扩增
1
1 1 12 25
DEPC-H2O
Total
3.6
20
cDNA第一链合成反应
实验目的
了解RT-PCR的基本原理。 熟悉RT-PCR的常规步骤。 掌握琼脂糖凝胶电泳技术。
实验要求
掌握PCR技术。 学会操作PCR仪。 熟悉琼脂糖凝胶电泳技术。
实验原理
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是80年 代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、 产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点； 能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于 数小时内扩增至十万乃至百万倍，使肉眼能直接观察和判 断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量 的DNA供分析研究和检测鉴定。过去几天几星期才能做到 的事情，用PCR几小时便可完成。PCR技术是生物医学领域 中的一项革命性创举和里程碑。
实验原理
PCR是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的方法，其特异 性是由两个人工合成的引物序列决定的。在DNA聚合酶催 化的一系列合成反应中，用两段寡核苷酸作为反应的引物。 一般情况下，这两段寡核苷酸引物的序列互不相同，并分 别与模板DNA两条链上的各一段序列互补；而这两段模板 序列又分别位于待扩增DNA区段的两侧。反应时，首先是 在摩尔数过量的两段寡核苷酸及4种dNTP存在下，将模板 进行加热变性。随之将反应混合物冷却至某一温度，使引 物与它的靶序列进行配对，称为退火。然后，退火引物可 在DNA聚合酶作用下进行延伸。上述过程是由温度控制的。 这种热变性-复性-延伸的过程就是一个PCR循环。
PCR 和凝胶电泳
实验一、实验二基因的PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳检测1、实验目的本实验通过学习用PCR扩增技术来获取特异性的基因DNA，以及扩增DNA的琼脂糖凝胶电泳检测技术，掌握有关的技术原理和实验方法。
2、实验原理2.1 特异性基因的PCR扩增：PCR扩增是指直接以待扩增的DNA为模板，加入特异性的一对引物、四种脱氧核糖核苷酸以及Tag DNA聚合酶等，进行DNA的合成反应。
2.2 琼脂糖电泳：DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子本身的大小和构型。
DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围琼脂糖凝胶浓度线形DNA的最佳分辨范围（bp）0.5% 1,000～30,0000.7% 800～12,0001.0% 500～10,0001.2% 400～7,0001.5% 200～3,0003、材料、试剂及器具3.1 材料DNA模板3.2 试剂4XdNTP，Taq 酶 buffer，一对引物，Taq DNA聚合酶，琼脂糖，0.5*TBE。
3.3 器具PCR管，移液器，1.5ml Eppendorf管，PCR管架,Eppendorf管架，PCR 仪,电泳仪；紫外检测仪；水平电泳槽；一次性手套。
4、操作步骤4.1特定基因DNA的扩增1)配模板DNA液H2O 15.3 μldNTP (10 mM ) 0.5 μl10×Taq Buffer 2 μl引物1 (10 μM ) 0.5 μl引物2 (10 μM )0.5 μlTemplate 1 ulTaq DNA polymerase 0.2 μl==========================Total 20 μl2)加入1 ul的模板DNA。
对照组的模板为ddH2O。
3)进行PCR反应。
按照下列反应条件进行：预变性：95 ℃ 5 min变性：95 ℃？s退火反应：（Tm-5）℃？s引物延伸：72 ℃ 1 kb/min,循环数：30个循环补平反应：72 ℃ 5 min。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
多聚酶链式反应（PCR）扩增DNA片段及琼脂糖凝胶电泳产物检测
一、实验目的：
1、了解PCR技术的基本操作
2、理解PCR的原理
3、讨论PCR的应用
二、实验原理：
PCR是一种在体外模拟细胞内环境进行迅速扩增DNA片段的技术，这一技术需要模板、四种脱氧核苷酸等组分条件外，还需要不同温度环境以进行DNA的解旋和聚
1、PCR反应组分
细胞内DNA复制条件分析：
2、PCR反应条件
PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合，现在使用的PCR 仪实质上也是一台能够自动调控温度的仪器。
PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分为三个基本步骤──变性、复性和延伸。
(!)变性（模板DNA解旋）
模板DNA经加热至90℃以上。
一定时间后，使模板DNA双链解离，使成为单链，以便于它与引物结合，为下轮反应作准备。
(2)复性（退火）
模板DNA经加热变性成单链后，温度降到50℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。
(3)延伸
DNA模板－引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下以脱氧核苷酸为原料，以母链为模板，按碱基互补配对的原则与半保留复制的原理，合成一条新的DNA链。
3、PCR产物的检测
(1)紫外分光光度计
DNA在260nm的紫外波段有一强烈的吸收峰，可以通过与蒸馏水的对比进而计算扩增出DNA的含量。
(2)琼脂糖凝胶电泳
DNA在电厂作用下，可以由电源的负极向正极泳动，泳动的速度与DNA片段的长度成负相关，与电压强度成正比，因此可以分离不同长度的DNA。
在有DNA marker（不同已知碱基对大小的DNA片段的混合物）的条件下，由于不同碱基大小的DNA片段在琼脂糖凝胶上涌动的速度不同，因此电泳完毕后会出现在胶块的不同位置。
通过将扩增出的DNA片段与已知的条带做比较，可以大概推测出该片段的碱基对的大小。
如果要进一步检测其大小，可以换另
外规格的DNA marker 继续电泳。
核酸荧光染料可以与DNA嵌合，一起电泳，DNA图谱观察仪可以激发特定的蓝色光源，荧光染料在该光照射下可见到荧光，荧光的亮度与DNA大小成正比。
三、实验仪器及试剂
7种PCR组分微量可调移液器离心管 PCR仪水平电泳槽电泳仪电源紫外分光光度计 250ml锥形瓶(封口膜) 记号笔卫生纸
四、实验步骤
1、DNA体外扩增
(1) 将所有试剂管瞬时离心一次（4000r/min,1min），使管壁没有残留药品，在引物
I 和引物II的离心管内用移液器各加入40ul双蒸水（ddH2O），混匀后瞬时离心一次。
所有的离心管都摆到双面板上。
(2)向装有Taq DNA 聚合酶的离心管按下表加入以下成分：
原有的Taq DNA 聚合酶有15ul，此时混合液体系共计500ul,此步骤由第一、二组同学合作完成。
（在实验老师的监督指导下操作，确保此后其他同学的实验顺利进行）
(3)共分25组，第一、二组的同学并入其他小组进行实验。
每组取20ul的上述混合液于0.5ml的离心管中，加入15ul的液体石蜡封闭体系，以防止在加热过程中蒸发。
(4) 对自己组的离心管上进行标记之后，放到PCR仪上进行DNA扩增。
2、琼脂糖凝胶电泳检测DNA
（1）用蒸馏水将电泳槽和梳子冲洗干净，放在水平桌面上，并架好梳子。
（2）配制浓度为1%（1 g/100 mL）的琼脂糖凝胶2块。
在锥形瓶中，称取1g的琼脂糖粉，加入100ml 1x电泳缓冲液，用封口膜封住瓶口后在微波炉内加热，使琼脂糖粉熔化，然后冷却至60 ℃，倒入电泳槽中（每块胶50ml），插好梳子，待其凝固。
（电泳槽首先用透明胶带将两端封住再进行倒胶）
（3）待胶凝固后，去掉胶带纸，小心移去梳子，注意不要破坏加样孔。
将倒胶槽至于水平电泳槽内，梳井（点样孔）一端朝负极方向。
向电泳槽中缓缓倒入1x电泳缓冲液，以没过胶面2 mm为宜。
（5）将80ul的6xLoading Buffer 加入到80ul的核酸荧光染料中，按1:1比例混合。
（6）移液器枪头插入到扩增出的样品离心管的底部，吸取20ul样品于另一0.5ml的离心管中，注意不要吸到液体石蜡，再加1ul的染料混合液，充分振荡混匀。
用移液器吸取10ul缓慢加入梳井内，枪头抵到梳井口，以防止样液被缓冲液冲散，此外，为防止手抖将凝胶破坏，可以用左手扶住右手的手腕。
（6）盖上电泳槽盖，接通电源，电压为80 V，电流最大。
（7）当指示剂移动到凝胶中间时，断开电源，终止电泳。
（8）取出凝胶块，在DNA图谱观察仪中观察电泳带及其位置，判断扩增产物的情况。
3、紫外分光光度计检测DNA含量
（1）最后1组取2ulPCR反应液，加入98ul蒸馏水，将样品稀释50倍。
（2）以蒸馏水作为空白对照，在波长260nm处，将紫外分光光度计的读数调节至零。
（3）加入DNA稀释液100ul至比色杯中，测定260nm处的光吸收值。
（4）根据下面的公式计算DNA含量：
DNA含量（ul/ml）=50*（260nm的读数）x稀释倍数
五、注意事项
1 离心机上盖没有锁，在离心机运转时，转速最高可达16000r/min，如果这时打
开离心机上盖，里面的离心管就会甩出，对人身造成危险，切忌等全部停下来之后再打开上盖取出离心管。
另外，离心管一定要对称放置。
2 水平电泳槽在电泳时一定要盖上上盖，此时的缓冲液电压可以达到80V，大大
超过了人体的安全电压，切忌不能用手触碰缓冲液或者是电源两端接头。